（分析化学专业论文）新型毛细管液相色谱柱的研制及其相关应用.pdf

复旦文学博士论文 尘 摘要 毛细管液相色谱柱是微分离分析的核心，也是毛细管分析技术的瓶颈。研究 新型、实用、专用的毛细管色谱柱，揭示其分离机制，且与相关技术相结合，始 终是毛细管微分析的首要任务。 溶胶凝胶( s o l g e l ) 技术是色谱分析领域一种灵活多变的、简单易行的固定 相制备技术。溶胶凝胶技术与包覆型复合填料制备结合，是一个全新的交叉点。 传统包覆型复合填料制备过程中聚合物的固载化方法通常涉及自由基引发的交 联反应，这种方法不易控制，交联重现性差。探索性地采用溶胶凝胶固载化技术 将气相固定液包覆并固载在无机载体表面，制备出具有不同色谱选择性的复合型 固定相，无疑有利于拓展溶胶凝胶技术的应用范围和开展相关复合型色谱柱保留 行为的研究。 溶胶凝胶技术与普通毛细管填充柱相结合，制备的细内径颗粒圆定化无塞整 体柱已在毛细管电色谱领域得到应用。在此基础上，开创性制备高性能大口径无 开裂颗粒固定化无塞整体柱，并将其应用于复杂蛋白质组学样品的固相预富集， 无论从柱制备技术还从应用范围，是一项创新性和实用性兼备的工作。 发展高通量、高峰容量、高分辨率的新型蛋白质组学技术平台已成为当务之 急。鉴于蛋白质组学样品的复杂性和现有二维液相串级质谱体系有限的运行通 量，建立一个新型的和实用性极强的蛋白质组学分析技术平台，无疑对蛋白质组 学多维色谱技术的发展提供了有益的支持。 本论文以溶胶凝胶技术制备毛细管色谱柱为核心，研究开发了新型实用的毛 细管色谱柱，并在此基础上开展相关研究和应用工作。制备出气相固定液包覆硅 胶复合型固定相，并与线性溶剂化相关能色谱理论相结合，研究其分离机理和色 谱行为；制备了大口径颗粒固定化型无塞整体柱，对其作为肽段预富集柱的性能 指标进行了测试和评价：搭建了蛋白质组学阵列式全多维色谱分离技术平台，将 所制备预柱应用其中，提高和拓展多维色谱分离技术的分离性能。 本论文共分五章。主要内容摘要如下： 第一章总结了毛细管色谱柱的发展概况和溶胶凝胶技术在色谱固定相制备 领域的应用及进展，同时概述了蛋白质组学多维色谱技术的发展及新型色谱柱与 之相结合的应用前景。介绍了本论文选题的目的和意义 第二章开创性地采用溶胶凝胶法制备了气相固定液包覆硅胶复合型固定相。 详细考察研究了制备中对色谱柱性能影响的主要因素，通过优化气相固定液的用 量、溶胶凝胶前驱体的体积浓度和柱内反应时间及温度，确定了最佳包覆工艺条 件，明确了用溶胶凝胶法进行聚合物包覆无机载体的可行性。以不同极性的的芳 复旦大学博士论文 香族化合物为探针，测试评价了合成固定相的色谱性能。结果表明，所制备的复 合型s e 3 0 包覆硅胶固定相分离性能良好，柱效可达1 0 0 0 0 m ，耐碱性良好，对 碱性化合物的分离存在一定程度的色谱峰拖尾。疏水选择性和绝对流动相灵敏度 的检测表明，该固定相具有反相固定相保留的特征。 第三章利用线性溶剂化相关能理论( l s e 黜) 对不同气相固定液( s e 3 0 ， s e 5 4 ，o v - 1 7 0 1 ) 包覆硅胶固定相的反相色谱行为分别做了研究，建立了线性 良好的化合物保留预测方程，并与碳十八键合硅胶固定相的溶质保留行为做了比 较。研究表明，气相固定液包覆硅胶固定相与碳十八键合硅胶固定相( o d s ) 在 保留机理上有很大不同，溶解机理多于吸附机理。溶质的体积，偶极性极化率， 氢键给体酸性和氢键受体碱性共同成为决定溶质保留主要因素。另外固定液包覆 硅胶固定相与溶质之间可以发生很强的纠【作用，因此它对强偶极性极化率的化 合物选择性较高。由于保留机理不同，气相固定液包覆硅胶固定相和o d s 固定 相对于相同的化合物将表现出不同的选择性。无疑这对满足实际样品分析中复杂 的分离要求提供了一个新的手段。另外，所制备固定相的选择性可通过改变包覆 的聚合物的类型来控制，相比通常情况下反相液相色谱中只靠改变流动相配比来 控制分离选择性，无疑具有机动灵活的优势。 第四章用溶胶凝胶法以甲基三乙氧基硅氧烷为单一前驱体成功制备出了内 径为3 2 0 岬和5 3 0t a n 的大口径无开裂的颗粒固定化型无塞整体柱。首先对柱制 各的溶胶凝胶配方和工艺条件进行了优化，摸索出的制作工艺简便易行，可靠性 和可控性强，避免了批量装填短柱的繁琐和费时，提高了预柱制备重现性和批量 生产可能性。其次，我们将其作为肽段预富集柱应用于多维液相色谱平台，对预 富集柱的相关性能指标进行了测试和评价，探讨了最佳富集条件。建立了在线预 富集分离检测体系，利用六通阀将毛细管预柱与毛细管反相分离柱相连，联用 紫外检测。结果表明，自制的3 2 0 t u n - i d 和5 3 0 岫i d 的预柱机械强度高，长 度5n 3 1 n 即可耐压至3 0 0 b a r ，且通透性良好。富集流速可达6 0 “l m i n ，样品负 载量高达7 0 嵋，回收率9 0 ，浓度线性回归系数r 2 ；0 9 9 ，富集倍数达6 0 倍 重复使用1 5 0 次，重现性和化学稳定性依然良好因此自制预富集柱能够方便快 捷地实现肽段的除盐和高倍浓缩，极大改善了样品上样量、分析灵敏度和检测限， 非常适合应用于二维液相色谱分离技术平台。 第五章搭建了新型阵列式二维液相色谱分离m a l d i t o f t o f m s 检测技 术平台，将自制预富集柱应用于样品的在线预处理，对人肝组织的蛋白质组进行 了高效分离和检测。多通道式的并行接口模式使系统在第二维1 8 根反相柱上实 现并行式洗脱，使样品分析时间缩短1 8 倍。该平台以强阳离子交换色谱( s c x ) 为第一维色谱分离模式，以反相液相色谱( r p l c ) 为第二维分离模式，可快速 复旦文学博士论文 土 完成进样，浓缩除盐、分离及鉴定，实现真正的蛋白质组学研究所需的高通量分 析。s c x 柱采用阶梯式盐梯度洗脱，洗脱下来的组分通过两个十通阀的切换被 依次保留在1 8 个自制预富集柱的柱头，进行样品的浓缩和除盐。然后经多通道 式接口被并行反冲到相应的反相色谱柱上，在1 8 根反相色谱柱上同时完成色谱 分离。色谱流出物通过一个自行设计加工的接口实现并行式点样到m a i d i 靶板 上( 点样频率1 5s 次) ，最后联用m a l d i - t o f t o f - m s 快速鉴定。整个系统对 3 0 0i t g 人肝蛋白酶解肽段进行了分离鉴定，共鉴定出4 6 2 个蛋白。 