（生理学专业论文）nesfatin1对大鼠脑干孤束核葡萄糖敏感神经元电活动的影响.pdf

丫l l j l l l l i i f f l 7 f 1 1 3 l l l i l l 3 l ；4 l l l 9 4 1 9 l t f l l 元给予葡萄糖( 5 m m o l l ) 灌流后放电频率下降并伴有膜电位绝对值增大( g - i n h ) ， 其余1 2 个给予葡萄糖( 5 m m o l l ) 灌流后无反应。在2 0 个g - e x c 神经元，其中1 8 个灌流n e s f a t i n - i ( 1 0 n m m o l l ) 使其放电频率增加伴膜电位绝对值减小，2 个 无反应。在1 1 个g i n h 神经元，其中1 0 个灌流n e s f a t i n - i 使其放电频率减少 并伴有膜电位绝对值增大1 个无反应。 结论：n e s f a t i n - l 能够调制孤束核葡萄糖敏感神经元的兴奋性，这可能是 n e s f a t i n 一1 作用于孤束核抑制摄食的机制之一。 硕士研究生：宋文科( 生理学) 指导教师：蒋正尧教授 关键词：n e s f a t i n - 1 ：孤束核( n t s ) ；葡萄糖敏感神经元；膜片钳 n e s f a t i n - 1i n f l u e n c e st h ee l e c t r i ca c t i v i t yo fg l u c o s es e n s i t i v e n e u r o n e si nt h en u c l e u so fs o l i t a r yt r a c t a b s t r a c t b a c k g r o u n d ：a na n o r e x i g e n i cp e p t i d e ，n e s f a t i n - 1w a sf o u n db ym o r i m ( j a p a n ) i nr a t p v n ，s o no ft h eh y p o t h a l a m u s ，a n dn t so ft h eb r a i ns t e m ，t h es t o m a c ha n dp a n c r e a , a n di t se x p r e s s i o ni nt h ep a r a v e n t r i c u l a rn u c l e u so ft h eh y p o t h a l a m u sw a sr e d u c e db y s t a r v a t i o n i n t r a c e r e b r o v e n t r i c u l a ra d m i n i s t r a t i o nd o s e - d e p e n d e n t l yi n h i b i t e df o o d i n t a k ef o r6 hi nm a l ew i s t a ra n dl e p t i nr e s i s t a n t ，z u c k e rf a t t yr a t s i n t r a p e r i t o n e a l a d m i n i s t r a t i o no fn e s f a t i n - 1a n di t sm i d - s e g m e n td o s e d e p e n d e n t l yi n h i b i t e df o o d i n t a k ef o r3h m i d - s e g m e n to fn e s f a t i n - 1d e c r e a s e df o o di n t a k eu n d e r l e p t i n r e s i s t a n t a n i m a lm o d e l so f o b e s i t y i n t r a p e d t o n e a la d m i n i s t r a t i o no ft h em i d - s e g m e n to f n e s f a t i n - 1i n c r e a s e d p r o o p i o m e l a n o c o r t i na n dc o c a i n - a n d a m p h e t a m i n e - r e l a t e d p e p t i d em r n ae x p r e s s i o ni nt h en u c l e u so ft h es o l i t a r yt r a c t ，b u tn o ti na r c u a t e n u c l e u so ft h eh y p o t h a l a m u s n o ww ek n o wt h a tt h eb