苦参碱对小鼠免疫器官的影响.docVIP

苦参碱对小鼠免疫器官的影响 作者：王晓燕 ,李伟忠 梁磊 常建兰 杨敏慧 李祖国【摘要】 目的观察苦参碱(MT) 对昆明小鼠免疫器官的影响。方法将40只昆明小鼠分为苦参碱组、5-Fu组、苦参碱+5-Fu组和生理盐水(NS)阴性对照组。给药组小鼠分别按40，30，20+30 mg/kg腹腔注射给药。计算不同组别小鼠的胸腺指数，脾脏指数和肝脏指数，并进行病理组织学观察。结果苦参碱组小鼠的胸腺、脾脏和肝脏指数均无显著变化(P>0.05);5-Fu组小鼠胸腺和脾脏指数均显著降低(P<0.01);苦参碱+5-Fu组小鼠的胸腺指数与对照组相比显著降低(P<0.01)。病理组织学光镜观察结果显示，苦参碱组小鼠胸腺和脾脏没有明显的萎缩和破坏，肝脏组织无明显病理变化。结论苦参碱可以拮抗5-Fu对脾脏的免疫抑制，使脾脏指数增加。 【关键词】 苦参碱;免疫;小鼠Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of Matrine on the immunological organs of Kunming mice.Methods40 Kunming mice were divided randomly into 4 groups: Matrine treated, 5-Fu treated, Matrine+5-Fu treated and control groups, subjected to 40, 30, 20+30 mg/kg and normal saline through abdominal cavity injection, respectively. The weight and index of thymus gland, spleen and liver of mice were measured. The tissues of thymus, spleen and liver were observed by pathological examination.ResultsMatrine had no significant effect on the weight and indexes of thymus, spleen and liver in Kunming mice(P>0.05); 5-Fu decreased the weight and indexes of thymus and spleen(P<0.01); Matrine+5-Fu decreased the weight and index of thymus (P<0.01). The weight and index of spleen matrine+5-Fu treated group were higher than those of 5-Fu treated group (P<0.01) while almost the same as those of control and Matrine treated group(P>0.05). H&E staining showed the structure of thymus, spleen and liver was almost normal in Matrine-treated group.ConclusionMatrine can antagonize immune suppression induced by 5-Fu and raise the weight of spleen in mice.Key words：Matrine; Immune; Mice苦参碱是豆科植物苦参的主要有效成分，药理作用广泛，具有清热利湿、退黄利尿、抗菌、抗过敏等多种作用1， 用于治疗多种疾病。我们对苦参调节小鼠免疫功能的作用进行了实验研究。报道如下。1 材料和方法1.1 动物SPF级昆明种小鼠40只，雌雄各半，体质量1822 g，同性别小鼠之间的体质量相差不超过3 g，由南方医科大学实验动物中心提供。实验动物中心使用许可证号：SCXK(粤)2006-0015;2006B023;2006A044。饲养室温度: 2025，相对湿度：40%70%。自由饮水、进食普通饲料。鼠笼垫料与饮水壶定时换洗，保持清洁。1.2 药物苦参碱由宁夏盐池县医药公司提供，批号060630，纯度99%。25 mg/ml氟尿嘧啶注射液(5-Fu)，由上海旭东海普药业生产，批号040108。1.3 苦参碱对昆明小鼠免疫器官的影响将40只小鼠分为4组，每组10只，雌雄各半。