（果树学专业论文）水果中苯并咪唑类农药检测方法和残留现状研究.pdf

摘要 本论文选择苹果、桃、柑橘、葡萄、草莓、香蕉6 种水果为代表性水果，研究水果中常用苯 并咪唑类农药多菌灵、苯菌灵和噻菌灵残留的检测方法。运用建立的方法，对2 0 0 5 、2 0 0 6 及2 0 0 7 年从相应主产区果园和市场采集的共2 1 3 个苹果样品和4 7 个葡萄样品进行多菌灵和噻菌灵农药残 留检测。 一、检测方法研究结果如下： l 、建立了水果中多菌灵、苯菌灵、噻菌灵残留检测方法，即分散同相萃取高效液相色谱 法。通过对方法条件进行优化、改进，并在苹果等6 种有代表性的水果上进行方法验证，获得农 药浓度在0 0 1 m g k g - - - - 3 哗g 范围内呈良好的线性关系，线性相关系数在0 9 9 9 以上，平均回收 率8 8 1 0 4 7 ，方法的r s d 值在4 2 以下。方法的准确度、精密度和重复性都满足要求，并 且准确度、成本、耗时等方面优于国内外现行的4 个水果中多菌灵标准检测方法。同时编写了中 华人民共和国农业行业标准水果中多菌灵、苯菌灵( 以多菌灵计) 、噻菌灵残留量的测定的 草案。 2 、使用c 1 8 和p s a 吸附剂组合对具有代表性的6 种水果进行系统的研究，多菌灵回收率由文 献中的超出1 1 0 降为9 1 8 1 0 4 7 ，将噻菌灵的回收率由文献中的1 7 - - 4 4 提高到8 8 1 0 2 。 3 、发现并解决了多菌灵农药残留检测时出现的基体效应干扰的问题。 二、农药残留现状研究结果如下： 1 、苹果样品抽样合格率很高，安全性较强。2 0 0 5 年样品中多菌灵检出率6 3 5 ，噻菌灵检出 率1 6 4 。2 0 0 6 年样品中多菌灵检出率5 1 5 ，国内样品没有检出噻菌灵，我国样品中多菌灵检 出率高于噻菌灵，而进口样品情况相反。嘎拉中多菌灵平均残留量国内样品以0 1 6 2 m g k g ，进口 样品以0 1 5 3 m g k g 的平均浓度显著高于相应的其他品种样品，其中噻菌灵平均残留量也以 0 6 2 2 m g k g 的平均值高于其他品种。 2 、葡萄样品中多菌灵检出率6 8 1 ，但均不超标，安全性较强，3 1 9 的样品检出噻菌灵农 药残留，我国没有噻菌灵最犬残留限量标准，与日本、c a c 最大残留限量标准相比不超标，与欧 盟最大残留限量标准相比检出样品全部超标。 关键词：苯并昧唑类农药，检测方法，农药残留 a b s t r a c t a n a l y s i sm e t h o do fc o m l i l o nb e n z i m i d a z o l ef u n g i c i d e sw h i c hc o n t a i nc a r b e n d a z i m , b e n o m y la n d t h i a b e n d a z o l ew a ss t u d i e do ns a m p l e so fs i x t y p i c a lk i n d so ff r u i t s a p p l e ，p e a c h ，c i t r u s ，g r a p e ， s t r a w b e r r ya n db a n a n a w i t hn e we s t a b l i s h e dm e t h o d ，c a r b e n d a z i ma n dt h i a b e n d a z o l er e s i d u e sw e r e d e t e r m i n e di n2 13a p p l es a m p l e sa n d4 7g r a p es a m p l e sc o l l e c t e df r o mm a i np r o d u c t i o nr e g i o n sa n d m a r k e t si n2 0 0 5 ，2 0 0 6a n d2 0 0 7 m a i nr e s u l t so ft h ea n a l y s i sm e t h o ds t u d ya r ea sf o l l o w s ： 1 、d i s p e r s i v e s p ea n dh p l ca n a l y t i c a lm e t h o dw a ss u c c e s s f u l l yd e v e l o p e df o rt h eq u a l i t a t i v e a n dq u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o ft h eb e n z i m i d a z o l ef u n g i c i d er e s i d u e s - - c a r b e n d a z i m , b e n o m y la n d t h i a b e n d a z o l e t h ep a r a m e t e r so