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药物分析,甄汉深注：甄-音“真”zhen,1,fhfh,普通高等教育“十五”国家级规划教材药物分析供药学类专业用第五版刘文英主编人民卫生出社2003年7月,2,fhfh,普通高等教育“十五”国家级规划教材中药制剂分析供中药类专业用中国中医药出社2003年月,3,fhfh,第三章药物的杂质检查药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。第一节概述一、药物的纯度要求药物的纯度即纯净程度，是反映药品质量的一项重要指标。对药物质量的评价：三效：高效、长效、速效;三小：毒性、用量、副作用小。,4,fhfh,药物的纯度通常可以从（）药物的结构，（）外观性状，（）理化常数，（）杂质检查，（）含量测定等方面作为一个有联系的整体来表明和评定药物的纯度。所以在药物的质量标准中就规定药物的纯度要求。但是杂质多了：）药物的理化常数变化）外观性状变化）稳定性下降）含量下降、活性下降）毒副作用上升,5,fhfh,二、杂质的来源和种类（一）杂质的来源1、生产过程中引入的杂质：来源于制备原料、溶剂、试剂、中间产品、副产品、器械等等。2、贮存过程中引入的杂质：来源于外界条件包装、运输、保管不妥（受光线、温度、空气、微生物的影响等等）。,6,fhfh,（二）杂质的种类药物中的杂质来源可分为一般杂质和特殊杂质。一般杂质是指在自然界分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。特殊杂质是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。容许量。,7,fhfh,三、杂质的限量的检查（一）、没有必要把药物中的杂质完全除去从杂质的来源考虑，完全除去药物中的杂质，即不可能也没有必要。（二）、药物中杂质允许最大限度的原则：在不影响药物的疗效和不发生毒性的前提下，允许药物中存在有一定量的杂质。这一允许量被称为杂质的限量。杂质限量指药物中所含杂质的最大容许量。药物中杂质的检查多数采用限量检查（limittest），该检查不要求测定杂质的含量，而只检查其是否超过限量。由于以上的原因，因此，药物的杂质检查又称纯度检查，限度（限量）检查。,8,fhfh,A、取一定量供试品结果（产生色或浑浊）,B、取一定量与被检杂质相同同上处理的纯物质或其他对照品标准液结果（色或浑浊）,药物的限量检查的方法：比色法或比浊法,当AB时：本项不合格。,当AB时：本项合格。,当A=B时：重做。,依法处理,然后比较A和B：,9,fhfh,杂质的限量通常用百分之几(%)或百万分之几(10-6)来表示。1g=10-6g=10-3mg,10,fhfh,应用示例一对乙酰氨基酚中氯化物检查取对乙酰氨基酚2.0g，加水100ml时，加热溶解后冷却，滤过，取滤液25ml，依法检查氯化物（中国药典，附录VIIIA），所发生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml相当于10g的cl-）制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少？,L=,CV,S,100%=,0.015,2103,25,100,100%=0.01%,11,fhfh,第二节一般杂质的检查方法一、氯化物的检查法1、原理：中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定标准氯化钠溶液在相同的条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。Cl-AgCl（微量时浑浊）,稀HNO3,AgNO3,12,fhfh,2、方法：比浊法A、取一定量供试品产生AgCl(浑浊）,依法处理,稀HNO3AgNO3,同上处理,B、取一定量标准NaCI液同上（标准NaCI浓度C=0.01mgCI-/ml）（如A浊度比B小则本项合格）。,13,fhfh,3、注意点：（1）加HNO3目的；A、AgCI不溶于HNO3可在HNO3中产生最好的乳化浑浊；B、加速AgCI的产生；C、防止产生Ag20，Ag3PO4,Ag2CO3因为这些溶于HNO3这样就可以防止CO32-，OH-，PO43-干扰。（2）加HNO3的量要合适（3）CI-浓度（4）温度,14,fhfh,（6）有干扰物必须消除。A、如：（有色）取两分等量供试品：a、一份做供试液（A管）依法检查b、另一份AgCI滤液（B管加入规定量的标准NaCI溶液作为对照管）。,加稀HNO3,过滤,B、用滤纸过滤时，滤纸中如含有氯化物，可预先用含有硝酸的水溶液洗净后使用。