菌落总数的测定PPT课件.ppt

食品中菌落总数的测定,1,一、菌落总数,食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。,2,二、菌落总数测定的意义,1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。2、预测食品存用的期限长短。3、了解细菌在食品中的繁殖动态。,3,三、设备和材料,除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：361，301。冰箱：25。恒温水浴箱：461。天平：感量为0.1g。均质器。振荡器。无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。无菌培养皿：直径90mm。pH计或pH比色管或精密pH试纸。放大镜或/和菌落计数器。,4,四、平板倾注法测定菌落总数,检验步骤(程序)：检样稀释处理做平板培养菌落计数报告结果,5,（一）、样品的稀释及做平板,1、固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min10000r/min均质1min2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min，制成1:10的样品匀液。,6,2、液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。,（一）、样品的稀释及做平板,7,（一）、样品的稀释及做平板,3、用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。4、上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。,（一）、样品的稀释及做平板,8,（一）、样品的稀释及做平板,5、根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。,（一）、样品的稀释及做平板,9,（一）、样品的稀释及做平板,6、及时将15mL20mL冷却至46的平板计数琼脂培养基（可放置于461恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。,（一）、样品的稀释及做平板,10,1:10,1:1000,1:100,1:10000,25g/ml样品,11,注意：检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。,12,（二）培养,1、待琼脂凝固后，将平板翻转，361培养48h2h。水产品301培养72h3h。2、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层3、琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按1、条件进行培养。,13,（三）计数和报告,到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于04，但不得超过24h。,14,1、菌落的选择,（1）、单个菌做一个菌落计（2）、呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算。（3）、如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。,15,2、平板菌落计数的选择,（1）、选取菌落数在30300之间的平板，若有二个稀释度均在30300之间时，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字。,16,（2）、如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告（3）、如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告（4）、如菌落数有的大于300，有的又小于30，不在30300之间，以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告（5）、如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告。,17,3、菌落数的报告,菌落数在1100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。,18,(四)、检验注意事项,1、对照平板出现几个菌落时，要追加对照平板；2、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分；3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴;4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触;,19,5、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min.6、稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，不可作为检样计数报告的依据。,20,复习题,1、什么是菌落总数？2、测定食品、饮料等产品的菌落总数