r a i nh y p o t h a l a m u sc o n t a i n s c e r t a i ns e c r e t e dm o l e c u l e st h a ta r ei m p o r t a n ti nr e g u l a t i n gf e e d i n gb e h a v i o u r h e r ew e s h o wt h a tn e s f a t i n ，c o r r e s p o n d i n gt o n e f a n u c l e o b i n d i n 2 ( n u c b 2 ) ，as e c r e t e d p r o t e i no fu n k n o w nf u n c t i o n ，i se x p r e s s e di nt h ea p p e t i t ec o n t r o lh y p o t h a l a m i cn u c l e i i n r a t s i n t r a c e r e b r o v e n t r i c u l a r ( i c v ) i n j e c t i o no fn u c b 2r e d u c e sf e e d i n g r a t c e r e b r o s p i n a lf l u i dc o n t a i n sn e s f a t i n - 1 ，a l la m i n o - t e r m i n a lf r a g m e n td e r i v e df r o m n u c b 2 ，a n di t se x p r e s s i o ni sd e c r e a s e di nt h eh y p o t h a l a m i cp a r a v e n t r i c u l a rn u c l e u s u n d e rs t a r v e dc o n d i t i o n s i c v i n j e c t i o no fn e s f a t i n - 1d e c r e a s e sf o o di n t a k ei na d o s e d e p e n d e n tm a n n e r , w h e r e a si n j e c t i o no fa na n t i b o d yn e u t r a l i z i n gn e s f a t i n - 1 s t i m u l a t e sa p p e t i t e i nc o n t r a s t ，i c v i n j e c t i o no fo t h e rp o s s i b l ef r a g m e n t sp r o c e s s e d f r o mn u c b 2d o e sn o tp r o m o t es a t i e t y , a n dc o n v e r s i o no fn u c b 2t on e s f a t i n 一1i s n e c e s s a r yt oi n d u c ef e e d i n gs u p p r e s s i o n n e s f a t i n 1 - i n d u c e da n o r e x i ao c c u r si n z u c k e rr a t sw i t hal e p t i nr e c e p t o rm u t a t i o n ，a n da l la n t i n e s f a t i n - 1a n t i b o d yd o e sn o t b l o c k l e p t i n i n d u c e d a n o r e x i a i n c o n t r a s t , c e n t r a l i n j e c t i o n o f a - m e l a n o c y t e s t i m u l a t i n g h o r m o n ee l e v a t e sn u c b 2g e n e e x p r e s s i o n i nt h e p a r a v e n t r i c u l a rn u c l e u s ，a n ds a t i e t yb yn e s f a t i n - 1i sa b o l i s h e db ya na n t a g o n i s to ft h e m e l a n o c o r t i n - 3 4r e c e p t o r w ei d e n t i f yn e s f a t i n - 1a sas a t i e t ym o l e c u l et h a ti s a s s