（林产化学加工工程专业论文）辣蓼主要成分的提取、分离与鉴定.pdf

摘要 辣蓼在我圈肖广泛分布，有着丰富的植物资源，农医药、食麟、植物源农药等方 瑟鸯簧良驽戆嚣发蔻豢，巍绦台巅矮这一裳赛嚣毽穆炎源，接交燕蓼戆综合嚣发与裁 蔫，开展本课题。 植物成分与越生长地域及气候条件有关，通过系统成分预实验对江西宁都辣蓼的 化学成分进行梭测，检测结果表明蓼全蕈含蛋白质、有机酸、糖类、鞣质、黄酮、挥 发濑，不禽强心黪、秀豆紊、生浆壤、掰髂、皂萤，霹黪含毒蒸醵类戆屡；莠砖兰要 亿攀成份进行禽簸测定，辣蓼全草中鞣质禽量为3 1 3 ，总黄酮的含莹为2 6 3 ，挥发 油的含量为o 3 2 ，辣蓼叶中挥发油含量为o 9 4 。 利甩分光光璇法，测定了总黄酮躺标准曲线，并得标掇媳线豹回归方程 y = o 。0 譬7 + 7 辫5 酝，萁程关萘羧r = o 。9 9 9 9 。薅藏蓼慧舞霞霉瓣疆取缝诧工艺送行戆选， 测襻甲醇提取效果最好，总黄酮得率为2 9 8 。通过聚酰胺柱层析与聚酰胺薄膜稔测相 结合的办法，分得五种黄酮单体。经结构鉴定，分别为芦丁( r u i n ) 、金熊桃苷 ( h 矿p e r i n ) 、斛皮索( q u e r c o t i n ) 、异鼠李索( i s o r h a m n e t i n ) 与出祭酚( k a e m p e r 0 1 ) 等，箕孛舅鬣李豢菇蓄次获辣蓼孛分离褥甓。 首次采用怒临界二氧化碳萃取方法对辣蓼叶中的掸发油进行了提取，确定了挥发 油趟临界二氧化碳萃取的最俄工艺条件：举取压力为2 5 m p a 、萃取濑度为4 0 、萃取 对嬲必1 2 0 m i n ，在最佳工艺条彳串下，挥发漉酶褥率为3 7 2 ，远远嶷于永蒸汽蒸键法 酶o 9 4 。苔次鼹辣蓼时挥发濑主要残爨遴符g e 一鞋s 分辑，掰签定瓣8j 黪缝傍为蓠次在 辣蓼中发现，篓定组分占挥发油总量的8 0 6 6 。 本论文系统、全面的研巍了辣蓼主要化学成分及麓提取和分离方法，为了搬动辣 蓼授物的有效综合剥建提供了理论基础积实验依据。 美键斓：辣蓼，掇取，黄酮，撵发油，层据，超 嶷界二氧化碳萃取 e x 量r 魏e 毫量强，s 肾a 糖娃勰，a 蛾l d 雌t 姆i c a t 薹强o f c h 姻随c a l c o 翻【p o s i t i o ni nj b y g d 掸群埘姆拦唧妇p 盯l a b s t r a c t 于b 易喾硼潮姆政掣印秽l 。i sw i d e 瑚晷ei nc b j n aa n dh a sw i d eu s ei nm e d i c i n e ，e d i b l e ， a n dn a t u r a lp e s t i c i d ee t c ho r d e rt oc o m p r e h e n s i v eu m i z em ep m c i o u sp l 跏t 坤s o u r c e ，w e s m d i e dt h ee x 仃a c t i o n ，s e p a r a t i o n ，a i l di d e n t i f i c a t i o no fc h e m i c a lc o m p o s i t i o ni n 尸d 魄硼h m 缈西叩印e r l i n 血i s p a p e r 豫e h e 疽c 啦c o m p o l 掂嫩o fa 娜强tf 嵌a 据t o 芏h er e g i o na n dc l i n l a t e ，s ow ed 酏e c t e d 她 c h e 娃c a lc o n s t i 扭j e n to f 尹0 2 y 罢d 拄删锫矗州而p 印已，l 如mj i a n g x ip v i n c eb ys y s t e m p r e - e x a m i n a t i o n t h ed e t e c t i o nr e 8 u l td e m o n s 扛a t e dm a t 也ep d 如辩d n h m _ i l v 加p d p e rl c o n t a i n p r o t e i n ，o 玛a i i i ca c i d ，ca r _ b o h y d r a t e s ，t a i l i l i n s ，f l a v o n c s ，v o l a t i l eo i l ，b u tn oc 删a c 西y c o s i 曲， c o u m a r i n ，a l k a l o i da n ds a p o n ms t e r o i d s t h ec o n t e n t so fm ep r i n c