（环境科学专业论文）共振瑞利散射和高效液相色谱在药物分析中的应用研究.pdf

摘要 再与硫酸葡聚糖钠( d s s ) 结合形成离子缔合物，使溶液的r r s j 虽度显者增强斤产生相应的散射 光谱。其最人r r s 波长位丁4 0 0 姗。考察了适宜的反应条彳， ：和影响冈素：在最佳实验条件下， 硫酸葡聚糖钠的线性范围为0 。0 4 2 0g g m e - 1 ，线性同归方程为蝎冗s = 2 2 7 0 7 + 9 9 6 。3 9 8 c ，相 关系数，为0 9 9 9 3 。该方法具有较高的灵敏度，对硫酸葡聚糖钠的检出限为2 8n g m l _ 。另外， 考察了共存物质的影响，测定了合成样品中硫酸葡聚糖钠的含量，效果令人满意。 4 银( i ) 一邻菲罗啉体系共振瑞利散射测定肝素钠 在p h = 5 4 0 的醋酸一醋酸钠缓冲溶液中，银( i ) 与邻菲罗啉形成配刚离子 a g ( p h e n ) 2 】+ ，进 而与肝素钠( h e p ) 结合形成离子缔合物，引起反应体系共振瑞利散射显著增强，其最大r r s 波 长位于3 9 8n l t l 。在最佳实验条件下，a r r s = 8 4 7 4 + 1 0 5 8 0 7 c ，相关系数r 为0 9 9 9 8 ，肝素钠的 线性范围为0 0 4 6 0p g ，m l ，检出限为2 0n g m l - 1 。 5 r p h p l c 法测定康言灵口腔炎喷雾剂中绿原酸和咖啡酸的含量 建立了反相高效液相色谱一紫外检测器同时测定康言灵口腔炎喷雾剂中绿原酸利咖n 酸的 方法。采用岛津s h i m - p a c kv p o d s 柱( 5g m ，2 5 0m i l l 4 6m mi d ) ，以甲醇一0 0 1 2m o l l 。的 磷酸( 2 7 ：7 3 ) 为流动相，柱温为3 0 ，流速为o 8m lm i n 一，紫外检测器波长为3 2 3n m 。结 果表明绿原酸在0 5 1 9 1 8 0g g m l 1 ( ，= o 9 9 9 6 ) 、咖啡酸在2 0 - 3 6 0 0p g m l - 1 ( ，= o 9 9 9 7 ) 范围内具有良好的线性关系，平均同收率( n = 9 ) 分别为9 7 5 和1 0 0 4 ，r s d 分别为1 0 和 l 。o ，检出限( s 麒= 3 ) 分别为0 。1 0g g m e - 1 和o 。4 0g g m l ，定最限( s n = 1 0 ) 分别为0 3 6 a g m l _ 1 和1 4 0 “g m l 。该方法简便、重现性好、准确度高，可作为康言灵口腔炎喷雾剂中咖啡酸刺 绿原酸的测定方法。 关键词：共振瑞利散射咖啡酸硫酸葡聚糖钠肝素钠绿原酸高效液相色谱 a b s t r a c t s t u d y o nt h ed e t e r m i n a t i o no f p h a r m a c e u t i c a l sb y r e s o n a n c er s 0 m e a y l e i g h s c a t t e r i n ga n dh i g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y m a s t e ro fe n v i r o n m e n ts c i e n c e ：d il i a n g s u p e r v i s o r ：p r o f e s s o rh o n gq u nl u o a b s t r a c t s p e c t r o p h o t o m e t r yi sac l a s s i c ，r a p i d ，s i m p l ea n dc o n v e n i e n ta n a l y t i c a lt e c h n o l o g y ，w h i c hi s w i d e l yu s e dt oa n a l y z ep h a r m a c e u t i c a l s i nr e c e n ty e a r s ，r e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n g ( r r s ) i sa n e wa n a l y t i c a lt e c h n o l o g yw h i c hi sp r o v i d e dw i t hh i g hs e n s i t i v i t y ，c h e a p n e s si n s t r u m e n t ，s i m p l e o p e r a t i o na n dr a p i da n a l y s i ss p e e d a tp r e s e n t ，t h er r sm e t h o dh a sb r o u g h tt om u c hm o r ea t t e n t i o n a n di n t e r e s t i n gf o rt h er