（食品科学专业论文）决明子中蒽醌化合物组成和功能的研究.pdf

摘要 摘要 决明子是豆科植物决明( c 口s s 妇d 6 m s 洳妇l ) 或小决明( c 口船妇幻ml ) 的成熟干 燥种子，为药食同源中草药。决明子在我国种植面积广泛，具有清肝明目、润肠通便和 调压降脂的作用，是我国卫生部首批公布的药食同源食物之一。葸醌化合物是决明子中 主要的功效成分，具有抗氧化、抑菌、抗突变等多种药理活性，在医药、保健品和食品 添加剂等领域应用广泛。故本课题选择决明子作为研究对象，对决明子中的主要功效成 分进行分离和鉴定，研究葸醌化合物的体外抗氧化和抗诱变活性，为合理开发利用决明 子资源提供理论依据。 采用柱层析的方法对决明子中的蒽醌化合物进行分离，通过化学和波谱分析方法鉴 定化合物的结构。分离得到9 种葸醌类化合物，分别鉴定为大黄酚( i ) 、大黄素甲醚 ( i i ) 、8 一甲氧基大黄酚( 1 1 1 ) 、大黄素( ) 、黄决明素( v ) ，8 甲氧基大黄素f ) 、2 一 甲氧基大黄酚一8 o b d 一毗喃葡萄糖苷( ) ，4 ，6 ，7 一三甲氧基芦荟大黄素一8 一。一b d 一吡喃 葡萄糖苷( ) ，大黄素一6 一。一b 一龙胆二糖苷( ) 。化合物i i i 、和均为首 次从该植物中分得。 通过单因素以及正交试验，得到决明子中蒽醌化合物最佳提取工艺：乙醇浓度7 0 ( v v ) ，温度5 0 ，固液比1 ：2 5 ，提取时间为1 5 小时，蒽醌得率为8 0 5 m g g 原料。 采用碱溶一酸沉的方法对粗提物中葸醌化合物进行分离，n a o h 溶液浓度为o 5 、固液 比为l ：1 5 下提取，在p h 值为2 的条件下沉淀，得到黄色粉末状蒽醌提取物，含量达到 6 5 4 。决明子在1 5 0 加热过程中总蒽醌含量基本不变，游离葸醌含量显著增加，结合 葸醌( 糖苷) 的量明显降低。利用h p l c 对加热过程中9 种蒽醌化合物的含量变化进行 了分析。推断葸醌糖苷化合物的糖苷键会受热分解，转变为蒽醌苷元。 采用亚油酸过氧化、c u ”诱导的低密度脂蛋白( l d l ) 氧化、还原力和螯合过渡金属 离子等试验，研究了大黄酚、大黄素甲醚、8 甲氧基大黄酚、大黄素、黄决明素和8 一甲 氧基大黄素的体外抗氧化作用。实验结果表明各化合物在1 2 5 5 0 m m o l ，l 的浓度范围 内，可以抑制b n 引发的亚油酸过氧化。通过对反应体系的紫外可见吸收光谱变化的 分析，推断各蒽醌化合物通过两种不同方式捕获自由基，抑制氧化反应的发生。各葸醌 化合物在高浓度均可抑制f e “引发的亚油酸过氧化，但大黄酚在低浓度时表现为促氧化 作用。蒽醌化合物对a i b n 和f e 2 + 引发的亚油酸过氧化的抑制作用均较b i t 弱。还原 力实验结果表明黄决明素、8 一甲氧基大黄素和8 一甲氧基大黄酚表现出明显的还原能力， 在相同浓度下，黄决明素还原能力最强，而大黄酚、大黄素甲醚和大黄素的还原力较弱。 实验结果还表明各蒽醌化合物可以抑制c u “诱导的u ) l 氧化，提示其可能具有潜在的 预防动脉粥样硬化的功能。通过紫外可见吸收光谱分析，推断大黄酚、大黄素甲醚、大 黄素和8 一甲氧基大黄素可以通过螯合c u “来抑制u ) l 氧化。 江南大学博：l 学位论文 采用单细胞凝胶电泳的方法，以尾矩( 0 l j v et a i lm o m e n t ，o t m ) 作为评价指标，对决 明子中游离葸醌化合物的遗传毒性和对苯并( a 1 芘诱导的仓鼠卵巢( c h o ) 细胞d n a 损伤 的保护作用进行研究。实验结果表明，在2 5 2 0 m m o l l 浓度范围内，大黄素甲醚、8 甲氧基大黄酚、黄决明素和8 一甲氧基大黄素没有表现出遗传毒性，大黄酚和大黄素在高 浓度下f 2 0 m m o l l ) 可能具有一定的遗传毒性。各蒽醌化合物在一定浓度下均可抑制苯并 r a l 芘对细胞d n a 的损伤，提示具有一定的抗诱变活性。各葸醌化合物不能提高细胞对 d n a 损伤的修复能力，实验结果提示蒽醌化合物可能是通过抑制苯并( a ) 芘的代谢活化 或与致癌物直接反应来起到保护细胞d n a 的作用。 对决明子中的自由基清除活性成分进行了研究。采用硅胶柱层析、t l c 和制备h p l c 等分离方法，以n ，n 一二苯基三硝基苯肼自由基【d p p h 1 清除活性作为检测指标，从决 明子乙醇提取物中筛选分离得到自由基清除活性成分f a 1 和f a 2 ，利用n m r 对化 合物结构进行了初步鉴定，如下： o ho h 心 c c - c c h 2 o h 化合物f a 一1化合物f a 一2 利用体外实验方法对f a 一1 和f a 2 的自由基清除活性进行了研究。实验结果表明 f a 一2 具有很强的清除【d p p h 】活性，i c 5 0 为3 1 1 “g m l ，活性强于v c ，f a 一1 的l c 5 0 为5 3 距m l 。f a - l 和f a - 2 可有效清除羟基自由基【o h 】，i c 5 0 分别为2 o 即m l 和3 2 4 m l ，活性均强于白藜芦醇。