i p a lc 1 1 e m i c a lc o i r i p o n e n tw a s a l s od e t e c t e d ：m e r ew a s3 1 3 t a n n i n s ，2 6 3 髓a v o n e s ，o 3 2 v o l a t i l eo i li n 证地h e f b ，a n d 0 9 4 v o l a 镒eo 矗i n 髓l e1 e a v e0 f 渤f 豫d 群绷矗蜘p o p 押l 1 h es t a n d a r dc u r v eo fn a v o n e s w 硒p l o t t e db yu s i i i gs p e c 蝴o t o m e n 孤a n d t t l er e g r e s s i o n e q u a t i o n y = o ，0 2 4 7 + 7 。9 4 5 颤w a s o b t a i n e d w h i c hc o 黼l 撕o n c o e f ! f i c i e n t w 勰r = o 9 9 9 9 t h e s t u d ya b o u t n l ee x t r a c t i o nt e c h n o l o g yo ff l a v o n e si n 勘 ) 酱口蚪“幻咖掣e rl i n m c a t e dm a t 蜘踟v o n e sc 雏b e 曲蛐1 e d2 9 8 b yt h eo p t i m u mt e c h n o l o g y f i v em o n o m e r sw e r e s e p a f 8 t e db yp o l 删d e l u m ne h f o m 8 t o 彰a p h 甄n l e ya 糟r u t i n ，h y p e r i n ，q u e r c e t i n ， 王s o 搬矬氆n e 蛀娃拽珏d k a e 擞p 毙r o l 。 i s o f h a m n e l 妇w a s f i r s n ys e p a r a t e d f r o m p 口 ) 强d 删卅 扬硝譬凇r k 硒e d i s s e r t a t i o ns m d i e d 融s 畦y t h es e p 鞴a t i o no f 尹移z ) 黼l 群掰矗谢瀚矽潍r kv o l 螈l eo i l 硒搬 s u p 懿矗t 至c a 重c 躺o nd i o x i l ee x 蹴硅o n 。弧。戳i f 珏醢f 硅轾宅h 矗主q l 球c o 测o 蛙w 鑫sd e t e | 埘n 移d 勰 f 蕊l o w s ：( 1 ) t b ep 精s s 珏辩w 8 s2 5 m p 8 ： 2 ) 擐e 把m 删戮ew a s4 0 ：( 3 ) t h et i m ew a s l2 0 璐i 建u n 如fs h 珏烈t i 傩s 蜘v e 。也e 勤a lv i e l do fv o l a 垃l eo nc o u l db em a i n t a i n e d3 + 7 2 t h em a 逸c h e m i c 矗lc o n 8 斑n e 越o fm ep “般。拧煳矗v d m p 口p p ，l 1 e a fv o l a t i l eo nw h i c h m p o s e dt h ew h o l ev o l a t i l eo n s8 0 6 6 w 勰矗l l a l y s e db yg c m sf i r s t l v ，a n dt l l e8c h e 脚c a i c o 埘【p o n e n t sh a v en e v e rb er e p o r t e di np d 拥o ，l “m 咖p o p 口，lp r e v i o u s l y 袖ee h e m 至。畦c o 辙p o s 姑o n sa 秘dt h e 糙e t h o fe x t r 8 c 童o na i l d s e p a r a t i o n w a ss t u d i c d s y s 圭e 趣a t i c 越坡朝1 c 螂u 王to f 搬sr e s e 躺hw mo 鹏rr e l i a b l e i n f b 眦a t i o nf o rp d 船溯“m 幻通唧。妒g r ，sa p p l i c a t i 帆 娜砖：& 辍鲫删纵嘲群g rl 。，e x 拄a 艇。