e s e a r c h e r si nd e t e r m i n i n gp h a r m a c e u t i c a l sa n do t h e rf i e l d s i th a sb e e n q u i c k l yd e v e l o p e da n d h a sb e e na p p l i e di nt h ed e t e r m i n a t i o no fb i o m a c r o m o l e c u l e s ，t r a c em e t a li o n s a n dn o n m e t a l s 蕊w e l la so r g a n i cm a u e m h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) i sa n e ws e p a r a t i o nt e c h n o l o g yb a s e do n c l a s s i cl i q u i dc h r o m a t o g r a p h ya n dg a sc h r o m a t o g r a p h yi n2 0 c6 0 s i ta d o p t sn e ws t y l eh i g hp r e s s u r e p u m p ，h i g hs e n s i t i v i t yd e t e c t o r , h i g he f f i c i e n tp e r f o r m a n c ep a r t i c u l a t es o l i dp h a s e h p l c h a saf a s t d e v e l o p m e n ts p e e d ，a n do n l i n ea n a l y s i s c a nb e a c h i e v e db yc o n n e c t i n gw i t ho t h e ra n a l y t i c a l i n s t r u m e n t s u pt on o w , h p l c h a sb e e nw i d e l yu s e di ne n v i r o n m e n ts c i e n c e ，a g r i c u l t u r e ，c h e m i s t r y , m a t e r i a l ，b i o l o g y , m e d i c i n ep h a r m a c e u t i c sa n ds of o r t h 。 i nt h i sd i s s e r t a t i o n s o m eo r g a n i cm a t t e rs u c ha sc a f f e i ca c i d ( c a ) i n t e r a c t i o nw i t hp b ( i i ) ，a g ( i ) 一p h e n a n t h r o l i n eh a v eb e e ns t u d i e db yt h er r st e c h n o l o g y ，a n dw eh a v ea l s or e s e a r c h e dt h e r r sp h e n o m e n o nb e t w e e nt w ot y p eo fa c i dm u c o p o l y s a c c h a d e s ( d e x t r a ns u l f a t es o d i u ma n d h e p a r i n ) a n da g ( i ) - p h e n a n t h r o l i n e i na d d i t i o n ，t h ed e t e r m i n a t i o nc h l o r o g e n i c a c i da n dc a f f e i c a c i di nk a n gy a nl i n gs t o m a t i t i ss p r a yh a sb e e nd i s c u s s e db yr e v e r s ep h a s eh i g hp e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( r p - h p l c ) t h em a i nc o n t e n t sa r ea sf o l l o w s ： 1 r e s o n a n c e 。