关键词：溶胶凝胶，毛细管液相色谱，聚硅氧烷包覆硅胶，线性溶剂化相关能， 预富集，阵列式，多维分离，蛋白质组学 复旦文学博士论文 a b s t r a c t c o l u m nt e c h n o l o g y , w h i c hi st h eh e a r to f t h ec a p i l l a r ys e p a r a t i o np r o c e s s ，i sa l s o t h eb o t t l en e c kt e c h n o l o g y i nt h ef i e l do fc o l u m np r e p a r a t i o n ，t h ep r i m a r yt a s ko f c a p i l l a r ys e p a r a t i o ni st op r e p a r en o v e la n da p p l i c a b l ec o l u m n s s o l g e lt e c h n o l o g yo f f e r sav e r s a t i l ea n ds i m p l em e a n 8o fc r e a t i n g s t a t i o n a r y p h a s ew i t hd e s i r e dc h r o m a t o g r a p h i ca n ds u r f a c ec h a r a c t e r i s t i c st oc o l u m nf a b r i c a t i o n f o rm i c r o s e p a r a t i o nt e c t m i q u e s t h ec o m b i n a t i o no fs o l g e lt e c h n o l o g ya n dp r e p a r a t i o no fh y b r i dl cp a c k i n g m a t e r i a li san o v e li n t e r s e c t i o np o i n t p o l y m e r - c o a t e ds i l i c a , w h i c hi sp r e p a r e db y c o v e r i n gat h i nl a y e ro fo r g a n i cp o l y m e ro n t ot h es u r f a c eo fi n o r g a n i cs u p p o r th a st h e a d v a n t a g e so f b o t hh i g he f f i c i e n c ya n dr i g i d i t yo fb o n d e dp h a s e s ，a sw e l la sc h e m i c a l s t a b i l i t yo fp o l y m e rp h a s e s h o w e v e r , t h ec r o s s - l i n k i n gr e a c t i o n su s e di nt h e c o n v e n t i o n a lp o l y m e ri m m o b i l i z a t i o np r o c e s sa r ed i f f i c u l tt oc o n t r o lt oe n s u r et h e s a m ed e g r e eo fc r o s s l i n k i n gi nd i f f e r e n tc o l u m n sw i mt h es a n l es t a t i o n a r yp h a s e a n d m a yl e a dt os i g n i f i c a n tc h a n g e si nt h ep o l y m e rs t r u c t u r e ，a n dc h r o m a t o g r a p h i c p r o p e r t i e so ft h er e s u l t i n gi m m o b i l i z e dp o l y m e r t h e r e f o r e ，i ti sab e wa n ds i g n i f i c a n t r e s e a r c hw o r kf o rt h en s eo fs o l - g e lt e c h n i q u e 邪am e t h o do fd e p o s i t i n ga n d i m m o b i l i z i n gap o l y m e rl a y e ro n t ot h ep o r es u r f a c e so fs i l i c as u p p o r tf o rt h e p r e p a r a t i o no fg cs t a t i o n a r yp h a s e - c o a t e do re n c a p s u l a t e ds t a t i o n a r yp h a s e sw i t h d i f f e r e n ts e l e c t i v i t y t h ec o m b i n a t i o no fs o l - g e lt e c h n i q u ea n dc a p i l l a r yp a c k e d c o l a n mt op r e p a r e n a r r o w - b o r ep a r t i c l e - e n t r a p p e dm o n o l i t h i cc o l u m n sh a sb e e na p p l i e dt oc a p i l l a r y e l e c t r o c h r o m a t o g r a p h ys e p a r a t i o n s b a s e do nt h ep i o n e e rw o r k , t h ef e a s i b i l i 毋o f m a k i n gl a r g e - b o r ep a r t i c l e e n t r a p p e dm o n o l i t h i cc o l u m ni sp r o m i s i n g t h e r e f o r e ，t h e p r e p a r a t i o no fl a r g