大小鼠眼眶取血方法PPT课件.ppt

1,大小鼠眼眶取血方法交流（附图）,2014-5-5,Page2,交流提纲,实验环境实验材料,动物处理,取血容量时间安排,具体操作,.,血样处理,问题讨论,Page3,环境材料,B毛细管,0.9mm100mm，看个人习惯使用，经常一管三断，30mm/管，弃去中间段。,EP管加入0.1%肝素钠（150U/mg）0.1mL，均匀润湿，50以下干燥；适用1mL全血的抗凝，效果良好。取血时必须提前检查管的质量，标号分组，适当多备。,C抗凝EP管,D计时工具,A通风台面,长时间操作，透气通风宽敞台面，便于多组多步骤同时操作,Page3,Page4,Page4,动物处理,实验期间，补充体液，目前常规为：取血后灌胃给予等统计生理盐水/葡萄糖溶液。,动物体重要求一般不低于250g,给药前禁食12-24h，给药前提前0.5-1.0h按0.5-1.0%（V/W）给水,实验之后，外用消炎药涂布眼部,Page5,Page5,容量时间,注射一般呈现降低趋势，给药后较短时间内采集的点数适当增加；灌胃存在Cmax-tmax，需通过考察tmax，根据一般原则，适当调整时间间隔。,取血容量时间安排,选点一般原则,预实验建立,药物性质,给药途径,分布相3-4个点,吸收相3-4个点,吸收相3-4个点,一般12h内取血不超过动物质量2.0%（v/w）,每次0.25-0.5mL,Page6,Page6,大鼠眼眶取血流程,6样品摇匀,1.将大鼠按压在鼠笼上，拇+中+食指固定住头部,3.右手持毛细管从眼内眦部，与鼠面成45夹角，旋转刺入,2.紧握颈部，压迫颈两侧，使眼突出，眶后静脉丛充血,4.固定身体，压住后肢，放松手指，调整毛细管，流畅出血。,5.取血完成，立即除去颈部压力，将采血器拔出，按压止血。,6血样管轻轻混匀，防止凝血、溶血。,2压迫颈部,3旋转刺入,4固定采血,5去管止血,1左手保定,Page7,Step1A建议笼子内放置重物防止摇晃；B一定要带手套；C开始必须牢牢固定住头部头部乱动，扎位置容易得偏离，且易被咬伤；D可在此时将大鼠取血侧的胡须剪掉，防止接触凝血。,Page7,大鼠眼眶取血流程,Page8,Step2A可用管试探性触碰眼球是否已经突出；B此时大鼠反抗挣扎最厉害，保证抓紧的同时，不能太过，使其窒息死亡。,Page8,大鼠眼眶取血流程,Page9,Step3A针头斜面先向眼球，刺入后再转一定角度使斜面对着眼眶后界；B刺入深度，小鼠约2-3mm，大鼠约4-5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，管退出约0.1-0.5mm，边退边旋转；C不要使用管的尖锐锋利端插入，易留玻璃碎片在眼内，造成持续伤害，使得下次反抗增加；D拿管的手要保持干净，带血渍的手指不要接触管的两端，易造成凝血，可用醇水擦洗。,Page9,大鼠眼眶取血流程,Page10,Step4A一般血流速度快，证明插破了眼眶动脉，如果血流速度慢，证明要调整毛细管的位置，血液都流到组织中了，没顺毛细管流出来；B出血过程中如遇到出血不畅不用着急拔毛细管可以调整一下毛细管的扎入位置或深或浅的挑正一下血会重新流出；C如看见血液已经在毛细管中凝固必须迅速拔除毛细管，再搽干净眼睛，重新换管扎针；D等到出血后将力道转移到大鼠的身体上大鼠出现乱动的情况很大的一部分力是他的后肢使出来的保证她的后肢无法乱蹬就能很好的保定大鼠，然后将中指和食指处解除一半的力道，可以保证血液的顺畅,Page10,大鼠眼眶取血流程,Page11,Step5A当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。B尽量把眼睛周围的血渍搽干净，避免结块影响下次取血。,Page11,大鼠眼眶取血流程,Page12,大鼠眼眶取血流程,Page12,Page13,大鼠眼眶取血流程,Page13,Page14,大鼠眼眶取血流程,Page14,Page15,Page15,Page16,大鼠眼眶取血流程,Page16,Page17,Page17,大鼠眼眶取血流程,Page18,Page18,大鼠眼眶取血流程,19,Page19,大鼠眼眶取血流程,Page20,大鼠眼眶取血流程,Page20,Page21,大鼠眼眶取血流程,Page21,22,血样处理,血样处理,血清不抗凝,血浆肝素钠抗凝,A全血37水浴0.51h，,短时间内（30min）,低速（4000）离心（10min