f a 一1 和f a 一2 对超氧阴离子自由基均有清除作 用，l c 5 0 分别为1 7 4 m l 和1 1 耻m l 。 关键词：决明子：葸醌；抗氧化；d n a 损伤；自由基清除 h a b s t f a c t a b s t r a c t j u e m j n g z ii st h es e e d so ft h el e g u m eo 船缸f d r 口lo ro 船缸曲m s f ，d f f 口l j u e m i n g z i i sa n i m p o n a n tm e d i c i n a lo r i 百np l a n t ，w h j c h i sw e l lk n o w nt oh a v e p h a m a l o 舀c 出 a c t i v i t j e ss u c ha sd i u i t i c ，d i a r r h e aa n da n t i h y p e n e n s i o nt h a th a v eb e e nc o n v e n t i o n a h yu s e d a sh e a l t h yb e v e r a g ew i t hm a n yp e o p l ef m ma n c i e n tt i m e a n t h r a q u i n o n e sa r et h em a i n f u n c t j o n a lc o m p o n e n t si nj u e m i n g z i m o d e mr e s e a r c hs h o w e dt h a t a n t h r a q u i n o n eh a s m u l t i - f u n c t i o n sj n c l u d i n ga n t i b a d e r i a l ，a n t i o x i d a n ta n da n t i m u t a g e n i nt h i sw o r k ，s y s t e m a t j c e x p e r i m e n t sw e r ec a 丌i e do u to ne x t r a c t i o n a n di d e n t i f i c a t i o no fa i l t h r a q u i n o n ep m t j l ei n j u e m i n g z i f u n h e 咖o r e ， t h e p h y s i o l o 舀c a la d i v i t y o f a n t l l r a q u i n o n e w a se v a l u a t e d p r e l i m i n a r i l y t h ea n t h r a q u i n o n e sc o n s t i t u e n t si nt h es e e do f ( 嬲妇f o r 口lw e r ei n v e s t 塘a t e d t h e c o n s t i t u e n t sw e r ei s o i a t e dt h r o u 曲c o l u m nc h m m a t o 伊a p h y t h e i rs t n l c t u r e sw e r ce l u c i d a t e d t h m u g hp h y s i o c h e m i c a l a i l d s p e c t m la n a l y s i s n i n ea n t h r a q u i n o n e sw e r ei s o i a t e da n d i d e n t i f i e da s c h f y s o p h a n o l ( 1 ) ，p h y s c i o n ( 2 ) ，8 - m e t h o x y c h r y s o p h a n o l ( 3 ) ，e m o d i n ( 4 ) ， c l l r y s o o b t u s i n ( 5 ) ，8 一m e t h o x y e m o d i n ( 6 ) ，2 一m e t h o x y c h r y s o p h a n o l 一8 - o - b d - g l u c o p y r a i l o s i d e ( 7 ) ， 4 ，6 ，7 一t r j m e l h o x y a l o e e m o d j n - 8 一。