（内科学专业论文）ghrelin与溃疡性结肠炎患者炎症活动、营养不良的相关性研究.pdf

中文摘要 英文摘要 研究论文g h r e l i n 与溃疡性结 研究 1 上l f i u 舌” 材料与方法0 00000 结果 附图 附表 讨论一一一” 结论一“ 参考文献2 8 综述肠内营养在消化系统疾病中的应用3 0 致谢0 6 0 000 60010 3 9 个人简历4 0 中文摘要 g h r e l i n 与溃疡性结肠炎患者炎症活动、营养不良的相关性研究 摘要 溃疡性结肠炎( u l c e r a t i v ec o l i t i s ，u c ) 是一种慢性非特异性肠道炎症性 疾病，病情有轻重之分，多数反复发作，目前人们对u c 的病因和确切发 病机制仍不十分清楚，有研究认为u c 发病和免疫调节因素有关，肠道免 疫功能失调是溃疡性结肠炎发病的根本原因【l - 2 】。u c 患者普遍存在能量代 谢异常和炎症反应过度亢进。营养状况与u c 的发病率、发病机制以及治 疗方法的选择密切相关。营养不良是u c 患者常见的突出并发症，严重影 响其免疫功能、生活质量和长期存活率。造成u c 患者营养不良的因素很 多，包括经口食物摄入减少、吸收不良、肠道丢失增多、药物一营养元素 相互作用，以及营养需求量增加等，其中饮食摄入减少是最主要的原因。 由于药物的不良反应和使用的限制，在溃疡性结肠炎患者中临床治疗有效 率仅5 0 左右，并且还无有效控制复发的治疗手段。通过肠内或肠外途径 补充机体所需的各种营养成分，在u c 患者的治疗中发挥着关键作用。营 养支持治疗不仅可以满足机体对营养物质的需要，纠正营养不良状态，又 可以调节炎症反应，有助于病变恢复。 营养支持分肠内营养支持( e n t e r a ln u t r i t i o n ，e n ) 和肠外营养支持 ( p a r e n t e r a ln u t r i t i o n ，p n ) ，目前主张尽早进行e n ，许多营养素已被证 明可以增强肠道免疫、减轻炎症反应、促进粘膜修复恢复肠道的粘膜屏障、 抑制细菌移位、促进疾病康复。 生长激素释放肽( g h r e l i n ) 是新发现的l 种脑肠多肽。g h r e l i n 具有多种 生物学作用，它能促进生长激素的分泌，除在摄食与能量代谢、心血管功 能等方面具有调节作用外，还具有促进胃酸分泌、调节胃肠动力、保护胃 黏膜、抑制肿瘤细胞增殖，调节能量代谢【3 】、免疫应答，并参与炎症过程 等作用。其中g h r e l i n 与营养不良、炎症反应的研究是最近研究的热点， 有研究表明在u c 患者中血清g h r e l i n 和营养状态呈负相关、和炎症反应 成正相关【4 】，但是目前尚无关于u c 患者接受肠内营养支持前后血清 g h r e l i n 变化的研究。 中文摘要 目的：本研究测定u c 营养不良患者接受肠内营养前后血清g h r e l i n 水平和相关营养指标变化的关系；g h r e l i n 水平和u c 炎症活动指数变化 的关系；同时观测g h r e l i n 在大肠粘膜的表达；了解g h r e l i n 和营养不良， 炎性反应的相关性，从而为u c 治疗提供新思路。 方法：收集到经我院确诊的u c 患者4 4 例和健康志愿者3 0 例入组， 按s u t h e r l a n d 疾病活动指数( s u t h e r l a n dd a i ) 标准将疾病严重程度分为轻 度、中度、重度三级；其中轻度活动组9 例，中度活动组1 8 例，重度活 动组1 6 例，各组间在年龄及性别等方面无统计学差异p o 0 5 ) 。首先对 u c 患者进行营养风险评估( n u t r i t i o nr i s ks c r e e n i n g ，n r s 2 0 0 2 评估量表) 其中包括对患者的疾病状态、人体体重指数( b o d ym a s si n d e x ，b m i ) 测 定、近期体重下降情况、一周内进食量下降情况和患者年龄进行评估。对 于存在营养不良的患者给予肠内营养支持( 不能耐受者行肠外营养支持， 并将病例剔除不再入组) ；收集u c 患者和健康志愿者外周血血清，储存 于一7 0 的深低温冰箱中，并在营养支持后再次评估病人营养风险，复查 上述指标。在电子结肠镜下夹取u c 患者乙状结肠粘膜组织( 病变明显处 结肠粘膜) 3 - 一5 块，和结肠息肉患者健康结肠粘膜组织( 取单发结肠息 肉患者距息肉1 0 c m 处正常粘膜) 3 - - 5 块作为正常对照。常规石蜡包埋。 采用酶联免疫吸附试验( e l i s a ) 测定血清g h r e l i n ；采用免疫组化法检 测结肠粘膜中g h r e l i n 的表达情况。