g a y l e i g hs c a t t e r i n ga n dr e s o n a n c en o n l i n e a rs c a t t e r i n gs p e c t r o s c o p yo fp b ( i i ) 一c a f f e i c a c i dc h e l a t ec o m p l e xa n di t sa n a l y t i c a la p p l i c a t i o n i nt h em e d i u mo f5 ，5 一d i e t h y l b a r b i t u f i ca c i ds o d i u ma n ds o d i u ma c e t a t eb u f f e rs o l u t i o n ( p h6 8 0 ) ， t h ec o m p l e xo fc a f f e i ca c i da n dp b ( i i ) w i l ls i g n i f i c a n t l yl e a dt ot h ee n h a n c e m e n to ft h er e s o n a n c e p 商人丫硕十学伊论文 r a y l e i g hs c a t t e r i n g ( r r s ) i n t e n s i t y , s e c o n d o r d e rs c a t t e r i n g ( s o s ) i n t e n s i t ya n df r e q u e n c e d o u b l e s c a t t e r i n g ( f d s ) i n t e n s i t y t h em a x i m u mr r sp e a kw a sa t4 7 0n n l ，a n da n o t h e rs m a l ls c a t t e r i n g p e a kw a sa t3 2 0a m t h em a x i m u ms o sp e a kw a sa t5 6 0 r i m ，a n dt h em a x i m u mf d sp e a kw a sa t 4 4 5 n m t h et h r e es c a t t e r i n gi n t e n s i t i e sa r ed i r e c t l yp r o p o r t i o n a lt ot h ec o n c e n t r a t i o no fc a f f e i ca c i d i nr a n g eo f 2 0 x 1 0 6m 0 1 l 一4 0 x 1 0 m 0 1 l - 1f o rr r sm e t h o da n ds o sm e t h o d 5 0 x 1 0 一m 0 1 l 一 1 5 x1 0 一m o i l - 1f o rf d sm e t h o d t h ed e t e c t i o nl i m i to fc a f f e i ca c i di s1 6 2 x1 0 一m 0 1 l 一f o rr r s m e t h o d ，7 9 0 x 1 0 m 0 1 l - 1f o rs o sm e t h o d ，3 4 5 x 1 0 m 0 1 l - 1f o rf d sm e t h o d t h eo p t i m u m c o n d i t i o n sa n dc o e x i s t e n tm a t e r i a l sw e r ed i s c u s s e d t h er e s u l t ss u g g e s tt h a tt h en o v e ls e n s i t i v e ， s i m p l ea n dq u i c ks c a t t e r i n gm e t h o d sf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fc a f f e i ca c i dh a v eb e e ne s t a b l i s h e d 2 d e t e r m i n a t i o no fc a f f e i ca c i dw i t ha g r a y l e i g hs c a t t e r i n gm e t h o d ) 一p h e n a n t h r o l i n e - c a f f e i ca c i di ns y s t e mb yr e s o n a n c e i nt h em e d i u mo fp h5 4 0h a c - n a a cb u f f e rs o l u t i o n ，t h ec o m p l e xo fc a f f e i ca c i d ( c a ) a n da g 卜p h e n a n t h r o l i n ew i l ls i g n i f i c a n t l yl e a dt ot h ee n h a n c e m e n to ft h er e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n g ( r r s ) i n t e n s i t y t h em a x i m u mr r sp e a kw a sa t3 8 6n l t l t h es c a t t e r i n gi n t e n s i t ya r ed i r e c t l y p r o p o r t i o n a lt ot h ec o n c e n t r a t i o no f c a f f e i ca c i di nr a n g eo f2 0 x l o m o i l - z 一1 0 1 0 m 0 1 l 一。