一b d - 羽u c 0 p y 埘1 0 s j d e ( 8 ) a n de m o d i n - 6 一d b g e n t i o b i o s i d e ( 9 ) a m o n gt h e m ，c o m p o u n d s3 ，6 ，7 ，8a n d9w e r co b t a i n e df m mt h i sp l a n tf o r t h ef i r s tt i m e t h ee x t r a c t i o na n di s o l a t i o no fa n t h r a q u i n o n e si nj u e m i n g z iw i t hr e n u xm e t h o dw e r e s t u d i e d t 1 l eo p t i m a lc o n d j t i o nw a s7 0 e t h a n o l ( v ：v ) ，t h er a t i oo fs o l i dt ol i q u i d ( 1 ：2 0 ) ， e x t r a c t i o n4h o u r s ，5 0 b ys i n 舀ef a c t o ra n do n h o g o n a le x p e r i m e n t s t h ea n t h r a q u i n o n e s w e r ei s o l a t e df r o mc n l d ee x t r a c t sw i t ho 5 a l k a l i n es o l u t i o na n d1 ：l5t h er a t i oo fs o l i dt o l i q u i d ，t h e nd e p o s i t e da tp h 2 t 1 l ec o n t e n to fa n t h r a q u i n o n ew a s6 5 4 e f 艳c to fh e a t i n g t r e a t m e n to na n t h r a q u i n o n ei nj u e m i n g z iw a se v a l u a t e d t b t a lc o n t e n to fa n t h r a q u i n o n e s c h a i l g e dl i t t l e n ef r e ea n t h r a q u i n o n ei n c r e a s e d ，a i l da n t h r a q u i n o n e 羽y c o s i d ed e c r e a s e d 1 1 1 e a b o v er e s u l t si n d i c a t e dt h a tg l y c o s i d eb o n do fa n t h r a q u i n o n ew e r ed e g r a d e db yt h e 珊a l t r e a t m e n t t l l e a n t i o x i d a l l t p r o p e n i e so ff r e ea i l t h r a q u i n o n e so b t a i n e df m mj u e m i n g z iw e r e e v a i u a t e du s i n gav a r i e t yo f 觑v l f j 叼m e t h o d si n c i u d i n gr e d u c i n gp o w e r ，p e r o x i d a t i o no f l i n o l e i ca c i da n dl o wd e n s i t yl i p o p i o t e i n ( l d l ) a n dc h e l a t i n ge f f c c to nt r a n s i t i o n a li o n s 7 n l e 1 c s u l t ss h o 、v e dt h a ta na n t h i a q u j n o n e st e s t e dc o u 】dr c d u c ep e r o x j d a t j 彻o fl i n o l e i ca c i d i n d u c e db ya l b n b a s e do nt h eu v 二v i s i b l es c a n n i n gs p e c t r ao fa n t h r a q u i n o n e s ，i tw a s s p e c u l a t e d t h a t a n t h r a q u i l l o n e ss c a v e n g e f r e er a d i c a l sj nt w od j f f e r e n tm a n n e 巧 i i l 江南大学博：i ：学位论文 a n t h r a q u i n o n e sc o u l dj n h j b i tp e r o x i d a t i o no fl i n o l e i ca c i di n d u c e db yf e “e m o d j ns h o w e d s i 印访c a n tp o t e n c yt oc h e l a t ef e 叶n es j x