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植物组培实验报告 专业班级：生物技术2班学号：xx0322229姓名：蒋薇同组人:卢晓燕、王雪娇、杨佳梅、袁蓉、莽斌、林兴龙、刘显浩、关德红、李玉胜 试验日期：xx年3月10日室温：大气压： 试验序号：1试验名称：组培室的设计及实验仪器设备的使用 一、实验目的 1.了解普通植物组织培养实验室和工厂育苗植物组织培养室的差别； 2.掌握植物组织培养实验室的组成及各分室的功能； 3.学会分析各种类型植物组织培养实验室的优点和缺点； 4.学会常见植物组织培养设备的使用方法。 二、试验原理 1.物组织培养实验室是完成植物组织培养的重要场所，植物组织培养实验室设计合理与否植影响着植物组织培养的成败。 2.植物组织培养实验室有：准备室、接种室、培养室、温室。准备室： 在准备室主要进行一些常规实验操作，如各种药品的储备，称量，器皿洗涤，培养基配制，培养基和培养器皿的灭菌，培养材料的预处理等。为了方便管理还可以将准备室进行适当的分区，如划分为药瓶储藏室，洗涤室，培养基配制室及灭菌室等。 药品储藏室 主要用于存放各种化学药品，要求室内干燥、通风、避光、应配制、备药品柜、冰箱等。各类化学试剂应按要求分类存放，需要低温保存的药剂应置于冰箱内保存，有毒药品应按规定存放和管理。洗涤室 用于玻璃器皿、用具及实验用具的洗涤、干燥和存放;；培养材料的 预处理与清洗：组培苗的出瓶、清洗与等。要求有电源、自来水和水槽，上下水道畅通，排水良好，地面耐湿、防滑，便于清洁。应配备工作台、烘箱、晒瓶架、周转筐、毛刷等。 （3）培养基配制室 用于培养基的配制，还可以分为称重分室和配制分室。药品称量需配制各种规格的天平，包括普通天平和分析天平。培养基配制需要配备工作台、蒸馏水器、电炉（电饭锅或微波炉）、水浴锅、磁力搅拌器、过滤装置、酸度计、分注器、各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管、移液管及移液管架以及贮藏母液的冰箱、移动式载物台（医用小推车）、周转筐等。 (4)灭菌室 用于培养基、器皿、用具、及其它物品的灭菌。灭菌室根据工作量的大小决定其面积的大小，一般控制在3050。要求、通风、明亮，墙壁和地面应防潮、耐高温。应配置高压电源和排水设施、高压蒸汽灭菌装置、干热消毒柜或烘箱、细菌过滤装置及移动式载物台、周转筐等。 准备室也可设计成大的通间，使试验操作的各个环节 在同一房间按程序完成，以便于程序化操作与管理，从而提高工作效率。此外还便于培养基的配制、分装和灭菌的自动化操作程序设计，从而减少规模化生产的人工劳动，更便于无菌操作体系的建立。无菌操作室（接种室） 无菌操作室也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培养 物的继代转接等无菌操作。由于植物组织培养时间较长，尤其需要防止细菌、真菌污染。因此，接种室内无菌条件控制的好坏直接影响培养物的污染率及接种工作效率等重要指标。接种室面积根据需要和环境控制的难易程度而定，在工作方面的前提下易小不宜大。室内地面、墙面、天花板应采用防水或耐腐蚀材料，符合无尘积累要求，易于清洁和消毒；门窗要求密闭性好，一般用滑动门窗，不能安装风扇，通风换气需通过空气调节装置进行。无菌室内安装紫外灯，每周照射12h，每次使用前照射1030min；定期用甲醛和高锰酸钾（或用臭氧发生器）熏蒸消毒。接种室内应配备超净工作台、灭菌器或酒精灯、酒精瓶及酒精棉球、接种工具、器械支架及移动式载物台。 接种室外还应设置预备室作为缓冲间，一方面可供操作人员更换工作服、工作帽、拖鞋及器皿准备、培养材料处理等，另一方面可减少工作人员将外界尘埃、杂菌等污染物直接带入接种室内。缓冲间与接种室之间最好安装塑钢玻璃及滑动门，以便于观察；而且缓冲间与接种室的门应该错开，也不得同时开启，以防止在工作人员进出时空气对流带入杂菌。缓冲间内应配备鞋架和衣帽挂钩，并备有清洁的工作服、工作帽、口罩及拖鞋；墙顶应安装12盏紫外灯，定时照射杀菌。 培养室： 用于对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养。培养室内放置培养架，方便操作，.并充分利用空间。培养室的大小可根据生产规模和培养架的大小、数目及其他附属设备而定，其 设计以充分利用空间和节省能源为原则。可采取多室设计方式，每个培养是面积不宜过大，约1020，以满足不同培养材料对环境条件控制的不同要求，也便于对同室内环境条件的均匀控制。室内天花板和内墙最好用塑钢板或瓷砖装修，地面铺设水模式或瓷砖，以保持室内明亮、平整，并方便清洁和消毒；室内还要安装紫外灯，定时进行杀菌处理。培养室内需要安装空调，以控制室内温度，一般要求保持在2027之间，低于15或高于35对植物的生长不利。培养室的光源一般使用白色日光灯，光周期可采用自动定时器来控制，光照强度一般控制为10006000lx，每天光照时间薇1016h。需要大量的暗培养时可以增设暗培养室，或使用暗箱培养。培养室内的相对湿度保持在7080为宜。