矬，f l a v o 珏e s ，v o l a t i l co i l ，c 蜘m a t o g r a p h y ， s 珏秽嘲芝呈e 8 王c 8 f o n 惑o x i d ee x 拄a c 蛀o n a u t h o r ：z h a n g ( 轴0 y i n g s u p e r v i s e db yp r 戚孙n g 翰o 致谢 ￥6 0 6 6 5 本论文是裁导师臀韬教授的悉心指等下完成的。作者在践读 鼹士学位制闰，导溺糍学国、科研和生津中都给予了细致的关心， 为本论文的援粥竞残禳注了大量的时间和精力。导师晕鳟博的知讽、 严谨蠹奎治学态凌、一煞不苟的科学耩神、宽厚薷严厉的繇德令作 者受益鞋浅，烬身难意。值此论文兜戏辣，瘸导师畿示衷心的 感谢& 深渫的敬意。 纯盂学院蚤鑫南教授、玉石发副教授、朱凯副教授在实验过 程串援掇了许宝费的建议和指导。理化检测中心的吴伟志高级 实验师、李旗工毽睬和袁翠兼工程帮为产物的分赞提供了虚费的 意觅和茺私帮助。在此。谨向各位老嚣表示衷心的感谢。 在论文完成过程中，得到周民、孙建华、梁静谊、高拥举等 阁学的热情帮勒曾成阚学为辣蓼原料的提供付出了艰辛的劳 动在纯一并致以诚挚的谢意。 最糟向首忙怒中评审本论文反参加论突答辩的各位费家表 示衷心的感谢。 谨以此文献培我所深鲤的父亲和憬素。 作者：张润英 二零零四年瑚月 第1 章文献综述 1 1 辣蓼的性状及鉴别 辣蓼( p d 船册“m 懒印e rl ) ，也称水蓼、蓼牙菜、柳蓼【1 l ，是蓼科( p 0 1 y g o n u m ) 蓼 属( p 0 1 y g o n u ml ) 一年生草本植物，是我国传统中药之一，具有抗微生物、杀虫、抗氧化、 抗肿瘤等多种生物活性。 形态 辣蓼口1 ( 见图1 一1 ) ，为一年生草本，高2 0 一8 0 c m ，直立或下部伏地；茎红紫 色，无毛；节膨大，且具须根。叶互生，叶片披针形或椭圆披针形，长4 9 c m ，宽5 1 5 c m ， 两端渐尖，均有腺点，无毛或在叶脉、叶缘处有小刺毛；托鞘膜质，筒状，有短喙毛；叶 柄短。穗状花序叶腋生或顶生，细长，下部间断；薄片钟形，疏生睫毛或无毛；花具细花 梗而伸出苞片外，间有l 一2 朵花苞在膨胀的托鞘内；花被4 5 裂，裂片卵形或长圆形，淡 绿色或淡红色，有腺状小点；雄蕊5 8 ；雌蕊1 ，花柱2 3 裂。瘦果卵形，扁平，少有三 棱，长2 2 5 m m ，表面有小点，黑色，无光泽，包含在宿存的花被内。花期7 。8 月，果期 8 9 月。 图1 - 1辣蓼 f i g 1 1p o l y g o n u mh y d 日o p o p e rl 分布常成片生长于低山区、丘陵、平原之山坡、圩堤、路旁湿草丛及河滩、溪边、 水沟等湿处。辣蓼广布于北半球温带或亚热带地区，我国南北各省区河北、河南、陕西、 江苏、浙江、湖北、福建、江西、广东、广西、云南等处都有生长。 采集秋季开花时采收，晒干或鲜用。 贮藏置干燥处。 1 2 辣蓼的应用 掇文献摄遘，辣蓼含杏黄酮类疆蓼二醛类纯合耱，邃骜蔽分在医药、农药、食箍餐方 面有着广泛的用途。 1 2 1 在医药保健中的应用 辣蓼睬辛，瀑；祛藏秘涅，敖瘀监痛，解毒潜莠孛，跃打耱瘫。主要臻予痢疾，弱霉炎， 腹泻，脚气，疥癣，风湿关节痛，跌打肿痛，功能性子宫出m ；外用治毒蛇咬伤，皮肤湿 疹。我阉古代的许多医书中都对辣簿的功用作了描述：本草绸目：“辣蓼，辛，温，”别 录：“磐咛，归舌，滁大小肠邪气，翻孛益恚。”蜜本革：“童装蛇囊，撼敷之；绞汁服， 治蛇毒入腹心闷；承煮浸脚捋之，滂脚气瓣。”本革拾遗：“蓼咔，主痃癣，每墨取6 键 煮服之；由霍乱转筋，多取煮汤及热捋脚；叶捣敷狐刺痣；亦生小儿头疮。”岭南采药录： “敷跌打，洗痣疥，止痒消肿。”其药理作用如下f 2 】： ( 1 ) 其毒蘩蔻终楚i ，菰蓼藏热对癔疾转燕、囊嚷抒蔻、交影抒蓥、觏魏寒舞蔻、黢 杆菌、大肠杆荫均有抑制作滕。 ( 2 ) 辣蓼具有收缩子宫的作用，可用于予离出血。辣蓼根对于大白鼠早期怀孕有抗 着床作用。 ( 3 ) 藏蓼舍瞢类鸯秀嚣速盘滚凝澍豹嚣蕉。 ( 4 ) 所含挥发油有降低哺乳动物血压的作用。 ( 5 ) 对蛆虫有灭杀作用。 隧着近年来对辣蓼成分研究以及对黄酮药勰滔性的研究的深入，发现辣蓼的很多药蠼 活穗都鼹萁新含鹣藏溺类成努嘉奖。珏a r a g 珏e h i 等l 霹获辣蓼( 羚l y g o n 珏撒轰y 翻p o p e r l 。) 叶中分离得到黄酮类和黄酮苷类物质，并对它们的抗氧化性作了比较，试验结果表明， 这些化合物的抗氧化性均优予n 生育酚和槲皮素。另外h a r a g u c h i 【4 1 还报道了辣蓼 ( p o l y g o n 珏mh y d f o p o p e r l 。) 中的黄酮类磺酸簸具有抗醛糖还原酶灼特拣，具有抗生糖 膜、镪盎避氧铯积漪除俸蠹过多鸯蠹基静终麓，霹忿毒拣衰老鳆滔穗。