ft h em e t h o dw e r ef u r t h e ro p t i m i z e da n di d e n t i f i e dw i t ht h ea b o v e m e n t i o n e d6k i n d so ft y p i c a lf r u i t ，i ts h o w e dg o o dl i n e a rr e l a t i o nf o rt h ef u n g i c i d e sc o n c e n t r a t i o n s r a n g i n gf r o m0 0 1 m g k 9 4 - - 3 0m g k gw i t h c o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t s 0 9 9 9 ，t h er e c o v e r yr a t ew a s b e t w e e n8 8 10 4 7 ，a n dr e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n 0 0 0 1 45678ls678 i l u sh 胁： 图2 6 使用不同流动相的液相色谱图二极管阵列检测器 f i g u e2 6l i q u i dc h r o m a t o g r a m so fc a r b e n d a z i mu s i n gd i f f e r e n tm o b i l ep h a s e 卜d a d ( 2 ) 柱温的选择 升高柱温可以有效地改变峰形，2 5 开始升温，每隔5 测定1 次，基线稳定后检测。随着 柱温升高，柱压降低，农药色谱峰的保留时间减少，峰形得到了改善。在4 0 时拥有较好的灵敏 度和分离度，效果最好。 ( 3 ) 检测条件的优化 根据多菌灵和噻菌灵在流动相介质中的紫外分光光度扫描图( 图2 7 ) ，以及不同光谱波长下 的二极管阵列检测器色谱图( 图2 8 ) 显示在紫外波长2 8 5 n m 下农药标样显示特征峰，且灵敏度 最高( 图2 1 0 ) 。荧光检测器的设置为激发波长：发射波长= 2 8 5 ：3 1 5 时灵敏度最高( 图2 9 ) 。 r a ：多菌灵 f _ j 一 | 、 图2 7 紫外分光光度扫描图 = 柚 a ：2 7 5 n m 二二 t h l 口押 讥a 贝一 t # t 坤 _ v 、_ _ ， 十 - 二扯- 二 l 。， _ 。n - ， 。心二_ j 一 t 图2 8 不同波长条件下液相色谱图二极管检测器 f i g u e2 8l i q u i dc h r o m a t o g r a r n so fc a r b e n d a z i ma n dt h i a b e n d a z o l ei nd i f f e r e n tw a v e l e n 舒h 一d a d 1 3 中隔农业科学院硕l ：学位论文第二章农药残留柃测方 ! j = 研究 图2 9 不同波长条件下噻菌灵液相色谱图荧光检测器 f i g u e2 9l i q u i dc h r o m a t o g r a m so ft h i a b e n d a z o l ei nd i f f e r e n tw a v e l e n g t h s - - - - - f l u o r e s c e n c ed e t e c t i o n 乏 e m i n u i e s 图2 1 0 多菌灵和噻菌灵的液相色谱图二极管阵列检测器 f l g u e2 1 0l i q u i dc h r o m a t o g r a mo fc a r b e n d a z i ma n dt h i a b e n d a z o l e - - - - - d a d 2 1 2 3 标准曲线的线性范围 ( 1 ) 标准曲线的线性范围、灵敏度 由表2 7 和图2 1 1 ，二极管阵列检测器检测的结果，2 种农药在0 0 5 m g k g 3 m g k g 范围内有 很好的线性关系( r 2 分别是0 9 9 9 7 和0 9 9 9 8 ) 。多菌灵和噻菌灵检出限( l o d 值) 分别为0 0 4 5 8 m g k g 和0 0 4 7 2 m g k g ，检出量( l o q 值) 分别为0 1 3 8 8 m g k g 和0 1 4 2 9 m g k g 。 荧光检测器检测的结果噻菌灵浓度在0 0 1 m g k g 3 m g k g 范围内争现良好的线性关系( r 2 为 0 9 9 9 8 ) ，检出限( l o d 值) 为0 0 0 0 2 5 m g k g ，检出量( l o q 值) 为0 0 0 0 7 6 m g k g ，比二极管阵 列检测器的检出限低2 , - 一3 个数鼍级，能够满足国际上0 0 5 m g k g 的最大残留限量要求。 表2 7 多面灵和嘿圃灵标准曲线的线性关系和灵敏度 墅垫! 曼兰：! 垦! 旦! 