（病理学与病理生理学专业论文）端粒酶和pinx1基因在食管癌中的表达及生物学意义.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要8 英文缩写1 6 研究论文端粒酶和p i n x l 基因在食管癌中的表达及生物学意义 引言1 8 第一部分端粒d n a 长度及端粒酶h t e r t 在食管癌高发区人群中的表达 及生物学意义 前言2 0翮舌2 0 材料与方法2 1 结果2 5 附图2 9 附表3 8 讨论4 3 小结4 7 参考文献4 7 第二部分食管癌中的端粒酶活性和p i n x l 的表达及其生物学意义 前言5 2刖舌5 z 材料与方法5 3 结果6 0 附图6 3 附表7 0 讨论7 4 小结7 7 参考文献7 8 第三部分基因转染p i n x l 对食管癌e e a l 0 9 细胞增殖和凋亡以及端粒酶 活性的影响 前言8 1日l j 舌1 材料与方法8 l 结果9 6 附图一9 9 附表1 0 7 讨论。11 0 小结111 参考文献1 1 2 结论11 4 综述端粒、端粒酶和p i n x l 与肿瘤的关系11 5 致谢1 2 8 个人简历j 1 2 9 中文摘要 端粒酶和p i n x l 基因在食管癌中的表达及生物学意义 摘要 目的：食管癌( e s o p h a g e a lc a r c i n o m a ，e c ) 是全世界最常见的消化道恶 性肿瘤之一，我国的食管癌发病率较高，河北省磁县更是食管癌的高发区。 严重影响着人们的生活质量和生命健康。端粒、端粒酶在肿瘤细胞的永生 化和演进中扮演重要角色。端粒酶的激活可以导致细胞无限制地增殖和肿 瘤的发生。端粒( t e l o m e r e ) 作为分子钟控制着人类细胞的复制与衰老，与 细胞的寿命密切相关。正常细胞每次分裂，端粒d n a 长度会缩短5 5 - 2 0 0 b p ，经历多次分裂后缩短至其下限时，细胞最终凋亡或死亡。端粒酶 ( t e l o m e r a s e ) 是一种以自身r n a 为模板的逆转录酶，其核心组分之一端 粒酶逆转录酶( h u m a nt e l o m e r a s er e v e r s et r a n s c r i p t a s e ，h t e r t ) 是端粒酶 发挥活化作用的重要途径，它的表达调控在端粒酶活性调节中起关键作 用，是细胞呈现端粒酶活性的决定因素。已有大量研究发现，在恶性肿瘤 的发生中存在有端粒d n a 长度的缩短，并且端粒酶的激活维持了大多数 组织的端粒长度，抵消了细胞分裂导致的端粒d n a 消耗。说明端粒缩短 在恶性肿瘤的演变中起重要作用。已有大量研究表明，人体正常细胞除少 量细胞如精原细胞、胚胎细胞、干细胞外，大多数细胞的端粒酶几乎都是 无活性的，而与之相反在绝大多数恶性肿瘤中端粒酶活性高表达，表达率 高达9 0 以上。因此端粒酶的活化可能是恶性肿瘤发生发展的多种基因改 变中起到了至关重要的作用，并且可以作为最具普遍性和特异性的肿瘤分 子标记物，在肿瘤的诊断和治疗中具有重要的地位。而抑制端粒酶的活性， 将有可能阻止肿瘤细胞恶性增殖，这种特性使端粒酶成为当今肿瘤诊治研 究的热点。 本实验利用了多项实验方法检测端粒d n a 长度、端粒酶h t e r t 蛋 白含量及细胞内d n a 含量在食管癌高发区现场人食管癌、异型增生及正 常食管的表达，探讨与食管癌发生及生物学行为的关系，试图为食管癌的 早期诊断提供客观参考指标，并为揭示食管癌的发生、发展的机制提供理 论依据。采用端粒重复序列扩增反应( t r a p ) - e l i s a 和t r a p 银染法半定 量技术，检测食管癌及异型增生组织中端粒酶活性的表达，探讨端粒酶活 中文摘要 性与食管癌发生发展及其与临床病理因素的关系。 p i n x l 基因作为端粒酶的内源性抑制基因，近年来被认为是一种潜在 的抑癌基因，其表达可能与多种肿瘤的发生发展有关。有实验证实在胃癌、 大肠癌及白血病患者中p i n x l 表达明显下降，端粒酶活性增强。但是也有 研究显示p i n x l 在肝癌细胞中的表达与正常组织无显著差异，而与之相应 的是此类肿瘤中大部分端粒酶活性也增强。目前p i n x l 基因在肿瘤细胞中 的作用和对端粒酶活性的调控及在细胞癌变中的机制尚不十分清楚。有关 p i n x l 基因在食管癌中的研究国内外也鲜有报道。p i n x l 基因的作用越来 越引起人们的重视，但到目前为止，p i n x l 基因在食管癌中生物学意义、 作用机理国内外的报道很少，并且没有适合研究p i n x l 基因的食管癌细胞 模型。