o c i a t e dw i t hm e l a n o c o r t i ns i g n a l l i n gi nt h eh y p o t h a l a m u s i ti sw e l le s t a b l i s h e dt h a tt h er e g u l a t i o no fg l u c o s ei ss oi m p o r t a n tt h a tt h eb r a i nh a s g l u c o s e - s e n s i n gn e u r o n sl o c a t e di nk e ya r e a ss u c ha st h eh y p o t h a l a m u s ，n t s ，a n d a m y g d a l aw h i c hm o n i t o rg l u c o s es t a t u si nt h eb o d ya n di n i t i a t eg l u c o p r i v i cf e e d i n g , a p p r o p r i a t es y m p a t h o a d r e n a la n dn e u r o h u m o r a lr e s p o n s e st om a i n t a i nh o m e o s t a s i s o t h e rw o r k sh a v es h o w nt h a th i n d b r a i nc a t e c h o l a m i n e r g i cn e u r o n sa r cg l u c o s e r e s p o n s i v e g l u c o s e e x c i t e dn e u r o n s ( g l u c o s e e x c ) i n c r e a s ea n dg l u c o s e i n h i b i t e d n e u r o n s ( g l u c o s e i n h ) d e c r e a s e t h e i r f h - i n g r a t ew h e ne x t r a c e l l u l a r g l u c o s e c o n c e n t r a t i o nr i s e s o b j e c t i v e ：t oo b s e r v et h ee f f e c t so fn e s f a t i n 1o nt h eg l u c o s es e n s i t i v en e u r o n si nt h e n u c l e u so fs o l i t a r yt r a c t ( t o t s ) ，e x p l o r et h em e c h a n i s mo fn t sn e u r o n si n v o l v e di nt h e s u p p r e s s i n go f f o o di n t a k e m e t h o d s ：w h o l e - c e l lp a t c h - c l a m pt e c h n i q u ew a su s e dt or e c o r dt h ed i s c h a r g e so f4 3 n e u r o n si nt h en t ss l i c eb e f o r ea n da f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o no fg l u c o s ea n dn e s f a t i n - 1 r e s u l t s ：1 n h e4 3n t sn e u r o n sw e r et e s t e dw i t hg l u c o s e ，o fw h i c h2 0w e r ea c t i v a t e d a n di d e n t i f i e da sg l u c o s e e x c i t e d ( g - e x c ) n e u r o n s t h ef i r i n gr a t eo fg - e x c s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e da f t e rg l u c o s ea d m i n i s t r a t i o n ( 5 m m ) o fw h i c h1 1w e r e d e p r e s s e db yg l u c o s ea n di d e n t i f i e da sg l u c o s e i n h i b i t e d ( g - i n h ) n e u