运用图像分析技术计数切片的阳性细 胞数，取光学显微镜下5 个视野每平方毫米( 1 0 x 4 0 ) q b 的平均阳性细胞数 作为计数标准。运用s p s s l 6 0 统计软件进行统计学分析，数据不属于正 态分布，以中位数( m e d i a n ，m ) 表示，血清g h r e l i n 水平与营养指标，疾 病活动指数，两独立样本采用m a n w h i t n e yu 检验；肠内营养治疗前后血 清a l b 、n r s 、g h r e l i n 水平比较属两个相关样本采用w i l c o x o n 符号秩和 检验；血清g h r e l i n 水平与血清e s r 、c r p 的相关性采用s p e a r m a n 等级 相关分析；结肠黏膜g h r e l i n 的表达采用m a n w h i t n e yu 检验。p 0 0 5 为 显著性标准。 结果： 1 基本情况 本次研究对象共7 4 例，u c 组4 4 例( 按s u t h e r l a n dd a i 评分轻度9 例， 中度18 例，重度17 例，健康对照组3 0 例) ；按n r s 2 0 0 2 评分，u c 患者中， 中文摘要 轻度营养不良1 0 例，中度营养不良1 6 f f 0 ，重度营养不良1 8 例。重度营养不 良和部分中度营养不良且能够耐受者应用肠内营养支持，共计2 1 例。未行 营养支持患者2 3 例，各组间在年龄、性别方面无统计学差异。 2u c 患者营养支持前后血清g h r e l i n 水平的变化： 营养支持前血清g h r e l i n 水平( m = 3 5 51 6p g m 1 ) ，营养支持后血清 g h r e l i n 水平( m - - 9 5 0 7 8p g m 1 ) ，两者间z = 4 0 1 5 ，p = 0 0 0 0 0 0 5 有统计 学意义；肠内营养前血清a l b ( m = 2 8 5 1 ) ，肠内营养后a l b ( 3 2 5g 1 ) ， 两者间z = 一3 8 0 7 ，p = 0 0 0 0 0 0 5 有统计学意义；肠内营养前n r s 评分( m = 3 分) ，肠内营养后n r s 评分( m = 2 分) ，两者间z = 3 0 0 0 ，p = o 0 0 1 0 0 5 。 均有统计学意义。 3u c 患者血浆g h r e l i n 水平和营养状况的关系： 轻度营养不良患者g h r e l i n ( m = 8 2 8 4 6 p g m 1 ) ，中度营养不良患者 ( m = 1 1 4 0 6 p g m 1 ) ，重度营养不良患者( m = 2 7 5 0 8 p g m 1 ) 。轻度组与中 度比较z = 2 3 9 8 ，p = 0 0 1 4 0 0 5 ；中度与重度比较z = 2 10 5 ，尸 = o 0 3 6 0 0 5 ，有统计学意义。 4 血清g h r e l i n 和疾病严重程度的关系： 健康对照组血清中g h r e l i n 平均水平( 1 6 5 0 6p g m 1 ) ) ，u c 患者血清 浓度( m = 1 7 3 6 7 0p g m 1 ) ，z = 1 6 9 ，p = o 0 4 5 o 0 5 两者比较有统计学意义。 4 4 t 魏j u c 患者血清中g h r e l i n 的浓度：( 轻度活动患者m = 6 8 6 1 9p g m l ，中 度活动患者m = 1 0 5 4 8p g m l ，重度活动患者m = 3 2 3 2 0 0p g m 1 ) ，轻度和中 度比较z = 一4 16 7 ，p = o 0 0 0 0 0 5 ；中度和重度比较z = 4 4 2 3 ，p = o 0 0 1 0 0 5 。 5u c 患者血清g h r e l i n 水平和血清e s r 、c i 冲的相关性： u c 组血清g h r e l i n 水平( m _ 1 7 3 6 7 0p g m 1 ) ，e s r 水平( m = 2 4 7 m m h ) 两者比较尸= o 0 0 1 0 0 5 ，i - = 0 9 1 9 成正相关；血清c r p 水平( m = 4 2 9 ) 与 g h r e l i n 比较p = 0 0 0 0 轻度组( m = o 15 0 ) ，p = o 0 0 0 ou 3a tt l r s tt i l e ( ， u cp a t i e n t sw e r ee v a l u a t e df o rt h em a l n u t r i t i o nr i s k ( n r s 2 0 0 2e v a l u a t i n g s c a l e ) ，i n c l u d i n gt h ep a t i e n t s d i s e a s ei n d e x ，t h ed e c r e a s i n go fb o d yw e i g h t ， t h ed e c r e a s i n go ff o o di n t a k e 。 