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文档简介

,化学发光免疫检测,1,学习目标,化学发光检测的分类及原理了解常见进口、国产全自动化学发光仪检测原理,2,酶促化学发光,01,辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（ALP）,吖啶酯发光异鲁米诺发光电化学发光,直接化学发光,02,化学发光免疫检测分类,3,1.酶促化学发光,HRP,辣根过氧化物酶常用的底物为鲁米诺或其衍生物,碱性磷酸酶常用的底物为AMPPD和4-MUP,ALP,酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光,常用的酶HRP和ALP,4,鲁米诺在碱性缓冲液中被HRP催化发生氧化反应,+N2+H2O+光,1.酶促化学发光,5,AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有230min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，1560min内光强度保持相对稳定,1.酶促化学发光,6,利用酶对发光底物催化作用而直接发光，通过光强度的测定而直接进行定量。,1.酶促化学发光,反应原理图,7,1.酶促化学发光,特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的稳定性不如直接化学发光好。代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS2、DXI800,8,1.酶促化学发光,代表仪器：迈瑞CL-2000i、安图AutolumoA2000,9,2.直接化学发光,不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质,反应迅速,1,背景低,2,信比高,3,10,吖啶酯在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见，特点发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。,吖啶酯,+CO2+光,吖啶酯化学发光,11,吖啶酯发光,代表仪器：拜耳公司的ACS180西门子的ADVIACentaur雅培的ARCHITECT,12,+NaOH+H2O2发光激发底物1激发底物2,delay2.5s,delay0.1s,异鲁米诺发光,原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯在缓冲液不稳定、易水解的缺点,13,异鲁米诺发光,代表仪器：瑞典索灵公司的LIAISON、新产业MAGLUMI2000/4000,14,是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质特点：反应在电极进行；电子供体为：三丙胺（TPA）化学发光剂：三联毗啶钌,三联毗啶钌分子结构图,电化学发光,15,电化学发光反应原理,底物：三联吡啶钌Ru(bpy)2+3、三丙胺(TPA),这一过程可在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号增强,16,电化学发光,代表仪器：罗氏e601、e411,17,进口全自动化学发光仪,18,国产全自动化学发光仪,19,测试题与讨论,酶促化学发光是发光底物经的降解作用而发出光,常用的酶有：
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