湿度过高，容易使培养及污染；湿度过低，容易使培养基失水变硬，影响培养物生长。在梅雨季节可使用除湿机人工除湿，干燥季节可利用加湿器来增加湿度，也可采取防治水盆的方法来调节湿度。 温室 组培试管苗在进入大田栽培之前，必须经过一段时间的炼苗，即驯化移栽过程，使其逐渐适应自然条件。北方（长江以北）通常建造日光温室，而南方通常建造连栋温室大棚进行试管苗得分驯化移栽。日光温室：日光温室又称为钢拱式日光温室、节能温室，主要利用太阳能做热源提供室内温度。这种温室跨度为57米，中高2.43.0米，后墙用砖砌成，厚5080厘米，高1.62.0米。钢筋骨架，拱架为单片桁架，上弦为1416,的圆钢，下弦为1214,的圆钢， 中间用810的钢筋做拉花，宽1520厘米，拱架上端搭在中柱上，下端固定在前端预埋水泥基础上。拱架间用三道单片桁架花梁横向拉接，以使整个骨架成为一体。温室后屋面可铺泡沫塑料板和水泥板，抹草泥封盖防寒，后墙没隔45米设通风口。 此种温室坚固耐用，采光和通风性好，操作方便，适于北方地区使用，能充分利用太阳能，降低生产成本。 智能连栋式温室：智能连栋式温室有屋脊形连栋温室和拱圆形连栋温室等类型，是由相等的双屋面借纵向侧柱相互连通，可以连续搭接，形成室内串通的大型温室。此类温室又被称为现代化温室，每栋可达数千或上万平方米，框架采用镀锌钢材，屋面用铝合金材料做桁条，覆盖物可采用玻璃、玻璃钢、塑料板材或者塑料薄膜，冬季通过热水、蒸汽或者热风加温，夏季采用通风与遮阳相互结合的方法降温。整栋温室的加温、通风遮阳和降温工作可全部或部分计算机控制。 3.高压灭菌锅、超净工作台等都是组培室必不可少的仪器和设备，只有科学正确的学会它们的使用方法，才能确保组培的成功。 三、主要材料、仪器、试剂 材料：各种植物材料仪器：分析天平 介绍:精确度达0.0001g，用于称量微量元素、植物生长调节剂和一些高精确度的试验品。电子天平一般采用应变式传感器、电容式传感器、电磁平衡式传感器。应变式传感器，结构简单、造价低，但精度有限。 植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA）和6苄基氨基腺嘌呤（6BA）的比例，决定了根和芽的分化。 三实验器材 （一）试剂 乙醇、IAA或2，4D、HgCl2（或次氯酸钠）、6-苄基氨基腺嘌呤（6-BA）MS培养基 （二）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等 三实验步骤 1.配制培养基 （1）愈伤组织诱导培养基：MS培养基（蔗糖含量为10g/L，2,4D含量为2mg/L，琼脂10g/L）。 （2）试验培养基：在MS培养基中按表331加入IAA和6BA。 吲哚乙酸先用少量0.1mol/LNaOH溶解，6-苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1mol/LHCl溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 2.培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH5.8，趁热分装于100mL三角烧瓶中，每瓶约20mL。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121（1kg/cm2）下灭菌20min。取出三角烧瓶放在台子上， 冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。 3.诱导产生愈伤组织 （1）取健壮的玫瑰、菊花茎数段，每段约5cm长，于烧杯中用0.1%氯化汞（升汞）浸泡20min，取出用无菌水洗34次，置于无菌培养皿中，在接种箱中按无菌操作要求剥去外皮（接种箱事先用紫外灯灭菌30min），用解剖刀切成5mm厚的圆片（弃去开始一片和最后一片），用长镊子将它接种在诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶接种4片，接种后扎好瓶口。 （2）将已接入植物组织（外植体）的三角烧瓶，培养在25温室中，每星期检查l2次，剔除材料已被杂菌污染的三角烧瓶，34周后产生愈伤组织。 （3）选取愈伤组织生长良好的三角烧瓶，用解剖刀将愈伤组织切下，转移到含有不同激素的试验培养基中（也可以连同原来的外植体一起转移），每瓶放12块，仍培养在25温室中，每周12次观察不同处理的三角烧瓶中，愈伤组织分化情况，直至长出根和芽。长成的幼小植株即为“试管苗”，可移栽于花盆中。 四实验结果 因为时间有限及实验严密性等问题，大部分都失败了，但是仍然有小部分分化发育了出来。已经证明了植物组织能够经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。 植物组织培养实验报告 实验一母液的配置与保存 一、实验目的 通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法二、实验原理 配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的 母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。