f o r r r sm e t h o d t h ed e t e c t i o nl i m i to fc a f f e i ca c i di s1 0 2 x l o m o l - l - 1 t h eo p t i m u mc o n d i t i o n sa n d c o e x i s t e n tm a t e r i a l sw e r ed i s c u s s e d t h en o v e ls e n s i t i v e ，s i m p l ea n dq u i c ks c a t t e r i n gm e t h o df o rt h e d e t e r m i n a t i o no fc a f f e i ca c i dh a sb e e nf o u n d 3 d e t e r m i n a t i o no fc a f f e i ca c i dw i t ha g ( i ) 一p h e n a n t h r o l i n e d e x t r a ns u l f a t e s o d i u mi ns y s t e mb y r e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n gm e t h o d an e wr a y l e i g hs c a t t e r i n gm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o nd e x t r a ns u l f a t es o d i u mi sp r e s e n t e d i np h 3 4 0h a c n a a cb u f f e rs o l u t i o n ，i ti sf o u n dt h a tw h e n a g ( p h e n ) 2 】+ a n dd e x t r a ns u lf a t es o d i u m r e a c tt h r o u g he l e c t r o s t a t i cf o r c et of o r mt h ec o m p l e x a g ( p h e n ) 2 + 一d e x t r a ns u l f a t es o d i u mq u i c k l y , t h er r si n t e n s i t yo ft h es y s t e mw i l lb es i g n i f i c a n t l ye n h a n c e d t h em a x i m u mr r sp e a kw a sa t4 0 0 n m t h es c a t t e r i n gi n t e n s i t yi sd i r e c t l yp r o p o r t i o n a lt ot h ec o n c e n t r a t i o no f d e x t r a ns u l f a t es o d i u mi n r a n g eo f0 0 4 2 0l a g m l a n dt h ed e t e c t i o nl i m i to fd e x t r a ns u l f a t es o d i u mi s 2 8n g m l t h e o p t i m u mc o n d i t i o n sa n dc o e x i s t e n tm a t e r i a l sw e r ed i s c u s s e d t h i sm e t h o dc a nb eu s e df o r t h e d e t e m f i n a t i o no fd e x t r a ns u l f a t es o d i u mi ns y n t h e t i c a ls a m p l e sw i t hs a t i s f a c t o r yr e s u l t s 4 d e t e r m i n a t i o no fc a f f e i ca c i dw i t ha g ( i ) 一p h e n a n t h r o l i n e - h e p a r i ni ns y s t e mb yr e s o n a n c e r a y l e i g hs c a t t e r i n gm e t