太原师范学院 设计性实验报告 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定.doc

设计性实验报告 题题 目目 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定植物可溶性蛋白质和糖含量的测定 课程名称：课程名称： 基础生物化学实验 实验学期：实验学期： 2011 至至 2012 学年学年 第第 一 学期学期 植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定 摘要摘要 本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了 可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。结果表明：生菜的蛋白质含量为 5.88（mg/g） ，糖含量为 0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为 0.2926（mg/g） ，糖含量为 0.2126g/100g。即说明：生菜中蛋白质含 量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。 关键词 可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝 G-250 染色法，蒽酮法，含量测定 1 1、材料与方法、材料与方法 1.1 蛋白质含量测定 标准蛋白质溶液 、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果 分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等 1.2 糖含量测定 200ug/ml 标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果 试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架 2 2、实验步骤、实验步骤 蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝 G-250G-250 染色法）染色法） 2.1 标准曲线的绘制 取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入 5ml 考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放 置 5min 左右，以 0 号试管为空白对照，在 595nm 下比色测定吸光度。以蛋白质含量为横坐 标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 管号 试剂 012345 标准蛋白 质（ml） 00.200.400.600.801.00 蒸馏水量 （ml） 1.000.800.600.400.200 蛋白质含 量（ug） 020406080100 2.2 样品测定 2.2.1 样品提取 分别秤取生菜、苹果鲜样 0.250.5g，用 5ml 蒸馏水或缓冲液研磨 成匀浆后，3000r/min 离心 10min，上清液备用。 2.2.2 吸取样品提取液 1.0ml（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入 5ml 考马 斯亮蓝试剂，摇匀，放置 2min 后在 595nm 下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋 白质含量。 糖含量测定糖含量测定 2.3.葡萄糖标准曲线的制作 取 6 支 20ml 具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液 。 在每管中均加入 0.5ml 蒽酮试剂，再缓慢地加入 5ml 浓 H2SO4，摇匀后，打开试管塞 ，置沸水浴中煮沸 10 分钟，取出冷却至室温，在 620nm 波长下比色，测各管溶液的光密 度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。 2.4.可溶性糖的提取 称取 1 克生菜叶和苹果，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后 转入 20ml 刻度试管中，用 10ml 蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸 水浴中加盖煮沸 10 分钟，冷却后 3000r/min 离心 10min，滤液收集于 100ml 容量瓶中， 用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 2.5.糖含量测定 用移液管吸收 1ml 提取液于 20ml 具塞刻度试管中，加 1ml 水和 0.5ml 蒽酮试剂。再 缓慢加入 5ml 浓 H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀 ，再置沸水浴中 10 分钟（比色空白用 2ml 蒸馏水与 0.5ml 蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴 保温 10 分钟）。冷却至室温后，在波长 620nm 下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知 对应的葡萄糖含量（g）。 3 3、结果记录及处理、结果记录及处理 3.13.1（蛋白质） 管号 012345 生菜生菜苹果苹果 蛋白质含量 （ug、x） 020406080100Y Y1 1Y Y2 2 吸光度 （nm、y） 00.1650.2560.3850.4860.5970.4990.4990.1830.183 散点图表示： 标准曲线 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 020406080100120 蛋白质含量 吸光度 吸光度 通过计算 上表可用 y=0.00547x+0.0496 表示 样品中蛋白质的含量=（C*Vt/（Vs*Wf*1000） （mg/g） 式中：C查标准曲线值，ug Vt提取液总体积，ml Wf样品鲜重，g Vs测量时加样量，ml 所以 生菜中蛋白质的含量=5.88（mg/g） 苹果中蛋白质的含量=0.2926（mg/g） 3.23.2 （糖） 管号 123456 生菜生菜 苹果苹果 葡萄糖含量 （ug、x） 04080120160200 Y Y1 1 Y Y2 2 吸光度 （nm、y） 00.01980.2870.4790.5890.741 0.7390.739 0.7800.780 散点图表示 糖含量标准曲线 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 050100150200250 葡萄糖含量 吸光度 吸光度（nm、y） 通过计算 上表可用 y=0.00347x+0.0424 表示 样品中糖含量（g/100g 鲜重） （计算所得糖含量（ug）*稀释倍数）/（样品重（g）*106）*100 则 生菜样品中糖含量=0.0739g/100g 苹果样品中糖含量=0.2126g/100g 4 4、结果讨论、结果讨论 结果表示生菜的蛋白质含量为 5.88（mg/g） ，糖含量为 0.0739g/100g；苹果中蛋白 质含量为 0.2926（mg/g） ，糖含量为 0.2126g/100g。即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果， 但苹果中的糖含量高于生菜。 5 5、收获体会、收获体会 生物学是一门以实验为基础的自然科学，现代生物科学的发展尤其依赖科学实验。 在生物教学中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科学方法、 培养我们的动手能力和形成科学素质都起到了至关重要的作用。正是因此，从我们 开始接触生物这门学科开始，就不断有生物实验课程，锻炼我们各式各样的能力。 生物化学是一门严密的课程，对于其每一步，都需要我们认真操作好每一步，认真 读取数据并按照其规则准确计算。对待这样一门