型堕垫垒坚! 坠! 竺￥堕垒虫呈翌垒丝塑垫璺坠! 堂! 旦垒丝旦! ! 分析物标准曲线方程。2 l o d l o q a n a l y t e c a l i b r a t i o ne q u a t i o n 一 ( m g k g ) ( m g k g ) c 主烹鬈m y = ( 5 1 8 3x o 0 6 4 1 ) 1 0 4 r 2 = o 9 9 9 7 o 0 4 5 8o 1 3 8 8 意艺l e y = ( 5 6 1 9 x o 0 2 2 9 ) 1 0 4 r 2 = o 9 9 9 8o 0 4 7 2o 1 4 2 9 t h 糕艺l e y = ( 4 8 2 6 3 x - 0 0 5 11 ) 1 0 7 r 2 = 9 8o 0 0 0 2 5o 0 0 0 7 6 注：a ，i - 极管阵列检测器：b ，荧光检测器：l o d 。检出限；l o q ，检h 量 n o t e ：8 ，d i o d ea r r a yd e t e c t i o n ；b 。f l u o r e s c e n c ed e t e c t i o n ；l o d ，l i m i to f d e t e c t i o n l o q ，l i m i to f q u a n t i f i c a t i o n 1 4 中同农、世科学院碾l 一学位沦：更第：审农药硪翻斡删方洼研究 拢 。 盘 嚣 - ： g 暑 -= 叫口 翅型 唇三 氍 倡 鹫 c # r b d a 五m - 吐r t l i i a b m d a m o l e 00 511 522 533 5 浓度c o l l t 恤t m 啦对 韪 拿1 4 0 0 0 0 0 0 瑟 1 2 0 0 0 0 0 0 i 售1 0 0 0 0 4 ) 0 0 嚣妻淼0 0 0 0 0 。0 ： 唇一 嚣4 0 0 0 0 0 0 0 薯2 0 0 0 0 0 0 0 b 012j4 浓度c o n t e m ( m z k 2 ) 图2 1 1 多菌灵和噻菌灵的标准曲线 a ：二极管阵列检测器；b ：荧光检测器( 噻菌灵标线) f i g u e2 11c a l i b r a t i o nc t l l v t 酷o f c a r b e n d a z i ma n dt h i a b e n d a z o l e a ：d i o d ea r r a yd e t e 贮t i o nb ：f l u o r e s c e n c ed e t e c t i o n ( t h i a b e n d a z o l e ) 2 1 2 4 高效液相色谱仪的重复性试验 取1 o m # g 的多菌灵、噻菌灵标准样品，每次进样i o p l ，重复5 次，测定峰面积，分别计 算保留时间和峰面积的r s d 值，重复性结果见表2 8 ，保留时间的r s d 值为0 1 5 ，峰面积r s d 值为1 5 2 ，重复性很好。 表2 8 重复性试验结果 ! 坐! ! 兰：! ! 垒宝璺型塑坐! 型塑坚! 塑巫! 星盥坐i 塑 序弓保留时间( r a i n )保留时间平均值峰面积( m a u m i n )峰面积平均值 丛! 巴垒旦曼璺塑堕塑! i 壁垒业兰! 幽垒塑! i 堡! 些皇堡垒垒! 塑竖篁堕些垒堡! 】 8 9 9 85 5 6 5 9 8 9 9 5 8 9 7 68 9 8 9 8 9 0 0 5 8 9 7 5 5 62 4 8 5 5 8 7 95 5 3 4 3 6 5 4 6 8 7 5 4 2 4 5 保留时问r s d 0 1 5 峰面积r s d 1 5 2 2 1 2 5 检测方法的准确度、精密度 ( 1 ) 多菌灵、噻菌灵嗣收率实验 以苹果、香蕉、桃、柑橘、葡萄、草莓6 种水果为试材，进行精密度和准确度试验。每个品种 每个添加浓度设计3 个平行，按上述前处理和液相色谱分析方法进行测定，添加回收率试验结果见 表2 9 。数据显示，试验获得的同收率范围在9 0 7 1 0 4 ，7 ，方法r s d 值范围在1 1 4 9 。表 2 1 0 是荧光检测器检测的噻菌灵同收率试验结果，添加最低浓度为0 0 1 m g k g 。回收率范围在8 8 9 7 ，r s d 值范围在3 2 4 1 。 ( 2 ) 苯菌灵农药同收率试验 采取苯菌灵处理后检测多菌灵的方法检测，在样品中添j d o 0 5 m g k g 、o 1 m g ，k g 、0 5 m g k g 苯 菌灵标准溶液，每个添加浓度设计3 个重复进行回收率试验。同收率结果如表2 1 1 显示，试验获得 1 5 o 0 0 0 o o o o 0 o 帅帅吣帅帅一鲫舳舯帅帅脚印柏均 中同衣q p 科学院碾 ：忙论文第i 幸农药残御榆测方 杰研究 的回收率范围在8 7 8 1 0 2 1 ，方法r s d 值范围在5 4 7 8 。 以上结果均符合n y 厂r7 8 8 2 0 0 4 农药残留试验准则要求。 表2 , 96 种水果的添加回收试验结果二极管阵列检测器 一一 ! 