r o n s ；t h ef i r i n g r a t eo fg i n hs i g n i f i c a n t l yr e d u c e da f t e rg l u c o s ea d m i n i s t r a t i o n o fw h i c h1 2f a i l e d t or e s p o n dt og l u c o s e 1 0 r a i na f t e rr e t u r n i n gt on o r m a la c s f ：, o f2 0g - e x c n e u r o n s e x a m i n e df o rr e s p o n s et on e s f a t i n 一1 ( 1 0 h m ) ，1 8w e r ea c t i v a t e d ，a n d2f a i l e dt or e s p o n d t on e s f a t i n 1 1 0o u to f1 1g - i n hn e u r o n sw e r es u p p r e s s e db yn e s f a t i n - 1 ，a n d1f a i l e d t or e s p o n dt on e s f a t i n - 1 c o n c l u s i o n ：o u rd a t ac l e a r l yd e m o n s t r a t e dt h a tt h i sn e w l y - d i s c o v e r e dp e p t i d em a ye x e r ta tl e a s ta p a r to fi t sp h y s i o l o g i c a la c t i o n so nt h ec o n t r o lo ff o o di n t a k ea s 置d i r e c tr e s u l to fi t sr o l ei n c o n t r o l l i n gt h ee x c i t a b i l i t yo fn e u r o n si nt h en t s k e yw o r d s ：n e s f a t i n - l ；n u c l e u st r a c t u ss o l i t a r i u s ；g l u c o s e - s e n s i t i v en e u r o n s ； p a t c h - c l a m p 目录 弓l 言1 第一章实验材料”3 1 1 动物准备3 1 2 药品及配制3 1 3 实验仪器”3 第二章实验方法及观察项目一5 2 1 电生理学方法5 2 2 观察项目6 2 3 显微镜检查- 6 2 4 统计学处理6 第三章实验结果”7 3 1 灌流葡萄糖前后对n t s 神经元电活动的影响7 3 1 1 葡萄糖敏感神经元的鉴定7 3 1 2 葡萄糖对n t s 葡萄糖敏感神经元电活动的影响7 3 2 灌流n e s f a t i n - 1 前后对n t s 葡萄糖敏感神经元电活动的影响1 3 3 2 1n e s f a t i n l 对葡萄糖兴奋型神经元电活动的影响1 3 3 2 2n e s f a t i n l 对葡萄糖抑制型神经元电活动的影响1 5 第四章讨论2 0 结论2 2 参考文献2 3 综述2 7 综述的参考文献4 0 中英文缩略词表5 0 攻读学位期间的研究成果5 2 致谢”：5 3 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明5 4 引言 n e s f a tin - 1 对大鼠脑干孤束核葡萄糖敏感神经元电活动的影响 引言 n e s f a t i n - i 是日本群马大学森昌朋教授等( m o r im ，2 0 0 6 ) 新发现的摄食 调节肽，其前体是n e f a 基因编码的4 2 0 个氨基酸组成的多肽( n u c l e o b i n d i n i i ，简称n u c b 2 ) ，n u c b 2 上有与d n a 和c a 2 + 结合的位点。在转换酶的作用下，n u c b 2 裂解为n 一末端的8 2 个氨基酸片段称之为n e s f a t i n - i ( 除信号肽以外的第l 8 2 位氨基酸) ，c 一末端的两个片段分别为n e s f a t i n - 2 ( 8 5 1 6 3 ) 、n e s f a t i n 一3 ( 1 6 6 3 9 6 ) 。比较人和大鼠的n e s f a t i n - i ，只有1 1 个氨基酸不相同( p h o e n i x p h a r m a - c e u t i c a l si n 2 0 0 6 ) 。n e s f a t i n - i 能够以非饱和的方式通过血脑屏障， 大鼠脑脊液中含有n e s f a t i n 一1 。