e b o r ep a r t i c l e - e n t r a p p e dm o n o l i t h i cc o l u m n sa n da p p l i c a t i o no fi t 船ap r e c o n c e n t r a t i o nc o l u m nf o ro n - l i n ep e p t i d e se n r i c h m e n ta r ei n n o v a t i v ea n d p r a c t i c a l p r o t e o m i c si sp l a y i n gm o r ea n dm o r ei m p o r t a n tr o l e si nt h el i f es c i e n c e sa f t e rt h e s e q u e n c i n go f t h eh u m a ng e n o m ew a sc o m p l e t e d b e c a u s eab i o l o g i c a ls y s t e mi sv e r y c o m p l e xa n dd i v e r s e ，t h es t u d ya n da p p l i c a t i o no ft e c h n o l o g i c a lp l a t f o r mf o rt h e s e p a r a t i o na n da n a l y s i s 、：i ，i mh i 曲r e s o l u t i o n , h i 曲s e n s i t i v i t y , h i 曲t h r o u g h p u ta n d b r o a dd y n a m i cr a n g eh a v eb e c o m eo n eo ft h ei m p o r t a n ta n dh o ts p o t s c o n s e q u e n t l y ， i ti si m p o r t a n tt od e v e l o pan o v e lp l a t f o r mt oc i r c u m v e n tt h et h r o u g h p u tp r o b l e mi n ) 复旦史学博士论文尘 c u r r e n to n - l i n e2 d l c m s m ss y s t e mf o rc o m p l e xp r o t e o m ea n a l y s e s i na d d i t i o n , t h ea p p l i c a t i o no fn e wc a p i l l a r yc o l u m n st o p r o t e o m i c sp l a t f o r mi sa l s og a i n i n g i n c r e a s i n ga t t e n t i o n t h e r e f o r e ，t h ec o r eo ft h i sd i s s e r t a t i o ni se x p l o r i n gt h er e l a t e di n v e s t i g a t i o na n d a p p l i c a t i o nb a s e do nt h ep r e p a r a t i o no ft h en o v e la n dp r a c t i c a lc a p i l l a r yc o l u m n s u s i n gs o l g e lt e c h n o l o g y t h i sd i s s e r t a t i o ni sd i v i d e di n t of i v ep a r t s i nt h ef i r s tc h a p t e r , a d v a n c e si n s t a t i o n a r yp h a s e so fc a p i l l a r ys e p a r a t i o n s ， s o l g e l - b a s e dc a p i l l a r yc o l u m n sa n dm u l t i d i m e n s i o n a ll i q u i ds e p a r a t i o nt e c h n i q u e s w e r es u m m a r i z e dw i t hd e t a i l s i nc h a p t e r2 ，as o l g e lc h e m i s t r y - b a s e dp o l y m e rc o a t i n ga p p r o a c hw a sd e v e l o p e d f o rt h ep r e p a r a t i o no fan o v e lp o l y s i l o x a n e c o a t e ds i l i c as t a t i o n a r yp h a s ef o rc a p i l l a r y l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y s e 一3 0 ，ac o m m e r c i a lp o l y s i l o x a n es t a t i o n a r yp h a s eu s e di n g a sc h r o m a t o g r a p h y , w a si n c o r p o r a t e di n t ot h ep r o p e r l yd e s i g n e ds o ls o l u t i o n t h e n t h es o l - g e lm i x t u r ew a si n t r o d u c e di n t oas i l i c ag e l p a c k e dc a p i l l a r yc o l u m nb y p r e s s u r e at h i nf i l mo fs o l g e ls e - 3 0 一c o a t i n gi sc h e m i c a l l yb o n d e dt ot h es u r f a c eo f s i l i c