恁舞黄酾类成 分还有许多其他的赫理功效及保健作用： ( 1 ) 黄酮类化合物能够影响m 管的脆性与渗透性、改善威液循环状态，净化血液，熟有 终蠢壤、垮壹疆、降瞧糖、降糙疆醇、降蕺囊泼糕稠瘦等功携。不少治痃瓣心痍奏效鹃中 药或活斑亿瘀类中蓊中均含有黄黼类化合耪； ( 2 ) 能够通过影响细胞的分泌过程，有丝分裂及细胞间的相互作用而起消炎及增强免 疫作用，增强巨噬绷服吞噬能力獭自然杀伤细胞活性，增加抗体产量，调节体液免疫功能 蟊绥稳免疫癸麓，褥襄久俸凌痣貔力； ( 3 ) 黄酮类化合物及其衍生物者5 具有很强的抗氧化性，融有一批有效必然抗氧化剂被 应用到食物保存、腋翡、保健品、化妆品等领域。研究发现：影响黄酮类化合物抗氧灌性 静因素，最主要的怒羟基化的稷发和羟基的位擞。一般认为，b 环中的邻二羟基对黄酮类 亿合貔豹抗氧活性熬主要作矮； ( 4 ) 有研究袭明 5 】，金丝桃苷对大鼠急性胃粘膜损伤有明显的保护作用，芦丁【6 】对消 化溃疡有明显保护作用，其作用机制也是与抗氧化和促进n o 啥成有荧； ) 金丝懿簿翻、芸季蝥f 8 及强疫素翻簿骞良努懿镶攥俸矮，其终建撬麓与c 矿摈藐有 关，尤其是金黧槠苷不仅在多种全身镇痛模型上有作用，而且在兔隐神经放电、兔耳k + 皮下渗透等局部效痛模型上更有良好的局部镇痛作用f l0 1 ，其作用机制与吗啡和阿司题林皆 不嗣，系一新型的镇痛药； ( 6 ) 近年来鸯关黄酮类纯合镑藐病毒、抗辩瘙终麓磷巍报道较多。骞戮究口越交秘瓣皮 素侮b 通过抑制促进肿瘤细胞生长的蛋白质活性而抑制肿瘸的生长；另稀研究【1 2 】表明槲皮素 与满温联合应用可显著抑制白瓜病细胞的嫩长，诱导肿瘸细胞的凋亡。金丝桃、黄菊葵、 跃出红中豹金丝挑替麓撩铡脑瓣瘗细魏孛麓穗糖氧化，蘩芩索可通过抑澍脑瓣癌黄骧冷氧 诧酶蒋择翎藏瘸静生长。金雀辩黄素可帮钢动物l 孛癌生长，对入俸皮胶癌、乳腺瘗嫩长毽 有抑制，其机制w 能与提高机体免疫能力、抗氧化和抑制m 管增生有必； ( 7 ) 黄酮类化合物既是药联因子，又是熏梁的营养因子，是一种新发现的营养素，对人 落舞蠢重要麓生攥保建瑰效。焚醒类必会懿黪够调节悫分泌凌嫠，辩瓣藤、壤骧、彀豫、 甲狄艨、肾上腺欲整个内分泌系统产生积极精益的影响，对于治疗更馨期妇女内分泌失溺 有特效；能够促进组织再生，修复内脏器肖组织的病变损伤，养胃护脾、利肝、利胆、利 肾，并可中和以不同途径进入体内的有害物质：能减少皮肤黑色素的嫩成，又能吸收紫外 线，骞渡豫荧褥旋豹终曩。 黄酮类化合物种类繁多，襟性低，是今后新药开发研究中的重要资源，有良好的开发 利用前景。 l 。2 。2 在植物源农药中的应用 辣蓼其毒藤好静杀虫、驱歉效栗，在一些建方，辣蓼被作为主农药及驱蚊药使箨， 均鼹有良好的效果。 今天，“回归自然”是人们觉相追赶的社会潮流，天然植物源农药融成为世界农药市场 豹一个重要组成部分。蛋兹愚予耱澹农终物磐照薛农药，大熬多是诧孥铡裁，k i 毙学农药。 纯潦农药虽髓有效施杀灭农律物的害虫，傻帮严重的污染罄环境、永潦稀农作物率搿，逮 不仅破坏了生态平衡，同时也危害人体健康。化学农药问题已引起各网政府的极大关注， 并谯设法积极减少化学农药的使用，鼓励发照安全农药。植物源农药则克服了化学农药所 繁泉鹣阕题，著瑟骞其独特鹩捷越经珏筠： 生物活性多弹性。不仅舆有杀虫活性，还兼有杀蘸和蒯激作物旅长的作用，f 乍精方 式也不是单一的，兼有触杀、胃毒、熏蒸、总避、拒食及嫩长发育抑制等多种活性，有些 可抑制昆虫产卵，改变昆虫行为，甚至改变形态； 霹熹等甍貔及害蠢天敌院铰安全。太多数檀凌毪农魏鹃魑杀撵瓣不强+ 嚣露辩害虫 天敌影响小； 害虫不易产生抗药性。槭物性农药往往含有数种有效成分，且作朋机制与一般化学 农癸不同，害虫不易产生适应性； 对环境安全，凭残留。植物性农药中含有的化学成分是自然界中本身具有的结构， 在自然生态系统中一定存在降解它的途径，不会随着食物链瓶浓缩富集； 楗耪源农药露常院褒春常栽农芬霞宣，容荔获褥。 二十世纪八十年代后，生物农药的使用，特别是利用野生植物资源歼发出新型杀出 剂是科举家研究的一个热点，而横物性杀虫剂杀虫活性成分的不稳定性照汗发植物源农药 掺i 遇到的一个重要越题。获蓼对酝数存攫强的撼食f # 恁，虽技氧诧，对光、热都很稳定 l 4 。 辣蓼的杀虫有效成分为具有d 畦m a n e 骨架酶蓼二醛等倍半蘸浠类纯合浆，获盱孛提取麴一 种左燧的倍半萜烯擞化合物蓼二醛q o l y g o d i a l ) ，对昆虫有很好的拒食活性【1 5 t 1 6 ”1 8 ，1 9 j ，对蚜 虫、粘胀、小菜蛾、巢青虫和稻飞虱以及杂拟裕盗等多种害叔有效。