森昌朋等2 0 0 6 年在n a t u r e 的首篇报导指出， i c v 给予n e s f a t i n - l 抑制摄食呈剂量依赖性，而n e s f a t i n - 2 和n e s f a t i n - 3 无此作用n 2 1 。n e s f a t i n - i 作为一种饱感因子，由室旁核等神经元和胃黏膜内分 泌细胞所分泌n - 羽，大鼠脑室内注射n e s f a t i n - i 能抑制摄食，而这个效应可被特 异性n e s f a t i n l 抗体所阻断。在l e p t i n 受体基因突变z u c k e r f a t t y 大鼠脑室 内注射n e s f a t i n - i 仍旧能够诱发厌食，说明n e s f a t i n - i 抑制摄食不依赖瘦素信 号系统( 1 e p t i n i n d e p e n d e n t ) ，通过阿片一促黑色素细胞皮质素原( p o m c ) 途径 发挥调抑制摄食的作用。最近，我们测定了i 、i i 型糖尿病患者空腹血浆 n e s f a t i n - i 水平，观察到i 型糖尿病患者空腹血浆n e s f a t i n 一1 水平略高于正常 人，但无统计学差异；i i 型糖尿病患者空腹血浆n e s f a t i n l 水平明显低于正常 人和i 型糖尿病患者口1 。 已知葡萄糖的水平对能量平衡的调控有很重要的作用，脑内许多关键区域存 在葡萄糖敏感神经元，如下丘脑、n t s 、杏仁核，这些区域监测体内葡萄糖的水 平，并启动因葡萄糖降低导致的摄食增加以及适当地调控交感肾上腺系统和神经 元介质反应性，维持能量平衡h j 。脑干孤束核( n u c l e u st r a c t u ss o l i t a r i u s ，n t s ) 含有葡萄糖敏感神经元h 1 ，包括葡萄糖兴奋型神经元( g e x c ，葡萄糖刺激引起 自发放电频率加快的神经元) 和葡萄糖抑制型神经元( g i n h ，葡萄糖刺激引起 自发放电减少的神经元) 。其他一些研究也表明脑干儿茶酚胺能神经元具有葡萄 糖反应性哺1 。当细胞外葡萄糖浓度升高时，葡萄糖兴奋型神经元( g l u c o s e e x c ) 的放电频率增加，而葡萄糖抑制型神经元( g l u c o s e - i n h ) 的放电频率降低h 5 1 。 许多研究证明，孤束核葡萄糖敏感神经元参与摄食的调控。我们以前的研究观察 了饥饿激素g h r e l i n 对孤束核葡萄糖敏感神经元放电的调制作用h 1 。最近， m a e j i m a 等隅1 报导第三脑室注射n e s f a t i n - i 诱发c - f o s 的表达主要位于室旁核和 孤束核( n t s ) 。这种选择性的c - f o s 表达，提示除室旁核之外，n t s 是n e s f a t i n - 1 青岛大学硕士学位论文 抑制摄食的重要靶点之一。本实验采用全细胞膜片钳技术，通过观察新发现的厌 食肽n e s f a t i n - i 对n t s 葡萄糖敏感神经元的放电活动的影响，探讨n e s f a t i n 一1 在 脑干n t s 水平抑制摄食的可能机制。 2 第一章实验材料 1 1 动物准备 第一章实验材料 出生1 4 天的健康s d 大鼠，体- 莺3 0 - 4 0 9 ，雌雄各半，由青岛市药检所提供。 1 2 药品及配制 ( 1 ) 细胞外液( 即人工脑脊液，a r t i f i c i a le e r e b r o s p i n a lf l u i d ，a c s f ) ：1 2 4m m o l l n a c i ，3m m o l lk c l ，1 3n a h 2 p 0 4 ，2 6m m o l ln a h c 0 3 ，5m m o l lh e p e s ，2 m m o l lc a c l 2 ，1m m o l lm g s 0 4 ，1 0m m o u lg l u c o s e ，用l m m o l l 的n a o h 调节 p h 值至7 3 5 7 4 5 。 ( 2 ) 电极内液：1 3 0m m o l lk - g l u c o n a t e ，1 0m m o l lk c i ，1m m o l lm g c l 2 ，1 m m o l lc a c l 2 ，1 0m m o l lh e p e s ，1m m o l le g t a ，4m m o i ln a z a t p ，0 5 m m o l lg t p ，用l m m o l l 的n a o h 调节p h 值至7 3 5 _ _ 7 4 5 。4 c 冰箱保存 备用。 ( 3 ) 葡萄糖：s i g m a 公司产品，药品名d 一( + ) 一g l u c o s e 。 ( 4 ) n a 2 a t p ：s i g m a 公司产品。 ( 5 ) g t p ：s i g m a 公司产品。 ( 6 ) h e p e s ：s i g m a 公司产品。 ( 7 ) e g t a ：s i g m a 公司产品。 ( 8 ) 氯化钠( n a c i ) 、氯化钾( k c l ) 、磷酸二氢钠( k h 2 p 0 4 ) 、氯化钙( c a c l 2 ) 、 硫酸镁( m g s 0 4 ) 、碳酸氢钠( n a h c 0 3 ) 均系a m r e s c o 公司产品。 1 3 实验仪器 ( 1 ) 硬质玻璃毛坯( s u i t e ri n s t r u m e n tc o ) ，玻璃微电极：南京六合泉水 教学实验器材厂，外径1 7m m ，长度1 0m i l l ，有芯。 ( 2 ) 振动切片机( w o r l dp r e c i s i o ni n s t r u m e n t ) ( 3 ) 恒流泵( h l - 2 ) ( 4 ) 玻璃微电极拉制仪( s u t t e ri n s t r u m e n tc o p 一9 7 ，u s a ) ( 5 ) 显微镜( n i k o n ，j a p a n ) 3 青岛大学硕士学位论文 ( 6 ) o l y m p u s 正置显微镜( 日本，o l y m p u s 公司产品) ( 7 ) m e z 8 2 0 1 型放大器( n i h o nk o h d e n ，日本) ( 8 ) 抛光仪( n a r i s h i g em f 8 3 0 日本) ( 9 ) 分析实验用纯水机( 青岛紫泉仪器有限公司) ( 1 0 ) 电热恒温水槽( d k - - b a d 型，上海一恒科学仪器有限公司产品) ( 1 1 ) 电子天平( 德国，s a r t o r i u s 产品) 4 第二章实验方法及观察项目 2 1 电生理学方法 第二章实验方法及观察项目 2 1 1 麻醉与脑片制备： 乙醚麻醉后，将生后1 4 天的大鼠迅速断头，剪开头皮，去除颅骨，于含9 5 0 2 和5 c 0 2 冰冷的a c s f 中取下脑干组织块，放于浸有a c s f 的滤纸上将脑干修 块，然后同琼脂块一起用5 0 2 胶水粘在切片槽的固定位置。槽中含有冰冷的a c s f ( 0 左右) ，并不断通入含9 5 0 2 和5 c 0 2 混合气体。用振动切片机( w o r l d p r e c i s i o ni n s t r u m e n t ) 切出含n t s 在内的2 5 0 l f m 的冠状切片，切好的脑片置于含 9 5 0 2 和5 n 殇c 0 2 混合气体的a c s f ( 3 3 ) 中孵育1 2 h 。 2 1 2 电极制备： 记录电极采用外径为1 5 m m 的带芯硬质硼硅玻璃毛坯，经抛光后由玻璃微 电极拉制仪( s u a e ri n s t r u m e n tc o p 9 7 u s a ) ，分四步拉制成尖端直径约为 1 5 砣靴m ，充灌电极内液后的入水阻抗为3 - 5 m o ( 见附图l ，附图2 ) 。记录电 极内注入细胞内液( 1 3 0m m o l l k - g l u c o n a t e ，1 0m m o l l k c i ，1m m o l l m g c l 2 ， 1m m o l lc a c l 2 ，1 0m m o l lh e p e s ，1m m o l le g t a ，4m m o l ln a 加，0 5 m m o l l g t p ，见附图3 ) 。 2 1 3 脑片固定与灌流： 将脑片移至记录用灌流槽内，采用盖网固定法，即用铂金丝制成的u 形框架， 然后将稀疏的尼龙丝附着其上，制成盖网轻覆于脑片上。使用恒流泵( h l ，2 ) 持续向脑片浴槽灌注含9 5 0 2 和5 c 0 2 饱和气体的a c s f ，流速为2 - 3 m l m i n ， 脑片浸没于液面下1 - 2 m m 。给予药物时适当调节灌流速度，室温保持在 2 4 - - 2 6 。c1 9 - 1 3 l 。 2 1 4 全细胞膜片钳记录 在电流钳状态下记录n t s 区神经元的电位水平和放电频率n 毛1 5 1 ，记录电极采用 外径为1 5 r a m 的带芯硬质硼硅玻璃毛坯，经抛光后由玻璃微电极拉制仪( s u t t e r i n s t r u m e n tc o p 9 7 ，u s a ) ，分四步拉制成尖端直径约为1 5 2 耻m ，充灌电极内 液后的入水阻抗为3 5 m o 。实验在立式正置显微镜( n i k o n ，j a p a n ) 下进行，用 5 物镜观察进行n t s 定位，4 0 x 物镜观察细胞状态，在转换器屏幕下进行可视封 接。在显微镜观察下，将充灌电极内液的玻璃微电极安置在电极固定器上，用微 电机操纵器推进电极，电极入水前通过一个1 0 m l 注射器，从后部给予微电极施 加正压l m l ，以防止电极尖端入水后堵塞。