h o d an o v e lm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fh e p a r i n ( h e p ) w i t ha g ( i ) - p h e n a n t h r o l i n e b y r e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n gh a sb e e np r o p o s e d i nt h em e d i u mo fh a c - n a a cb u f f e rs o l u t i o n ( p h 5 4 0 ) ，t h ei n t e r a c t i o no fh e p a r i nw i t h a g ( p h e n h 】+ c a nb eo c c u r r e dw h i c hg r e a t l ye n h a n c e dt h er r s i v a b s t r a c t i n t e n s i t ya t3 9 8 n m t h es c a t t e r i n gi n t e n s i t yi sd i r e c t l yp r o p o r t i o n a lt ot h ec o n c e n t r a t i o no fh e p a r i ni n t h er a n g eo f0 0 4 6 0l a g m l - 卜a n di t sd e t e c t i o nl i m i ti s2 0n g m l - t h eo p t i m u mc o n d i t i o n sa n d c o e x i s t e n tm a t e r i a l sw e r ed i s c u s s e d t h en o v e ls c a t t e r i n gm e t h o di ss a t i s f y i n gw h e na p p l i e di nt h e d e t e r m i n a t i o no fh e p a r i ni na c t u a ls a m p l e 5 d e t e r m i n a t i o nc h l o r o g e n i ca c i da n dc a f f e i ca c i di nk a n gy a nl i n gs t o m a t i t i ss p r a yb yr p h p l c ah p l cm e t h o dw a se s t a b l i s h e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fc h l o r o g e n i ca c i da n dc a f f e i ca c i di n k a n gy a nl i n gs t o m a t i t i ss p r a y t h i sa n a l y s i sw a sp e r f o r m e do nas h i m a d z us h i m p a c kv p - - o d s c o l u m nw i t hm e t h a n o la n d0 0 1 2m o l l - 1p h o s p h o r i ca c i d ( 2 7 ：7 3 ) a sm o b i l ep h a s e t h et e m p e r a t u r e o ft h ec o l u m nw a ss e ta t3 0 t h ef l o wr a t ew a so 8m l m i n _ 1a n dt h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a s 2 3 2n m c h l o r o g e n i ca c i da n dc a f f e i ca c i di nk a n g y a nl i n gs t o m a t i t i ss p r a yw e r eh i g h l ys e p a r a t e d a n de x a c t l yq u a n t i f i e d t h el i n e a rc o n c e n t r a t i o nr a n g eo fc h l o r o g e n i ca c i dw a so 51 - 91 8 0 弘g m l w i t ht h er e c o v e r yo f9 7 5 假s d = 1 0 ) t h ed e t e c t i o nl i m i t ( s n = 3 ) w a so 1 0l a g m l ，a n dt h eq u a n t i f i e dd e t e c t i o n ( s n = 1 0 ) w a