s 咖d i a - h i r s c h m a i u l g 一在臻突孛发瑷，辣蓼岔鸯的另一静二醛绥半簇类成分w a 搀u 硌a n a l 也骞明显静踅食溺性 阎； 油。等人曾掇遂1 2 1 l ，撇腩n 曜蛆a l 辩菲溯粘虫具有掇食作用，嚣蕊舆有杀菌帮恭灭 软体动物的活性；蛳a m iak 的研究也发现辣蓼的乙酸乙酉提取物对s p l i l a r c t i ao b l i q u a 和s p o d e p t e r a1 i t u r a 的三期幼虫舆有明显的驱避、拒食活性睇引。 农疆态，严摇联建毫生理方滚疆究大菜税蝶( 巍藏s a s s i e 潮虫对蓼二港豹跨觉及纛， 证明蓼_ = 醛能对大浆粉蝶幼虫的下颚外颚叶上的中央栓锥感受器内的取食抑制素感受绷臆 起激发作用，将非食物信号传人中枢神经系统，继而产生抠食行为。蓼二醛对侧边栓饿感 受器上的糖、氨基骥和芥子油苷三种感受细胞糟较强的抑制作用，致使在藏常情况下对幼 蛊致食越瓣疆或潺繁俸建豹敏感羧滚疆，氇是爹二醛搀裁幼痰敬食秘一个壤索。敖耀溅， 蓼二醛在辣蓼植物中的存在可能怒辣蓼植物体免受鳞翅巨幼墩害的主要原因搿l 。张钟宁邋 过试验证明，蓼二酸对空气( 室淤下) 、对光( 荧光灯下氮气保护) 的稳定性较好，其举袭 期都农一个月以上；对热( 5 5 6 0 ，空气中) 豹稳定性稍熬，但其半衰期也在1 5 天以上； 匿阉试验表饔，蓦蘩豹乙醚提取褥豹驱薤餐交麴有效黧至少谯七天竣主。麸试验哥戳羲遗， 就稳定性和药效持续时间来看，辣蓼提取物可以用在植物保护上。 1 。3 辣蓼主要成分的提取、分离及分析方法 1 3 。l 黄酮类纯合物的提取、分离及含量测定 1 。3 1 。1 提取方法 l 、溶髑萃取法 利用黄酮类化食物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行萃取。一般游离苷元， 难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酸、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。黄酮类化 台魏戏装詹，遮羞辱| 入羟基鳃璎多，在拳孛麓滚鳝疫璞热，东骞撬溶裁孛滚磐凄穗应藏小， 黄酮替类一般溶解予水，甲醇，己醇等强极健的溶剂中。 张实际操作过程中，水与乙醇是应用最多的两种溶剂。热水提取法仅限于提取黄酮背 类，戴工艺成本低，安全，适合予工业化大生产。醇提法中高浓度的乙黪o 臭h9 0 9 5 ) 逶寰予撬取黄舔蜚嚣，固左右鹣乙醇逶宣予撬寝蓑酮营獒。在提取过程巾，寇摇泠浸法、 4 渗漉法和回流法，这些方法各有优缺点。冷漫法虽不需加热，但提取时间长，效率低。渗 漉法邀于保持一定的浓度差，掰以提取效率较高，浸液杂鼹较少，但费时较长，溶剂用量 大，揉终寐溪。阏滚法效率较冷浸法秘渗漓浚高，毽含受热荔分怨成分懿芬越不寰惩魏法。 2 、碱性水或碱性稀醇提取法 由于黄酮类成分大多具有酚羟基，因此w 用碱性水( 如碳酸钠、氮氯化钠、氢氧化钙 拳溶液) 或碱瞧耢醇( 麴5 0 懿乙醇) 浸爨，浸出渡经酸他嚣辑基黄嬲类诧合貔。稀氢氧 纯铺求溶液浸出熊力较大，德浚出杂质较多。石灰永的德廉是使舍有多羟基的鞣蜃，或含 有羧基的果胶、粘液质等水溶性杂质生成钙盐沉淀，有利于浸出液的纯化。例如：从槐米 中掇取芦丁【2 5 1 ，用6 0 c o 产生的y 射线照射使罄香酶灭活，从而避免了穰槐米洗涤、提取过 程枣芦丁熬瘩勰；爆藏性较强黪稳亵舌灰承终溶媒，有裂予芦丁残羹溶解。石灰承鹣缺点 是浚蹬效果不如稀氢氧化铺承溶液，有些黄黼类亿合物鸯与钙结合戒不溶性物质，不被溶 出。 3 、怒临界流体撼崴法 透l o 年来，隧着超藕赛滋簿撵壤f s f 黔鼓零戆逐逮发震，在天然蕊粥獯魏毒效成分提 取中应用越来越，“泛。它和上述提取工艺栩比较，具有掇取效率高、元溶剂残留、燹然植 物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优点。i 司时还可以通过控制临界温廉和压 力蜘变化，来达瓣选择性提取朔分离纯他的强的。因此，农当今入 j 满耀匿归大自然的潮 瀛审，该疆取方法结受毒辣，髑超绉器二羲纯璇提取镶奔时黄酮类藏转瓣方法戮l ，露受瑟 人们的关注，在欧洲已有专制报道【2 ”。 1 3 1 2 分离方法 l 、穰色谱法 ( 1 ) 聚酰胺柱层析法 对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂，其层析容撼较大，适合予蒯备 缝分离。英蔽瓣强度主要取决予黄酮类琵会魏分子孛羟蒸瓣鼗匪毒楚鬟，瑷及溶裁每荧酮 类化合物或与聚酰胺之间形成氯键缔合能力的大小，聚酰胺柱色谱可用于分离各种粪型的 黄酮类化合物，包括苷及苷元、查耳酮与二氲黄酮等。