f r e ea j l t h r a q u i n o n e sa r ee f f e c t i v ej np r o t e c t i n g l d la g a j n s to x i d a t i o ni na c o n c e n t r a t i o n d e p e n d e n t m a n n e r t h ed a t as u g g e s t e dt h a t a n t h r a q u i n o n e sf r o mj u e m i n g z im i g h th a v eap r e v e n t i v ee f f e c ta g a i n s ta t h e r o s c l e m s j sb y i n h i b i t i n gl d lo x i d a t i o n a c c o r d i n gt ot h ed i f f e r e n t i a lu v s p e c t 八l mo fs a m p l e si nt h e p r e s e n c e o f c u 2 + ， j t w a si n d i c a t e d t h a t c h r y s o p h a n o l ，p h y s c i o n ， e m o d i na n d 8 一m e t h o x y e m o d i nc o u l dc h e l a t ec o p p e ri o n s n ee 仟e c t so ff r e ea n t h r a q u i n o n e sf r o mj u e m j n g z io nb e n z o ( a ) p y r e n e ( b 【a 】p ) i n d u c e d d n a d a m a g ei nc h i n e s eh a m s t e ro v a r yc e l ll i n e ( c h o ) w e r ei n v e s t i g a t e dv i as i n g l ec e l lg e l e l e c t r o p h o r e s i s( s c g e ) w i t h e x o g e n o u s a c t j v a t i o n m i x t u i s ( s 9 ) p h y s c i o n ， 8 一m e t h o x y c h r y s o p h a n o l ，c l l r y s o o b t u s i na n d8 一m e t h o x y e m o d i n a tt h ec o n c e n t r a t j o no f 2 5 2 0m m o i ls h o w e dn og e n o t o x j ce f 诧c tt o w a r dc h oc e l l b u tc h r y s o p h a n o la n de m o d i n a tc o n c e n t r a t i o n0 f2 0m m o l le x e ns o m ed a m a g eo nd n ao fc h oc e l l e a c ho ft h e s e a n t h r a q u i n o n e sd e m o n s t r a t e dp m t e c t i v ee f ! f e c t so nd n ad a m a g eo fc h oc e l li n d u c e db y b 【a 】p ：t h ea n t j g e n o t o x i ca c t i v i t y o fc h r y s o p h a n o l ， p h y s c i o n ，8 一m e t h o x y c h r y s o p h a n o l ， e m o d i n ，c h r y s o o b t u s i na n d8 一m e t h o x y e m o d i no nb 【a 】p - m e d i a t e dd n ad a m a g ei nc h o c e l l w e r e7 0 ，6 4 ，7 4 ，5 8 ，8 0 a n d7 5 ，r e s p e c t i v e l y ，a t2 0 m m o l ，lt h eb i o a n t i m u t a g c n i c a c t i v i t y o ft h e s e a n t h t a q u i n o n e s w a sn o to b s e r v e d 1 1 1 er e s u l t s s u g g e s t e d t h a tt h e a n t i m u t a g e n i ca c t i v i t yo fa n t h r a q u i n o n e