ag e lp a r t i c l e sb yh y d r o l y t i cp o l y c o n d e n s a t i o nu n d e rm i l dc o n d i t i o n sw i t h o u ta n y f r e er a d i c a lc r o s s - l i n k i n gp r o c e d u r e s ，t h e r e f o r et h es o l g e la p p r o a c ho f f e r sas i m p l e a n de f f e c t i v ep a t h w a yt oc r e a t eah y b r i dp o l y m e r - c o a t e ds i l i c as t a t i o n a r yp h a s e v a r i o u sf a c t o r sa f f e c t i n gc o l u m nm a k i n gw e r eo p t i m i z e da n dd i s c u s s e di nt h i sr e p o r t t h er e s u l t i n gs t a t i o n a r yp h a s es h o w e dg o o d p e r m e a b i l i t y , m e c h a n i c a lr o b u s t n e s s ，h i 曲 d u r a b i l i t yt oa l k a l i n em o b i l ep h a s ea n ds a t i s f a c t o r yc h r o m a t o g r a p h i cp e r f o r m a n c ei n s e p a r a t i o n so fp o l a ra n dn o n - p o l a ra r o m a t i cc o m p o u n d s t h er e s u l t sa l s oi n d i c a t et h a t t h es t a t i o n a r y p h a s eh a s ar e v e r s e d p h a s e dc h a r a c t e rw i t hs e 一3 0 p r o v i d i n g c h r o m a t o g r a p h i cf u n c t i o n a l i t y i nc h a p t e r3 ，t h er e t e n t i o nb e h a v i o r so fp o l y m e r - c o a t e ds i l i c as t a t i o n a r yp h a s e p r e p a r e db yu s i n gd i f f e r e n tp o l y s i l o x a n e ( s e - 3 0 ，s e - 5 4 ，o v - 1 7 0 1 ) w e r es t u d i e db y m e a n so fl i n e a rs a l v a t i o ne n e r g yr e l a t i o n s h i p s ( l s e r s ) a n dc o m p a r e dw i t ho d s s t a t i o n a r yp h a s e o nt h ef o u rs t a t i o n a r yp h a s e s ，2 1k i n d so f c o m p o u n d sw e r et e s t e di n m o b i l ep h a s eo fm e t h a n o la n dw a t e r g o o dr e l a t i o n s h i p sb e t w e e nl o gk a n dl s e r s p a r a m e t e r sa r eo b t a i n e df o rt h e s ep h a s e s a c c o r d i n gt op e r c e n tv a r i a n c e r e t e n t i o no n t i l ep o l y s i l o x a n e c o a t e ds i l i c ai sd o m i n a t e db yf o i l rm a j o rf a c t o r s ：t h es o l u t es i z e d i p o l a r i t y p o l a r i z a b i l i t y , h y d r o g e nb o n dd o n o ra c i d i t ya n dt h es o l u t eh y d r o g e nb o n d a c c e p t o rb a s i c i t y t h i sr e s u l ti n d i c a t e st h a tt h er e s u l t i n gs t a t i o n a r yp h a s eh a sd i f f e r e n t s e l e c t i v i t ya n dr e t e n t i o nm e c h a n i s mc o m p a r e dw i t ho d s ，a n dt h es e l e c t i v i t yo f 复旦太学博士论文 尘 s t a t i o n a r yp h a s ec a nb ev a r i e db ya p p r o p r i a t ec h o i c eo f p o l y m e rf o rc o a t i n gt or e a l i z e t h er e q u i r e ds e p a r a t i o n c h a p t e r4 d e s c r i b e st h e p r e p a r a t i o n a n dc h a r a c t e r i z a t i o no f l a r g e b o r e p a r t i c l e - e n t r a p p e dm o n o l i t h i cp r e c o l u m