so 3 6i i g m l - t h el i n e a rc o n c e n t r a t i o nr a n g eo f c a f f e i ca c i dw a s2 0 3 6 0 0l a g - m l - 1w i t ht h er e c o v e r yo f1 0 0 4 ( r s d = 1 0 ) t h ed e t e c t i o nl i m i t ( s n = 3 ) w a s0 4 0l a g m l - 1 a n dt h eq u a n t i f i e dd e t e c t i o n ( s n = 1 0 ) w a s l 4 0l a g m l - 。t h i s m e t h o d i ss i m p l ea n dc o n v e n i e n tw i t ht h ec a p a b i l i t yo fh i g hv e r a c i t ya n dh i g hr e p r o d u c i b i l i t ya n dc a nb e u s e dt oc o n t r o lt h eq u a l i t yo fk a n gy a nl i n gs t o m a t i t i ss p r a y k e yw o r d s ：r e s o n a n c er a y l e i g hs c a t t e r i n g ；c a f f e i ca c i d ；l e a d ( i i ) ；d e x t r a ns u l f a t e s o d i u m ；h e p a r i n ；a g ( i ) - p h e n a n t h r o l i n e ；c h l o r o g e n i ca c i d ；r p - h p l c ； v 独创性声明 学位论文题目：基拯瑞型邀挝塑直教逋担鱼谱在药物盆板生 的应用巫究 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中己加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者： 黎磷 签字日期：矽d7 年5 月2 口日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名：寄i 姊导师签名：、罗磊砰 1 签字日期：2 加了年占胡2 0 日签字日期：。叫年岁月矽日 第一章绪论 m m mm , m 鼍曼曼皇曼皇曼量曼量皇曼量曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼量皇曼曼曼曼皇曼曼曼量量量舅舅 第一章绪论 1 药物及其测定方法 1 1 咖啡酸( c a ) 及其测定方法 咖啡酸( c a f f e i ca c i d ) ，化学名3 ，4 二羟基桂皮酸。分子式为c 9 h 8 0 ，分子量为 。4 1 8 01 5 具有抗菌、抗病毒等功效l ，是中草药的活性成分。咖啡酸具有抗氧化、清热解毒功效j ，具 有较广泛的抑菌作用，但在体内能被蛋白质灭活，对牛痘和腺病毒抑制作用较强咖啡酸 是中约蒲公英、忍冬藤的抗菌抗病毒的有效成分之一【j 圳。咖啡酸对酪氨酸酶具有明显的激活 作川，可激活酪氨酸酶的单酚酶活力和和二酚酶活力，从而强化天然产物的黑化或褐变过程p j 。 咖啡酸可提高大鼠的中枢兴奋性，可增强子宫的张力，增进大鼠胆汁分泌，升高白血球、 止血及灭活维生素b 。等作用，能抑制鼠脑组织匀浆脂质过氧化物的生成；有缩短血凝及 出血时间的作用i b j 。咖啡酸片具有收缩增固微血管、提高凝血因子的功能、升高白细胞和血 小板的作用【，j 。 1 1 1 高效液相色谱法( h p l c ) 杨刚等【4 】采用h p l c ，使用d i a m o n s i l r m c l 8 ，4 6n r n 2 5 0m i l l ，1 0l a m 色谱柱，乙腈一0 2 磷酸溶液( 1 1 ：8 9 ) ，检测波长为3 2 4 n n l ，测定了不同产地忍冬藤中咖啡酸的含量，结果咖啡 酸线性范围为o 0 3 _ o 1 5p - g 。谭晓杰【5 j 等人采用r p h p l c 法，c 1 8 柱( 4 6n m x 2 5 0r n l n ，5l a m ) 。 流动相为乙腈水一磷酸( 1 2 ：8 8 ：0 0 4 ) ，检测波长为3 2 7 n m ，成功测定野菊花注射液中的咖啡 酸的含量，咖啡酸的线性范围为0 2 2 1 “g i 心1 。张宇平p j 等人使用w a t e r s 系列高效液相色谱 仪，采用甲醇- 0 1 的h a c 溶液梯度洗脱，流速为0 8m g m l - 1 ，紫外二极管阵列检测器测定 金银花中的咖啡酸，咖啡酸的线性范围为0 0 8 - 2 0 4l a g 。晏媛 i u l 等人建立了r p h p l c 法测定 蒲公英中咖啡酸的含鼍，考察了不同产地蒲公英中咖啡酸的含量。