当电极尖端轻轻接触细胞表面形成一 5 青岛大学硕士学位论文 个小凹后释放正压，并轻施负压吸引细胞膜，当电极尖端和细胞膜问形成大于 1 g o 左右高阻抗封接后，即认为封接成功，阻抗小于1 g o 时视为封接失败，重 新选择细胞再试。封接成功后采用口吸或电击( z a p ) 破膜，以形成常规全细胞 模式膜片钳f l l l 。 2 2 观察项目 2 2 1 葡萄糖敏感神经元的鉴别标准和方法： 当记录到b i t s 神经元自发放电并待稳定后开始实验。先记录一段自发放电( 通 常为4 - 5 m i n ) 作为对照，然后灌流含葡萄糖( 5 m m o l 1 ) 的a c s f5 m i n ，接着用 正常a c s f 冲洗。给予葡萄糖前后放电频率改变超过2 0 的神经元鉴定为葡萄糖 敏感神经元【7 1 。将给予葡萄糖前后放电频率变化超过2 0 的神经元列入统计。 2 2 2n e s f a t i n l 对n t s 区葡萄糖敏感神经元放电频率的影响： 鉴定出葡萄糖敏感神经元后，用a c s f 冲洗待神经元放电恢复并稳定约5 分 钟，再次灌流l o n m 的n e s f a t i n 一1 ，观察时间卜l o 分钟，观察神经元在灌流 n e s f a t i n - i 前后放电频率的变化，观察其对神经元放电频率的影响。同样，对 灌流前后放电频率改变超过2 0 的神经元列入统计，并做统计学处理。 2 3 显微镜检查 每次实验，将电极封接神经元位置进行观察并拍照，按照p a x i o n s w a t s o n 图 谱进行核对，观察电极记录位置，位置不准确的资料不列入统计。 2 4 统计学处理 实验中所有电刺激均从胞体内给予，模拟数字转换器采样频率1 0 k h z ，低 通滤波频率3 k h z , 数据采集、记录采用h e k a 实验室提供软件i g o rp r o5 0 1 进 行，分析软件采用s p s s 。统计学处理：所有数据用均数标准误( x s ；) 表示， 显著性检验采用t 检验。 6 第三章实验结果 第三章实验结果 3 1 灌流葡萄糖前后对n t s 神经元电活动的影响 3 1 1 葡萄糖敏感神经元的鉴定 全细胞膜片钳细胞内记录孤束核( n r s ) 区具有自发性放电的神经元的活动。 记录到的这些自发放电神经元中有4 3 个给予灌流葡萄糖加以鉴定。观察到灌流葡 萄糖后这些神经元有的兴奋有的抑制，还有一些没有明显改变。其中有2 0 个神经 元给予葡萄糖灌流后放电频率升高鉴定为葡萄糖兴奋型神经元( g l u c o s e - e x c ) ( 图 3 1 ) ；有1 1 个神经元给予葡萄糖灌流后放电频率降低，鉴定为葡萄糖抑制型神经 元( g u c o s e i n m ( 图3 2 ) ；有1 2 个神经元给予葡萄糖灌流后没有明显反应( 表 3 1 ) 。 3 1 2 葡萄糖对n t s 葡萄糖敏感神经元电活动的影响 灌流葡萄糖后，2 0 个葡萄糖兴奋型神经元的膜电位水平由原来的 6 1 3 3 _ + 1 4 1 m v 升高到5 2 3 2 _ + 1 7 9 m v ，灌流葡萄糖后其膜电位水平与灌流前比 较，p 0 0 1 ，差别有统计学意义( 图3 3 ，表3 2 ) ，其放电频率由原来的0 4 6 0 1 2 h z 升高到1 2 2 _ + 0 2 4 h z ，灌流葡萄糖后其放电频率与注射前比较，p 0 0 5 ，差别有统 计学意义( 表3 3 ) 。 灌流葡萄糖后，1 1 个葡萄糖抑制型神经元的膜电位水平由原来的 5 6 2 7 + 1 7 8 m v 下降到6 2 4 4 _ + 1 4 8 r a m ，灌流葡萄糖后其膜电位水平与灌流前比 较，p 0 0 1 ，差别有统计学意义( 图3 4 ，表3 2 ) ，其放电频率由原来的o 7 3 _ + 0 2 2 h z 下降n 0 2 6 _ + 0 0 8 h z ，灌流葡萄糖后其放电频率与注射前比较，p 0 0 1 ，差别有统 计学意义( 表3 3 ) 。 表3 1 葡萄糖对n t s 神经元放电频率和膜电位的影响 t a b 3 1 t h ee f f e c to fg l u c o s eo nt h ef i r i n gr a t ea n dm e m b r a n ep o t e n t i a lo fg s - e x c l l e n r o n sa n dg s i n hn e u r o n si nn t s 7 青岛大学硕+ 学位论文 表3 2 葡萄糖对葡萄糖敏感神经元膜电位的影响 t a b 3 2 t h ee f f e c to fg l u c o s eo nt h em e m b r a n ep o t e n t i a lo fg s - e x cn e u r o n sa n dg s - 矾h n e u r o n si nn t s g s