sm a y a c ta sd e s a n t i m u t a g e n i ca g e n t n l e c o m p o n e n t sw i t h r a d i c a l s c a v e n g i n ga c t i v i t y w e r ej n v e s t i g a t e d t h ea c t i v e c o m p o n e n t s ，f a - 1a n df a 一2w e r ep r e p a r e dw i t hs i l i c ac o l u m nc h r o m a t o g r a p hy t l ca n d p r e p a r e dh p l c t 1 l e i rs t m c t u r e sw e r ep r e l i m i n a r ye l u c i d a t e dw i t hn m ra n a l y s i s t 1 l e s t r u c t u r eo ft w oc o m d o u n d sw e r es h o w na sf o l l o w s ： uu c o m p o u n df a - 1c o m p o u n df - a 一2 r a d i c a ls c a v e n 百n ga c t i v i t yw a se v a l u a t e dw i t h 抽v f f r dm e t h o d f a 一1a n df a - 2 d e m o n s t r a t e ds t r o n gi n h i b i t o r ye f f e c to nd p p h ，w i t ht h el c 5 0o f5 3 8 m la n d3 1l g m lr e s p e c t i v e l y f - a 一1a n df a 一2w i t h t h ei c 5 0o f2 0 8 m la n d3 2 4 m l e x h i b i t e dm o r ep o t e n c yo ns c a v e n g i n gh y d r o x y lr a d i c a lt h a nr e s v e r a t t d l - t h ec a p a c i t i e st o s c a v e n g es u p e r o x i d ea n i o nr a d i c a lw e r e1 7 4 m la n d1 15 m lf o rf a - 1a n df a - 2 ， h o l i cf 吼 吣 吼 0llclo a b s l r a c t r e s p e c t i v e l y k e y - o r d s ：j u e m i n g z i ；a n t h r a q u i n o n e ( s ) ；a n t i o x i d a n t ；d n ad a m a g e ；r a d i c a ls c a v e n 舀n g v 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 敛幺受壤宝 签名：墨竖墨 日期：如d 6 年3 月巧日 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规 定：江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和 磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 签名：茎堕导师签名：j 盟 日期：二6 年3 月2 石日 第一章绪论 1 1 决明子简介 第一章绪论 决明子为豆科植物决明( 已龉妇d 6 m s 和f 抽l ) 或小决明( 0 5 5 胁f d r l ) 的成熟 种子，前者习称大决明，后者习称小决明，形态如图卜1 所示。决明子为传统常用中药， 始载于神农本草经，列为上品，具有清肝明目、润肠通便和调压降脂的作用，是我 国卫生部首批公布的药食同源食物之一。 决明子为一年生半灌木草本状，高5 0 一1 5 0 厘米，上部多分枝，全体被短软毛。叶 互生，偶数羽状复叶。叶轴上在第一对小叶间或在第一对和第二对小叶问各有一条长约 2 毫米的针刺状暗红色腺体。大决明子( 韶妇d 6 m s 和妇l i ) 呈四菱状方形或短圆柱形， 两端近平行倾斜，形似马蹄，一端钝圆，另一端稍斜尖，长3 7 唧，宽1 5 4 唧。表面 黄绿色或棕褐色，平滑有光泽。背腹面各有一条突起的棱线，棱线两侧各有一条从脐点 向合点斜面对称而颜色较浅的线形凹纹。质坚硬、不易破碎。横切面可见种皮薄，胚乳 灰白，半透明，胚黄色，中间有s 形折曲的黄色子叶，叶片重叠，味微苦，略带粘性。 小决明( o 鼯插f d ml ) 呈段圆柱形，长2 5 5 彻，宽1 53m m 。棱线两侧各有一条宽 广的浅黄绿色带，其余与大决明相似”1 。 