（环境科学专业论文）利用褐菖鲉肝hsps的lamp技术快速监测海洋石油污染的可行性研究.pdfVIP

目录 目录 摘要i x a b s t r a c t x 第1 章引言。1 1 1 立题背景1 1 1 1 石油污染的现状1 1 1 2 石油污染对鱼类的危害。1 1 2 热休克蛋白的研究进展。2 1 2 1 热休克蛋白及其发现过程2 1 2 2 热休克蛋白的分类和特征。3 1 2 3 热休克蛋白的生物学功能3 1 2 4 鱼类热休克蛋白的研究概况5 1 2 5 热休克蛋白与生物标志物7 1 3 环介导等温扩增( l a m p ) 技术8 1 3 1l a m p 法概述8 1 3 2l a m p 法的引物设计。8 1 3 3l a m p 法的原理9 1 3 4l a m p 法的技术特点9 1 3 5l a m p 产物的检测方法10 1 3 6l a m p 法的应用1 1 1 4 本研究的目的、意义及主要内容1 4 第2 章厦门海域褐蕾鲇热休克蛋白基因的克隆1 6 2 1 材料1 6 2 1 1 实验动物1 6 2 1 2 主要试剂1 6 2 1 3 主要仪器1 6 2 2 方法1 7 2 2 1 简并引物的设计。1 7 i 目录 2 2 2 模板d n a 的制备1 8 2 2 3 从基因组d n a 中扩增基因序列1 9 2 2 4p c r 产物的t 载体克隆2 0 2 3 结果2 1 第3 章r e a l t i m ep c r 检测热休克蛋白基因表达方法的建立2 6 3 1 材料2 6 3 1 1 实验动物2 6 3 1 2 主要试剂。2 6 3 1 3 主要仪器2 6 3 2 方法2 6 3 2 1 模板d n a 的制备2 6 3 2 2r e a l t i m ep c r 引物2 6 3 2 3r e a l t i m ep c r 反应2 8 3 2 4 灵敏度分析。2 8 3 3 结果与分析。2 9 3 3 1 引物验证结果2 9 3 3 2 标准品拷贝数2 9 3 3 3 读值温度的确定3 0 3 3 4 灵敏度分析3 1 第4 章l a m p 技术检测热休克蛋白基因表达方法的建立3 3 4 1 材料3 3 4 1 1 实验动物3 3 4 1 2 主要试剂3 3 4 1 3 主要仪器3 3 4 2 方法3 3 4 2 1 模板d n a 的制备3 3 4 2 2 引物设计。3 4 4 2 3l a m p 反应体系优化3 5 4 2 4l a m p 反应的灵敏度检测。3 6 n 目录 4 3 结果与分析3 7 4 3 1 引物验证结果3 7 4 3 2l a m p 反应体系优化结果3 8 4 3 3l a m p 灵敏度检测结果。4 1 第5 章原油水溶性成分诱导褐菖鲇热休克蛋白基因的表达4 4 5 1 材料与方法4 4 5 1 1 实验动物4 4 5 1 2 主要仪器4 4 5 1 3 主要试剂4 4 5 1 4 原油w s f 的制备4 4 5 1 5 污染实验4 5 5 1 6 数据统计分析4 5 5 2 结果4 6 5 2 1w s f 处理后褐菖壹i i i 肝h s p 6 0m r n a 的表达变化4 6 5 2 2w s f 处理后褐菖夸i i i 肝h s c 7 0m r n a 的表达变化。4 7 5 2 3w s f 处理后褐菖童l i 肝h s p 7 0m r n a 的表达变化4 9 5 2 4w s f 处理后褐菖童由肝h s p 9 0m r n a 的表达变化5 0 5 2 5w s f 处理后褐莒纳肝脏的脏器系数5 l 第6 章讨论5 3 6 1l a m p 反应体系的优化5 3 6 2 石油污染对热休克蛋白的影响5 4 6 3 利用h s p s 的定量l a m p 技术监测石油污染的可行性5 5 第7 章结论与展望5 7 7 1 结论5 7 7 2 创新点。5 7 7 3 展望5 7 参考文献5 9 发表文章及参加课题6 5 1 1 1 目录 致j 射6 6 i v c o n t e n t s c o n t e n t s a b s t r a c t ( i nc h i n e s e ) i x a b s t r a c t ( i ne n g l i s h ) a b s t r a c t x c h a p t e r1i n t r o d u c t i o n 1 1 1b a c k g r o u n do ft h es u b j e c t 1 1 1 1t h es i t u a t i o no fo i lp o l l u t i o n 1 1 1 2t h ed a m a g eo fo i lp o l l u t i o n 1 1 2t h ea d v a n c e so fh s p s 2 1 2 1h s p sa n di t sd i s c o v e r y 2 1 2 2t h ec i a s s i f i c a t i o na n dc h a r a c t e r i s t i c so fh s p s 3 1 2 3t h eb i o l o g i c a lf u n c t i o no fh s p s 3 1 2 4t h es t a t eo fh s p sr e s e a r c hi nf i s h 5 1 