e x c2 06 1 3 3 + 1 4 15 2 3 2 _ + 1 7 98 2 3 1 o 0 1 g s i n h1 15 6 2 7 _ + 1 7 86 2 4 4 _ + 1 4 87 2 5 0 0 0 1 宰p 0 0 1c o m p a r e dw i t hb e f o r ep e r f u s i n gg l u c o s e 表3 3 葡萄糖对葡萄糖敏感神经元放电频率的影响 t a b 3 3 t h ee f f e c to fg l u c o s eo ht h ef i r i n gr a t eo fg s - e x cn e u r o n sa n dg s - i n hn e u r o n si n g s e x c2 00 4 6 _ + 0 1 21 2 2 o 2 42 5 1 1 o 0 5 g s i n h1 10 7 3 0 2 2o 2 6 o 0 83 9 2 4 0 0 1 毒宰 p o 0 1 ，宰p 0 0 5c o m p a r e dw i t hb e f o r ep e r f u s i n gg l u c o s e 8 第二章实验结果 一一州 a c s f 灌流 一 一 一 一叫 一 一一 珊葡麓糖麓凌 l 一一一 _ p 一_ a c s f 冲洗 2 0 o m v i 图3 1 葡萄糖兴奋型神经元在给予葡萄糖灌流前后放电频率的变化 f i g u r e 3 1e l e c t r i c a la c t i v i t yo fg e x cn e u r o n si nt h e n t sb r a i ns l i c e sa td i f f e r e n t e x t r a c e l l u l a rs o l u t i o n t h ef i r er a t e so ft h eg e x cn e u r o n si n c r e a s e di naa c s fs o l u t i o n c o n t a i n i n g5 m mg l u c o s e ；w h i l et h ef i r ef r e q u e n c yr e t u r n e dt ot h eo r i g i n a ll e v e li na c s fs o l u t i o n a g a i n 9 文 a p a c s f 灌流 a c s f + 葡萄糖灌流 图3 2 葡萄糖抑制型神经元在给予葡萄糖灌流前后放电频率的变化。 r ， f il，厂f a c s f 冲洗 i 2 0 0 m v l l f i g u r e 3 2e l e 圮t n c a la c t i v i t yo fg - i n hn e u r o n si nt h e 硒b r a i ns l i c e sa td i f f e r e n te x t r a c e l l u l a r s o l u t i o n t h ef i r er a t e so ft h eg i n hn e u r o n sd e c r e a s e di naa c s fs o l u t i o nc o n t a i n i n g5 m m g l u c o s e ；w h i l et h ef i r ef r e q u e n c yr e t u r n e dt ot h eo r i g i n a ll e v e li na c s fs o l u t i o na g a i n 1 0 第二章实验结果 a c s fg l u c o s 七 上 ii p o o i 图3 3 葡萄糖兴奋型神经元在给予葡萄糖灌流后膜电位的变化 f i g u r e 3 3m e m b r a n ep o t e i n t i a lo fg - e x cn e u r o n si nt h e n t sb r a i ns l i c e sa td i f f e r e n t e x t r a c e l l u l a rs o l u t i o n t h ea b s o l u t ev a l u eo fm e m b r a n ep o t e i n t i a lo ft h eg - e x cn e u r o n sw a s s m a l l e ri naa c s fs o l u t i o nc o n t a i n i n g5 m m g l u c o s et h a nt h a ti nt h ea c s fs o l u t i o n 1 1 0 0 o 0 0 0 0 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 一 一 一 一