（细胞生物学专业论文）低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞cbt凋亡的研究.pdf

漩疆天学骥士学往论文 诋溢诱导菠承鑫鲳尾鼗蝈薤c b t 蠲亡熬鞲竞 致谢 ( a c k n o w l e d g m e n t s ) 随着这本毕韭论文的诞生，三年的时光也窝将过去，四首过去赞 种滋味都在心头；刚来时候的稚嫩和好奇，学会了基本实验技能时的 欢欣，面对崭新的实验课题的一筹莫展，以及文章初成时的满足和自 信。 在这三年的时问熙我的导师张铭教授对我的关怀和帮助不是简 单的一句谢谢所能够表达的，我的一点一滴的成长都包含了他辛勤的 污水，在3 - 作孛纯严谨级致、一丝不苟的作风一壹是我y - 作、学习中 的榜样；他循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪。 感谢赵小立老师和杜英老师在实验申给我的大力支持，以及在生 活中给我无私的帮助，感谢明镇寰，邵键忠，陈良标等老师在毒睾研的 过程中，给予我无私秘诣导与帮霸。我的师兄黄华荣无论在生活中还 是在_ y - 作中都给了我许多帮助和支持，工作中我有不懂的问题他都会 及时地帮我解答。 实验室孛璐嗣擎徐超，溪妹张氇豢，帮弟骆靖峰，还有吴娲翻， 昊蓉蓉，冯树梅，刘玉侃，苏中渊等，都给过我无私的帮助和支持。 最后，向我的爸爸、妈妈、哥哥致谢，感谢他们对我的理解与支持。 在论文馨将完成之鼯，我的心情无t 法乎静，姣秀褥遥入课题到论 文的顺剥完成，有多少可敬的师长、同学、朋友给了我无言的帮助， 在这嫩请接受我诚挚的谢意1 2 浙江大学硕士学位论文低温诱导淡水白鲳尾鲒细胞c b t 凋亡的研究 中文摘要 淡水白鲳属于喜温性鱼类，水温降至i o 。c 时就出现寒害死亡。本实验室在 1 9 9 7 年建立了淡水白鲳尾鳍细胞系c b t ，发现该细胞系具有与整体相一致的温度 生长特性l o 胁迫致死，这为探讨喜温性鱼类细胞的寒害机理提供了一一个较 为理想的研究模型。 本实验以c b t 细胞为研究对象，探讨了i o 。c 低温导致淡水白鲳尾鳍细胞系 c b t 死亡的原因及其可能机制。实验采用c c k 一8 试剂盒法检测了低温处理前后 的细胞存活率；用荧光染料h 2 d c f d a 染色测定细胞内活性氧( r o s ) 含量的变化； 通过亚二倍体峰和t u n e l 分析检测细胞凋亡，并用琼脂糖凝胶电泳法对死亡细胞 的d n a 进行了分析；用h o e c h s t 3 3 2 5 8 染色观察凋亡细胞核形态变化：比色法测 定乳酸脱氢酶( l d h ) 释放率。实验结果表明，随着c b t 细胞受1 0o c 低温作用时 间延长，细胞存活率显著下降，细胞内r o s 含量和l d h 释放率显著增加( 仪o 0 1 ) 。 低温处理3 d 的c b t 细胞经流式细胞仪检测出现亚二倍体峰，凋亡率为1 3 。再 经3 2 复温1 2 h 后，琼脂糖凝胶电泳显示d n a 凋亡梯带；t u n e l 检测，低温处理 3 d 、4 d 和5 d 的c b t 细胞分别有2 3 4 9 ，2 7 7 2 和3 5 1 0 发生凋亡。低温处 理5 d 的c b t 细胞核分裂成多个小核，呈现出典型的凋亡小体的形状。维生素e 浓度梯度显示，维生素e 对低温处理的c b t 细胞有明显的保护作用，能明显改善 细胞活力和l d t t 的释放现象，且在5 0um 至1 0 0 0um 浓度范围内，该保护作用呈 剂量依赖性。由此认为，i o * c 低温能诱导c b t 细胞凋亡。r o s 参与了i o * c 低温致 c b t 细胞损伤及凋亡过程。 关键词：低温：淡水白鲳；细胞凋亡；活性氧；维生素e 3 浙江太学硕士攀位论文低温诱导淡水自鲳憋鲢绷胞c b t 捌亡的研究 e n g l is ha b s t r a c t t h ew a r m w a t e rf i s hc o l o s s o m ab r a e h y p o m u mc a nn o ts u r v i v ew h e nw a t e r t e m p e r a t u r ei sb e l o wl o 。c o l o s s o m ab r a c h y p o m u mt a i lf i n ( c b t ) c e l ll i n e h a sb e e ne s t a b t i s h e di no u rl a b o r a t o r yi n1 9 9 7 t h i sc e l ll i t i eh a st h e s a m ec h a r a c t e ra st h ef i s ht h a tt h i sc e l lc a nn o ts u r v j v ei nt h e1 0 w a t e r i th a sp r o v i d e dao p t i m a ls t u d ym o d e lt oo b s e r v et h em e c h a n i s mo fc o l d i n j u r yi nw a r m w a t e rf