由于基因转染已经成为治疗肿瘤等基因表达异常的有效手段，那么， 通过外源性过表达p i n x l 基因能否抑制食管癌细胞的增殖? 是否可以抑制 端粒酶活性? 本实验中利用多项技术，应用细胞模型研究p i n x l 在人食管 癌、异型增生组织及正常食管组织中的表达，探讨p i n x l 与食管癌发生发 展及与食管癌临床分期、病理分型及预后的相关性，并分析与端粒酶活性 表达的相关性。研究转染p i n x l 基因前后细胞增殖凋亡等的变化，初步了 解该基因对食管癌细胞的生物学影响。同时我们应用t r a p e l i s a 和 t r a p 银染法检测转染前后e c a l0 9 细胞端粒酶活性的变化，进一步探讨 p i n x l 基因与端粒酶的关系。 方法： 1 端粒d n a 长度及端粒酶h t e r t 在食管癌高发区人群中的表达及生物 学意义 收集采集自河北省磁县食管癌高发区现场的咬检组织1 0 0 0 例，所有 患者未接受过化疗和放疗。从中选取1 3 0 例，根据病情分为3 组，第l 组为正常食管组织3 6 例，第2 组为异型增生组织5 0 例，第3 组为食管鳞 癌组织4 4 例。经病理组织学诊断，5 0 例异型增生食管粘膜组织中，2 2 例为轻度增生组织，2 8 例为重度增生组织；4 4 例食管鳞状细胞癌中，2 0 例为高分化鳞癌、11 例为中分化鳞癌，1 3 例为低分化鳞癌，2 5 例侵及纤 维膜及周围软组织，1 9 例未侵及纤维膜；2 0 例为淋巴结转移，2 4 例为无 淋巴结转移。采用流式细胞术方法( f l o wc y t o m e t r y ，f c m ) $ n 免疫组织化学 方法( i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ，i h c ) 检测测端粒d n a 长度、端粒酶h t e r t 中文摘要 蛋白含量及细胞内d n a 含量在食管癌高发区现场人食管癌、异型增生及 正常食管的表达，分析与食管癌发生及与临床病理特征的关系。 2 食管癌中的端粒酶活性和p i n x l 的表达及其生物学意义 收集食管鳞状细胞癌手术切除标本1 3 0 例，每例标本分别取癌组织、 癌旁组织( 距癌边缘2 5 c m ) 及手术切缘正常食管粘膜( 距癌边缘5 c m 以上) 。 从中选取5 0 例食管鳞状细胞癌、异型增生及正常食管粘膜组织。经病理组 织学诊断，5 0 例食管鳞状细胞癌，3 9 例为高中分化鳞癌，1l 例为低分化鳞 癌，3 4 例侵及纤维膜，1 6 例未达到纤维膜，1 7 侈l j 淋巴结转移，3 3 例未转移。 采用逆转录聚合酶链反应( r e v e r s et r a n s c r i p t i o n p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n r t p c r ) 、流式细胞术方法( f l o wc y t o m e t r y ，f c m ) 、t r a p e l i s a 和t r a p 一 银染法检测食管癌组织、异型增生、正常粘膜组织中端粒酶活性和p i n x l 基因和蛋白的表达，分析端粒酶活性和p i n x l 表达与食管癌临床病理特征 的关系。 3 基因转染p i n x l 对食管癌e c a l 0 9 细胞增殖和凋亡以及端粒酶活性的影 响 利用分子生物学技术构建p c d n a 3 1 ( + ) p i n x l 重组质粒。采用脂质 体转染方法将p c d n a 3 1 ( + ) p i n x l 重组质粒转染e c a l 0 9 细胞，同时也设 置空载体p c d n a 3 1 转染组。转染7 2 小时后用g 4 1 8 进行稳定转染细胞 的筛选，筛选出来的阳性细胞分别命名为e c a l 0 9 p i n x l 、 e c a l 0 9 p c d n a 3 1 细胞。 应用激光共聚焦方法测定转染效率，m t s 方法检测过表达p i n x l 对 e c a l 0 9 p i n x l 、e c a l 0 9 p c d n a 3 1 、e c a l 0 9 细胞生长抑制作用。f c m 方 法检测细胞生长周期和细胞凋亡。r t p c r 、f c m 、w e s t e r n b l o t 方法检测 e c a l 0 9 p i n x l 、e c a l 0 9 p c d n a 3 1 、e c a l 0 9 细胞中p i n x l 基因及蛋白的表 达，t r a p e l i s a 和t r a p 银染法检测端粒酶活性在细胞中表达。 