C、Br-、I-与AgNO3作用均能生成Ag（卤化银）；硫氰酸盐能与AgNO3作用生成硫氰酸银，以上均有干扰。因此，必须排除。,（5）严格按照操作顺序进行,AgNO3,15,fhfh,D、存在于有机物结构中的氯化物检查。方法：必须使结状态的氯变为游离状态的氯。如有机破坏的方法：某些药物含有有机氯杂质可以采用本法。ClCl-,（7）、溶于水的有机药物（如有机酸碱金属盐）按药典附录方法直接检查氯化物。不溶于水的有机药物，多数加水振摇，使所含氯化物溶解，滤过，取滤液依法检查（也有用丙酮溶解后检查的）。,16,fhfh,SO42-BaSO4（SO42-微量时浑浊）,二、硫酸盐检查法1、原理：药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件生成的浑浊比较，浊度不得更大。,2、方法：比浊法依法处理A、供试品一定量产生BaSO4的浑浊HCl，25%BaCI2,同上B、取一定量K2SO4标准液同上,HCl,25%BaCI2,17,fhfh,3、注意点：（1）加HCI要适量,防止BaCO3,Ba3（PO4）2等的生成。（2）本法适宜比浊浓度为0.10.5mgSO42-/50ml。（3）BaCl2试液浓度在10%25%范围内。（4）供试液如需滤过，应先用盐酸使成酸性的蒸馏水洗净滤纸中硫酸盐。（5）有色供试品溶液的处理及其他注意事项与氯化物检查法相同。,18,fhfh,1、原理铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色比较，颜色不得更深。,H+,3-,移至50mI纳氏,比色管,稀HCI4mI,过硫酸铵50mg,按上法,三、铁盐检查法：,Fe3+6SCN-,、方法：比色法,（）供试品水mI,加水稀释或约35mI后,Fe（SCN）6,液（30100）3mI，再加水适量稀释成50mI，摇均,如显色与标准溶液比较。,（2）标准铁溶液,处理,显色,（一）硫氰酸盐法,加硫氰酸铵溶,19,fhfh,（二）巯基醋酸法（“巯”音“球”）BP采用巯氰醋酸（mercaptoaceticacid）法检查药物中铁盐。原理硫氰醋酸还原Fe3为Fe2，在氨碱性溶液中进一步与Fe2作用生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以限制铁的量。,3）注意点：1）加HCI防止铁盐水解2）加过硫酸铵（NH4）2S2O8氧化剂，氧化供试品中F2+生成Fe3+;防止光线使硫氰酸铁还原或分解退色。3）有干扰要排除。,20,fhfh,2Fe32HSCH2COOH2Fe2SCH2COOH2HSCH2COOH2Fe32HSCH2COOHFe（SCH2COOH）2HFe（SCH2COOH）2Fe（SCH2COO）222H20,2OH-,红色,21,fhfh,1、原理H+（1）Pb2+PbS（量少时，呈色黄黑）H2S（2）、凡溶于碱不溶于稀酸的药物，如磺胺类，巴比妥类等，均在碱性溶液中以硫化钠试液为显色剂。,四、重金属检查法：,OH-Pb2+PbSNa2S,（3）含芳环或杂环的有机药物，先进行结构破坏，使共价的铅变为游离的铅，再采取上述的（1）或者（2）法检查。,22,fhfh,.方法第一法硫代乙酰胺法原理硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈现颜色比较，颜色不得更深。,CH3CSNH2H20CH3CONH2H2SH2SPb2PbS2H,pH3.5,23,fhfh,操作方法（比色法）：依法处理A、一定量供试品PbSHAC、H2S,注意点：pH：pH3.5在此条件下沉淀完全；不溶于HAC的检品在OH-中进行。,同上B、取一定标准铅液PbS,Pb(NO3)2,24,fhfh,第二法适用于在水、乙醇中难溶，或能与金属离子形成配位化合物的有机药物。原理将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解，破坏完全后，再按第一法进行检查。第三法适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等。原理在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使Pb2生成PbS微粒的混悬液，与一定标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较不得更深。,25,fhfh,注意点：A、加HNO3目的：水解盐+H2O酸+碱中和,B、临用前配制：溶液愈释愈易水解，所以临用前稀释。（3）排除干扰物质（4）含芳环或杂环有机物，按药典方法先炽灼破环使与有机物分子结合的重金属游离，再依法检查。（5）微孔滤膜过滤法。,26,fhfh,第四法微孔滤膜法。