图l 一1 决明子实物图 f i g l 一1s e e do fc 口5 s 抽f d 阳l 决明子主要产于江苏、安徽、四川等地，近年来全国各地多有栽培。秋季采收成熟 果实，干燥后使用。 江南大学博士学位论文 1 2 决明子的研究与利用现状 1 2 1 决明子的化学成分 决明子中的基本营养成分有水分( 5 7 5 8 ) 、蛋白质( 1 7 一1 8 ) 、脂肪( 5 2 5 3 ) 、 粗纤维( 2 5 0 4 ) 和灰分( 4 9 6 ) ”1 。 1 2 1 1 蒽醌类化合物 决明中含有蒽醌类成分约为1 2 ，含有大黄酚( c h r y s o p h a n 0 1 ) 、大黄素甲醚 ( p h y s c i o n ) 、美决明子素( o b t u s i f o l i n ) 、黄决明素( c h r y s o o b t u s i n ) 、决明素( o b t u s i n ) 、橙黄 决明素( a n l a i l t j o o b t u s i n ) 、大黄素( e m o d i n ) 、芦荟大黄素( a l o e e m o d i n ) 、意大利鼠李蒽醌 一1 一o 一葡萄糖苷( a i a t e n i n - l 一0 _ - b - d 出u c o p y r a n o s i d e ) 、l 一去甲基橙黄决明素 ( 1 一d e s m e t h y l c h r y s o o b t u s i n ) 、黄决明素2 o b d 葡萄糖苷。大决明中还含有：葡萄糖基 美决明子素、葡萄糖基黄决明素、葡萄糖基橙黄决明素、大黄素甲醚一8 一o 一葡萄糖苷、1 去甲基决明素、大黄酚一1 0 ，1 0 一联蒽酮、大黄素- 8 一甲醚、大黄酚一9 葸酮。小决明中还含 有：大黄酚一1 o 三葡萄糖苷、大黄酚一1 一。一四葡萄糖苷、美决明子素一2 一。一葡萄糖苷。 1 2 1 2 萘并一毗喃酮 决明中均含有红镰玫素( r i l b r o f u s a r i n ) 、决明子苷( c a s s i a s i d e ) 、决明内酯( t o r a l a c t o n e ) 、 决明子苷( c a s s i a s i d e ) b 及c 、红镰玫素一6 0 一龙胆二糖苷m b r o f i l s a r i n 一6 一。一g e n t i o - b i o s i d e ) 。 大决明中还有决明葸酮( t o r o s a c h r y s o n e ) 、异决明内酯( i s 0 t o r a l a c t o n e ) 、决明子内酯 ( c a s s j a l a c t o n e ) 例、2 ，5 一二甲氧基苯醌( 2 ，5 一d i m e t h o x y b e i l z o q u i n o n e ) 、决明子苷( c a s s i a s i d e ) b 2 及c 2 【6 】。小决明中还含有红镰玫素一6 一o 芹糖葡萄糖苷 6 - 【od a p i o f i l r a n o s y l ( 1 6 ) o b d d u c o p y r a n o s y l o x y 】一r u b m f l l s a r i n 及c a s s i t o r o s i d e “。 1 2 1 3 非皂化物质 大决明种子含有十六烷一三十一烷、胆甾醇、豆f 醇、b 一谷甾醇、小决明中还含有 少量锦癸酸( m a l v a i i ca c i d ) 、苹婆酸( s t e r c u l i ca c i d ) 及菜籽甾醇( c a m p e s t e r 0 1 ) 。 1 2 1 4 脂类 决明子脂类主要由类固醇脂、游离脂肪酸和甘油三脂三部分组成，其中甘油三脂含 量较高，类固醇脂和游离脂肪酸含量较低。类固醇脂、游离脂肪酸和甘油三脂中饱和脂 肪酸的含量分别为3 0 8 3 2 、2 6 4 6 9 和2 4 2 2 1 ，多不饱和脂肪酸的含量分别为为 4 6 1 5 6 、4 5 1 0 7 和4 1 0 4 2 ，对于单不饱和脂肪酸，分别为2 2 7 9 6 、2 8 5 2 0 和 2 7 8 2 3 。 1 2 1 5 无机元素 篇一章绪论 决明子中含有丰富的人体必需微量元素：铁1 0 7 8 p p m 、锌4 3 9p p m 、铜5 5 p p m 、 镁2 7 6 3 6 p p m 、锰1 9 5 p p m 钙3 4 0 5 3 p p m 、钠3 5 3 p p m 、钾5 3 5 3 4 p p m 、镍o 2 7 p p m 、 钴0 0 9 p p m 、钼o 叭7 p p m 等。无机元素在决明予中的含量较一般蔬菜高，达2 0 9 m g 1 0 0 9 干重1 。 1 2 2 决明子的药理活性与临床应用 1 2 2 1 药理活性 ( 1 ) 降压作用 试验表明决明子水提醇沉物对自发性遗传性高血压大鼠具有平均降低收缩压 5 3 1 3 m i i l l g ( 尸 0 0 0 5 ) ，平均降低舒张压3 8 1 2 咖( 尸 0 0 1 ) 。