型望兰：竺墼! 坚! 坐型! 堕望! 兰翌幽型婴望型鲤! 璺鱼! i 型! 壁! ! 堕! 生二= 旦些 平均i 口 收率( r s d ) ， a v e r a g er e c o v e r y ( r s d ) ， 农药添型鎏度苹果葡萄香焦桃柑橘草莓 f u n g i c i d e 胁执趾i 黧s ，m 非g a p p l eg r a p e b a n a n a胁bc 慨 s t r a w b e r r y 注：n = 3 ：r s o = - 相对标准偏差 n o t e ：n - 3 tr s i b r e l 撕v es t a n d a r dd e , r 【a t i o n 表2 1 0 噻菌灵的添加回收试验结果费光检测器 ! 些! ! ! ：! 竺些! ! 坐望竺! ! ! ! 苎! 呈翌垡! 翌生墅兰旦! 旦! z ! 坐生竺! 翌型2 生= 兰! ! 竺! ! ! 塑生堕堕! 1 2 空 添加浓度i n 昌肚g f o r t i f i c a t i o nl e v e l s 。m g 瓜g 检 | i 浓度l f o u n d l 检出浓度2 f o u n d 2 枪出浓度3 f o u n d 3 平均回收率( r s d ) ， r e c o v e r y ( r s 阱， 注：n = 3 ：r s d = 相对标准偏差 e ；n = 3 rr s d = - r e i a l j ws t a n d a r dd e 啊a f j o n 表2 11 苯菌灵的添加回收试验结果= 极管阵列检测器 ! 业! ! 兰：! ! 些曼型! 生竺! 曼! 翌竺巴丑里! ! ：笪z ! 苎p 望望兰! ! 塑旦翌垫i 婪旦坐2 1 生巫t 二旦垒巳 f黜ortifi“c擎ationl e v e l s ，舢f o u 凇n d l l 籼f o u 嫩n d 2 2 籼f o u 触n d 33 韵r e c 啪o v e r 氧y ( r r s d s d ) ) , 注：n = 3 ：r s i 相对杯稚偏差 n o 据：n - - 3 , , r s d = r e l a 吐v es t 山m l 缸dd e “a 岵o i l 2 1 2 6 检测方法的重复性试验 对不同水果设计3 个浓度梯度，每个浓度1 2 次重复的同收率试验结果见表2 ，1 2 ，可以看出在 添加浓度0 0 5 o 5 范围内的标准偏差低于4 2 ，满足检测要求。 1 6 中固农、i k 科学院硕f j 学位论文第一j 亭农药残留榆测方法研究 表2 1 2 方法重复性试验结果 ! 璺垒! 曼兰：! 兰垦! ! ! 坚! 旦! 垫型z ! i ! 望兰! 塾鲤堡匹些生i ! i 型堡坠 添加水甲 m g k g 农药 f o r t i f i c a t i op e s t i c i d e s n l e v e l s 1 2 次重复测定 口l 收率( ) 12r e p e t i t i v er e c o v e r y ( ) f 1 。妻憨 。9 0 1 9 7 99 5 98 8 19 0 19 8 2 9 1 89 3 39 1 6 1 0 ，0 9 8 6 9 3 19 4 14 o4 2 o 0 5 墓9 6 7 8 帅9 4 59 1 29 7 8 9 6 5 8 9 9 9 8 69 0 79 纛删3 6 。c 淼i m 9 8 o9 9 29 9 89 4 59 7 9 1 0 0 l9 8 1 9 6 9 9 9 4 9 7 9 9 7 3 1 0 7 l 9 8 52 o2 1 “1 1 1 1 i 譬纂叠0 l c1 警9 8 2 9 6 5 1 罗+ 9 8 31 字9 9 5 9 5 99 8 2 9 9 89 8 1 9 5 59 8 5 1 8 1 8 。c 鬟怒i m 9 9 21 0 0 8 1 字1 ( ：0 1 字1 乎。1 字1 警1 字1 詈9 9 21 7 1 0 1 4 1 7 “。n i 鬈墓釜0 l e 9 9 81 0 0 2 1 字1 字。1 字1 7 1 警1 争1 0 3 。9 9 81 警9 9 1 1 0 0 81 3 1 3 2 2 农药残留方法比较研究 2 2 1 材料与方法 2 2 1 1 试材 苹果。按农药残留分析样本的采样方法( n y f r7 8 9 2 0 0 4 ) 抽取样品，处理，备用。随机 采自辽宁省兴城市农贸市场。 2 2 1 2 试剂与配制 ( 1 ) 试剂 净化吸附剂：n 一丙基乙二胺填料( p s a ) ( 平均粒度：4 5 i t m ) 、十八烷基硅烷键合硅胶填料 ( c 1 8 ) ( 平均粒度：4 5 p m ) ，艾杰尔科技有限公司。 农药标准品：多菌灵( 纯品，北京康林科技有限责任公司) 。流动相：甲醇( 色谱纯) 、磷 酸二氢钾( 优级纯) 、磷酸氢二钾( 优级纯) 、去离子水，流动相需经0 4 5 1 a m 的溶剂滤膜过滤后 使用。 