结果： 1 端粒d n a 长度及端粒酶h t e r t 在食管癌高发区人群中的表达及生物 学意义 f c m 检测端粒长度结果显示，端粒d n a 长度在食管癌组织中表达量 与正常食管组织相比明显缩短，在食管正常组织、异型增生组织、癌组织 的表达量呈现逐渐降低趋势( 尸 o 0 1 ) ；端粒d n a 长度在食管轻度增生、 中文摘要 重度增生之间呈逐渐降低趋势，重度增生组与轻度增生组相比明显缩短 ( 尸 o 0 5 ) 。随着细胞学 分级增高，端粒d n a 长度q f i s h 值逐渐降低，端粒d n a 长度与细胞学 分级呈负相关( r - - - - 0 7 9 ，p o 0 1 ) 。 f c m 检测端粒酶h t e r t 基因蛋白含量，在癌、重度增生、轻度增生 和正常食管的f i 值分别为1 8 4 4 - 0 2 1 、1 3 9 + 0 2 4 、1 1 3 + 0 1 9 和o 8 7 + 0 1 8 ， 癌组h t e r t 含量高于重度增生组( 尸 o 0 1 ) 、重度增生组高于轻度增生组 ( 尸 o 0 1 ) ，轻度增生组与正常组相比无显著性差别。随着细胞学分级增高， h t e r t 的f i 值随之升高，h t e r t 蛋白含量与细胞学分级呈正相关关系 ( r - - - 0 8 3 ，p 1 0 为阳性表达的判断标准，轻度增生组、 重度增生组和癌组h t e r t 蛋白阳性表达率分别为6 8 1 8 、9 2 8 6 和 9 5 4 5 ，重度增生组和癌组的表达率都高于轻度增生组俨 0 0 1 ) 。 f c m 检测正常组、轻度增生组、重度增生组和癌组细胞d n a 含量， d i 值分别为1 0 3 + 0 3 4 、1 0 6 + 0 2 8 、1 1 7 士0 2 5 和1 5 4 + 0 3 7 ，正常组、轻 度增生组和重度增生组的d i 值呈上升趋势( 胗0 0 5 ) ，癌组的d i 值明显高 于重度增生组。d i 值与细胞学分级正相关( 严o 6 2 ，p 0 0 1 ) ；正常组、轻 度增生组、重度增生组和癌组d n a 异倍体率分别为1 1 11 ( 4 3 6 ) 、 9 0 9 ( 2 2 2 ) 、2 8 5 7 ( 8 2 8 ) 和8 1 8 2 ( 3 6 4 4 ) ，癌组异倍体率高于重度增生组 ( p o 0 1 ) ，重度增生组高于轻度增生组( p o 0 5 ) ；从正常组到癌组p i 值分 别为1 0 9 8 - 4 - 4 1 1 、1 4 1 5 + 4 7 6 、1 8 9 7 + 5 2 7 和2 8 7 9 + 5 4 7 ，随着细胞学分级 的升高，p i 值增大，癌组显著高于重度增生组( 尸 o 0 1 ) ，重度增生组高于 轻度增生组( p o 0 5 ) 。p i 值与细胞学分级正相关( 严0 6 4 ，p 0 01 ) 。 1 3 0 例食管样本的d i 值与p i 值高度正相关( 严o 7 6 ，p 0 0 1 ) ；端粒长 度q f i s h 值与端粒酶h t e r t 蛋白f i 值负相关( 严7 4 9 ，p 0 0 1 ) ；端粒 q f i s h 值与d i 值负相关护0 4 1 ，p 0 0 1 ) 。 i h c 结果显示：端粒酶h t e r t 蛋白阳性颗粒呈棕黄色，阳性物质全 部位于上皮细胞和癌细胞的核内。在异型增生组织，端粒酶h t e r t 蛋白 的阳性表达部位主要集中在基底细胞层及其上方的细胞核内，随着食管黏 膜上皮增生程度的加重，h t e r t 阳性细胞逐渐增多，阳性细胞带上移。 正常食管粘膜组织中阳性表达率为1 1 1 ( 4 3 6 ) ，异型增生组织和癌组织 h t e r t 蛋白阳性表达率分别为4 4 0 ( 2 2 5 0 ) 和8 6 3 7 ( 3 8 4 4 ) 。三者阳性 中文摘要 率比较，癌组织显著高于异型增生组织( 尸 o 0 1 ) ，异型增生组织高于正常 上皮组织( p o 0 1 ) 。 2 食管癌中的端粒酶活性和p i n x l 的表达及其生物学意义 端粒酶活性检查结果显示，在食管癌、异型增生和正常食管组织中， 阳性表达率分别为8 4 o 、6 2 o 及6 o ，食管癌及异型增生组织与正常 食管粘膜比较具有显著统计学差异( p o 0 5 ) 。端粒酶活性的平均a 值分别 为食管癌组织1 4 5 7 + 0 8 3 8 、食管异型增生组织0 4 2 9 + 0 3 4 6 和正常食管粘 膜组织0 0 7 3 4 - 0 0 3 9 。三组间两两比较端粒酶活性的平均a 值均存在高度 显著统计学差异( 氏o 0 5 ) 。按正常食管粘膜组织、食管异型增生组织和食 管鳞癌组织的序列，端粒酶阳性表达率和平均a 值依次明显增高。