三、实验材料、试剂和仪器设备1.试剂 NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl22H2O,MgSO47H2O,FeSO47H2ONa2-EDTA,MnSO44H2O,ZnSO47H2O,H3BO3,KI,Na2MoO42H2O CuSO45H2O,CoCl26H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水2.仪器设备 电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。四、实验步骤1大量元素母液的配制 先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3,KNO3,KH2PO4,MgSO47H2O,CaCl22H2O，待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。2微量元素母液的配制 按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO44H2O,ZnSO47H2O H3BO3,KI,Na2MoO42H2O，CuSO45H2O,CoCl26H2O,按制备母液I的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。3铁盐母液的制备 把FeSO47H2O和Na2-EDTA分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把FeSO4倒入Na2-EDTA溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调PH到5.5，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡12min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。4有机化合物母液的制备 按配方表中用量依次称取：维生素B,烟酸,甘氨酸，用蒸馏水溶解后定容后，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。5植物生长物质母液制备 NAA母液:准确称取10mg,用少量1mol/LNaOH溶解后加蒸馏水定容至100ml,即配制成0.1mg/ml的NAA母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。6BA母液配制方法相似，浓度为2mg/ml。五、试验结果分析及注意事项配制母液时注意药品只能出不能进。 实验二培养基的制备与灭菌一、实验目的 学习母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法二、实验原理 组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。三、实验材料、试剂和仪器设备 1.试剂：琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/LNaOH,各类母液 2.仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH试纸，锥形瓶瓶等。四、实验步骤 1.将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定位置2.取50ml烧杯一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入烧杯中。 3.取50ml烧杯一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入烧杯中。4.取瓷盆一个，加入300ml蒸馏水，置于电磁炉上加热，称量琼脂6克，白砂糖40克，依次倒入瓷盆中，待琼脂和白砂糖完全溶解后，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌，并定容至1L。 5.用1mol/LNaOH调PH至5.8 6.把培养基分装到广口瓶中，用牛皮纸包扎好，待灭菌。7.培养基灭菌 五、试验结果分析及注意事项 配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。培养基灭菌时注意要放干净冷空气。 实验三无菌植株的建立 一、实验目的 通过实验，初步掌握外植体材料消毒及在超净工作台上接种的方法与注意事项二、实验原理 植物细胞具有全能型，其外植体接种在无菌的人工培养基上，能长成完整的无菌植株。 三、实验材料、试剂和仪器设备 超净工作台、培养基，大号镊子，剪刀，酒精灯，喷