机理可能是蒽醌等物质 作用于胆碱能神经、外周m 受体3 。 ( 2 ) 降血脂，降胆固醇，抑制动脉硬化与脂肪肝形成 动物试验表明服决明子组小鼠比实验性高胆固醇血症鼠模型的血清高密度脂蛋白一 胆固醇( h d lc ) 血清总胆固醇( t c ) 比模型组提高6 0 m g d 和0 2 5 左右，但t c 基本不变； 服决明子组的兔比高胆固醇血症兔的血清中低密度脂蛋白一胆固醇( l d l c ) 降低 7 5 5 m g 1 0 0 m g 。机理可能是葸醌糖苷和多糖类物质通过导泻作用，减少肠道对胆固醇的 吸收及增加排泄，反馈调节降低血液中l d l c 含量，增加h d l c 和h d lc t c 值，这就有利 于胆固醇最终被转运到肝脏处理”。 ( 3 ) 增加免疫功髓 南景一等”报道决明子水煎醇沉剂可使小鼠胸腺平均萎缩2 0 2 m g 1 0 9 ，使外周血淋 巴细胞酯酶染色阳性率平均下降1 6 1 ，平均提高腹腔巨噬细胞吞噬率2 4 1 2 ，吞噬指 数上升1 2 9 ，平均提高血清溶菌酶3 2 2 5 ug m l 。谢宝忠等“”报道服决明子的小白鼠白 细胞平均增加1 5 9 0 一2 1 9 5 个m 3 ，使t 细胞b 细胞比例提高1 5 2 6 2 6 。机理可能是 蒽醌糖苷和多糖类物质增强巨噬细胞吞噬功能，增加自细胞总数，刺激t 淋巴细胞转化， 提高血清溶血素及循环抗体能力。 ( 4 ) 明目作用 动物试验表明服决明子水煎剂的兔、狗组的睫状肌中乳酸脱氢酶( l d h ) 比未服组高 o 3 3um o i ( l s ) 和o 2 3um o i ( l s ) 。机制可能是决明子中蒽醌、吡咯酮糖苷等成分激 活眼中l d h 活性，促进糖无氧酵解，减少水晶体中葡萄糖量，产生更多a t p ，扩张未梢血 管，改善视网膜及神经血液循环，促进水肿吸收“。 1 2 2 2 临床应用 江南大学博士学位论文 ( 1 ) 治疗高血压和高脂血症 用决明子种子开水泡后代茶饮用，治疗2 4 例高血脂患者。其中1 2 例1 月后平均t c 下 降1 9 1 2 ( p o 0 5 ) ，1 年后平均下降2 7 1 4 ( p o 0 1 ) ，2 年后下降2 7 1 1 ( p o 0 1 ) ，1 7 例1 月后t g 下降2 6 1 9 ( p 0 0 5 ) ，1 年后下降3 8 1 7 ( p o 叭) ，2 年后下降3 9 1 2 ( p o 0 1 ) 。治疗前后均有显著性差异”。周然报道决明子茶用于治疗高血压1 7 例，显效 6 例，有效6 例，无效5 例“。 ( 3 ) 治疗中老年便秘 魏秀元等用炒决明子开水浸泡代茶饮，治疗4 8 例便秘患者，结果1 个疗程治愈3 2 例， 2 个疗程治愈7 例，好转8 例，无效1 例，总有效率为9 8 ”。 ( 4 ) 治疗口腔溃疡 决明子煎水含漱，治疗口腔溃疡患者2 0 例，5 一1 0 d 溃疡面全部愈合，且各类型溃疡 病程均有不同时间的缩短，临床疼痛症状均有不同程度的减弱o “。 1 2 2 3 决明子的开发利用 ( 1 ) 决明子浸膏 决明子粉碎后经酒精回流浸提，过滤，减压浓缩得到膏状物。决明子浸膏一般用于 制药工业原料”“。 ( 2 ) 决明子食用色素 王海棠等。3 1 从决明子中提取出一种天然食用红色素，p h 8 9 水溶液呈现鲜艳红色， 水溶液在4 9 2 5 n m 处有最大吸收峰，具有较好的耐热性和耐还原性；k + 、n a + 、m 矛+ 、 c a “、3 + 对色素无不良影响，可与食盐、蔗糖、葡萄糖、淀粉等食品添加剂并用。产 品为暗红色颗粒，可在室温下长期存放。 ( 3 ) 决明子保健茶 决明子炒制后粉碎，同中低档绿茶混合后用水浸提，浓缩后喷雾干燥，制得速溶保 健决明茶，产品为棕黄色粉末，冲溶后汤色黄亮，香醇爽口，具有减肥保健效果“”。 1 2 3 利用生物工程技术培养决明及生产蒽醌类物质 决明子葸醌类成分的细胞培养生产最早见于1 9 7 5 年t 曲a t am a m o m 等的报道，其培 养小决明形成的愈伤组织，检测出最大总蒽醌占鲜重的o 3 3 4 ，比干种子高。周延清等 ”。以决明子无菌苗子叶为外植体，优化出最佳诱导决明愈伤组织的培养基和最佳的决明 生根培养基。王镨等”6 1 对由决明的胚轴、子叶诱导愈伤组织生长行为及其代谢产物关系 4 第一章绪论 进行了研究，确定决明愈伤组织最佳诱导条件并拟合出决明愈伤组织细胞液体培养的产 物动力学模型。常振战，果德安等“2 8 1 用叶盘法将发根农杆菌转化至决明子叶等外植体 中，诱导产生具有激素自主生长特点的r i 质粒转化根，在暗培养最佳周期后经h p l c 测出 转化根中芦荟大黄素等6 种游离葸醌成分含量是光培养时的2 倍多。 1 3 蒽醌化合物的研究现状 1 3 1 蒽醌化合物的分布和理化性质 蒽醌类化合物按其结构可大致分为两大类：大黄素型( 羟基分布在两侧的苯环上) 和茜草素型( 羟基分布在一侧的苯环上) 。葸醌及其衍生物在自然界植物中分布很广， 如百合科的芦荟，豆科的决明子、番泻叶，茜草科的茜草、鼠李，蓼科的大黄、虎仗、 何首乌、拳参。