。 a n dt h ee l m lnutritionalthe d e c r e a s i n go ff i ) o di n t a k ei naw e e ka n d ea g ee n t e r a lnu t n t l o n a l s u p p o r tw a sg i v e nt ot h ep a t i e n t sw h o w e r ei nt h em a l n u t r i t i o ns i t u a t i o n ( t h e p a t i e n t sw h od i dn o tt o l e r a t ee nw e r eg i v e np na n dw e r ee x c l u d e d ) t h e 6 英文摘要 一 s e n 】m sw e r ec o l l e c t e db e f o r ea n da f t e rt h en u t r i t i o n a ls u p p o r t s o m eo ft h e s e n l m sw e r ef o rr o u t i n eb i o c h e m i s t r ye x a m i n a t i o n ，s u c ha sa l b u m i n ( a l b ) ， e r y t h r o s e d i m e n t a t i o n ( e s r ) a n dc r e a c t i v ep r o t e i n ( c r p ) o t h e r s w e r es t o r e d i nt h ed e e pf r e e z er e f r i g e r a t o rf o rt h ee x a m i n a t i o no fg h r e l i n ，w i t h t h eh e l po f t h ec o l o n o s c o p y m u c o s a lb i o p s ys a m p l e s ( 3 - 5 p i e c e se a c hp a t i e n t ) w e r e o b t a i n e df r o ma c t i v ea n di n a c t i v ea r e a so fs i g m o i da n du cr e s p e c t i v e l y f o r c o m p a r i s o n ，n o r m a l c o n t r 0 1b i o p s ys p e c i m e n sw e r et a k e n f r o mp a t i e n t s u n d e r g o i n gc o l o n o s c o p yf o rc o l o np o l y p ( 3 5p i e c e sa l s o ) a l l t h es a m p l e s w e r ef i x e di n 10 f o r m a l d e h y d ea n de m b e d d e di np a r a f f i n b y t h e i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ya s s a y ，t h ee x p r e s s i o no fg h r e l i ni nt h ec o l o nm u c o s a w a ss t u d i e da n dt h eg h r e l i n p o s i t i v e c e l l sw e r ec a l c u l a t e di n 5r a n d o m h i g h p o w e rf i e l d s a n dg o tt h ea v e r a g ep o s i t i v ec e l l sn u m b e r t h es e r u m g h r e l i nw a se x a m i n e db ye l i s a t h er e s u l t s w e r eg i v e na sm e d i a n m a n - w h i t n e yut e s tw a su s e df o rt w oi n d e p e n d e n ts a m p l e sa n dw i l c o x o n n o n p a r 锄e t e rt e s tw a