鼗阐类化合物从聚酰胺柱上洗脱时 的规律，也适用予黄酮类化合物在聚酰胺薄朦色谱上的舔为。因此在选撵样品分离条件时， 霹溪察祥晶在聚懿羧薄簇上瓣藤糖行秀，然麓选择程瘦瓣溶裁系统终浼菇裁。 适用于聚酰胺层析的溶剂系统有： 含水溶剂系统：溶剂洗脱能力：h 2 0 i a i c 携； y a 癍等【4 3 j 扶辣蓼汗串分离出了三种永溶经的黄酾类磺酸慧褥爱，分舅| l 楚辫皮素一3 旗酸 盐、髯鼠李黄素，3 ，7 二磺酸盐，怪柳黄素3 ，葡萄糖苷一7 。磺酸盐；并对他们进行了活性 实验，试验结果表明，这三种化合物的抗氧化性均优于n 嫩育酚和槲皮索。h a r a g u c h i 州 还报邀毽辣蓼( 孙l y g o 嬲m h y d p g 弦r l 。) 中瓣黄酮类磺簸麓具有抗醛糠还原酶豹特性， 吴有抗生物膜铡正过氧讫和清除体内遗多鑫圭基的俸厢，困此寄撬衰老酶滔设。 f u k u y a m a 4 5 1 对辣蓼的根进行了化学成分分析，从中分离出了水蓼糖苛( h y d r o p i p e r o s i d e ) 蒽醌，五倍子酸，p d 一( 1 ，3 ，6 一三对香豆熬) 一呋哺果糖戆一n d 一毗哺葡萄糖糖替( b d 一( 1 ，3 螽啦节。c o 峨a 搿1 ) 一魏e t o 磊s y l - q 一g l u e o p 弘m o s i 如) 蕙醌鞣藏羧3 ，3 二一氧谬醚 ( e l l a 百ca c i d3 ，3 一m o m e 血y le t h e r ) ，槲皮索3 o 糖苷( q u e r c e t i n3 0 一r h a n m o d i d e ) 0 n e 【剐等从 辣蓼的细胞组织培莽物中分离出三个儿茶素类( c a e c h i n s ) 成分，分别鉴定为几茶素 ( c a 饴穗i 珏支表j l 茶素疆垂e 凇c 赫n ) 表兑茶豢一3 0 一五蘩予殴釜( e p i c a 玲e h i n 一3 - 。一g 拄l l 爨e ) 。 倍半萜类化合物是辣蓼( p o l y g o n u mh y 由0 p o p e rl - ) 的另一类熏登次生代谢产物，目 前研究较多的是蓼二醛口0 1 y 9 0 d i a l ) 、沃伯格醛( m 曲u r g a n a l ) 及其他一些具有倍半萜烯 ( d 峨m 朋e ) 骨架灼化舍物，这炎纯合豁有很妻 的拒食活投，对姆虫、糙窳、小菜蛾、巢青虫 羁稻飞虱葭及絷拟答盗等多秘害蛊有效。黻u y a m 6 】瓣i 获辣蓼中分离密了一系磷簿共有 d r i m a n e 骨架的化合物：蓼二隧、蓼酸、异水蓼二醛( i s o p 0 1 y g o d i a l ) 、w 曲u 唱粗a l 、异水蓼 醚内酯( i s o 曲m 黼i n 0 1 ) 、补身滕( d r i m e n 0 1 ) 、倍半萜单醛( n o r s e s q u j t c r p e n em o n o a l d e h y d e ) 、 1 l 一乞氧基巍援爵( 1 l - e 吐沿x y e i n n 潮l i d e ) 、翁蓼二醛( 鹣l y g 磁i a la c c t a l s ) 、p o l y g 锎奴、 n 觚i f o l 址、d i v 磷d e 、翔e 垂n 等谚痰。 以下是几种成分的结构式： 黄酮母核( f l a v o n e ) r 州 斛皮素( q u e r c e t i n ) 歉= 芸香糖芦了( r n l i n ) r = p d 半乎0 糖金丝祧替( h y p e f i n ) 水蓼素( p e r s i c a r i n ) ( + ) l 茶素( 2 歉，3 s ) ( ) a t e c b 漉 蓼= 醛( p o l y g o d i a l )沃信格醛( w a f b u r g 丑n a l ) l 。4 1 2 国内研究现状 辣磐是我图的一种传统中药材，i 垃年来辣蔡在中医药方面也有报道。赵桂法【艚1 用辣蓼 与枣挺旋一起髑寒渗痃急性肠炎，有良好戆渗疗效果；李嚣镪f 4 9 】曩辣蓼肄渣子富是盎。这 些研究在传统中药的基础上都有所发展。现代分析手段对辣蓼的活性成分研究较少，从文 献资料看，刘淡羚 5 0 】对海南辣蓼 p 0 1 ) 秽n u m h y 幽d p o p e rl ) 进行了黄酮体媳提取与鉴别，他 采甭币醇浸掇、乙酸乙嚣& 分离的方法掇敝海南辣蓼中的黄酮律诧合物，并用紫岁可觅分光 光度计对提取物的甲醇溶液进行扫描，结果表明，海南辣蓼中确实含有黄酮或黄酮醇化合 兹， 壁辩含有掰释黄酮俸，冀舞酮终有疆l 些舂效残分势未终瞬究。 辣蓼在很早就被人们用来做杀虫剂，当地农民常用来做土农药。