试剂：二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、乙腈等没有特殊说明的均为分析纯。 ( 2 ) 配制 多菌灵标准储备液：准确称取5 0 0 m g 多菌灵置于烧杯中，用甲醇溶解移入5 0m l 容量瓶中， 并稀释至刻度，浓度为1 0 0 m g l ，- - 2 0 。c 冷冻贮藏。 多菌灵标准一【：作液：准确移取上述标准储备液，根据需要用流动相配制成各种不同浓度的标 准i ：作液，所有标准一l ：作液均需在一2 0 冷藏条件下贮存，每周配制。 同相苓取淋洗液：c 1 8 小柱淋洗液，甲醇溶液，量取2 0m l 甲醇移入1 0 0m l 容量瓶，用去离 子水稀释至刻度线，浓度2 0 ( v v ) 。 二二醇基小柱淋洗液：磷酸溶液，量取0 6m l 磷酸溶液( p ( h 3 p 0 4 ) = 8 5 9 1 0 0 9 ) ，移入1 0 0r n l 17 贼 偏 掣m罐勰 嚣避 中围农业科学院硕i j 学位论文第：章农药残留柃测方法研究 容量瓶，并用水稀释至刻度。后将配制的磷酸溶液和甲醇以l ：1 的体积比配制淋洗液。 p h 调节液： 碳酸氢钠溶液：称鼍5 9 碳酸氢钠，用水溶解并稀释至1 0 0m l ； 盐酸溶液( 1 + 1 1 ) ：称取盐酸9 0m l 加水稀释至1 0 0 0m l ； 氢氧化钠溶液( 8 0 9 l ) ：称取8 9 氢氧化钠，加水溶解并稀释至1 0 0m l ； 氢氧化铵溶液( 1 + 7 ) ：量取氨水1 0m l ，加水稀释至8 01 1 1 i _ , 。 2 2 1 3 仪器与设备 圃相萃取柱：c 1 8 小柱、二醇基小柱( 北京艾杰尔公司) 高效液相色谱仪，日本岛津公司c l a s s v pi o a v p 型，c 1 8 反相色谱柱，v p o d s ，1 5 0 m m 4 6 m m ；紫外分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司t u 1 8 0 0 s p c ；p h 测定计，德国w l w 公司，i n o l a bp hl e v e l ；高速组织捣碎机，美国，d s 2 0 0 ；氮气吹干仪，北京八方科技有限公司， b f - 2 0 0 0 m ；同相萃取仪，美国j t b a r k e r 公司；旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂，r e 一5 2 a a ； 台式恒温振荡器，太仓市设备厂，t h z - d 。 2 2 1 4 试验方法 ( 1 ) 样品处理 蔬菜、水果中甲基托布津、多菌灵的测定( g b t 5 0 0 9 1 8 8 2 0 0 3 ) ； 出口水果中多菌灵残留量检测方法( s n 0 2 2 0 1 9 9 3 ) ： ( ( n o nf a t t yf o o d s d e t e r m i n a t i o no fb e n z i m i d a z o l ef u n g i c i d e sc a r b e n d a z i m ，t h i a b e n d a z o l ea n d b e n o m y l ( a sc a r b e n d a z i m ) 一p a r t1 ：h p l cm e t h o dw i t hs o l i dp h a s ee x t r a c t i o n c l e a nu p ( b se n 1 4 3 3 3 1 ：2 0 0 4 ) ； g n o nf a t t yf o o d s d e t e r m i n a t i o no fb e n z i m i d a z o l ef u n g i c i d e sc a r b e n d a z i m ，t h i a b e n d a z o l ea n d b e n o m y l ( a sc a r b e n d a z i m ) 一p a r t3 ：h p l cm e t h o dw i t hl i q u i d l i q u i d p a r t i t i o nc l e a nu p ( b se n1 4 3 3 3 3 - 2 0 0 4 ) ； 分散固相萃取一高效液相色谱法：称取样品1 0 9 于5 0 m l 可封闭离心管中，加入1 0 m l 乙腈， 旋涡混匀器混匀3 0 s ，加入2 9n a c i 后振荡混匀5 m i n 。以4 0 0 0 r m i n 离心5 m i n 。吸取上层乙腈相 1 5 m l 到装有4 0 m g c l 8 吸附剂和4 0 m g p s a 吸附剂的2 m l 离心管中。振荡，以6 0 0 0 r m i n 离心5 m i n 。 移取上清液l m l 到液相色谱进样瓶中。 ( 2 ) 分析条件 紫外分光光度计：直接测定吸光度而进行定量，定量时采用作图法，求得校止吸光度，再根 据校正吸光度和多菌灵的浓度关系绘制成标准曲线。测定出的试样的校正吸光度值，后与标准曲 线比较，计算试样中农药的含量。