su s e df o rt w or e l a t i v es a m p l e s c o r r e l a t i o nb e t w e e n t h e v a r i a b l e sw a sm a d ew i t hs p e a r m a n sc o r r e l a t i o na n a l y s i sa n dp 0 0 5 w a s r e 9 2 l r d e da st h ek e yv a l u ef o rs t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e t h es t a t i s t i c a la n a l y s i s w a sc a r r i e do u tw i t hs p s s16 0 r e s u l t s ： 1f u n d a m e n t a li n f o r m a t i o n 7 4o b je c t si n c l u d i n g4 4u cp a t i e n t s ( m i l d ，9 ；m o d e r a t e ，1 8 ；s e v e r ，17 ) a n d3 0c o n t r o l sw e r es t u d i e d a c c o r d i n gt on r s 2 0 0 2 ，t h e r ew e r e10p a t i e n t s o fm i l dm “n u t r i t i o n ，16o fm o d e r a t em a l n u t r i t i o na n d18s e v e rm a l n u t r i t i o n n u t r i t i o n a ls u p p o r tw e r eg i v e nt ot h ep a r to fm o d e r a t em a l n u t r i t i o np a t i e n t s a j l dt 1 1 es e v e rm a l n u t r i t i o np a t i e n t sw h oc a r lt o l e r a t ee n ，t o t a l l y2 1 p a t i e n t s t h e r ew a sn os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c eo nt h e i ra g ea n dt h eg e n d e r 2t h el e v e l so fs e r u mg h r e l i n ( m = 3 5 51 6p g m 1 ) b e f o r en u t r i t i o n a ls u p p o r t w a sl o w e rt h a nt h a t ( m = 9 5 0 7 8p g m 1 ) a f t e rn u t r i t i o n a l s u p p o r t ( z 一4 015 ，p = 0 0 0 0 0 0 5 ) ；t h e l e v e l so fs e r u ma l b ( m = 2 8 5 # l ) b e f o r e n u t r i t i o n a ls u p p o r t w a sl o w e rt h a nt h a t ( m = 3 2 5 9 l a f t e rn u t r i t i o n a l s u p p o r t ( z = 3 8 0 7 ，p = 0 0 0 0 0 5 ) ；t h e n r ss c o r e ( m = 2 ) b e f o r en u t r i t i o n a l 英文摘要 s u p p o r tw a sl o w e rt h a nt h a t ( m - - - 3 ) a f t e rn u t r i t i o n a ls u p p o r t ( z 一0 3 0 0 0 ， p = o 0 015 0 0 5 ) ； 3t h er e l a t i o no fs e r u mg h r e l i na n dn u t r i t i o ns t a t u s ：t h em e d i a no fs e r u m g h r e l i ni nm i l d n u t r i t i o ng r o u pw a s8 2 8 4 6 p m l ；t h em e d i a no fs e r u m g h r e l i ni nm o d e r a t e n u t r i t i o ng