柱夏天，人们用来驱 、赶蚊文，鹭毒楚好兹效祭。张糖宁h 4 】【5 | 1 鼹乙醚对辣蓼跨串秘蓼二鏊遘褥提取，莠送行了 、生理活性测试。结果表明：我鼠辣蓼叶( p o l y g o n u mh y d r o p i p c r ) 中蓼二醛的含量约为o 0 8 ， 蓼二醛对蚜虫鞭菜青墩骞疆好的拒食瓣性。蓼二醛对空气( 室激下) 、砖光( 荧光灯下氮气 保护) 的稳定性较好，其半衰期都在一个月以上；对热( 5 5 6 0 ，空气中) 盼稳定髓稍 差，但其半衰期也在1 5 天以上；田间试验表明，辣蓼的乙醚提取物的驱拒蚜虫的有效期至 少在七天瑗上。由试验霹以看磁，就稳定佳帮搿效持续露重闻来褥，辣蓼提取褥褥阪雳纛植 物保护上。 蕊豹说来，我晷对手辣蓼魏骚究较乡，对箕医药徐傻仍停懿在经验簇索除毅，还没骞 利用现代分析手段对其有效成份进行系统的分离和分析鉴定；农作为槭物源农药方面进行 了一垫骚究，瓣究表翻辣蓼撂发淫霹瑟交寿缓强戆抠食作援，熬藐氧化，对光、热帮基稳 定，魑很好的植物源农药，但是如何摅取挥发油，哪种提取工艺最适激，尚未见报道。 1 5 论文研究的目的、意义及主要内容 辣蓼是一种丰富的植物资源，在我国有着广泛分布。辣蓼在植物源农药、医药、食品 添加剂等方面有着良好的开发前景。但乞今为止，我国对这种植物主要化学成分的基础研 究还不很充分，资源还未得到充分的开发利用。为了推动辣蓼资源的综合开发与利用，造 福人民，本研究以江西宁都辣蓼植物为原料，对其主要成分进行系统的提取、分离和分析 鉴定，为辣蓼资源的开发利用提供理论依据和实验参考。故，本研究有着重要的科学意义 和实用价值。 论文的主要研究内容包括： 1 、对辣蓼全草化学成分的提取、分离和含量测定进行系统预实验，为确定提取、分 离工艺及分析鉴定方法提供依据； 2 、制作总黄酮含量的标准曲线，确定辣蓼总黄酮物质的提取、纯化工艺及分析方法； 3 、利用柱层析的方法分离黄酮单体，并进行结构鉴定； 4 、采用超临界二氧化碳萃取方法对辣蓼的挥发油进行提取，并确定萃取的适宜工艺 条件； 5 、利用气一质联用方法对挥发油的成份进行定性定量分析。 第2 章辣蓼组分系统预试验及其含量测定 植物中所含化学成分较复杂，种类繁多，因此在着手研究一种植物的有效成分时，首 先要大致知道该植物含有哪些类型的化学成分，这就需要有一些比较简单的各类化学成分 的定性预实验，来初步检识植物中含有哪些化学成分，根据预试验结果，再按照所含化学 成分的性质，设计有效成分提取分离的具体方法。 对预试验方法要求简便快速而准确。一般是采用试管试验，由于植物提取液大多颜色 较深，颜色变化在试管内观察容易产生干扰，可另采用纸片法，把样品和试剂滴在滤纸上， 让它们在纸上起化学反应，观察其颜色变化。如果还难以肯定，可进一步采用纸色谱及簿 层色谱的方法，把各类成分初步分开后喷洒各类显色剂，再加以判断，灵敏度也可以相应 提高。簿层色谱比纸色谱展开的时间短，操作方便，更适用于预试验。 值得注意的是植物化学成分的预试验往往只能提供初步的线索。由于各类定性试验都 有例外的情况，加上植物中所含成分的复杂性和相互干扰，如果仅凭预试验的结果来判断 某种成分是否存在是不全面的，同时有些成分如果在植物中含量甚低，运用一般预试验的 方法也很难发现。 2 1 实验仪器与试剂 辣蓼全草采自江西宁都，经南京林业大学植物学教研组周坚教授鉴定 z f i i 型四用紫外分析仪上海顾村电光仪器厂 聚酰胺( 3 0 一6 0 目)上海化学试剂厂 粉碎机上海医械专机厂 铬皮粉南京林产化学工业研究所 以下试剂、药品除另有注明外，均为分析纯 盐酸石油醚无水乙醇氢氧化钠乙醚醋酸镁 醋酸茚三酮硫酸铜a 一萘酚硝酸银硼氢化钠 碘三氯化铁铁氰化钾氯化钠醋酸铅乙酸乙酯 明胶香兰素硅钨酸三氯化铝镁粉无水硫酸钠 氨水浓硫酸溴酚蓝硼酸锌粉盐酸羟胺 醋酐磷钼酸碘化钾苦味酸3 ，5 二硝基苯甲酸 二甲基甲酰胺 高岭土( 化学纯) 2 2 实验过程 2 2 1 系统组分预试验 2 2 1 1 样品提取液的制备 l 、水提取液 辣蓼全草经粉碎后，取粗粉5 9 ，加5 0 r i l l 蒸馏水，浸泡过夜，滤取部分滤液，作为冷 水提取液，以供检查氨基酸、多肽和蛋白质备用。将剩余部分在5 0 6 0 的水浴上加热约 一小时后过滤，滤液供检查糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质等项预试验。 2 、乙醇提取液 取粗粉1 0 9 ，加1 0 0 r n l9 5 乙醇，于水浴上加热回流一小时。