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青海省血液中心血型参比室技术文件聚凝胺试验 编号:QBC/CB S 09-2004操 作 规 程 版号:第A版第0次修改1.目的: 是一种快速、简便检测红细胞不完全抗体的方法,可应用交叉配血试验、抗体筛选和抗体测定等。2.要求: 要求全科人员能够熟练掌握原理及操作。3.原理:聚凝胺是一种多价阳离子聚合物,在溶液中有多个阳离子集团,能中和红细胞表面的负电荷,从而缩短红细胞间的正常距离,通过正负电荷的作用,借助离心作用引起红细胞的非特异性凝聚,这种凝聚是可逆的,当红细胞与血清在低离子介质孵育,IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后,在凝聚和凝集外表上是不能区分的,再加入枸橼酸钠重悬液,使枸橼酸根的负电荷与聚凝胺上的正电荷中和,重悬后,非特异性凝聚现象消失,而真正存在的凝集不消失。4.材料与试剂4.1待检血清(或已知血清),待检2%5%红细胞悬液(或2%5%已知抗原红细胞)4.2 聚凝胺试剂盒(市售): 5.操作:5.1 取一支试管,加入待检血清2滴或(已知血清1滴)。5.2 加2%5%待检红细胞(或2%5%已知红细胞)1滴。5.3加按要求稀释的LIM液0.6ml(或12滴),混匀,置室温至少1分钟(时间长效果好)。5. 4 加Polybrene试剂1滴,混匀后 1000g ,离心1560秒。5.5 轻摇观察由 Polybrene引起的红细胞非特异性凝集,若未见红细胞凝集则需重做。5.6 加入1滴重悬液轻摇看结果:由Polybrene引起的非特异性凝集应在1分钟内完全散开,若是由免疫性抗体引起的凝集反应则不会完全散开。5.7阳性对照试剂代替待检血清按同样的步骤进行质控试验,结果应为“1+”的弱凝集。6、附注 6.1 若红细胞中含有较多血清或血浆则需用盐水洗涤细胞一次。 6.2 加Polybrene试剂时只需加1滴,多加Polybrene可能导致重悬液无法充分解散非特异凝集,出现假凝集;如果使用肝素抗凝的血浆配血需多加1滴Polybrene试剂以中和肝素。6.3冷凝集处理:在室温较低时(15)使用Polybrene方法试验,冷凝集会因Polybrene方法而加强,建议使用LIM配制的红细胞悬液加待检血清直接离心进行盐水对照试验,如果在盐水法试验中发现有冷凝集,则可将Polybrene试验结果置371分钟后再判读,这时较弱的冷凝集会散开,真凝集会有所减弱,但不会完全散开;或者在室温致敏1分钟后用温盐水(45左右)三洗,做间接抗球蛋白试验。7、相关文件7.1中国输血技术操作规程8、相关表单8
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