甲胎蛋白(化学发光法)检测操作规程.doc

稷山县妇幼保健院产前筛查实验室 产前筛查实验室作业指导书文件编号:JSFY-CQSX-ZY05版本/修订号：第一版主题内容 甲胎蛋白检测操作规程生效日期：20180112 第 1 页 共2页 甲胎蛋白检测操作规程【检验原理】产品采用双抗体来心法定量测定人血清中的甲胎蛋白(AFP)的含量。在微孔版的孔内先包被了识别抗AFP的单克隆抗体,用辣根过氧化酶标记另一株与之配对的单克隆抗体。待测孕妇血清样本中的AFP与包被的和酶标记的两株单克隆抗体形成夹心抗原抗体反应。再加上发光底物,用微孔板发光分析仪读取发光数值,发光值与待测血清中AFP含量成正比。【储存条件及有效期】试剂盒于2-8避光贮存，不得冻存,有效为12个月。开封有效期:板条开封后2-8C存放效期为3个月,其他液体组份同成品试剂盒效期。【检测仪器及试剂】仪器：重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪试剂：潍坊康华甲胎蛋白检测试剂盒（化学发光法）【样本要求】抽取静脉血3mL,置一次性采血管内,充分离心,吸取血清,不应有溶血及细胞颗粒:血清标本4存放最好不要超过3天,若不能及时检测,应-20冻存,检测时应将标本融化后混合均匀,并避免反复冻融。【检验方法】手工操作步骤:1、将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡30分钟2、,将浓缩洗涤液按1:40的比例稀释,摇匀备用,作为应用洗涤液3、根据AFP参考品、质控品及待测标本确定所需孔数。4、直接取AFP参考品、质控品及标本各25微升加入相应孔内,再每孔加入50 微升AFP酶结合物,用振荡器振荡30秒钟(此步非常重要),盖上封板膜,置37温浴1小时。5、取出,用应用洗涤液洗涤5次,洗涤时每孔注满洗涤液,停留10秒后吸尽拍干。6、根据使用量,将底物液A、B按1:1混匀,现用现配。每孔加入50微升,用振荡器振荡20秒钟,设定每孔测量时间为1秒,于10-20分钟内测定结果。仪器操作步骤：按照重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪操作规程检测。【参考区间】测定正常人血清样本并结合参考文献的报道,建议正常参考值范围如下:正常人血清中AFP浓度20ng/mL若用于产前筛查,应结合相应的风险分析评估软件使用。由于地区及人群的差异,以上范围仅供参考,各实验室在长期实践中应建立本实验室自己的正常参考值范围。【检验结果的解释】AFP质控品Q1浓度应为2.5-7.5ng/mL,质控品Q2应为105195ng/mL【检验方法的局限性】1、每次检测必须做AFP标准曲线,不能使用以前做过的标准曲线。2、含大量脂质、严重黄及溶血或加热灭活之标本均可能影响检测结果。3、建议按产前诊断技术管理办法的有关规定使用本品4、本品仅用于人血清的测定,不得使用抗凝血浆。5、用其他方法得出的AFP浓度值与本品测定结果不具有直接的可比性,应结合其他有关的临床诊断结果作 产前筛查实验室作业指导书文件编号:JSFY-CQSX-ZY05版本/修订号：第一版主题内容 甲胎蛋白检测操作规程生效日期：20180112 第 2页 共2页解释6、本试剂盒超出标准曲线范围的样品应适当稀释后测定其准确值。【产品性能指标】1、最低检测限:不高于1.ong/mL2、剂量-反应曲线的线性:在线性区间1.0ng/mL-600ng/mL内,剂量反应曲线相关系数(r)不小于0.9900。3、准确度:相对偏差不超过士10.0%。4、精密度:分析内精密度:手工操作试剂盒CV不高于10.0%,全自动操作的试剂盒CV不高于8.096:分析间精密度(仅限手工操作试剂盒)CV不高于15.0%;批间精密度CV不高于15.0%。5、 特异性:10份正常血清的检测结果均不高于20.0ngmL【注意事项】1、本试剂盒仅限于体外诊断用,一个试剂盒应作为整体应用,并请在有效期内使用。2、浓缩洗涤液会有结晶析出,可于37水浴溶解,不影响使用。3、试剂用前应摇匀,标本不可反复冻融。4、请将拆封后未用完的包被板条,放入自封袋内封紧保存,请勿受潮。5、洗涤时各孔需加满洗涤液,防止孔中有游离酶不能洗净。6、样本中加入120IU/mL类风湿因子、80mgdL胆红素、3000mgdL甘油三酯对检测结果未产生影响:样本中