i s h 强e a i m o f t h i ss t u d y i s i o o b s e r v ew h yh y p o t h e r m i a ( 1 0 x ? ) c o u l dl e a dt og b o s s o m a b r a c h y p o m u mc b tc e l ld e a t ha n dt h ep o t e n t i a lm e c h a n i s mi n v o l v e d c e l l v i a b i l i t yw a sm o n i t o r e db yc e l lc o u n t i n gk i t 一8 t h ep r o d u c t i o no fr e a c t i v e o x y g e ns p e c i e s ( r o s ) i nc e l l sw a sd e t e r m i n e db y 2 d c f d a a p o p t o s i sw a s a n a l y z e db yh y o p d i p l o i da p e xa n dt u n e l a g a r o s eg e le l e e t r o 珏h e r e s i sw a s u s e dt od e t e c td n af r a g m e n t a ti0 t 3 h o e c h s t3 3 2 5 8d y in gw a su s e dt oo b s e r v e c o l d i n d u c e dm o r p h o l o g i c a lc h a n g e s t h er e l e a s eo fd e h y d r o g e n a s o ( l d h ) w a sd e t e r m i n e db yc o l o r i m e t r i ca s s a y t h er e s u lt sw e r et h a tt r e a t m e n to f c b tc e l l sa tt h el o wt e m p e r a t u r e ( i o c ) ，c a u s e d8g r e a td e c r e a s ei nc e l l v i a b i l i t y ，a ni n c r e a s eo fp r o d u c t i o no fr o si nc e l l sa n dar e l e a s eo fl 溅 s i m u t t a n e o u s l y ( p ( 0 0 1 ) w h e nc b tc e l l sw e r et r e a t e da tt h el o w t e m p e r a t u r ef o r3 d a y s ，f l o wc y t o m e t r ys h o w e dt h eh y o p d i p lo i da p e x ，a n d t h ea p o p t o t i cr a t ew a s1 3 t h e ni ft h ec e l l st e m p e r a t u r ew a sr e t u r n e d t o3 2 a n dl a s t e df o r1 2 hm o r e a “d n al a d d e r ”p a t t e r nr e p r e s e n t i n g d n af r a g m e n t a t i o nc o u l db eo b s e i v e d t u n e ld e t e a t i o nr e v e a l e dt h a ta f t e r 3 d a y s ，4 d a y sa n d5 d a y sc o l di n c u b a t i o n ( i o 。c ) f o l l o w e db y1 2 hr e w a r m i n g ( 3 2 ) ，t h ea p o p t o t j cr a t e so fc b tc e l l sw e r e2 3 4 9 ，2 7 7 2 a n d3 5 ，1 0 r e s p e c t i v e y a f t e rt h ee 瓣c e l l sw e r ei n c u b a t e da tt h el o wt e m p e r a t u r e f o r5 d a y sf o ll o w e db y1 2 hr e w a r m i n g ，a p o p t o t i cb o d yc o u l db ef o u n d t h e r e s u l t so ft h et e s tb yc o n c e n t r a t i o ng r a d i e n ti n d i c a t e dt h a tt h e 一t o c o p h e r o lc o u l dp r o t e c tt h ec e l lu n d e r1 