食管 癌组织中端粒酶阳性表达率与组织学分级和淋巴结转移无关，而端粒酶活 性的平均a 值与组织学分级和淋巴结转移有关；食管癌组织中端粒酶阳 性表达率及端粒酶活性的平均a 值与其他临床病例因素如年龄、性别和 浸润深度等无关。 r t p c r 及f c m 检测p i n x l 结果显示，p i n x lm r n a 及蛋白在食管 癌组织中表达均显著低于食管正常粘膜( 尸 o 0 1 ) ，在食管正常粘膜、异型 增生、癌组织之间呈现逐渐降低趋势( 尸 o 0 5 ) 。食管癌组织中，p i n x l m r n a 和蛋白与分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移密切相关俨 o 0 5 ) 。 食管癌组织中端粒酶活性表达与p i n x l 蛋白表达呈负相关性( = - 0 8 8 3 ，p - - 0 0 0 0 ) 。 3 基因转染p i n x l 对食管癌e c a l 0 9 细胞增殖和凋亡以及端粒酶活性的影 响 应用脂质体转染方法，将p c d n a 3 1 ( + ) p i n x l 重组质粒及空载体 p c d n a 3 1 成功转染入e c a l 0 9 细胞中，并应用g 4 1 8 成功筛选出稳定转染 细胞，转染p c d n a 3 1 p i n x l 重组质粒与空载体p c d n a 3 1 的阳性克隆 细胞分别记为e c a l 0 9 p i n x l 、e c a l 0 9 p c d n a 3 1 细胞。 m t s 法测定增殖情况结果显示，转染p i n x l 基因后，e c a l 0 9 细胞 生长明显减慢俨 o 0 5 ) ；而e c a l 0 9 细胞与仅转染入空载体的e c a l 0 9 细 胞生长比较，两者无明显差异( 胗o 0 5 ) 。 f c m 测定细胞生长周期实验结果显示，转染p i n x l 基因的e c a l 0 9 细 中文摘要 胞的g o g l 期细胞数( ) 为7 0 5 8 + 5 2 6 ，明显高于未转染或仅转染空载体的 食管癌e c a l 0 9 细胞的g o g l 期细胞数( ) ( 分别为5 3 1 4 + 4 8 3 及 4 7 2 7 4 - 3 7 3 ) ( p 0 0 5 ) 。说明转染p i n x l 基因后，细胞的增殖明显变慢，细 胞生长阻滞于g o g l 期( f i g 3 9 ) 。 f c m 测定细胞凋亡实验结果显示，流式细胞仪检测细胞凋亡表明： 转染p i n x l 基因的e c a l 0 9 细胞的凋亡率( ) 为2 3 2 8 4 - 5 7 3 ，明显高于未转 染或仅转染空载体的食管癌e c a l 0 9 细胞的凋亡率( ) ( 分别为0 2 7 4 - 0 1 8 及 3 4 0 4 - 1 0 9 ) ( p 0 0 5 ) 。说明转染入p i n x l 基因后，细胞发生早期凋亡改变。 r t - p c r 、w e s t e r n b l o t 和f c m 检测结果显示，e c a l 0 9 p i n x l 细胞中 p i n x lm r n a 和蛋白表达水平较e c a l 0 9 p c d n a 3 1 、e c a l 0 9 细胞显著升 高( 尸 o 0 5 ) 。 细胞端粒酶活性的检测结果显示，转染p i n x l 基因后，细胞端粒酶 活性明显降低( p o 0 5 ) 。 转染前后e t a l 0 9 中端粒酶活性表达与细胞增殖指数( p i ) 表达呈正相 关性( r s _ - - 0 4 51 ，p = - 0 0 0 0 ) 。 结论： l 端粒d n a 长度在食管癌前细胞及癌细胞中明显缩短，并且随病变程度 加重而递减。端粒酶h t e r t 、细胞内d n a 含量和p i 值在食管上皮癌变 发生中明显递增，提示食管癌变与三者密切相关。端粒d n a 长度、端粒 酶h t e r t 在食管癌前病变早期即出现变化，可以做为监测食管癌发生发 展的参考指标。端粒酶h t e r t 与食管癌的临床病理特征无关，不能做为 食管癌病人预后的指标。端粒缩短、端粒酶h t e r t 高表达都与食管癌变 密切相关，有望以上述二者为靶点指导抗肿瘤的基因治疗。 2 食管癌及异型增生组织中存在端粒酶活性表达，并存在量的差异。端粒 酶活性在异型增生即呈现高表达，随着病变的加重，端粒酶活性依次显著 增高，提示端粒酶参与了食管癌的发生与发展，端粒酶的激活是食管癌的 早期事件。端粒酶可望成为食管癌的病情监测及早期诊断的生物学指标。 端粒酶活性a 值与食管癌的组织学分级和淋结转移有关，提示食管癌端 粒酶活性a 值可作为判断疗效和评价预后的指标。