r o u pw a s114 0 6 p g m l ；t h em e d i a no fs e r u m g h r e l i ni ns e v e r n u t r i t i o ng r o u pw a s2 7 5 0 8 p g m 1 i ft h em i l d n u t r i t i o ng r o u p w a sc o m p a r e dw i t ht h em o d e r a t e n u t r i t i o ng r o u p ，zv a l u ew a s 一2 3 9 8a n d p = o 014 0 0 5 ；i ft h em o d e r a t e n u t r i t i o ng r o u pw a sc o m p a r e dw i t ht h e s e v e r - n u t r i t i o n g r o u p ，zv a l u ew a s 一2 10 5 a n dp = 0 0 3 6 0 0 5 ，t h e r ew e r e s t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e 4t h er e l a t i o no fs e r u mg h r e l i na n di n f l a m m a t o r ya c t i v i t y ：t h em e d i a no f s e r u mg h r e l i ni nt h ec o n t r o l sw a s16 5 0 6p g m l ，a n dt h a ti nt h eu cp a t i e n t s w a s1 7 3 6 7p g m l ，z = 一1 6 9 ，p = 0 0 4 5 o 0 5 t h e r ew a ss t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e b e t w e e nt h e m a m o n gt h e4 4u c p a t i e n t s ，t h em e d i a no fs e r u m g h r e l i nw a s 6 8 6 1 9 p g m li nt h em i l di n f l a m m a t o r ya c t i v i t y ；1 0 5 4 8p g m li nt h em o d e r a t e p a t i e n t s ；3 2 3 2 0p g m li nt h es e v e rp a t i e n t s i fc o m p a r e dt h em i l dg r o u pw i t h m o d e r a t eg r o u p ，zv a l u ew a s 一4 16 7 ，p = 0 0 0 0 0 5 ；a n di fc o m p a r e dt h e m o d e r a t eg r o u pw i t hs e v e rg r o u p ，zv a l u ew a s 一4 4 2 3 ，p = 0 0 01 0 0 5 5t h er e l a t i o no fs e r u mg h r e l i na n de s r 、c r p ：t h em e d i a no fs e r u mg h r e l i n i nu cw a s17 3 6 7p g m l ，t h em e d i a no fs e r u me s rw a s2 4 7 m m h ) c o m p a r e d t h eg h r e l i nw i t he s r p = o 0 0 1 0 0 5 ，r = 0 9 1 9 ，c o m p a r e dt h eg h r e l i nw i t h c r p ( m = 4 2 9 ) p = 0 0 0 0 m i l d g r o u p ( 【_ o 1 5 0 ) ，p = o 0 0 0 t h e r ew a ss t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e 。 