除高等植物以外，蒽醌化合物还存在于低等植物地衣和菌类的代谢产物 中。 天然中草药中葸醌化合物母核上一般都有酚羟基助色基团，因此绝大多数蒽醌化合 物都是有色晶体，取代的助色基团越多，颜色越深，有黄、橙、棕红色以至紫红色等。 游离的葸醌衍生物极性较小，一般可溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，基本上不 溶于水，而与糖结合成甙后极性显著增大，易溶于甲醇、乙醇、热水中，在冷水中溶解 度大大降低，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等极性较小的有机溶剂中1 。 1 3 2 蒽醌化合物的含量测定 ( 1 ) 比色分析 比色法测定总葸醌化合物含量的常用方法，一般以大黄素或1 ，8 二羟基蒽醌为标 准测定游离蒽醌或总蒽醌，结合蒽醌的量等于总蒽醌减去游离蒽醌。该法设备简单，易 于普及。比色法常有的显色剂有碱液和醋酸镁甲醇液“。碱液一般采用5 氢氧化钠2 氢氧化铵混合液，与蒽醌反应显红色( b o m t r a g e r 反应) 。醋酸镁反应一般是以甲醇为溶 剂，反应生成物于甲醇中溶解良好，并显红色。郭澄“实验证明b o m t r a g e r 反应所呈颜 色不稳定，日光下1 5 m j n ，吸光度即下降6 0 ，而醋酸镁反应所呈的红色灵敏度高，比 b o m t r a g e r 反应更为稳定，在目光下可保持1 h 内稳定，利于实际操作，同时杂质干扰也 少。由于羟基蒽醌及其甙大多具有黄色或橙色，利用差示分光光度分析法可以进一步提 高比色分析的准确度 1 4 。醋酸镁反应为许多国家药典( 如英国药典) 采用为含总醌类 植物药的法定分析方法。近年又有三氯化钛一分光光度法、荧光分光光度法和化学发光 法测定决明子中葸醌含量的报道。2 。 ( 2 ) 高效液相色谱法 江南大学博士学位论文 高效液相色谱法是目前分析葸醌化合物含量最普遍应用的方法。高效液相色谱法具 有灵敏度高，分析速度快，准确等优点。实验过程中一般采用c 1 8 反相柱，以水和甲醇 或水和乙腈作流动相，为改善分离效果经常加入少量甲酸或乙酸。一般以2 5 4n m 、2 8 0 砌、或4 4 0n m 作为检测波长“1 。 ( 3 ) 高效毛细管电泳法 高效毛细管电泳( h p c e ) 是离子或荷电粒子以电场为驱动力在毛细管中按其淌度 和分配系数不同进行分离的一种电泳新技术。宗玉英。”建立了h p c e 法测定大黄中大黄 素、芦荟大黄素、大黄酸含量的方法；纪松岗等3 以o 0 5 0m o l lh 3 8 0 3 一n a o h ( s d c ) ( p h = 1 1 ) 含o 0 2 5m o l ls d s 为分离缓冲液，采用电动毛细管色谱法测定了大黄中的芦荟 大黄素、大黄酸和大黄素；张国庆等”利用高效毛细管电泳法对何首乌中7 种葸醌类成 分大黄素甙、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酸甲醚、大黄酚、大黄素甲醚进行了 模拟混合分离，缓冲体系为2 5m ms d s ，1 0 乙腈( p h ：9 2 ) ，1 6m i n 内可完全分离h p c e 分析法进样量少，分辨率高，分离时间短，但其重现性较差，对分析工作者的实验技能 要求也高。 1 3 3 决明子中蒽醌化合物的提取 1 3 2 1 传统提取工艺 ( 1 ) 热水浸提法 热水浸提法即煎煮法，它操作简便，提取效率较高。近年来，国内学者对决明子煎 煮提取的加工预处理与提取条件的控制等因素进行了深入的研究。文献 4 0 一4 2 分别讨 论了温度、时间及样品粒度对蒽醌提取率的影响，结果认为，温度越高，时间越长，粒 度越小游离葸醌提取率越高。炒决明子比生决明子含量高。 ( 2 ) 有机溶剂提取法 一般采用氯仿“、甲醇“、乙醚“2 1 和乙醇“3 1 作为提取溶剂，在回流得条件下提取决 明子粉末中葸醌。有机溶剂萃取法是目前使用最广泛的方法，易于实现工业化生产。 1 3 2 2 现代提取技术 ( 1 ) 超临界萃取技术( s f e ) 林洁茹采用s c c 0 2 技术对决明子中葸醌类活性成分进行分离，并提出其萃取工艺 参数：压力2 0 m p a ，温度3 5 ，解析温度4 5 ，得褐绿色油状稠膏“。s f e 技术用于决 明子中主成分蒽醌的提取仅处于试验探索初级阶段，还有待于今后进一步的研究和探 讨。 第一章绪论 ( 2 ) 微波萃取技术( m e ) 微波萃取是中药有效成分提取的一项新技术。它对不同形态结构中药的提取有选择 性。冯年平等“”对决明子微波萃取法与常用提取方法进行了比较，发现m e 的提取率最高， 优于超声提取法，且是索氏提取法的3 倍，是水煎煮法的1 1 倍。m e 对中药决明子的提取 具有高效、节能、省时的特点，可以在中药制药中进一步推广研究。 1 3 4 葸醌化合物的生理功能 ( 1 ) 抗氧化作用 张海晖等指出大黄酸、大黄素、芦荟大黄素对猪油和豆油体系的脂质过氧化均有抑 制作用；当游离蒽醌及其衍生物浓度为8 0u