2 5t h ea p p l i c a t i o no fh s p sa sb i o m a r k e r 7 1 3l o o p - m e d i a t e di s o t h e r m a la m p l i f i c a t i o n 8 1 3 1o v e r v i e wo fl a m pm e t h o d 8 1 3 2p r i m e rd e s i g no fl a m pm e t h o d 8 1 3 3p r i n c i p l eo fl a m pm e t h o d 9 1 3 4c h a r a c t e r i s t i c so fl a m pm e t h o d 9 1 3 5d e t e c t i o nm e t h o d so fl a m pp r o d u c t 1 0 1 3 6a p p l i c a t i o no fl a m pm e t h o d 11 1 4s i g n i f i c a n c ea n d m a i np o i n to ft h er e s e a r c h 1 4 c h a p t e r 2c l o n i n go fh s p sg e n ef r o ms e b a s t i s c u sm a r m o r a t u si n x i a m e nw a t e r s 1 6 2 1m a t e r i a l s 1 6 2 1 1a n i m a l sf o rs t u d y 1 6 2 1 2m a i nr e a g e n t s 1 6 2 1 3m a i ni n s t r u m e n t s 1 6 2 2m e t h o d s 1 7 v c o n t e n t s 2 2 1t h ed e s i g no fd e g e n e r a t ep r i m e r s 1 7 2 2 2p r e p a r a t i o no ft h et a r g e td n a 1 8 2 2 3g e n ec l o n i n gf r o mg e n o m i cd n a 1 9 2 2 4m o l e c u l a r c l o n i n gb yp u c 1 8tv e c t o ro ft h ep c r p r o d u c t 。2 0 2 3r e s u l t s 21 c h a p t e r3d e v e l o p m e n to fr e a l t i m ep c rm e t h o dt od e t e c tt h e e x p r e s s i o no fh s p sg e n e 2 6 3 1m a t e r i a l s 2 6 3 1 1a n i m a l s 2 6 3 1 2m a i nr e a g e n t s 2 6 3 1 3m a i ni n s t r u m e n t s 2 6 3 2m e t h o d s 2 6 3 2 1p r e p a r a t i o no f t h et a r g e td n a 。2 6 3 2 2p r i m e r so fr e a l t i m ep c r 2 6 3 2 3a m p l i f i c a t i o nr e a c t i o no fr e a l - t i m ep c r 。2 8 3 2 4s e n s i t i v i t ya n a l y s i so fr e a l t i m ep c r 2 8 3 3r e s u l t sa n da n a l y s i s 2 9 3 3 1r e s u l t so fp r i m e rv a l i d a t i o n 2 9 3 3 2c o p i e so ft h es t a n d a r d 2 9 3 3 3t e m p e r a t u r ef o rc tv a l u e 3 0 3 3 4s e n s i t i v i t yo fr e a l - t i m ep c r 3 1 c h a p t e r 4d e v e l o p m e n to fl a m pm e t h o dt od e t e c tt h e e x p r e s s i o no f h s p s g e n e 3 3 4 1m a t e r i a l s ：3 ：； 4 1 1a n i m a l sf o rs t u d y 3 3 4 1 2m a i nr e a g e n t s 3 3 4 1 3m a i ni n s t r u m e n t s 3 3 4 2m e t h o d s 3 3 4 2 1p r e p a r a t i o no ft h et a r g e td n a 3 3 v t c o n t e n t s 4 2 2d e s i g no ft h ep r i m e r s 3 4 4 2 3o p t i m i z e dc o n d i t i o n sf o rl a m p 