0 a n dw a sb e n e f i tt ot h e 4 浙江大学硕士学位论文低温诱导淡水白鲳斑髓细胞c b t 凋亡的研究 d e c r e a s e o f t h ev i a b i l i t ya n d t h el d h r e l e a s e i n c 8 c e l l s ，t h i sp r o t e c t i o n w a sa v a i l a b l ei nt h ec o n e e n t r a t i o no fa t o c o p h e r o lb e t w e e n5 0 ma n d 1 0 0 0 “m a 1lt h er e s u l t ss h o w e dt h a tl o wt e m p e r a t u r eo fi 0 c o u l di n d u c e e a r l ya p o p t o s i si nc b tc e l l ，a d d i t i o n a lt r e a t m e n ta tt e m p e r a t u r eo f3 2 ( 2 c o u l dp r o m o t ec b tc e l lt ol a t ea p o p t o s i s 。r o e ；m i g h tp l a yak e yr o t ei 1 1 c o l d - i n d u c e da p o p t o s i so fc b i 、c e l l k e y w o r d s ：h y p o t h e r m i a ；c o l o s s o m ab r a c h y p o m u m ：a p o p t o s i s ：r e a c t i v eo x y g e n s p e c i e s ：a t o c o p h e r o l 5 浙江大学硕士学位论文低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞c b t 凋亡的研究 文献综述 低温对鱼类基因表达的影响 摘要：低温是影响鱼类生长发育和地理分布的重要因素。近年来，有关鱼类 耐寒性分子生物学的大量研究结果发现低温影响了许多基因的表达，有部分是上 调了，也有部分下调了。根据基因表达的蛋白产物的作用，又可分为保护神经系 统的基因、维持运动系统的基因、保护酶系统的基因、代谢合成系统的基因和促 进转录表达过程的基因。作者对这几类低温反应基因的表达与调控及在鱼类耐寒 性作用的最新研究进展进行了介绍。 关键词：鱼，低温，基因表达 a b s t r a c t ：l o wt e m p e r a t u r er e p r e s e n t sm a j o re n v i r o n m e n t a lc o n s t r a i n t s 1 i m i t i n gg r o w t h ，d e v e l o p m e n ta n dd i s t r i b u t i o eo ff i s h e s r e c e n t l yt h e g r e a ta d v a n c e sh a v eb e e nm a d ei nt h er e s e a r c ho f f i s hc o l dt o l e r a n c ei n t h ef i e l do fm o l e c u l a rb i o l o g y ag r e a tn u m b e ro fr e s e a r c h e sd e m o n s i r a t e t h a tav a r ie t yo fg e n e sa r ein d u c e db y1o wt e m p e r a t u r e ，s o m eh a v e b e e n u p r e g u l a t e da n dt h eo t h e rh a v e b e e nd o w nr e g u l a t e d a c c o r d i n gt ot h e f u c t i o n so ft h ep r o d u c t i o n s ，t h e s eg e n e sc a nb ec l a s s i f i e di n t of i v e g r o u p s ，p r o t e c t i n gt h en e u r os y s t e m ，m a i n t a i n i n gt h em o t o rs y s t e m ， p r o t e c t i v ee n z y m es y s t e m ，m e t a b o l i t ep r o d u c t i o ns y s t e ma n de n h a n c i n gt h e t r a n s c r i p t i o n i nt h i sp a p e r ，r e c e n tp r o g r e s s e si nt h es t u d yo fe x p r e s s i o n o fc o l d - - i n d u c e dg e n e sinf i s h e sa n dt h e i rp o s s i b l em e c h a n i s m si nt h e d e v e l o p m e n to fc o l dt o l e r a n c ea r er e v i e w e d k e yw o r d s ：f i s h ，l o wt e m p e r a t u r e ，g e n ee x p r e s s i o n 鱼类作为变温动物，其体温与生存的环境温度直接相关。