适用于重金属限量低的药物。（含25g重金属）的检查。原理使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液同法处理后产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量。试验装置图见下页,27,fhfh,28,fhfh,五、砷盐检查法（一）古蔡（Gutzeit）氏法原理金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。,29,fhfh,原理：ASO33-（亚砷酸盐）ASH3AsH（HgBr）2黄色As（HgBr）3棕色,Zn+HCI,新生态H2,HgBr2试纸,砷斑：,30,fhfh,31,fhfh,装置:,32,fhfh,方法注意事项供试品处理含锑药物，如葡萄糖酸锑钠，用古蔡氏法检查时，锑盐也可被还原为锑化氢，与溴化汞试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检出：SbH3HgBr2SbH2（HgBr）HBr可改用白道田夫（Betterdorff）法检查砷盐。方法原理是氯化亚锡在盐酸中将砷盐还原成棕褐色的胶态砷，与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较，可控制,33,fhfh,供试品中的砷量：2As33SnCl26HCl2As3SnCl46H此法的反应灵敏度以As2O3计20g。少量二氯化汞的加入，能提高反应灵敏度达20g/10ml。（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（silvediethyldithiocarbamate）简称Ag（DDC）法本法为中国药典和USP（24）收载的方法。不仅可用于砷盐的限量检查，也可用作微量砷盐的含量测定。原理金属锌与酸作用，产生新生态的氢，与微量砷盐反应，生成具有挥发性的砷化氢；砷化氢遇二乙基二硫代氨基甲酸银，,34,fhfh,AsH36Ag（DDC）3,As（DDC）36Ag3,HDDC,使其还原产生红色的胶态银，用目视比色法或在510nm波长处测定吸收度，再以一定量标准砷溶液用同法处理后得到的有色溶液进行比较。,35,fhfh,36,fhfh,六、溶液颜色检查法有色杂质可能在药物的生产过程中引入，也可能由贮藏过程产生。对溶液颜色进行检查，可控制药物中有色杂质的含量。中国药典采用的检查方法有三种。（一）目视比色法（二）分光光度法（三）色差法原理方法,37,fhfh,七、易炭化物检查法易炭化物检查法是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，用硫酸呈色的方法可以简便地控制他们的总量。方法注意事项八、溶液澄清度检查法澄清度可反应药物溶液中的微量不溶性杂质的存在情况，在一定的程度上可反映药品的质量和生产的工艺水平，对于供制备注射液用原料药物的纯度检查尤为重要。,38,fhfh,原理乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成不溶于水的甲醛白色浑浊。（CH2）6N46H2O6HCHO4NHSHCHOH2NNH2H2C=NNH2H2O方法注意事项,39,fhfh,九、炽灼残渣检查法中国药典和美国药典对炽灼残渣（residueonignition）的定义：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。英国药典称去其为硫酸灰分（sulphatedash）。炽灼残渣检查用于控制有机药物和挥发性无机药物中存在的非挥发性无机杂质。方法注意事项,40,fhfh,十、干燥失重测定法干燥失重系指药品在规定的条件下，经干燥后所减少的量，以百分率表示。干燥失重的量应恒重。由干燥至恒重的第二次及各次称重均应在规定的条件下继续干燥1h后进行。（一）常压恒温干燥法本法适用于受热较稳定的药物。方法注意事项,41,fhfh,（二）干燥剂干燥法本法适用于受热分解、或易于挥发的供试品。干燥剂：（1）硅胶(吸水力大于硫酸,使用方便,价廉,变色,可以反复使用）（2）硫酸（吸水次之，较便宜）（3）五氧化二磷（吸水力强，但价高）（三）减压干燥法本法适用于熔点低、受热不稳定或难驱除水分的药物。原理方法注意事项,42,fhfh,（四）热分析法在程序控制温度的情况下，测定物质的物理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法称为热分析法。该方法具有样品用量少，灵敏、快速等优点，在药物分析中广泛用于物质的熔点、多晶型、纯度、溶剂化物、水分及热解产物的测定。根据测定物理量的不同