8 英文摘要 c o n c l u s i o n s ：t h el e v e l so fs e r u mg h r e l i na n dt h ee x p r e s s i o no fg h r e l i n i nc o l o nm u c o s ai nu c p a t i e n t sw e r eh i g h e rt h a nt h o s ei nc o n t r o l s ，a sw e l la s p o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t hd i s e a s ea c t i v i t yi n d e x ，n u t r i t i o nr i s k ，e s ra n dc i 冲 t h en u t r i t i o ns t a t u sw a si m p r o v e da f t e rg e t t i n gt h en u t r i t i o n a ls u p p o r t t h e s e r u ml e v e l so fg h r e l i nd e c r e a s e dw h i l et h ea l bi n c r e a s e d g h r e l i nm a y p l a y a ni m p o r t a n tr o l ei nt h ee v a l u a t i n go fd i s e a s ea c t i v i t yi n d e xa n dn u t r i t i o n s t a r t l s k e yw o r d s ：g h r e l i n ；u l c e r a t i v ec o l i t i s ；i n f l a m m a t i o n ；m a l n u t r i t i o n a c t i v i t y ；a s s o c i a t i v i t y 9 研究论文 g h r e l i n 与溃疡性结肠炎患者炎症活动、营养不良的相关性研究 k 刖罱 溃疡性结肠炎( u l c e r a t i v ec o l i t i s ，u c ) 是一种慢性非特异性肠道炎症性 疾病，临床主要表现为腹痛、腹泻和粘液脓血便；病情有轻、重之分，多 数反复发作，其发病率不断增高，并且溃疡性结肠炎发生癌变的机会 明显增加【5 】。目前人们对u c 的病因和确切发病机制仍不十分清楚，目前 普遍认为u c 与能量代谢异常和炎症反应过度亢进有关，营养状况和u c 的 发病率、发病机制以及治疗方法的选择密切相关。营养不良是u c 患者常 见和突出并发症，严重影响其免疫功能、生活质量和长期存活率。造成 u c 患者营养不良的因素包括经口食物摄入减少、吸收不良、肠道丢失增 多、药物一营养元素相互作用以及营养需求量增加等，其中饮食摄入减少 是最主要的原因，即使处于非活动期的u c 患者往往也会存在各种营养障 碍。由于药物的不良反应和使用的限制，溃疡性结肠炎的临床治疗有效率 仅5 0 左右，并且还无有效控制复发的治疗手段。通过肠内或胃肠外途径 补充机体所需的各种营养成分，在u c 患者的治疗中发挥着关键作用。营 养支持治疗不仅可以满足机体对营养物质的需要，纠正营养不良状态，又 可调节炎症反应，有助于病变恢复。 营养支持分肠内营养支持( e n t e r a ln u t r i t i o n ，e n ) 和肠外营养支持 ( p a r e n t e r a ln u t r i t i o n ，p n ) ，目前主张尽早进行e n ，e n 可以刺激消化液和 胃肠道激素的分泌，减少肝脏和胆道并发症的产生，改善和维持肠道黏膜 细胞功能与结构的完整性，维持肠道机械屏障、化学屏障、免疫屏障功能， 防止肠道菌群移位的发生，还可以避免肠外营养支持带来的并发症，而且 e n 方法简便、安全，费用低廉、更加符合人体的生理需要。 生长激素释放肽( g h r e l i n ) 是新发现的一种新的脑肠多肽1 9 9 9 年从胃 内分泌细胞发现内源性生长激素释放肽( g r o w t hh o r m o n er e l e a s i n gp e p t i d e ， g h r p ) ，命名为g h r e l i n 。它分布在许多组织如胃肠、心脏、肺、脑、。肾 脏、睾丸、前列腺、胎盘和免疫组织等。g h r e l i n 具有多种生物学作用， 有研究表明，g h r e l i n 能促进生长激素的分泌除在能量代谢与摄食、心血 管功能等方面具有调节作用外，还具有促进胃酸分泌、保护胃黏膜、调节 研究论文 胃肠动力、抑制肿瘤细胞增殖，调节能量代谢、免疫应答并参与炎症过程 等作用。其中g h r e l i n 与营养不良的研究是最近研究的热点，有研究表明 在慢性阻塞性肺病、胃癌、肾功能衰竭的疾病中血清g h r e l i n 水平可以反 应身体的营养状态【6 7 】，作为评价营养不良的客观有效指标。