3 5 4 2 4s e n s i t i v i t ya n a l y s i so fl a m pm e t h o d 3 6 4 3r e s u l t sa n da n a l y s i s 3 7 4 3 1r e s u l t so fp r i m e rv a l i d a t i o n 3 7 4 3 2r e s u l t so ft h eo p t i m i z a t i o no fl a m pc o n d i t i o n s 3 8 4 3 3t h es e n s i t i v i t yo fl a m p 4 1 c h a p t e r 5e x p r e s s i o no fh s p sg e n ef r o ms e b a s t i s c u sm a r m o r a t u st o c r u d eo i lw ；f 4 4 5 1m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 4 4 5 1 1a n i m a l sf o rs t u d y 4 4 5 1 2m a i ni n s t r u m e n t s 4 4 5 1 3m a i nr e a g e n t s 4 4 5 1 4p r e p a r a t i o no fc r u d eo i lw s f 4 4 5 1 5t o x i c o l o g i c a le x p e r i m e n t 4 5 5 1 6s t a t i s t i c a la n a l y s i s 4 5 5 2r e s u l t s q 1 6 5 2 1t h ee x p r e s s i o no fh s p 6 0 g e n ei nt h el i v e ro fs e b a s f f s c u sm a r m o r a t u s a f t e re x p o s u r et ow s f 4 6 5 2 2t h ee x p r e s s i o no fh s c 7 0 g e n ei nt h el i v e ro fs e b a s 矗s c u sm a r m o r a t u s a f t e re x p o s u r et ow s f 4 7 5 2 3t h ee x p r e s s i o no fh s p 7 0 g e n ei nt h el i v e ro fs e b a s 矗s c u sm a r m o r a t u s a f t e re x p o s u r et ow s f 4 9 5 2 4t h ee x p r e s s i o no fh s p 9 0 g e n ei nt h el i v e ro fs e b a s 矗s c u sm a r m o r a t u s a f t e re x p o s u r et ow s f 5 0 5 2 5r e s u l t so fo r g a nc o e f f i c i e n t sa f t e re x p o s u r et oc u d eo i lw s f 5 1 c h a p t e r 6d i s c u s s i o n 5 3 6 1q u a n t i t a t i v el a m pm e t h o da n dt h eo p t i m i z a t i o no fl a m pc o n d i t i o n s 5 3 6 2e f f e c t so fo i ip o l l u t i o no nh s p s 5 4 v i i c o n t e n t s 6 3f e a s i b i l i t yo fh s p sb i o m a r k e r st om o n i t o ro i lp o l l u t i o nb yq u a n t i t a t i v e l a m p 5 5 c h a p t e r7s u m m a r ya n dp r o s p e c t i o n 5 7 7 1s u m m a r y 5 7 7 2i n n o v a t i o n 5 7 7 3p r o s p e c t i o n 5 7 r e f e r e n c e 5 9 p u b l i c a t i o n 6 5 a c k n o w l e d g e m e n t s 6 6 v i l l 摘要 摘要 环介导等温扩增( l o o p m e d i a t e di s o t h e r m a la m p l i f i c a t i o n ，l a m p ) 技术是一 种新颖的核酸扩增技术，该技术以其灵敏度高、特异性强、反应速度快、检测成 本低等优点已广泛应用于各种病原体的检测，但在环境污染监测方面的应用则较 少。 本文以我国海洋经济鱼类褐菖鲇( s e b a s t i s c u sm a r m o r a t u s ) 为研究对象，克 隆了四种热休克蛋白( h e a ts h o c kp r o t e i n s ，h s p s ) h s p 6 0 、h s c 7 0 、h s p 7 0 和h s p 9 0 基因序列，分别建立并优化定量l a m p 技术。