有些种类生活在一 个比较恒定的温度环境中，如深海或极地海洋，而大部分的鱼类生存的环境温度 是会随着季节的改变而变化的【l l 。低温作为喜温性鱼类生存的胁迫温度，对其生 6 浙江大学硕士学位论文 低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞c b t 凋亡的研究 死起着决定作用。鱼类为了适应低温环境，其体内的生理生化作用发生相应的改 变，而这些改变追本溯源是由于基因表达的变化。2 0 0 4 年g r a c e y ，p o d r a b s k y ， m a l e k 和l u c a s s e n 等分别利用基因芯片和r t - p c r 技术对低温下的鱼类基因的表 达进行了研究，结果发现，绵鲥，鲤鱼，斑马鱼和鳟鱼等在低温环境中，有大量 基因的转录表达发生变化，为其完成整个冷适应过程提供支持1 2 - 5 1 。本文将对与 冷适应紧密相关的一些基因及其功能作一综述。 一、上调的基因 l 、保护神经系统的基因 大脑作为鱼最重要的器官，对温度是非常敏感的，它在鱼进行冷适应的过程 中起着总指挥的作用。室管膜素( e p e n d y m i n ) 是由脑膜细胞分泌的一类糖蛋白， 主要存在于硬骨鱼的脑脊髓流体中，它有两种糖型3 7 k d a 和3 1 k d a l 6 1 。在正常 的生理条件下，e p e n d y m i n 主要以二聚体形式存在，且与胶原纤维的形成有关 8 - 1 0 】，它还能结合钙离子，从而使其构象发生改变i “，1 2 i 。另外，室管膜素还有助 于视神经再生和神经重构【1 3 + “l 。s h y e - j y et a n g 等发现，经过低温孵育后，鲤鱼 和斑马鱼大脑内的室管膜素的编码基因的转录水平明显上升，在数小时内达到最 火值【1 7 l 。因此认为，低温诱导室管膜素基因的表达在鱼类冷适应过程中属于早 期事件，它对低温下的神经系统以及钙离子平衡起着保护作用，为鱼类能在低温 下正常生存提供保障。 浙江大学硕士学位论文低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞c b t 凋亡的研究 ；r 母m 麟m e 6 p o l y m e r 图1e p e n d y m i n 的几种构型及其相互关系 2 、维持运动系统的基因 肌球蛋白( m y o s i n ) 属于马达蛋白，是肌肉组织中最重要的蛋白质之一，约 与 肌肉总蛋白的一半。可利用a t p 产生机械能，最早发现于肌肉组织( m y o s i ni i ) ， 1 9 7 0 s 后逐渐发现许多非肌细胞的m y o s i n ，目前已知的有1 5 种类型( m y o s i n i x v ) 。m y o s i ni i 是构成肌纤维的主要成分之一，由2 个重链和4 个轻链盘绕组 成，重链形成一个双股a 螺旋，c 端与两条轻链构成棒状结构，形成粗肌丝，n 端和两条轻链形成两个球状头部( s u b f r a g m e n t 一1 ，s 1 ) ，可与肌动蛋白相连，具 有a t p 酶活性( 图2 ) 。 图2 肌球蛋白的结构 浙江大学硕士学位论文 低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞c b t 凋亡的研究 w a t a b e 和g u o 研究结果表明，在鲤鱼中，s 1 的重链在不同的温度下有3 种 亚型( h 1 ，h 2 ，h 3 ) 分别占主导地位。在1 0 度环境中，鲤鱼s 1 重链主要由h l 和 h 2 亚型组成，其中h 1 亚型占5 5 ；在3 0 度环境中，鲤鱼s 1 重链主要由h 3 亚型组成，约占8 5 i ”1 。同时编码h 1 和h 2 的基因的转录水平在1 0 度环境中 显著升高【1 9 1 。h l 亚型具有较高的m 9 2 + - a t p a s e 活力和较低的热稳定性( 肌丝滑 动所需的能量较低) ，这有利于鱼类在低温下保持其正常游速【1 ，”1 。因此认为， 鱼类在构成肌球蛋白头部的不同亚型基因的表达调控是其为了对低温环境适应 而作出的改变。 3 、保护酶系统的基因 动物细胞为了适应低温，首先其脂双分子层必须保持完成各种细胞功能所必 需的流动状态，即h o m e o v i s c o u s 适应，这主要是通过改变膜脂成分来实现的”i 。 