利用高效液相色谱法梯度洗 脱，采川h y p e r s i lb d sc 1 8 分析柱( 5 1 a m ，4 6n l r nx 2 5 0m m ) ，柱温4 0 ，流动相为甲醇- 0 0 1 m 磷酸二氢钾溶液( 磷酸凋p h 为3 7 ) 梯度洗脱，流速1 0m l m l - 1 ，检测波长3 2 3n m 。咖啡酸的 线性范用8 1 9 2 8 1 9 2i t g m l _ 1 ，w a n g h f i i l j 等用h p l c 法测定了中国草药中的咖啡酸。 咖啡酸属于酚酸的一种，广泛存在于植物中，分离测定植物或中药中的咖啡酸使用最多 的是高效液相色谱法，并且常采用反相高效液相色谱，使用c 。8 柱，流动相多采用甲醇或乙腈， 并且加入些许无机酸调节流动相的酸度。这是因为咖啡酸分子中均含有酚羟基和羧基，酚羟 基、羧基在水溶液中容易发生电离，极性增强，在固定相表面形成双重保留机理，色谱峰拖 尾严重，定量分析误差较大。如果加入少量酸性溶液调节p h ，磷酸溶液，可使多酚的电离受 到抑制，以中性分子的形态存在，极性减弱，有利于增强在固定相上的保留，使分离效果和 峰形都得到改善。 1 1 2 高效毛细管电泳法( c e ) 目前国内主要应用区带毛细管电泳法( c z e ) 和胶束毛细管电泳法( m e c c ) 对中药材中有效 成分的不同类型及中药制剂含量进行测赳12 1 。李亦蕾【1 3 1 等人采用石英毛细管柱，缓冲液为 第章绪沦 2 0m m o l l _ 的硼砂溶液( p h = 9 1 8 ) ，分离电压1 2k v ，真空进样时i 刨为5 s ，温度为2 5 ，紫 外检测波长3 1 3a m 。咖啡酸在2 0 1 0 0g g m l _ 1 范围内呈良好的线性关系。x i a oy a o t l 4 j 等人采 用毛细管电泳一电化。z 检测器测定了中约材艾的幼芽中的咖啡酸。使川4 0c m 长的熔融石英管， 3 0 0g m 的碳针，工作电压是+ 0 9 0 v ，分离电压是1 5k v ，5 0m m 的硼砂缓冲液( p h = 9 2 ) ，咖啡 酸的检测限为0 3 9l a m ，绿原酸的检测限为0 5 0g m 。e d e r m u l l e r r i s s o 【i 圳等人采用m e c c 测 定了新鲜咖啡和烘干中的5 种主要的水溶性酚酸，s d s ( 7 0m m ) 一磷酸( 1 7 6m m ) 一甲醇 ( 5 v v ) 缓冲体系，p h2 5 ，检测波长为3 2 5n l t l ，咖啡酸的线性范同为2 5 2 2 5l a g m l - 1 。 1 1 3 线性扫描伏安法( l s v ) 线性扫描伏安法( 1 i n e a rs w e e pv o l t a m m e t r y ，l s v ) 是一种伏安法技术。将线性电 位扫描( 电位与时间为线性关系) 施加r 电解池的工作电极和辅助电极之间。r e y e s s a l a s e ol i o j 等人采j j 扫描式伏安法，测定植物a r n i c am o n t a n a 制成的片剂中咖啡酸的含量，咖啡酸 的检测限为o 3 8 5u g l - 1 。相对于其它测定咖啡酸的方法而言，该伏安法有较高的灵敏度。 1 1 4 液相色谱等仪器联用方法 i 州相微筚取( s o l i d p h a s em i c r oe x t r a c t i o n ，s p m e ) 是当今色谱分析中使用极为广泛的样 品前处理方法，这一技术将萃取、浓缩、解吸、进样等功能集于一体，灵敏度高且操作简便。在 食品、约物、毒理学、环境领域的大气、水体、十壤和沉积物，以及生物监测等多个方面，是 一种新颖的、具有良好发展前景的样品处理技术【i 川。胡国栋i i 驯研究了s m p e 在食品分析乐于 中的应川，指出s m p e 可以控制食品风味，以及在食品安全分析( 农药残留分析，有机毒物 分析) 中有重要用途。吴真鲥j 等人研究了s m p e 在环境监测中的应用价值。s m p e 可以测 定水中双酚a 、苯酚、氯仿等卤代烃类化合物、杀虫剂、除草剂等农药类化合物；钴、镍、锡、 汞、铅等有机金属化合物。国外学者a n n am i c h a l k i e w i c z 2 0 1 等采用s m p e 前处理技术，采用高 效液相色谱法测定了蜂蜜中的咖啡酸，其检测限为0 0 4l a g m l - 1 。 高效液相色谱一串联质谱联川技术的发展为复杂体系中微鼍组分的定性、定量分析提供了 可能。严诗楷l zl i 等应用高效液相色谱一二极管阵列检测器一蒸发光散射检测器联用技术 ( h p l c d a d e l s d ) ，测定3 个不同厂家的1 9 批清开灵注射液成品中的咖啡酸。色谱柱为 p h e n o m e n e xl u n ar pc 1 8 柱( 2 5 0m m x 4 1 6m l n ，i d 5 岬) ，保护柱为a l l t e c hc 1 8 柱 ( 7 1 5 m m x 4 1 6 m m i d ，5 9 m ) ，检测波长3 3 0 n m ，柱温：3 5 ，流动相a 液为含0 1 甲酸的水溶 液，流动相b 液为甲醇一乙腈( 体积比为4 ：1 ) ，梯度洗脱。