分析过程中注意扣除背景值。 高效液相色谱：流动相，甲醇：磷酸缓冲液( p h = 7 2 - - - 7 5 ) - - 4 0 ：6 0 ；流速0 8 m l m i n ；柱温 4 0 ；二二极管阵列检测器，检测波长为2 8 5 n m 。以保留时间定性，峰面积定量。 18 中嗣农业科学院硕0 学位论文第i 审农药残留检测方洼研究 2 2 2 结果与分析 2 2 - 2 1 标准曲线的线性范围 ( 1 ) 紫外分光光度法的标准曲线 根据g b t 5 0 0 9 1 8 8 2 0 0 3 进行标准曲线绘制如图2 1 2 ，其标准曲线方程为y = o 1 2 1 7x 一0 0 2 1 9 ，r 2 为o 9 9 9 7 。可以看出紫外分光光度法在浓度0 5 m g k g 3m g k g 范围内有很好的线性 关系。 写 v 彗 。 窘 “ 堙 倒 蛋 oo ，5l1 522533 5 标样菲度s t a l i d a r d c o l i c ( m g m g ) 图2 1 2 多菌曼标准曲线紫外分光光度法 f i g u e2 t 2s t a n d 删c l , l f v eo f c a t b e n d a z i md e t e r m i r l 。db ys p e c t r o p h o t o m e t r y ( 2 ) 高效液相色谱标准曲线 取适量多菌灵和噻菌灵标准储备液，用甲醇稀释，配制浓度为0 0 5 m g k g 、0 i m g k g 、0 ，5 删肚g 、 im g k g 、2 m g k g 、3 m g k g 的标准溶液，甲醇定容。在旋涡混匀器上混匀，过0 4 5 m 膜后，用高 效液相色谱分析，采集色谱图，绘制标准曲线。由表2 1 3 可以看出，二极管阵列检测器检测的结 果，多卣灵在o 0 5 m g k g 3 m g k g 范围内有很好的线性关系，r 2 是0 9 9 9 7 ，检出限( l o d 值) 为 0 0 4 5 8 m g k g ，检出量( l o q 值) 为o 1 3 8 8 m g k g ，能够满足国内外对多菌炙的最人残留限量要求。 表2 1 3 多菌灵高效液相色谱法标准曲线韵线性关系和灵敏度 一 ：! 垫堡三：! ! 些堡型丝垫垡苎! ! ! 苎芏壁! 璺堕垒! 壁垒些! 婴垒曼堡! 型些型坐丛些一 一 分析物标准曲线方程 r 2 l o d ( m g k g ) l o o ( 峨牡g ) a n a l v t e c a l i b r a t i o ne q u a t i o n 。 ：围至+y = ( 5 1 8 3x o 0 6 4 1 ) x l 矿0 9 9 9 7 0 0 4 5 8o 1 3 8 8 蛀：l o d ，检抖 限；l o q 樘出晕 n o t e ；l o d ，l i m i t o f d e t e c t i o ml 0 0 1 i m i t o f q u a n t i f i c a t i o n 2 2 2 2 前处理方法比较 4 种检测方法中的前处理方法可门类为液液分配法( g b t 5 0 0 9 18 8 2 0 0 3 、b se n1 4 3 3 3 - 3 ： 2 0 0 4 ) 、瑚相萃取法( s n 0 2 2 0 - 9 3 、b se n1 4 3 3 3 1 ：2 0 0 4 ) 。通过对其分类比较得到的结果见表 2 1 4 。可以看出，无论是时间、成本还是有机溶剂使用量分散固相萃取方法都是最小的，经济， 少污染，而且其步骤虽少，利r 1 操作。通过具体的试验操作还可以看出国家标准g b i t 5 0 0 9 1 8 8 2 0 0 3 蔬菜水果中甲基托布津、多菌灵的测定的试验数据后处理过程十分的繁琐。 19 4 i 3 i 2 e1o o j n 0 n 1 c ：m 0 o 0 o 中国农业科学院硕i ：学化论文第一二章农药残帘枪测方法研究 曼曼舅曼鼍詈鼍舅_ 一i i| ；一iii 面一一 一一一i i_i i 表2 t 4 前处理方法比较 t a b l e2 14 c o m p a r i s o n so fs a m p l cp r e p a r a t i o nm e t h o d s 渡波分配l 【p 尉相革取s p e 比较项日 i r e m s 一 分数围相摹取 g b t 5 0 0 9 1 8 8 - 2 0 0 3 船e 卜：警3 3 ：s 啪2 2 。9 38 8 絮3 山研5 8 i 悟s 陀 注；固相孽敬万法中的小# 的不同成年会有。些变化 n | d t c ：c t 5w i l lc h a n g eb yu s i n gd i f f o e n ts p ec o l u r m 2 2 2 3 各方法精密度和准确度结果比较 对添加0 0 5 m g k g 、0 1m g k g 、0 5m g k g 、1 0m g k g 、3 0m g k g5 个浓度多苗灵农药标准样 品的苹果样品按2 1 1 4 方法分别进行回收率试验，结果如表2 1 5 所示。 