p o d r a b s k y 和j a s o n 发现，鳙鱼在低温条件下，6 一脱饱和酶( d e s a t u r a s e ) , 和增长碳 链酶( e l o n g a s e ) 的转录水平明显上升，前者有利于形成单不饱和脂肪酸，后者参 于多不饱和脂肪酸的形成【3 】口鲤鱼体内的9 一脱饱和酶也有类似现象：首先，当 鱼体受到低温信号刺激后，体内处于未活化状态的9 一脱饱和酶在2 4 h 内被激活， 开始提高不饱和脂肪酸的比例；接着，随着低温处理时间的延长，编码9 一脱饱 和酶的基因开始转录表达。5 天内，转录水平提高8 1 0 倍，最终导致a9 一脱饱和 酶的活力上升8 一l o 倍【2 , 2 3 】。 在低温下，由于线粒体受到损伤，大量的电子会游离到细胞质中与氧结合形 成活性氧，而后者会严重的伤害到细胞。抗氧化酶作为氧自由基的清除剂，对平 衡细胞内的活性氧起着至关重要的作用。r e n a e 和d o r i s 对低温下鱼体内的氧化 应激反应研究发现，抗氧化酶( s o d ，g p x ) 基因的转录水平在低温诱导下显著 上调，与正常温度相比要上升2 4 倍1 2 ，5 ，2 “。这有利于降低胞内活性氧的浓度， 从而减少低温下活性氧对细胞的损伤作用，为鱼体对低温环境的适应提供保障。 4 、代谢合成系统的基因 物质代谢作为新陈代谢的一部分，分为同化作用和异化作用，它对细胞的生 存和死亡起着决定性作用。鱼类在低温下的物质代谢过程由于环境温度的变化而 浙江大学硕七学位论文 低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞c b t 凋亡的研究 受到一定程度影响。在物质代谢中，为生物合成提供还原力的n a d p 在脂肪酸 和固醇类物质的合成中发挥重要作用，而n a d p 的产生又主要来源于磷酸戊糖 途径。p o d r a b s k y 和s e d d o n 对磷酸戊糖途径的调控酶6 磷酸葡萄糖酸脱氢酶在低 温下的活力和转录水平进行研究发现，在低温环境中，该酶的活力和转录水平显 著上升，但是谷胱甘肽硫转移酶的转录水平却没有明显变化【3 2 ”。前者激活细胞 内的磷酸戊糖途径，产生n a d p 和使还原性谷胱甘肽( g s h ) 再生；后者参与 g s h 和氧自由基结合的反应，从而抑制氧自由基对细胞的损伤作用。因此，低 温下，6 磷酸葡萄糖酸脱氢酶的激活主要是利于n a d p 的生成，促进脂肪酸和固 醇类物质的合成，为脱饱和酶提供足够的底物，使细胞膜的流动性和完整性在低 温下得以保存，大大提高了鱼类对低温的适应性。 a t p 循环之父k r e b s 于1 9 3 7 年提出的三羧酸( t r i c a r b o x y l i ca c i dc y c l e t c a ) 循 环不仅是糖分解代谢的主要途径，也是脂肪、蛋白质分解代谢的最终途径，具有 重要的生理意义。异柠檬酸脱氢酶和柠檬酸合成酶作为t c a 循环的调控酶，控制 着整个t c a 循环的速度。l u c a s s e n 和j a s o n 对鱼在低温下的代谢功能研究发现，异 柠檬酸脱氢酶和柠檬酸合成酶的转录水平与正常温度下相比明显上升，l u c a s s e n 等认为这是代谢功能的温度补偿【3 , 4 , 2 5 j 。 真核生物的a t p 合成酶( f o f l a t p a s e ) 是线粒体氧化磷酸化耦联的关键装置， 能利用电子传递过程中释放的能量合成a t p 。a t p 合成酶分别由3 部分组成，头部 ( f 1 ) ，膜部( f 0 ) 和寡霉素敏感授予蛋白( o l i g o m y c i ns e n s i t i v e c o n f e i n gp r o t e i n ， o s c p ) 。f 1 由o 、b 、y 、6 和五种亚单位组成，拥有催化a t p 合成的能力； f 0 由a 、b 、e 、d 、e 、f 6 和a 6 l 7 种亚单位组成，具有质子导体的作用，其中a 和a 6 l 亚单位合称为a t p a s e 6 8 ，是由线粒体基因编码的。s h i r o 和s h i g e h a r u 对低温下 鲤鱼体内的a t p 合成酶的研究发现，一f 1 、b f 1 、y f l 、c f j 和a t p a s e 6 8 的基 因在低温下的转录水平是正常温度的2 6 倍。“。这为鲤鱼在低温下的生存提供了 能量保障。 细胞分裂周期因子c d c 4 8 作为a t p 酶家族成员之一拥有水解a t p 的能力， 可为细胞的分裂增殖提供能量。在斑马鱼的研究中表明，在一定范围，c d c 4 8 的表达随着温度的降低和处理时间的延长而明显升高1 2 7 1 。因此怀疑c d c 4 8 对低 温下的细胞增殖起着重要作用。 1 0 淅江大学硕士学位论文 低温诱导淡水自鲳尾螭绷腮c b t 凋亡豹研究 5 、健避转蒙表达过程的基蔽 高迁移率族蛋白b 1 ( h i g hm o b i l i t yg r o u pb l ，h m g b l ) 是一一种广泛存在的 d n a 结合凝囱，它参与d n a 的转录、复制、修复以及细胞运动等i ”1 。它与d n a 结台，可稳定孩小薅形获，终为纂澄帮缀缓褥舅毪豹转交调控匿子袁穗节转录活瞧 的作嗣。