为验证定量l a m p 技 术的可行性，将褐菖鲇分别暴露于2 0 嵋l 、6 0 嵋l 。1 和18 0 嵋l 。1 原油水溶性 成分( w a t e rs o l u b l ef r a c t i o n ，w s f ) ，第l 、5 、1 0d 采样，利用定量l a m p 技术 检测肝h s p s 基因的表达情况，并与r e a l t i m ep c r 结果进行比较。 主要研究结果如下： ( 1 ) 建立了h s p s 的l a m p 检测方法，并对其中的几个重要参数进行了优 化。结果表明，m 9 2 + 最佳浓度为8m m o l l ，外引物与内引物浓度比为l ：6 时效 果最好，最适反应温度为6 4 ，最佳反应时间为5 0m i n ，甜菜碱最佳浓度为o 4 m o l l ，d n t p 最佳浓度为1 4m m o i l 一。 ( 2 ) 本实验以h n b 为染料，建立了定量l a m p 检测技术，对其灵敏度进行 摸索发现，检测限为4 7 4 1 0 4c o p i e s ，而r e a l t i m ep c r 的检测限为2 7 5c o p i e s 。 虽然l a m p 的灵敏度低于r e a l t i m ep c r ，但是l a m p 反应快，成本低，耗时短， 只需简易的实验设备，更适用于现场的快速检测。 ( 3 ) 原油w s f 短期毒性实验结果表明，l a m p 的检测结果与r e a l t i m ep c r 的基本一致，表明该方法可用于实际样品的快速检测；不同浓度原油w s f 暴露下， 不同h s p s 基因m r n a 的表达变化趋势不一致，其中对w s f 敏感性和特异性较好的 是h s p 6 0 和h s c 7 0 基因。 关键词：环介导等温扩增技术；热休克蛋白；褐菖纳；原油水溶性成分 a b s 仃a c t a b s t r a c t a san o v e ln u c l e i ca c i d a m p l i f i c a t i o nm e t h o d ，l o o p - m e d i a t e d i s o t h e r m a l a m p l i f i c a t i o n ( l a m p ) ，w h i c ha m p l i f i e sd n a w i t h h i g hs p e c i f i c i t y , e f f i c i e n c y , r a p i d i t ya n dl o wc o s t ，h a sb e e nw i d e l ya p p l i e dt ot h ed e t e c t i o no fk i n d so fp a t h o g e n s ， b u tf e wu s e df o re n v i r o n m e n t a lm o n i t o r i n g i nt h i ss t u d y , f o u rh e a ts h o c kp r o t e i n s ( h s p s ) g e n e ，h s p 6 0 ，h s c 7 0 ，h s p 7 0a n d h s p 9 0 ，w e r ec l o n e df r o ms e b a s t i s c u sm a r m o r a t u s l a m pt e c h n o l o g yf o rd e t e c t i n g t h eh s p sg e n ew a sd e v e l o p e d t os t u d yt h e f e a s i b i l i t yo fl a m p , s e b a s t i s c u s m a r m o r a t u sw a se x p o s e dt o2 0g g l ，6 0 “g l a n d18 0 g l 一1c r u d eo i lw a t e r s o l u b l ef r a c t i o n ( w s f ) ，s a m p l e da f t e r1 ，5 ，10d a y s t h ec o n t e n t so fh s p sm r n ai n t h el i v e ro fs e b a s t i s c u sm a r m o r a t u sw e r e m e a s u r e db yl a m pm e t h o da n dr e a l - t i m e p c r t e c h n i q u e t h er e s u l t ss h o w e d ： ( 1 ) l a m pt e c h n o l o g yf o rd e t e c t i n gt h eh s p sg e n ew a sd e v e l o p e d t h ed a t a s h o w e dt h a tt h eo p t i m a la m p l i f i c a t i o nc o n d i t i o nw a sa t6 4 5 0m i nw i t h8m m o l l m 9 2 + a n d1 4m m o l l 1b e t a i n ea n d0 4m m o l l 。