n s ，w h i c ha r es u i t a b l ef o ri n c o r p o r a t i o ni n t oa 2 d l cs y s t e mf o rp r o t e o m ea n a l y s i s t h ef r i t l e s sp r e c o l u m n sw i t hd i f f e r e n ti n n e r d i a m e t e r ( 3 2 0 啪a n d5 3 0r t m ) w e r er a p i d l ya n ds u c c e s s f u l l yp r e p a r e db ye n t r a p p i n g o c t a d e c y l s i l i c a ( o d s ) p a r t i c l e sp r e p a c k e di n t of u s e ds i l i c ac a p i l l a r i e sw i n las o l g e l n e t w o r kw h i c hw a sf o r m e d b yh y d r o l y s i s a n d p o l y c o n d e n s a t i o n o f m e t h y l t r i e t h o x y s i l a n e ( m t e s ) e n o u g hm e c h a n i c a ls t r e n g t ha n dp e r m e a b i l i t yo ft h e r e s u l t i n gl a r g e - b o r e m o n o l i t h i c p r e c o l u m n sw e r e a c h i e v e d b yo p t i m i z i n g t h e p e r c e n t a g eo fm t e si nt h es o ls o l u t i o n , a n dn oc r a c k i n go rs h r i n k a g eo ft h ec o l u m n b e dw a so b s e r v e de v e l li n 5 3 0 一p r n i d c a p i l l a r y t h ep e r f o r m a n c e o ft h e p a r t i c l e - e n t r a p p e dm o n o l i t h i cp r e c o l u m n su s e df o rp r e c o n c e n t r a t i o na n dd e s a l t i n go f p r o t e o l y t i cd i g e s t sw a se v a l u a t e db yo n l i n ec o u p l i n gt h el a r g e - b o r ep r e c o l u m n sw i t h ac a p i l l a r yr e v e r s e d - p h a s el i q u i dc h r o m a t o g r a p h i cc o l u m nf o l l o w e db yu vd e t e c t i o n t h el a b o r a t o r y - m a d em o n o l i t h i cp r e c o l u m n sw i t h3 2 0a n d5 3 0 i t m i d w e r e c h a r a c t e r i z e db yu s i n gb s a d i g e s t e dp e p t i d e sa st h ea n a l y t e sw i t hr e s p e c tt os a m p l e l o a d i n gc a p a c i t y , l i n e a r i t y , r e c o v e r ya n dr e p r o d u c i b i l i t y , e t c t h er e s u l t si n d i c a t e dt h a t t h el a r g e b o r ea n ds h o r tp r e c o l u n m s ( 5m m x 3 2 0b u ni do r5m m 5 3 0h mi d ) a l l o ws a m p l ef a s tl o a d i n ga n dh a v eam a s sl o a d i n gc a p a c i t yf o rb s a p e p t i d e so f a b o u t 7 0 i t g ，g o o dl i n e a rc a l i b r a t i o nc u r v e s ( r z 0 9 9 ) w e r eo b t a i n e da n dt h el i m i t so f d e t e c t i o nw e r ei m p r o v e db y6 0 一f o l de v e nw i t hau va b s o r b a n c ed e t e c t o r 1 1 l et o t a l r e c o v e r yw a sf o u n dt ob ea p p r o x i m a t e l y9 0 w i t hg o o dr e p r o d u c i b i l i t yf o r c o l u m n - 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t o f t o f m sp r o t e o m i c s a n a l y z e r f o rc o m p r e h e n s i v ep r o t e o m i c a n a l y s e sh a sb e e nd e v e l o p e d ，i nw h i c ho n ec a p i l l a r ys t r o n gc a t i o n - e x c h a n g e ( s c x ) c h r o m a t o g r a p h i cc o l u m