但目前尚无 关于u c 患者接受营养支持前后g h r e l i n 动态变化的研究 本研究测定u c 营养不良患者营养支持前后血清g h r e l i n 水平和相关 营养指标变化的关系；g h r e l i n 水平和u c 炎症活动指数变化的关系；同 时观测g h r e l i n 在大肠粘膜的表达；了解g h r e l i n 和炎性反应，营养不良 的相关性，从而为u c 治疗提供新思路 材料与方法 l 研究对象 收集到经我院确诊的u c 患者4 4 例，入选病例均符合“2 0 0 7 年济南 全国溃疡性结肠炎学术会议 【8 】制订的溃疡性结肠炎诊断标准。健康志愿 者3 0 例入组( 对照组血清来源于健康体检者，结肠粘膜标本来源于结肠 息肉切除患者) ，u c 患者按s u t h e r l a n d 疾病活动指数( s u t h e r l a n dd a i ) 标 准将疾病严重程度分为轻度、中度、重度三级，其中轻度活动组9 例，中 度活动组18 例，重度活动组1 6 例，各组间在年龄及性别等方面无统计学 差异( 尸 o 0 5 ) 。 1 1 病例入选标准 ( 1 ) 有持续或反复发作的黏液脓血便，可伴腹痛、里急后重和不同 程度的全身症状，可有关节、皮肤、眼、口及肝、胆等肠外表现：( 2 ) 结 肠镜检查可见病变多从直肠开始，连续性、弥漫性分布，且有以下表现之 一：黏膜血管纹理模糊、紊乱、充血、水肿、质脆、出血及脓性分泌物附 着，可见黏膜粗糙、细颗粒状；病变明显处可见弥漫性多发性糜烂或溃疡 形成；慢性病变者结肠囊袋变浅或消失，假息肉及桥型黏膜形成；( 3 ) 除 外细菌性痢疾、阿米巴痢疾、血吸虫病、肠结核及缺血性、放射性结肠炎； ( 4 ) 意识清楚，病情稳定，具有语言交流能力，并且愿意参加本研究。 1 2 剔除病例标准 糖尿病、甲亢、侏儒症、肢端肥大症、心、肾功能不全、妊娠及哺乳 研究论文 期。 所有纳入患者一周内均未无输血和应用糖皮质激素治疗 2 仪器 r g z l 2 0 型体重计 l q p b 4 颗粒制冰机 海尔l c 1 5 9 冰箱 海尔b c d 2 5 9 k a 冰箱 超低温冰箱 s w c j i f d 净化工作台 电热恒温水浴箱 b 8 5 c i i 型紫外线空气消毒器 液氮容器 t h e m ol a b s y s t e m s 移液枪 低温容器 e l x 8 0 0 酶标仪 恒温水浴震荡器c u 6 0 0 移液器、染色缸、湿盒等 l e i c ar m 2 2 4 5 石蜡切片机 m o t i c 6 0 数码医学图象分析系统 y b l 2 生物组织包埋机 y t 6 生物组织摊烤机 h m p 11 0 组织脱水机 c h k 2 f g s 显微镜 离心机 h m 315 组织切片机 3 主要试剂 人血清g h r e l i ne l i s a 试剂盒 兔抗g h r e l i n 多克隆抗体 s p 9 0 0 1 试剂盒 d a b 显色剂 4 方法 无锡市衡器厂 上海世义精密仪器有限公司 青岛海尔集团 青岛海尔集团 日本三洋公司 苏州苏净集团安泰空气技术司 北京市长风仪器仪表厂 广西柳州市第二医疗器械厂 四川乐山市东亚机电工贸有公司 芬兰t h e n n o 公司 河南新乡豫新航空低温容器限责任公司 德国b i o t e k 公司 姜堰市医疗器械有限公司 北京中山有限公司 莱卡上海分公司 厦门麦克奥迪仪器仪表有限公司 孝感亚光医用电子技术研究所 孝感亚光医用电子技术研究所 德国w a l l d o r f 公司 日本o l y m p u s 公司 美国b e c k m a n 公司 德国w a l l d o r f 公司 美国r d 公司 武汉博士德生物技术有限公司 北京中山生物技术有限公司 北京中山生物技术有限公司 研究论文 4 1 对u c 患者进行病情分期：应用s o u t h e r l a n d 疾病活动指数评分进行病 情分期，总分 2 分为症状缓解；3 一- 5 分为轻度活动；6 1 0 分为中度活 动；1 l 1 2 分为重度活动。( 见t a b l e l ) 4 2 营养不良风险筛查步骤和标准 采用( n r s ) 评估量表对u c 患者进行营养不良评分，n r s 法测定采用 统一的问卷进行评定，内容包括：体质指数( b m i ) 2 0 5 2 4 0 ( 1 分) ； 18 5 2 0 5 ( 2 分) ； 18 5 ( 3 分) 。近3 个月体重丢失情况，体重下降5 ( 在 3 个月内1 分，2 个月内2 分，1 个月内3 分) 膳食评估：在一周内食欲下降 2 5 5 0 ( 1 分) ；下降5 0 7 5 ( 2 分) ；下降7 5 1 0 0 ( 3 分) 。说明： 按最高分评，不能累加，年龄超过7 0 岁加1 分。总分1 分为轻度营养不良风 险，2 分为中度营养不良风险，3 分为重度营养不良风险。 b m i 测定方法：测量时病人赤足，足底与地板平行，足跟紧靠，双足尖 外展6 0 。