p i n x l 在食管癌组织中 表达显著低于食管正常组织，在食管正常组织、异型增生组织、癌组织之 间呈现逐渐降低趋势。p i n x l 在食管癌中表达和病理分级呈负相关，分级 中文摘要 越高，p i n x l 表达越低。浸润深度达到纤维膜者、有淋巴结转移者的p i n x l 表达要低于浸润深度未达到纤维膜者、无淋巴结转移者。认为p i n x l 是一 种潜在的食管癌相关基因，检测p i n x l 的表达水平可能对评价食管癌恶性 程度、转移潜能和预后评估有重要的临床价值。食管癌组织中端粒酶活性 与p i n x l 表达呈显著负相关性，证实p i n x l 抑制端粒酶活性。 3 首次应用脂质体转染方法建立食管癌细胞株e e a l 0 9 p i n x l ，目前国内外 文献尚未见相关报道。e c a l 0 9 细胞转染p i n x l 基因后，细胞的增殖明显 变慢，细胞生长阻滞于g o g l 期，细胞发生早期凋亡改变。e c a l 0 9 细胞转 染p i n x l 基因后，端粒酶活性明显降低，并且端粒活性与细胞增殖指数呈 显著正相关，考虑在食管癌细胞中p i n x l 基因通过降低端粒的活性，减弱 细胞的增殖，有望成为食管癌治疗的分子靶点。 关键词：食管鳞状细胞癌；端粒；端粒酶；端粒酶逆转录酶；端粒长 度；端粒酶活性；p i n x l ；t r a p 银染法 英文摘要 e x p r e s s i o no ft e l o m e r a s ea n dp i n x lg e n ei ne s o p h a g e a l l o 一 c a r c l n o m aa n dt h eb i o l o g i c a ls i g n i f i c a n c e a b s t r a c t o b j e c t i v e s ：e s o p h a g e a lc a r c i n o m ai so n eo f t h em o s tc o m m o nm a l i g n a n t g a s t r o i n t e s t i n a lt u m o r s t e l o m e r e sa r er e p e t i t i v ed n as e q u e n c e sa tt h ee n d s o fl i n e a rc h r o m o s o m e st h a ta r ee s s e n t i a lf o rc h r o m o s o m ep r o t e c t i o na n d g e n o m i cs t a b i l i t y ，w h i c hp l a yt h ek e yr o l ei nh u m a n c e l lr e p l i c a t i o na n da g i n g s h o r t e n i n go ft e l o m e r e si sa s s o c i a t e dw i t he a c hr o u n do fc e l ld i v i s i o na n d e v e n t u a l l yr e s u l t si nt h ec e l l sa p o p t o s i so rd e a t h o n c et e l o m e r e sa r es h o r t ， c e l l se n t e ra ni r r e v e r s i b l eg r o w t ha r r e s ts t a t ec a l l e dr e p l i c a t i v es e n e s c e n c e s o m a i n t e n a n c eo ft e l o m e r el e n g t hi si m p o r t a n ti np r e v e n t i n gt h ec o n s u m p t i o no f t e l o m e r ed n ad u r i n gc e l ld i v i s i o n t e l o m e r a s e ，ac e l l u l a r r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e ，h e l p ss t a b i l i z et e l o m e r el e n g t hi nh u m a ns t e m ，r e p r o d u c t i v ea n d c a n c e rc e l l sb yc o m p e n s a