g b t 5 0 0 9 18 8 2 0 0 3 方法母小检出浓度是0 5 m g ，l ( g ，而其他方法的蕞小检山浓度是0 0 5 m g 成g 。 原因是g b t 5 0 0 9 18 8 2 0 0 3 是用紫外分光光度计进行检测，其灵敏度要低于液相色谱法。 总体上看，液液萃取前处理方法的同收率低于同相萃取方法的回收率。同时，液液萃取法的 平行样品回收率结果之间的r s d 值高于蒯相萃取法，方法的重复性较差。 液液萃取过程中经常出现由于p h 值的微小差别产生的乳化现象，而导致试验结果的变化， 提取效果比同相萃取法差。阿相萃取方法中样品通过崮相萃取柱处理后，试样中的色素等大分子 杂质去除的更干净，更有利于保护液相色谱枉。 表2 1 5 不同方法的回收率试验结果 ! ! 垒! ! 兰：! 坠塑q ! 旦! ! ! 生堡! ! ! 堡! ! 尘! ! 堂些! ! 竺坐唑 一 添加浓度m 鼎g f 均州收率( r s d ) ，a v e r a g er e c o v e r y ( r s d ) ， 0 0 5 9 2 0 ( 6 0 )9 2 7 ( 5 4 ) 8 0 ，7 ( 9 5 )9 3 + 8 ( 4 2 ) 0 1 9 2 ，7 ( 4 3 )9 3 o ( 4 7 ) 8 6 7 ( 5 9 )1 0 0 2 ( 2 8 ) 0 5 8 6 o ( 1 0 1 )9 6 3 ( 4 2 )9 7 1 ( 2 7 )9 4 2 ( 5 + o ) 10 0 ，5 ( t ，2 ) 1 1 0 1 9 ( 8 7 )9 7 3 ( 3 8 )9 7 8 ( 2 1 )9 5 7 ( 4 _ 1 )1 0 0 9 ( 1 2 ) 3 1 0 7 1 ( 6 5 )1 0 1 2 ( 2 1 )1 0 1 3 ( 1 3 )1 0 0 5 ( 2 7 )9 9 4 ( 0 9 ) 注：n = 3 ；r s d = - 柑对标准儡蕞 n o t e ：1 = 3 1r s d = r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n s n 0 2 2 阻9 3 和b se n1 4 3 3 3 1 ：2 0 0 4 运用的都是州相萃取法。但两者采用的原理不同， s n 0 2 2 0 9 3 使用的是c 1 8 小桂，是利用多菌灵农药处丁不同溶剂f 的极性区别进行分离；而b se n 1 4 3 3 3 1 ：2 0 0 4 使用的是二醇基小 丰，魁利用多菌灵在不同酸碱性条件f 的电荷区别进行分离。两 者的结果有细微的区别。 综台2 2 2 2 、2 2 2 3 可以看出，由丁分散同相萃取法前处理过程中的步骤简单，溶液在辑器 中转移的次数少，冈此其r s d 值比上述几种方法相席添加农药浓度的r s d 值小，重复性好，精 密度和准确度高。同时其成本相对较低、试验过程中有机溶剂的使片4 鼙较少，有利r 操作者的健 康和环境保护。 2 0 中国农、也科学院硕 ：学位论文第：奄农药残留枪测方法研究 2 2 2 4 基质效应 在检测方法比较试验过程中，欧盟标准检测方法b se n1 4 3 3 3 3 ：2 0 0 4 中出现了实际样品与 标准样品的保留时间差异较大的现象，响应值也发生了一些变化( 图2 1 3 ) 。在对方法的进一步 研究中发现，多菌灵的分离原理是其在不同p h 值条件下不同极性溶剂中的溶解度不同，不同p h 值，多菌灵的保留时间和峰面积不同。如表2 1 6 所示。 345678 m i n u l e o 图2 1 3 基质效应b se n1 4 3 3 3 3 ：2 0 0 4 f i g u e2 1 3m a t r i xe 行e c t s _ b se n1 4 3 3 3 3 ：2 0 0 4 表2 1 6 不同p h 条件下液液萃取的结果 ：! 兰垒! ! 兰：! ! 墨曼! 旦! ! ! q ! ! i g 竖! 垒旦! g 坚i 垒：仑垒垡i 堕竺翌! ! 曼垫：坚pi 翌垒! ! 重型! 巳婪 项目i t e m s 1 0 5 21 0 0 51 09 8 99 3 99 3 28 5 37 8 3 由于使用常用的空白基体萃取液配制标准样品进行补偿的办法( 胡文兰，2 0 0 5 ) 不能很好地 消除基质效应，如图2 1 3 所示。因此本文将基质匹配标准溶液校准方法以及标准添加法结合使用 进行基质效应的消除。基质标准品的配制：在前处理过程进行剑调节p h 值前，在提取液里加入 定量的农药，配制成一定浓度的基质标准品，根据方法继续调节p h 值后进行净化与测定步骤， 得到的响应值做标准曲线。根据校准后的标准曲线进行样品的定量计算。 2 3 讨论 2 3 1 分散固相萃取高效液相色谱检测方法研究 ( 1 ) 苯并咪唑类农药的提取剂 国内外报道的苯并咪唑类农药的前处理方法有很多，其中提取剂的种类多种多样，常用的有 甲醇( 金t ：耀等，2 0 0 5 ) 、乙酸乙酯( 孔样虹，2 0 0 3 ) 、丙酮( 淑英，2 0 0 6 ) 、乙腈( p r o u s a l i sk p ，2 0 0 4 ) ，本文将农药残留前处理过程中常用提取剂的提取效果进行了系统的比较，选择了适合 分散p 司相萃取操作的提取剂种类。