，背伸直，上臂自然下垂；清晨、空腹、穿单衣时称体重，同时 作营养缺乏症状体格检查，计算体质指数b m i = 体重( k g ) 身高( m ) 2 。 4 3 对有中、重度营养不良风险患者进行肠内营养支持 肠内营养支持方法：肠内营养制剂选用能全力，用量应个体化给予( 最 大4 瓶天，约2 0 0 0k c a l 天) ，经口服或鼻饲管供给，如初始阶段热量与液 体量不足，则由普通液体经静脉补充。建议作为唯一的营养治疗应用2 周， 如病情缓解，建议用足3 周；如应用7 1 0 天后疾病及其指标未见明显缓解 即改用其他方案。e n 的主要问题是不能耐受、顺应性差、口感欠佳【9 】等， 减少这些不适反应可通过教育、引导及培训来改善。在开始的几天可能发 生头晕和恶心，如出现泻可通过减少用量或增加稀释度来缓解。逐渐过渡 到正常用量。并在肠内营养三周后再次测定血浆g h r e l i n 水平。不能耐受肠 内营养支持者给予肠外营养支持，并将病例剔除不再纳入实验组。 5 检测指标 5 1 血浆g h r e l i n 水平测定： 5 1 1 血清标本的采集与保存：收集研究对象清晨空腹抽取静脉血3 m l ，静 置，1 5 0 0 r p m 离一i l , 1 0 m i n 分离血清，以2 5 0 - - - ，5 0 0 u l 安锫存储于。7 0 。c 深低 温冰箱中，测定时在常温下自溶所有标本经盲法同批测定。 5 1 2 过程及步骤 1 ) 标准品的稀释。 研究论文 2 ) 加样：分别设空白孔( 空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各 步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样5 0 1 t l ， 待测样品孔中先加样品稀释液4 0 山，然后再加待测样品1 0 1 d ( 样品最终 稀释度为5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻 晃动混匀。 3 ) 温育：用封板膜封板后置3 7 温育3 0 m i n 。 4 ) 配液：将3 0 倍浓缩洗涤液用蒸馏水3 0 倍稀释后备用。 5 ) 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 3 0 秒后弃去，如此重复5 次，待干。 6 ) 加酶：每孔加入酶标试剂5 0 1 d ，空白孔除外。 7 ) 温育：操作同3 。 8 ) 洗涤：操作同5 。 9 ) 显色：每孔先加入显色剂a 5 0 1 d ，再加入显色剂b 5 0 1 z l ，轻轻震荡 混匀，3 7 避光显色1 5 m i n 。 1 0 ) 终止：每孔加终止液5 0 1 t l ，终止反应( 此时蓝色立转黄色) 。 1 1 ) 测定：以空白空调零，4 5 0 n m 波长依序测量各孔的吸光度( o d 值) 。测定应在加终止液后1 5 m i n 以内进行。 操作程序总结： 1 l r 1 i r j j 1 l r l 研究论文 计算 5 2 生化指标测定： e s r 测定采用魏氏法、血清白蛋白测定采用溴甲酚绿法、c r p 测定 采用免疫荧光法。 5 3h e 及免疫组织化学法检测结肠粘膜g h r e l i n 的表达 5 3 1 普通光镜、及免疫细胞化学切片制备 1 ) 取材：取u c 患者乙状结肠病变明显处粘膜3 5 块。取单发结肠 息肉患者距息肉1 0c m 处正常粘膜3 - - - 5 块作为正常对照。 2 ) 固定：所有活检组织经中性福尔马林固定2 4 小时后，将用于光镜 的结肠粘膜标本固定于4 多聚甲醛。 3 ) 脱水及包埋：2 4 小时后将固定好的组织块经常规梯度酒精脱水， 二甲苯透明，石蜡包埋。 4 ) 切片：连续切片，厚度为5 9 m ，取4 片蜡片分别裱于涂有蛋白甘 油( 用于普通h e 染色) 及多聚赖氨酸( 用于免疫组织化学染色) 的载玻 式上o 5 3 2 h e 染色步骤： 1 ) 切片常规脱腊至水。 二甲苯i ，二甲苯i i ，1 0 0 酒精i ，10 0 酒精i i ，各1 0 m i n 。9 5 酒精， 9 0 酒精，8 0 酒精，7 0 酒精各1 0 m i n ，蒸馏水洗。 2 ) 苏木精染色1 m i n ，自来水冲洗。 3 ) 1 盐酸分化，自来水冲洗。 4 ) 伊红染色2 m i n 。 5 ) 常规梯度酒精脱水7 0 酒精，8 0 酒精，9 0 酒精，9 5 酒精， 各2 m i n ，1 0 0 酒精i ，1 0 0 酒精i i ，各10 m i n 二甲苯透明，中性 树胶封片。 5 3 3 免疫组织化学染色： 组织切片二甲苯脱蜡，酒精梯度水化 i p b s 洗5 m i n x 3 次 1 l r 3 n 醇配制的h 2 0 2 室温孵育3 0 m i n ，消除内源