t i n gt h i sp r o g r e s s i v et e l o m e r ea t t r i t i o nt h r o u g hd e n o v oa d d i t i o no ft t a g g gr e p e a t st ot h ec h r o m o s o m ee n d s a m o n g t e l o m e r a s e ，t h eh u m a nt e l o m e r a s er e v e r s et r a n s c r i p t a s e ( h t e r t ) i so n eo f c o r ec o m p o n e n t sa n dp l a y sak e yr o l ei nt h ea c t i v a t i o no ft e l o m e r a s e t h o u g h t e l o m e r a s ei sc o n s i d e r e dt ob en e c e s s a r yf o rt h ei n d e f i n i t ep r o l i f e r a t i o no f h u m a n c e l l s ，s e v e r a ll i n e so fs t u d i e ss h o wh i g hl e v e le x p r e s s i o n so ft e l o m e r a s e a r ef o u n di nt u m o r , w h i c hi m p l i c a t et h a ta c t i v a t i o no ft e l o m e r a s ep l a y sak e y r o l ei nt h em a l i g n a n tt r a n s f o r m a t i o np r o c e s s s i n c em o s tc a n c e r se x p r e s s t e l o m e r a s e ，t h i s i n d i c a t e st h a tt e l o m e r a s e i n d u c e dt e l o m e r e l e n g t h m a n i p u l a t i o n sm a y h a v e u t i l i t y f o rt i s s u e e n g i n e e r i n g t o m a l i g n a n t p r o l i f e r a t i o na n di n v o l v ei n c a n c e rd e v e l o p m e n t i n h i b i t i o no ft e l o m e r a s e r e s u l t si ng r a d u a le r o s i o no ft e l o m e r e sf o l l o w e db yc e s s a t i o no fp r o l i f e r a t i o n o ra p o p t o s i s ，a n dt h u sm a yb eap r o m i s i n gt a r g e tf o rc a n c e rt h e r a p y a st h ee n d o g e n o u ss u p p r e s s o rg e n e so ft e l o m e r a s e ，p i n x 1i sr e g a r d e da s o n eo fp o t e n t i a lt u m o rs u p p r e s s o rg e n e sa n di n v o l v e si nv a r i e t yo ft u m o r d e v e l o p m e n t r e c e n tr e p o r t ss h o w e d t h a te x p r e s s i o no fp i n x1w a so b v i o u s l y 8 英文摘要 d e c r e a s e da n dt e l o m e r a s e a c t i v i t yw a se n h a n c e di ng a s t r i cc a r c i n o m a ， c o l o r e c t a lc a n c e ra n dl e u k e m i a b u ti tw a sa l s or e p o r t e dt h