流动相流速为1 0m l m i n 。二极 管阵列检测器检测条f l ：2 0 0 5 9 0n l l l 全波长扫描。e l s d 检测器条件：漂移管温度1 1 0 ，载 气州2 ) 流速2 1 0l m i n ，不分流模式。测得咖啡酸的线性范围为0 1 - 4 0p g m l _ 1 ，为中约复杂 体系的多组分同时定量测定及其质昔控制提供了一条新的思路。许高燕1 2 2 1 等人采用高效液相 色谱一串联质谱( h p l c m s m s ) 分析方法。以甲醇和o 1 乙酸铵溶液为流动相；m s m s 使用 多反应监洌u ( m r m ) 扫描方式，在3 m i n 内完成迷迭香提取物中咖啡酸以及另外两种有机物化合 物的分离分析，咖啡酸的线性范围为0 0 0 5 0 5 0g g - m l 。刘琳i z j j 等人建立了应用高效液相色 谱一二极管阵列检测一电化学检钡i ( h p l c d a d e c d ) 联用技术同时测定三精双黄连口服液中 的咖啡酸以及另外三种化合物的方法。以z o r b a xs b - c 1 8 柱( 1 5 0m m x 4 6n l i ni d ，5 0 岬) 为 色谱柱，柱温为3 0 c ，流动相为( a ) 甲醇和( b ) 甲醇一水一冰醋酸( 体积比为5 0 ：5 0 ：1 ) ，采用梯 2 第一章绪论 度洗脱科序，流速为0 8m l m i n 。二极管阵列检测波长为2 7 5n n l 。电化学单安培检测器的：i ： 作电压为0 7v 。测得咖啡酸的线性范围为0 0 5 一1 5t t g n i l 。国外学者c e l l in 1 2 4 1 等采用液相 色谱一质谱联用方法测定了老鼠血浆和尿液中的咖啡酸代谢物。 1 2 绿原酸( c l a ) 及其测定方法 绿原酸( c h l o r o g e n i ca c i d ) 是由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸，异名咖啡鞣酸，化学名为 5 0 咖啡酰全尼酸。它是植物在有氧呼吸工程中经磷酸戊糖途径中间产物合成的一种苯丙素类 物质。绿原酸j “泛存在于些植物中，绿原酸是存在于葵花籽、水果、蔬菜、大豆、小麦、 咖啡豆中1 ，杜仲、枸杞【26 1 、山银花【2 7 】、蒲公英【2 8 】。研究表明，绿原酸具有清热解毒、消 炎利j | 口、抗菌、降血脂等生理功能1 2 9 】，还有抗肿瘤、抑制突变等作用，抗脂质过氧化【3 0 】，具 彳丁j “泛的抗菌作川，还有i 卜血、增高白血球及抗病毒作用【3 。 1 2 1 化学发光法 贺彩霞1 3 2 1 等采刚鲁米诺一过氧化氢一三价铬发光体系，抑制化学发光法测定中药金银花中 绿原酸，线性范闱为2 1 0 一一4 1 0 “g m l _ 1 ，检山限达6 3 1 0 g - m l _ 1 。贺彩霞等使用另外一 种抑制化学发光法测定绿原酸，碱性介质鲁米诺铁氰化钾化学发光体系，测定绿原酸线性范 罔为1 o x l 0 一一1 0 x 1 0 g m r l ，检测限为5 2 x 1 0 - 9 9 m l 1 。x i a o x i a w a n 9 1 3 4 1 等人利用绿原酸在 酸性高锰酸钾溶液产生化学发光机理，甲醛为化学发光增强剂，测定了水果中的绿原酸，其 线性范围为5 0 x 1 0 一一5 0 x 1 0 。5g m l - 1 检测限为5 7 x 1 0 - 9g m l 。 1 2 2 流动注射双安培滴定法 l ij u nl i t 3 5 1 等人使用c h l 6 6 0 b ( c hi n s t r u m e n t 。u s a ) 电化学工作站，基于绿原酸在铂电极 和高锰酸l u 极之间的电化学氧化性，建立了不可逆电流检测系统。在0 0 5m o l l 一1 的硫酸中。 绿厉i 酸的线性范丽是0 8 1 2 0l a g m l - 1 ，检测限是0 1 8l , l g m l - 1 。 1 2 3 二阶导数光谱法 周波林0 3 6 i 等使j - t t u 、2 1 2 0 1 型双光束紫外可见分光光度计于3 5 7 9h i l l 波长处测定绿原酸振 枇d 值，采川二阶导数光谱法，测定银黄清口服液中总绿原酸，其线性范围为4 6 7 - 2 3 3 5 u g m l 一。李守信3 7 1 等人使川t u 一1 9 0 紫外分光光度计，3 0 8 34 - 0 5h i l l 波长处，测定了抗感颗 卡髓中缘原酸的含鹫，线性范同为2 0 1 0 鹇- m l 一。 1 2 4 制备色谱法 程德军p 8 1 等人川氯仿除脂，乙醇超声提取杜仲叶中的绿原酸，经萃取除杂，两次制备薄 层色谱纯化得剑绿原酸。用薄层色谱分析和液相色谱检测，产品的紫外光谱特征与文献相符， 薄层色谱士斑与绿原酸对照品对应，h p l c 主峰t r 与绿原酸对照品t r 吻合。h p l c # i 标法测得 产