它邋过维持转录予的感受态和稳定d n a 链的开放结构来激活转荣过程。 h m g b l 鬣自浓度的升高有利于许多活化基因的转淤。a n d r e w 和s o m e r o 对鲤鱼 在低温下的转录水平的研究中缴现，h m g b l 基因的转录表达水平显落上升，认 为它低瀑琢辘中，对稳定核酸魏缝擒发挥着重要的作瘸。两稳定核酸的熊力在整 令冷适应遥程串发挥着穰重要黪律羯，这毽是为嚣么变溢动痨髓对在琢浚滠度在 一定范围内变化作出反应，并最终在该温度下生存下去的主要原因之【2 , 2 2 1 。 冷诱母r n a 结合蛋1 1 1 ( c o l d ，i n d u c i b l er n a - b i n d i n gp r o t e i n ，c i r p ) 怒一种位于 细胞核内的摄自质，它作为分予伴倡在低温下对细胞内的转录和表达水平进行调 控，程送转泶遗翟1 2 鳓。鲤象遴入低滠嚣壤嚣，葵体肉夔c i r p 豹转交承乎缀浃 上舟，8 1 0 天后c i r p 的m r n a 达到蜂值，大约是磁常的5 6 倍，之后又随着时间 的延长，熟转录水平又逐渐下降1 2 1 。 二、下调越基因 在低漱环境中，鱼体内慧蕊水平下调报道的并不多。r e n a e 在对斑马鱼的冷 适应机制的研究中发现，当斑马鱼长时间在低温环境中是，其体内的热激蛋白 ( h e a ts h o c kp r o t e i nh s p ) h s p 9 0 一。和h s p t 0 的转泶水平发生较大程度的下调 1 5 1 。可是如聚只有短对滴冷孵霞，h s p 7 0 麴转录承平并没有明显变化剐。 热激麟子( h e a ts h o c kf a c t o r sh s f s ) 是热激蘩囱表达的转录霹予。它终_ 薅l 与 热激蛋白( h e a ts h o c kp r o t e i nh s p ) 基因上游的热激元件( h e a ts h o c ke l e m e n t h s e ) ，从而启动热激蛋白的表达。h s f l 是热激因子家族成员之一，斑马鱼中的 h s f l 有两种表型，其对应的表达基因分剐为z h s f l a 和z h s f l b 。研究终聚表明， 在褰灌落凝- f ，z h s f l a z h s f l b 鳃缱率疆受毒予歪露承平；纛在氛滋袋传下， z h s f l a z h s f l b 的比率则下降至q 讵常的二分之。因此认为，z h s f l a z h s f l b 的比率 可能预示糟热激蛋白h s p 7 0 的应急特异性表达1 3 ”。 浙江大学硕士学位论文低温诱导淡水白鲳尾鳍细胞c b t 凋亡的研究 三、问题与展望 鱼类对低温胁迫的响应是由多基因表达产生的响应综合，而并不只是简单的 累加。研究这些基因以及它们在低温下的转录表达关系，从而揭示鱼类耐寒性的 分子机理，有利于提高鱼类的耐受低温的能力，延长鱼类耐受低温的时间，从根 本上提高鱼类的耐寒性。 低温诱导的基因大多已被克隆和鉴定，应用分子生物学手段，鱼类在低温环 境中的生化和分子生物学机制正被逐步阐明，但仍有许多问题亟待研究，如低温 信号是如何被感知? 低温胁迫下抗寒基因的表达依赖于多种转录因子的调节，而 这些转录因子有哪些? 它们的作用方式又是怎样的? 这些问题的解决将有助于 阐明低温胁迫的信号转导途径，因此已成为鱼类分子生物学研究的领域的前言内 容。 参考文献 3 4 5 6 w a t a b e ，s ，t e m p e r a t u r e p l a s t i c i t y o f c o n t r a c t i l e p r o t e i n s i n 郧h m u s c l e i e x p b i o l ，2 0 0 2 2 0 $ ( p t1 5 1 ：p 2 2 3 1 6 g r a c e ) , , a y ，e la 1 ，c o p i n gw i t hc o l d ：a ni n t e g r a t i v e , m u f t i t i s s u ea n a t y s i so f t h et r a n s c r i p t o m e o f a p o i k i l o t h e r m i cv e r t e b r a t e p r o c n a i l a c a ds c i u s a ，2 0 0 4 1 0 1 ( 4 8 ) ：p 1 6 9 7 0 5 p o d r a b s k y , j e a n dg n s o m e r o c h a n g e s 抽g e n ee x p r e s s i o na s s o c i a t e dw i t ha c c l i m a t i o nt o c o n s t a n tt e m p e r a t u r e sa n d f l u c t u a t i n gd a f f yt e m p e r a t u r e si na na n n u a lk i l l i l i s ha u s t r o f u n d u l u s l i m n a e u s je x pb