a tt h e r ew a sn o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h ee x p r e s s i o no fp i n x 1i nt h eh e p a t u m ot i s s u e s c o m p a r e dt ot h a ti nn o r m a lc o n t r o lt i s s u e s ，w h i l eh i g ht e l o m e r a s ea c t i v i t yw a s f o u n di nt h eh e p a t u m ot i s s u e s t h o s ec o n t r a d i c t i o u sr e s e a r c h e ss h o w e dt h e e x a c tr o l eo fp i n xlg e n e si nr e g u l a t i o no ft e l o m e r a s ea c t i v i t yi nt u m o rc e l l si s s t i l lu n c l e a r s oi ti sa l s ou n c l e a rw h e t h e rp i n x1i n h i b i t st e l o m e r a s ea c t i v i t y a n d o rs u p p r e s s e st u m o rc e l l p r o l i f e r a t i o n i ti s a c h i e v e dt os e tu pa n e s o p h a g e a lc a n c e rc e l l sm o d e lt og e ti n s i g h ti n t ot h ef u n c t i o n so fp i n x1g e n e i n r e g u l a t i n g t h et e l o m e r a s e a c t i v i t y t h ed e v e l o p m e n to ft e l o m e r a s e i n h i b i t o r sa st h e r a p e u t i ca g e n t sh a sb e c o m en e wm e t h o df o rc a n c e rt h e r a p y a n dt h es t u d yo fp i n x1i ne s o p h a g e a lc a n c e rc e l l sw i l lc o n t r i b u t et ot h e a d v a n c e dt h e r a p e u t i cs c h e m e s i no r d e rt oe x p l o r et h er o l eo ft e l o m e r ea n dt e l o m e r a s ei nc a r c i n o g e n e s i s o fe s o p h a g e a le p i t h e l i u m ，t h et e l o m e r el e n g t ha n dt h ee x p r e s s i o no fh t e r t p r o t e i ni ne s o p h a g e a lc a r c i n o m aa n da t y p i c a lh y p e r p l a s i aw e r em e a s u r e db y f c ma n di h c m e a n w h i l e ，t e l o m e r a s ea c t i v i t yo fe s o p h a g e a lc a r c i n o m aa n d a t y p i c a lh y p e r p l a s i at i s s u e sw a sf u r t h e rd e t e c t e db yt r a p a r g e n t a t i o n r e l a t i o n s h i p b e t w e e nt e l o m e r e l e n g t h a n dt e l o m e r a s ea c t i v a t i o na n d e s o p h a g e a lc a r c i n o m ac l i n i c a lp a t h o l o g i c a lf e a t u r e sw