nw a su s e da st h ef i r s ts e p a r a t i o nd i m e n s i o na n d1 8p a r a l l e l 复旦大学博士论文 土 c a p i l l a r yr p l c c o l u m n sw e r eu s e d 船t h es e c o n d s e p a r a t i o n d i m e n s i o n 1 8 p a r t i c l e e n t r a p p e dm o n o l i t h i cp r e e o l u m n s ，w h i c hw e r em a d eu s i n gs o l g e lt e c h n i q u e i no u rl a b o r a t o r y , w e f ep l a c e di n d i v i d u a l l yp r i o rt oe a c hp a r a l l e lc a p i l l a r yr pc o l u m n t oi n t e r f a c et h et w od i m e n s i o n sf o rd e s a l t i n ga n de n r i c h m e n to fp e p t i d ef r a c t i o n s e l u t e df r o mc a p i l l a r ys c xc o l u m n p e p t i d e sb o u n dt ot h es c xp h a s ew e r e “s t e p p e d o f fu s i n gm u l t i p l es a l tp u l s e sf o l l o w e db ys e q u e n t i a l l yl o a d i n go fe a c hs u b s e to f p e p t i d e so n t o t h ec o r r e s p o n d i n gp r e c o l u r n n a f t e rs a l tf r a c t i o n a t i o n , w i 血ah o m e b u l k 1 8 一c h a n n e ll i q u i ds p l i t t e r , p e p t i d ef r a c t i o n sw e r ec o n c u r r e n t l yb a c k f l u s h e df r o mt h e p r e c o l u m ma n ds e p a r a t e ds i m u l t a n e o u s l yb y1 8c a p i l l a r yr pc o l u m n s b yu s i n ga h o m e m a d el c m a l d ii n t e r l a c e l ce f f l u e n t sw a sd i r e c t l yd e p o s i t e do nt h em a l d i t a r g e tt h r o u g ha t la r r a yo f c a p i l l a r yt i p sa ta1 5st i m e i n t e r v a lf o rf u r t h e rm sa n a l y s i s t h e r e f o r e ，w i t hs i m p l i f i e de q u i p m e n t ，t h i sn e ws y s t e ma l l o w sa l l18 一f o l di n c r e a s ei n t h r o u g h p u tf o rc o m p l e xp r o t e o m es e p a r a t i o nc o m p a r e d 、析t l ls e r i a l b a s e d2 d - l c s y s t e m t h eh i e l le f f i c i e n c yo ft h eo v e r a l ls y s t e mw a sd e m o n s t r a t e db ya n a l y s i so f t r y p t i cd i g e s to f p r o t e i n se x t r a c t e df r o mn o r m a lh u m a n l i v e rt i s s u e k e yw o r d s ：s o l g e l ，c a p i l l a r yl i q u i dc h r o m a t o g r a p h y , p o l y s i l o x a n e - c o a t e ds i l i c a ， l i n e a rs o l v a t i o ne n e r g yr e l a t i o n s h i p s ，p e p t i d es o l i d - p h a s ep r e c o n c e n t r a t i o n ，c a p i l l a r y a r r a y , m u l t i d i m e n s i o n a ls e p a r a t i o n s , p r o t e o m i c s 复旦大学博士论文 第一章文献综述 ， 1 1 引言1 引百 毛细管高效液相色谱( 一h p l c ) 是在对常规液相色谱柱进行微型化的基础 上，伴随精密加工以及微加工制造技术的进步和新材料的出现而发展起来的一种 色谱微分离技术【1 】。它能大幅度提高分离柱效，大大减少了样品、流动相和固 定相的消耗，对于较为难得的试样极为有利，而且由于降低了溶质柱上稀释比， 所以检测灵敏度优于传统的h p l c 。它还很容易与其它检测器( 如质谱) 在线联 用，使用“一h p l c ，不仅提高了分离效率，而且减少了与质谱联用时的样品稀 释，这样便可以提高浓度型检测器电喷雾离子源质谱( e s i m s ) 的灵敏度【2 】。 此外，i _ t - h p l c 还特别适宜于作为第一维，与其它色谱分离技术联用，例如，常 规h p l c 、g c 、超临界流体色谱( s f c ) ，c e 等。峰容量的大幅度提高为复杂样 品的分离分