i o l ，2 0 0 4 2 0 7 ( p t1 3 1 ：p 2 2 3 7 5 4 l u c a s s e n ，m ，e ta 1 ，m i t o c h o n d r i a l p r o l i f e r a t i o ni nt h e p e r m a n e n tnt e m p o r a r yc o l d e n z y m e a c t i v i t i e s a n d m r n a l e v e l s i n a n t a r c t i ca n d t e m p e r a t e z o a r c i d 如 a mj p h y s i o lr e g u l i n t e g r c a m pp h y s i o l ，2 0 0 3 2 8 5 ( 6 ) ：p r 1 4 1 0 - 2 0 m a l e k , r l ，e ta 1 ，t h ee f f e c t so f t e m p e r a t u r er e d u c t i o no ng e n ee x p r e s s i o na n do x i d a t i v e s t r e s si ns k e l e t a lm u s c l e f r o ma d u l tz e b r a f i s h c a m pb i o c h e m p h y s i o lct o x i c o lp h a r m a c o l ， 2 0 0 4 1 3 8 ( 3 ) ：p 3 6 3 7 3 h o f f m a n n ，w ，g o l d f i s he p e n d y m i n s ：c e r e b r o s p i n a l f l u i d p r o t e i n so f m e n i n g e a lo r i g i n p r o g b r a i nr e s ，1 9 9 2 9 1 ：p 1 3 7 浙江大举硕上学位论文低温诱导淡水白鲳尾鲭细胞c b t 凋亡的研究 7 k o n i g s t o r f e la ss t e r r e r , a n dw h o f f m a n n ，b i o s y n t h e s i so f e p e n d y m i n s f r o mg o l d f i s hb r a i n 。 jb i o lc h e m ，1 9 8 9 2 6 4 ( 2 3 ) ：p 1 3 6 8 9 9 2 8 h o f f m a n n ，w ，e p e n d y m i s a n d t h e i r p o t e n t i a l r o l e 执n e u r o p l a s t i c i t y a n d r e g e n e r a t i o n ： c a l c i u m - b i n d i n g m e n i n g e a l g l y c o p r o t e i n s o f t h e e e r e b r o s p i n a l f l u i d a n d e x t r a c e l l u l a r m a t r i x i n tjb i o c h e m ，1 9 9 4 2 6 f s ) ：p 6 0 7 1 9 9 h o f f m a n n ，w a n d h s c h w a r z ，e p e n d y m i n s ：m e n i n g e a l - d e r i v e d e x t r a c e l l u l a r m a t r i x p r o t e i n s a tt h eb l o o d - b r a i nb a r h e i n tr e vc y t o l ，1 9 9 6 1 6 5 ：p 1 2 1 - 5 8 稳 s c h m i d t ，r ，c e i l - a d h e s i o nm o l e c u l e si nm e m o r y f o r m a t i o n b e h a vb r a i nr e s , 1 9 9 5 ，辗l * 秘： p ，6 5 7 2 1 1 g a n s s ，b 。a n d 辍h o f f m a n n ，c a l c i u mb i n d i n g s i a l i ca c i d sa n di t se f f e c to nt h e c o n f o r m a t i o no f e p e n d ) r a i n s e u rjb i o c h e m 1 9 9 3 2 1 7 ( 1 ) ：p 2 7 5 8 0 1 2 s h a s h o u a ，v e ，t h er o l eo f b r a i ne x t r a c e l l u l a r p r o t e i n s 如n e u r o p l a s t i c i t ya n dl e a r n