a sa n a l y z e dt oe x p l o r e t h ei n v o l v e m e n to ft e l o m e r ea n dt e l o m e r a s ei nc a r c i n o g e n e s i so fe s o p h a g e a l e p i t h e l i u m i no r d e rt o e x p l o r et h e r o l eo fp i n x1i n c a r c i n o g e n e s i s o fe s o p h a g e a l e p i t h e l i u ma n di ni n h i b i t i n gt e l o m e r a s ea c t i v a t i o n ，t h ee x p r e s s i o no fp i n x1i n e s o p h a g e a lc a r c i n o m aa n da t y p i c a lh y p e r p l a s i aw e r em e a s u r e db yf c m a n d i h ca n dt h ep r o l i f e r a t i o na n da p o p t o s i so fe c a10 9c e l l st r a n s f e c t e dw i t h e x o g e n o u sp i n x 1w e r ea s s e s s e d b yr t - p c r , f c ma n dw e s t e r nb l o t m e a n w h i l e ，t e l o m e r a s ea c t i v i t yo fe c a10 9c e l l st r a n s f e c t e dw i t hp i n x1w a s f u r t h e rd e t e c t e db yt r a p a r g e n t a t i o n m e t h o d s ： 1e x p r e s s i o no f l e n g t ho f t e l 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eu n t o u c h e d ( n - 19 ) ，l y m p hn o d em e t a s t a s i sp o s i t i v e ( 1 1 _ 2 0 ) ，l y m p hn o d em e t a s t a s i sn e g a t i v e ( n - 2 4 ) 50d y s p l a s i ao fe s o p h a g e a l s q u a m o u se p i t h e l i u mi n c l u d e d2 2c a s e so fm i l dd y s p l a s i aa n d2 8c a s e so f s e v e r ed y s p l a s i a n et e l o m e r el e n g t ha n dt h ee x p r e s s i o no fh t e r t p r o t e i ni n e s o p h a g e a l c a r c i n o m aa n da t y p i c a l h y p e r p l a s i aw e r em e a s u r e db yf l o w c y t o m e t r y ( f c m ) a n di m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ( i h c ) r e l a t i o n s h i pb e t w e e n t h e i re x p r e s s i o n sa n dc l i n i c a lp a t h o l o g i c a lf e a t u r e sw a s a n a l y z e d 2e x p r e s s i o no ft e l o m e r a s ea c t i v i t ya n dp i n x li ne s o p h a g e a lc a r c i n o m a a n dr e l a t e db i o l o g ys i g n i f i c a n c e e s o p h a g e a lc a r c i n o m at i s s u e