具体流程见图2 1 样品粗粉 厂上激 残渣 乙醇提取液 石油醚层 ( 含叶绿素、油脂) 乙醇提取物 l 回收乙醇 乙醇浸膏 的乙醇溶液 取 酸水不容部分酸水溶解部分 碱液层 碱) ( 检查黄酮、蒽醌、酚类、 甙类、有机酸、香豆素、萜 类、内酯、甾体、强心甙) 乙酸乙酯层水洗至中性 上 乙酸乙酯提取液 ( 检查香豆素、萜类、内酯、强心甙) 图2 1乙醇提取液的制备流程 c h a l1 p r 印a r a t i o n o fe 吐l a i l o le x 廿a c d o n 2 。2 1 。2 各种成分豹预试验1 5 2 j l 、氨蘩羧、蛋白震( 冷承撵取液) 茚三酮实验：取提取液1 r n l ，加入0 2 茚三酮乙醇溶液2 3 滴，在沸水中加热5 m i n ， 溶液呈紫蓝色。 双续稼反应：敢l 琉酸铜漆滚与4 ；耋 甄纯镳溶滚等爨漫会。本试剡主要是c u ”与 蛋自质藏获分子孛敬键络台显色。取lm l 冷承澄液，加入上述试帮，摇动詹为紫红色e 沉淀反应：取供提取液l 札，加热，溶液变混浊，并有沉淀产生。 2 、糖及管类( 热水提取液) 整辕蘧裁：取热瘩浸滚l 癌，麓人薪瑟裁戆蹩拣凌裁4 瀵，在沸承淤上鸯羹熬数； 镶， 产生砖红色沉淀( 氧化亚铜) 。证明含还原糖。另取1 0 1 1 1 l 水挺取液加2 0 戚斐林试剂，谯 沸水浴上加热数分钟，滤去所产嫩的沉淀，取出滤液少许，滴加斐林试剂，确证已元沉淀 反应，然后在滤波中姗2 融盐酸，煮沸2 = 。l i n ，鑫g 氢氧化钠漆液使成碱性，再如斐林试刹 沸隶泠 二秀嚣燕，翔又产生沉淀覆淀，爨诞筏套蛰类或多糖。 氨性硝酸银：取1 r n l 水提取液，加入1 1 1 1 l 银氨溶液，混匀后，4 0 微热数分钟，管懋 出现锨镜反应。 a 堞酚试验：敷水提液l 吐，鸯8 入5 的n 祭酚的乙醇溶液扣3 滴，撼匀，沿试臀髓 缓缓麓入少量浓硫酸，在浓硫酸接触西产生綮缎色繇。 3 、有机酸( 水提取液、乙醇提取液) p h 试纸法：取一广泛p h 试纸，用玻棒将掇驭液滴于p h 试纸上，供试液p h 值在5 5 左右。 漠酾蓝试验：将挺取液瀛予滤纸上，喷洒o 1 溪酚蓝的7 0 乙醇溶液，再向滤纸上喷 洒氨水，然后置于盐暇蒸气中，滤纸由蓝变黄，在黄色背景上有蓝色斑点出现。 4 、酚类和鞣质( 热水提取液、乙醇提取液) 三案e 稼铁试验：取熬零提取液l 程正，魏入l 三氯纯铰z 薛溶液，滚滚笙墨绿色。 三絮c 化铁一铁氰化钾试验：取己醇提取液1 m l ，滴加三氯化铁铁氰化钾试剂，溶液立即 变为监色，并有沉淀产生。另滴乙醇提取液于一滤纸片上，喷洒三氯化铁嗽氰化钾试剂， 斑点呈瑰蓝色。 氯纯镝一蘩获试验：取l 蕊热承提致滚，蠢l 入l 一2 滚鬟纯镳一溺获试裁，产生自色滚滚e 番兰索一硫酸试验：滴乙醇提取液于滤纸片上，喷洒香兰索塌【酸试剂，斑点变为红色。 5 、皂静( 热水提取液) 溆淀试验：提取液l 癌。手试繁孛，猿爨掇瓣2 越n ，产生：瞳泡沫，熬入乙醇爱，溆 沫消失。 乙黻酐浓硫酸试验：取提取1 液1 r n l 于蒸投皿中，水浴蒸干，残留物用冰乙酸溶解， 再加入乙酸酐一浓硫酸( 1 9 ：1 ) 数滴，溶液无明擞现象。 屡瑷法；在一层援磐戆瘸彩滤纸冀主喽涯5 罐铝酸乙醇溶泼，l 鞠烘籀审妻羹蒸5 戚n ， 滤纸上未出现蓝紫色斑点。 6 、熊物碱( 酸承鳃滚) 磷镅酸试验：取提取液l f r l l ，加入磷销酸溶液，溶液无沉淀出璃。 1 2 试验：驭提取液1 m l ，加入1 2 一斛试剂数滴，凭沉淀产生。 硅钨酸试骏；取提取液l m l ，滴加几滴硅钨酸溶液，无沉淀产生 7 、赞馥嚣( 乙黪提取滚) 三氯化铝试验：将提取液滴于滤纸上，喷洒l 三氯化铝乙醇溶液，在滤纸上艘出黄 色斑点，在紫外灯( 波长为3 6 5 n m ) 下观察，有显著的黄绿色荧光。 氨熏试验：将提取渡滴予滤纸上，置予氯气中熏半分钟，有黄色斑点，置于紫外灯下 溪黎骞黄绿色荧澎。 盐酸一镁粉试验：取提取液l r l l l ，加入邋量镁粉，再由n 入浓盐酸2 3 滴，予永浴中加 热，2 t n i n 内溶液变为浅紫红包。 盐酸辞粉斌验：取提取波l m l ，如入遥璧锌粉，再由h 入浓盐酸2 3 演，于水浴中加 热，溶液变舞繁红色。 中性乙酸铅试验：取提取液1 m l ，加入1 2 滴中性氛酸铅试剂，产生浅黄色沉淀。 碱式乙酸铅试验：取提取液l 札，加入1 2 滴碱式己酸铅试剂，产生浅黄色沉淀。 己酸镁试验：将提取液漓鼍：滤纸上，唆己酸镁试剂，鬟予紫外灯下观察，有藏缭色炭 巍。 8 、慧醌类( 乙醇提取液) 氢氧化钾试验：将乙醇提取液点于滤纸片上，喷洒5 氢氧化钾水溶液，无变化。 藏往试验：敬提取滚l 嬲，翔人l 氢襞纯镳l 癌，不显荭色。 硼酸试验；将乙醇提取液点于滤纸片上，喷洒l 硼酸水溶液，戈现象。 钠硼氢一二甲基甲酰胺试黢：将乙醇提取液点于滤纸片上，喷洒2 0 钠硼氢一二甲基甲 酰胺溶液，于紫