但只涉及到了单种类的提取剂，混合种类提取剂的提取效果有 待进一步研究。 ( 2 ) 苯并咪唑类农药的净化吸附剂 在国外的相关报道中，还没有对较广泛种类水果中苯并咪唑类农药进行一个系统的研究。2 0 0 3 2 1 中圉农业科学院硕i j 学位论文第：审农药残留柃测方泫研究 皇曼鼍曼皇皇曼曼皇鼍i。 i i i i 一 _ ! ! 曼曼皇 年a n a s t a s s i a d e sm e ta l 使用净化吸附剂p s a 和g c b ( 石墨化炭黑) ，得剑生菜和樱桃中噻菌灵 的回收率是1 7 4 4 ，不能满足要求。2 0 0 5 年l e h o t a ysje ta 1 只使用p s a 对甜橙和生菜样品 进行了处理，获得噻菌灵回收率在9 0 l1 0 ，但多菌灵回收率不稳定，在甜橙中的超出了1 1 0 。 2 0 0 3 年噻菌灵的回收率低原因在于相对于p s a + c 1 8 吸附剂组合，p s a + 石墨化炭黑组合对噻菌灵 农药的吸附量较大。2 0 0 5 年噻菌灵的回收率虽然符合了要求，但多菌灵的结果又不稳定，而且其 检测仪器是液相色谱一质谱串联，对试验设备的要求很高。 本文采取新的净化吸附剂组合进行前处理分析，对具有代表性的6 种水果进行系统研究，将 2 种农药的同收率提高到8 8 1 0 2 。获得了较为理想的结果。 ( 3 ) 苯并咪唑类农药的检测 国外运用分散固相萃取技术是针对以质谱作为检测器的分析方法构建的，对实验设备的要求 较高。欧盟水果中噻菌灵的最低最大残留限量要求是0 0 5 m g k g ( 葡萄、醋栗) ，二极管阵列检测 器的检出限最低为o 0 4 7 2 m g k g ，仪器无法将0 0 5 m g k g 的噻菌灵色谱峰与噪音相区分，无法完成 积分分析，因此本文研究了采用二极管阵列检测器和荧光检测器分别进行测定的方法，得到噻菌 灵的最低检出限为0 0 0 0 2 5 m g k g ，比二极管阵列检测器检出限降低了2 - 3 个数量级，满足噻菌灵 0 0 5 m g k g 的最大残留限晕要求，同时降低了对检测仪器的要求，适合大多数实验窒使用。 ( 4 ) 苯并咪唑类农药多残留研究 苯并咪唑类农药残留检测大多利用其特殊性质进行提取和净化( d a n a h e rm e ta l ，2 0 0 7 ) ，对 提取所用试剂的酸碱性和离子环境有特殊要求，这决定了其很难与其它种类农药一起进行多残留 检测。 苯并咪唑类农药根据其结构组成包括噻苯眯唑类似物和苯并咪唑基氨基甲酸盐两类。多菌灵 和噻菌灵分属于这两类，因此分析检测中常把其分别归于具有相似结构的化合物中( s uy r ，2 0 0 3 ； i t oy ，1 9 9 8 ) 。国内多农药残留检测方法标准中，只有水果和蔬菜中4 0 5 种农药及相关化学品 残留量的测定液相色谱一串联质联法( g b t 2 0 7 6 9 2 0 0 6 ) 能够同时测定多菌灵和噻菌灵，但两 者归于不同的分析组。方法需要2 种固相萃取小柱串联进行前处理，较为复杂。 本研究采用的分散同相萃取净化方法的原理是把基质中的杂质去除，不涉及被检农药的性质。 因此该方法非常适合需要特殊分离环境的苯并咪唑类农药前处理。国内还没有相关内容的报道。 国外已有报道( a n a s t a s s i a d e s m e t a l ，2 0 0 3 ) 能够同时检测上百种农药残留，但其使用的净化吸 附剂与本文不同，导致试验结果不能满足要求。本文采取新的净化吸附剂组合进行前处理分析， 获得了较好的结果，为包括苯并眯唑类农药的多残留研究提供新的思路。但在多残留检测的条件 方面还有待进一步的研究。 ( 5 ) 苯菌灵的检测方法 苯菌灵的不稳定决定了其测定的困难，国内外样品中苯菌灵较为通用的检测方法是将其转化 为多菌灵进行间接检测( 王鸣华等，1 9 9 3 ；l e v i n e a r ，1 9 9 8 ) 。有文献报道在冷冻条件卜进行苯 菌灵纯品的检测获得了苯菌灵的液相色谱图谱( 汤淼荣，1 9 9 9 ) 。苯菌灵在常温溶液状态卜的降 解为多菌灵的速度十分快，很难获得其准确剂量的谱图，难以检测( s i n g hp r e ta l ，1 9 9 0 ；s i n g h p re ta l ，1 9 9 3 ) 。国际上相关标准中苯菌灵都是按照多菌灵计。本文在研究苯菌灵的检测方法时 也采用了这种方法。将苯菌灵标准溶液添加到样品中，通过本试验建立的方法进行处理检测获得 符合要求的结果。 2 2 啐l 圆如业科学院硕1 ：学位论文第二节农药残田榆删方法研究 ( 6 ) 试验按照相关标准测量方法与结果的准确度( 正确度与精密度) 第l 部分：总则与定义 ( g b 仃_ 6 3 7 9 2 2 0 0 4 i s 0 5 7 2 5 1 ：1 9 9 4 ) 和测量方法与结果的准确度( 正确度与精密度) 第2 部