随机分为NS阴性对照组，苦参碱组，5-Fu组和苦参碱+5-Fu组。均采用腹腔注射给药。苦参碱剂量为40 mgkg-1d-1;5-Fu剂量为30 mg/kg，2次/周;苦参碱+5-Fu合用组为20 mgkg-1d-1+ 30 mg/kg;对照组予腹腔注射生理盐水。连续注射14 d。各组小鼠停药后次日称重，采用颈椎脱臼法处死完整取出脾脏、胸腺和肝脏后称重，计算胸腺指数、脾脏指数和肝脏指数。胸腺、脾脏和肝脏病理学切片行HE染色观察。胸腺(脾、肝脏)指数=胸腺(脾、肝脏)重量(mg)/体质量(kg)1.4数据分析和统计方法所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行统计处理，实验数据用s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，方差齐性，组间两两比较采用LSD法，方差不齐的采用Tamhanes T2法;取P<0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1苦参碱对昆明小鼠免疫器官的影响经单因素方差和LSD法分析，结果显示，与阴性对照组相比，苦参碱组小鼠的胸腺、脾脏和肝脏指数均无显著变化(P>0.05);5-Fu组小鼠胸腺和脾脏指数均显著降低(P<0.01)。苦参碱+5-Fu组小鼠的胸腺指数与对照组相比显著降低(P<0.01)。苦参碱+5-Fu组小鼠脾脏指数与5-Fu组相比均有显著性差异(P<0.01)，与对照组、苦参碱组比较无显著性差异(P>0.05);提示苦参碱可以拮抗5-Fu对脾脏的免疫抑制，使脾脏指数增加。结果见表1。表1苦参碱对昆明小鼠胸腺、脾脏和肝脏指数的影响经析因方差分析表明，昆明小鼠不同组别和不同器官指数主效应均有统计学意义(P<0.05)，即不同分组、不同器官间比较均有显著性意义。小鼠免疫器官重量的交互效应轮廓图(图1)显示二者呈平行关系，提示二者交互作用不显著(P=0.310)。而免疫器官指数的交互效应轮廓图(图2)显示二者呈不平行关系，提示二者交互作用显著(P<0.001)。图1不同组别和器官对小鼠免疫器官指数交互作用轮廓图*P<0.05, *P<0.01, vs 对照组图2苦参碱对昆明小鼠免疫器官指数的影响2.2 不同组别小鼠免疫器官组织病理形态学观察大体解剖结果显示，与对照组相比，苦参碱组小鼠的胸腺、脾脏和肝脏无显著变化;5-Fu组小鼠的胸腺和脾脏萎缩变小;苦参碱+5-Fu组的胸腺萎缩，但脾脏和肝脏体积无明显变化。HE染色结果见图3。与对照组相比，苦参碱处理组小鼠胸腺和脾脏结构尚清楚，没有明显的萎缩和破坏，脾血窦有轻度扩张充血。肝脏组织轻度水肿变性。5-Fu组小鼠胸腺和脾脏皮质萎缩，淋巴细胞数目减少，甚至消失;髓质内组织细胞和纤维细胞增生明显。苦参碱+5-Fu组小鼠胸腺和脾脏的病理改变与5-Fu组类似，但病变程度稍轻。3讨论本研究主要比较了NS对照组、苦参碱、5-Fu和苦参碱+5-Fu处理组间胸腺、脾脏和肝脏指数的变化。这三种器官在免疫学中占据极其重要的位置。免疫功能的强弱与这些免疫器官的重量变化有着密切关系。胸腺为机体的重要淋巴器官，主要介导细胞免疫反应，对T淋巴细胞的成熟至关重要，为周围淋巴器官正常发育和机体免疫所必需。产生和分泌胸腺素和激素类物质以及能储存分泌免疫细胞和免疫分子等。脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总量的25%，含有大量的淋巴细胞和巨嗜细胞，是T、B淋巴细胞居留增殖以及淋巴细胞接受抗原刺激、发生特异性免疫应答的场所。脾脏还产生免疫活性细胞而发挥免疫功能，是抗体生成的器官。肝脏不仅是机体最大的消化与代谢器官，而且是重要的免疫器官。肝血窦表层的肝巨噬细胞(又称为枯否细胞)具有吞噬细菌和病毒的作用，对细胞因子(一类重要的免疫因子)的分泌也有密切关系，参与调节免疫、炎症反应及调控和基质修复等功能，还能清除衰老与变性的血细胞和肿瘤细胞。A-胸腺B-脾脏图3不同组别小鼠免疫器官病理组织学光镜观察(200)研究中，苦参碱组小鼠的胸腺、脾脏及肝脏指数与N.S.对照组相比均无显著性差异(P>0.05);5-Fu组小鼠胸腺、脾脏指数均显著降低(P<0.01)。苦参碱+5-Fu组小鼠的胸腺指数与对照组相比显著降低(P<0.01)。苦参碱+5-Fu组小鼠脾脏指数与5-Fu组相比均有显著性差异(P<0.01)，与对照组、苦参碱组比较无显著性差异(P>0.05);提示苦参碱可以拮抗5-Fu对脾脏的免疫抑制，使脾脏指数增加。另外，实验中我们也观察到，5-Fu处理组的大部分小鼠都出现了精神萎