1d n t p , t h eb e s tr a t i oo fo u t e rp r i m e r s t oi n n e rp r i m e r sw a s1t o6 ( 2 ) q u a n t i t a t i v el a m pm e t h o dw a sd e v e l o p e db yu s i n gh n b w i t has e n s i t i v i t y o f4 7 4 10 4c o p i e so f t e m p l a t e ，i ti sl e s ss e n s i t i v et h a nt h a to fr e a l t i m ep c r ，w h i c h w a sm e a s u r e da s2 7 5c o p i e so ft e m p l a t e i nc o n s i d e r a t i o no ft h a tl a m pi sf a s t e rt h a n t h el a t t e r ，a n de a s i e ra n dm o r ec o n v e n i e n tt ou s ew i t h o u ts p e c i a li n s t r u m e n t s ，t h en e w m e t h o di sm o r es u i t a b l ef o rr a p i df i e l dd e t e c t i o n ( 3 ) t h er e s u l t so fw s fs h o r t t e r mt o x i c i c a le x p e r i m e n ts h o w e d ，t h ee x p r e s s i o n o ff o u rh s p sm r n ad e t e r m i n e db yt h eq u a n t i t a t i v el a m pw a ss i m i l a r i t yw i t ht h a to f r e a l - t i m ep c r ，i n d i c a t i n gt h a tt h eq u a n t i t a t i v el a m pw a ss u i t a b l et om e a s u r ea c t u a l s a m p l e a f t e re x p o s u r et od i f f e r e n tw s f ，t h ec h a n g i n go fd i f f e r e n th s p sg e n ew a s v a r i a b l e ，h s p6 0a n dh s c 7 0g e n e ss h o w e db e t t e rs e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t y k e yw o r d s ：l o o p - m e d i a t e d i s o t h e r m a l a m p l i f i c a t i o n ；h e a t s h o c k p r o t e i n s ； s e b a s t i s c u sm a r m o r a t u s ：c r u d eo i lw a t e rs o l u b l ef r a c t i o n x 第l 章引言 1 1 立题背景 1 1 1 石油污染的现状 第1 章引言 随着海运事业和海上采油业的发展，溢油污染已成为各种海洋污染中发生频 率最高、分布面积最广、危害程度最大的一种，是威胁全球海洋环境的最严重的 污染问题之一，被称为海洋环境的超级杀手。据统计，世界上每年通过不同途径 排入海洋的石油量约占世界石油总产量的5 ( 沈南南等，2 0 0 6 ) ，倾注到海洋 的石油量达2 1 0 6 1 07 吨。由于航运而排入海洋的石油污染达1 6 0 万2 0 0 万 吨，其中l 3 左右是油轮在海上发生事故导致石油泄露造成的( 刘慧杰和张虎山， 2 0 1 0 ) 。 特别是近几年，海上石油开采活动日益频繁，海上石油运输也日趋活跃，重 大石油泄露事故频频发生，如2 0 1 1 年6 月1 1 日，我国山东蓬莱1 9 3 油田发生 溢油事故，总溢油量超过3 3 2 0 桶；2 0 1 0 年4 月2 0 日，位于墨西哥湾的“深水 地平线”钻井平台发生爆炸并引发大火，原油泄露估计已超过6 8 6 1 0 5 吨，成 为美国历史上规模最大的石油泄露事件。 1 1 2 石油污染对鱼类的危害 石油一旦泄露，几小时后便发生光化学反应，生成醌、酮、醇、酚、酸 和硫的氧化物等，对海洋生物有很大的危害( p r i n c ee ta 1 ，2 0 0 3 ) 。石油的水溶性 成分十分复杂，含有多种烷烃和芳香烃，尤其是多环芳烃( p a h s ) ，对海洋生物 具有免疫毒性、生殖毒性、神经毒性、基因毒性等多种慢性毒性作用。 ( 1 ) 免疫毒性：油污干扰了鱼类正常的生理、生化机能，引起鱼类产生病变， 造成鱼类对海洋细菌、病虫害等病原菌及海洋污染的免疫功能下降( 陈刚，2 0 0 2 ) 。 ( 2 ) 生殖毒性：产卵场或孵化场受到严重油污时，将影响鱼的怀卵数量和产卵 行为，种群繁衍可能受到危害( 陈刚，2 0 0 2 ) 。石油污染对幼鱼和鱼卵的危害很 大，在受到石油污染的海水中孵化出来的幼鱼大部分是畸形的，不仅鱼体扭曲而 1 第l 章引言 且没有生命力( 张瑞安，1 9 9 7 ) 。 ( 3 ) 致死毒性：海洋石油污染短期内对成鱼并不产生明显的危害，但是毒性大 的燃料油却能大量杀死鱼类。鱼的体表、嘴和鳃都有一层粘性的防油薄膜，如果 将鱼浸泡在含油废水中，半分钟后再放回清洁的水中，鱼体上的油就会完全漂走， 并不产生危害( 马志华，2 0 0 2 ) ，但是若长期暴露在含油废水中，油膜会堵住鱼 鳃，使其生理机能失常，造成呼吸困难导致死亡。 ( 4 ) 另外，石油进入海洋后，漂浮在水面并迅速扩散，形成油膜，阻碍水面白 空气中摄取氧气，抑制水中总浮游植物的光合作用，致使水中溶解氧逐渐减少， 鱼虾贝类窒息死亡。 1 2 热休克蛋白的研究进展 1 2 1 热休克蛋白及其发现过程 热休克蛋白( h e a ts h o c kp r o t e i n s ，h s p s ) 也叫热激蛋白，是一组在结构上高 度保守的多肽类蛋白质分子家族，普遍存在于自然界原核、真核细胞中。当生物 体受到环境胁迫如高温、缺氧、重金属、氧化应激、机械损伤、病毒或病虫害侵 袭等应激源刺激时，将降低正常基因的表达，同时启动热激基因，迅速合成h s p s ， 从而使机体抵御不良环境( 许竟成和蔡亚非，2 0 0 9 ) 。 关于h s p s 的最早报道见于1 9 6 2 年，r i t o s s a ( 1 9 6 2 ) 把2 5 培育的果蝇幼 虫置于3 0 热环境中，3 0m i n 后发现果蝇唾液腺染色体上出现很大的“膨突”， 提示该区域的基因转录增强，r i t o s s a 称之为“热激反应”。1 9 7 4 年，t i s s i e r e s 等 ( 1 9 7 4 ) 在实验时发现，对果蝇升温处理时唾腺细胞中有一组分子量为7 6k d a 和2 6k d a 的蛋白质表达量增加，并证实这是由于热休克激发了染色体内基因转 录而合成的特异性蛋白，即h s p s 。 1 9 8 2 年a d e m s 等证实，一切生物细胞( 包括原核细胞和真核细胞) ，温度增 高时均可合成一类具有生物学活性及其多种生理功能的蛋白质。不仅如此，b o n d 等( 1 9 8 7 ) 发现，在其他许多应激条件下，如缺氧、重金属、营养缺乏、创伤、 感染、肿瘤等，细胞内均可生成这种蛋白，因此又称这类蛋白质为应激蛋白。 2 第1 章引言 1 2 2 热休克蛋白的分类和特征 1 2 2 1 热休克蛋白的分类 h s p s 种类繁多，现已发现几十种，尚无明确的分类标准，不过大多数分类 方法都是基于分子量的大小。目前应用较多的是日本学者m o r i m o t o ( 1 9 9 3 ) 的 划分方法，他将h s p s 分为4 个家族，h s p 9 0 家族( 分子量为8 3 - - 一9 0k d a ) ，h s p 7 0 家族( 分子量为6 6 7 8k d a ) ，h s p 6 0 家族以及小分子量h s p s 家族( 1 2 - - 一4 3k d a ) 。 其中h s p 7 0 在大多数生物中含量最多，细胞应激后生成最显著，具有高度的保 守性，因此在h s p s 中最受关注、研究最为深入。 1 2 2 2 热休克蛋白的特点 ( 1 ) 保守性：在生物的进化过程中，h s p s 被认为是最保守的成分，其核酸序列 在不同物种之间具有高度的同源性，如不同来源的真核生物h s p 7 0 的同源性为 6 0 7 8 ，人类的h s p s 基因序列与果蝇的有7 2 的同源性，与大肠杆菌有5 2 的同源性( 刘玲玉等，2 0 0 7 ) 。 ( 2 ) 普遍性：h s p s 的存在具有普遍性，从原核生物到真核生物，从微生物、植 物到动物( 包括人类) ，同一生物体的不同组织内，包括细胞质、线粒体、内质 网及细胞核等，受到刺激时均会诱导h s p s 的生成。 ( 3 ) 非特异性：除了热刺激外，其他的物理、化学及生物应激源，如重金属、 缺血、缺氧、感染、创伤、氧自由基等均可诱导h s p s 的产生。 ( 4 ) 交叉耐受性：机体受应激源刺激后，诱导细胞产生h s p s ，不仅使细胞对该 刺激的耐受性增加，也增加了细胞对其他应激源刺激的耐受性( 任莉萍和曹小汉， 2 0 0 6 ) 。 1 2 3 热休克蛋白的生物学功能 1 2 3 1 分子伴侣功能 分子伴侣广泛存在于原核生物细胞和真核生物细胞内，是一类互不相关的胞 内蛋白质，能介导其他蛋白的正确装配( 蒲力群等，2 0 0 8 ) ，不仅可以在细胞处 于应激状态下调节细胞的生理功能，而且还在蛋白质的跨膜转运、折叠、降解及 特定构象维持等方面起重要作用( 曹宏，19 9 9 ) 。h s p s 是研究最多的一种分子伴 第1 章引言 侣。胞质h s p 7 0 家族成员可以与前体蛋白相互作用，防止前体蛋白形成不可解 开的构象，也可以防止已松弛的前体蛋白聚集( 靳远祥和陈玉银，2 0 0 2 ) 。蛋白 质的跨膜运输需要有分子伴侣的协助完成，参与这一作用的主要