i n g c e l l m o ln e u r o b i o l ，1 9 8 5 ，5 ( 1 - 2 ) ：p 1 8 3 m 2 0 7 1 3 s e h m i d t ，je t a n d m ，s c h a e h n er r o l e f o r c e l l a d h e s i o n a n d g l y c o s y l ( h n k - 1 a n d o l i g o m a n n o s i d e ) r e c o g n i t i o ni nt h es h a r p e n i n go f t h er e g e n e r a t i n gr e t i n o t e c t a l p r o j e c t i o ni n g o l d f i s h jn e u r o b i o l ，1 9 9 8 3 7 ( ：p 6 5 9 7 1 挂 s c h r a i d l ，l t a n dv e s h a s h o u a ，a n t i b o d i e st oe p e n d y m i nb l o c kt h es h a r p e n i n go f t h e r e g e n e r a t i n gr e t i n o t e c t a l p r o j e c t i o ni ng o l d f i s h b r a i nr e s 1 9 8 8 4 4 6 ( 2 ) ：p 。2 6 9 8 4 1 5 t s c h m i d t ，r ，e la 1 ，n e u r o n a l p l a s t i c i t yd e p e n d i n go nag l y c o p r o t e i ns y n t h e s i z e di ng o l d f i s h l e p t o m e n i n x p r o gb r a i nr e s ，1 9 9 2 9 1 ：p 7 - 1 2 1 6 s h a s h o u a ，v e 。，t h er o t e 够e p e n d y m i ni nt h ed e v e l o p m e n to f t o n gl a s t i n gs y n a p t i cc h a n g e sj p h y s i o l ( p a r i s ) ，1 9 8 8 8 3 ( 3 ) ：p 2 3 2 - 9 1 7 ，t a n g , s j ，e la t ，c o l d - i n d u c e d e p e n d y m i ne x p r e s s i o n 如z e b r a f i s h a n dc a r p b r a i n ： i m p l i c a t i o n s f o rc o l da c c l i m a t i o n “f e b sl e l t ，1 9 9 9 4 5 9 ( i ) ：p 9 5 9 1 8 g u n ，x f ，m n a k a y a ，a n d s w a t a b e ，m y o s i ns u b f r a g m e n t - 1 i s o f o r m s h a v i n g d i f f e r e n t h e a v y c h a i n s t r u c t u r e s f r o m f a s t s k e l e t a l m u s c l e o f t h e r m a l t y a c c l i m a t e d c a r p j b i o c h e m ( t o k y o ) , 1 9 9 4 1 1 6 ( 4 ) ：p 7 2 8 3 5 h i r a y a m a ，￥a n d s w a t a b e ，s t r u c t u r a l d i f f e r e n c e s i n t h ec r o s s b r i d g e h e a d o f t e m p e r a t u r e “a s s o c i a t e dm y o s i ns u b f r a g m e n t - 1i s o f o r m s f r o mc a r p f a s ts k e l e t a lm u s c l e e u rj b i o c h e m ，1 9 9 7 ，2 4 6 ( 2 ) ：p 。3 8 0 - 7 塑垩查兰堕兰兰堡鎏塞堡塑垩量选查垒些鳘楚墅壁塑塑圭塑竺塞 2 0 t ( 抽l e ，n j a n d l a j o h n s t o n ，p l a s t i c i t yo f m y o s i nh e a v yc h 口蕊。审r 酷s 函 w 确f 删p e ，口船辟 。c c 弧m n t 抽“如g 邶d 瑚啦“q h 溉dd “r i n g0 n t o g e 掣汛t h ec o m m o 月c 。甲c y ”i h * r p l 0l i 。