（食品科学专业论文）橄榄解酒护肝功能学研究及功效成分的分离与鉴定.pdf

霜建农林大掌掌位论文橄榄解蕾护肝功能掌研究a 功效成分的分离与l 定 一。 摘要 为了进一步开发福建特色果品资源橄榄，提升橄榄产业价值，本研究按保健食品功 能学评价程序对橄榄汁、橄榄汁透析后不同组分解酒护肝作用进行了研究，并用气质联 用仪定性和定量分析橄榄具有解酒护肝的功效成分及其含量。 1 研究了橄榄汁对体外激活乙醇脱氢酶和小鼠酒精性肝损伤的影响，结果表明：橄榄汁 能够显著地降低小鼠血清中过氧化脂质( l p o ) 含量，并显著地提高小鼠全血中超氧化 物歧化酶( s o d ) 活性；用不同剂量橄榄汁喂养肝损伤模型组小鼠3 0 d 后，高剂量组 橄榄汁喂养的小鼠，肝小叶结构正常，肝索以中央静脉为中心呈放射状排列，细胞呈多 面体、单核，偶见双核，核大且圆，位于细胞中央；中剂量组和小剂量组橄榄汁喂养的 小鼠，肝细胞结构基本正常，有轻度浑浊、肿胀、脂变；试验结果提示一定剂量的橄榄 汁具有解酒护肝作用。不同剂量的橄榄汁对乙醇脱氢酶的活性有不同的影响，高剂量 橄榄汁、中剂量橄榄汁、低剂量橄榄汁对乙醇脱氢酶的激活率分别为1 6 2 9 、1 5 0 8 、 1 2 7 2 ，说明橄榄汁剂量越大对乙醇脱氢酶的激活率越高。 2 橄榄汁经m d 2 5 ，分子量5 0 0 0 透析袋分离后，研究橄榄汁不同组分对体外激活乙醇脱 氢酶和小鼠酒精性肝损伤的影响，结果表明：橄榄汁透析液( 小分子) 能够显著降低 小鼠血清中过氧化脂质( l p o ) 含量、丙氨酸氨基转氨酶( a l t ) 活性、天冬氨酸氨基转 氨酶( a s t ) 活性，并显著提高全血中超氧化物歧化酶( s o d ) 活性和小鼠肝匀浆中谷 胱甘肽( g s h ) 的浓度( p o 0 1 ) ；用橄榄汁不同组分饲养肝损伤模型组小鼠3 0 d 后， 橄榄汁未透析液喂养的小鼠，肝细胞明显肿胀、坏死，胞质疏松，弥漫性气球样变，胞 质可见数量不一、大小不等脂滴空泡；橄榄汁透析液( 小分子) 喂养的小鼠，肝小叶结 构正常，肝索以中央静脉为中心呈放射状排列，细胞呈多面体、单核，偶见双核、核大 且圆，位于细胞中央，说明橄榄汁透析液( 小分子) 能够有效的保护小鼠的肝组织。 橄榄汁未透析液和橄榄汁透析液( 小分子) 对乙醇脱氢酶的激活率分别为3 0 2 和2 1 2 0 ， 提示橄榄解酒护肝的机理可能是通过橄榄小分子激活小鼠体内的乙醇脱氢酶活性。 3 通过气质联用仪对橄榄功效成分做定性和定量分析，研究出橄榄功效成分( 橄榄小分 子) 的组成及含量。结果表明：橄榄小分子中黄酮类物质含量最高，为4 0 1 ，主要包括 黄烷酮、异黄烷酮、异唑酮、苯基丁氮酮；醇类次之，为2 1 9 ，主要包括橄榄醇、双环 庚醇、苄醇；酸类，1 1 6 ；酯类，1 0 2 ；醛类，0 9 6 ；多晶质，0 4 ；酶最少，为0 0 6 。 此外还含有少量的没食子酸和其它类物质，这些组分构成了橄榄解酒护肝的主要功效成 分。 关键词：橄榄；解酒；护肝；功效；小分子：黄酮类 藕冀哥“长采啦群啦论文橄榄篇曙护肝糖麓掌崭兜嚣脯藏捌蕊p 的婶。卜弩鼍定 a b s t r a c t f o r t h e ；o f e x p l o i t i n ga n di m p r o v i n gt h e 、描u eo f o l i v ei n d u s t r yi nf u j i a ap r o v i n c e , s t u d i e so nt h ee f f e c to f o l i v e j u i c ea n dd i f f e r e n tc o m p o n e n t so f d i a l y z e dj u i c eo na n t l - a l c o h o l a n dl i v e r - p r o t e c t i o nw a s m a d ea c c o r d i n gt ot h ep r o c e d u r eo f t h ef u n c t i o n a le v a l u a t i o n t h e q u a i l t ya n dq u a n t i t yo ff u n c t i o n a lc o m p o n e n t sa b o u ta n t i - a l c o h o la n dl i v e r - p r o t e c t i o ni no l i v e w a sa n a l y z e db ys a t u m - 2 1 0 0 s t u d i e so ft h e 耐b do fo l i v ej u i c eo ne c t o g e n e s e da l c o h o ld e h y d r o g e n a s ea n da l c o h o l l i v e ri n j u r yw 黜m a d eo u lr e s u l t si n d i c a t e dt h a tl p oc o n t e n t si nm i s e 秘e n ds c l mw e f e r e d u c e dw h i l es o dc o n t e n t si nw h o l eb l o o dw e r ei n c r e a s e db yo l i v ej t r i c e a f t e r3 0 d sf e e d i n g l i v e ri n j u r e dr a i s eg r o u p sw i t hv a r i o u sd o s eo f o l i v e j u i c e ，t h eh e p a t i cl o b u l es t r u c t u r eo f m i s e w i t hh i g hd o s ew a sn o r m a l ；h e p a t i cc o r d d 试l yr a n g e d t h ec e n t e ro f n a v e lv e i n ，t h ec e l l s w e r ep o l y h e d r a l ，m o n o e y t i c ，o c c a s i o n a l l yd i k a r y o c y t e s t h ek a r y o n sw e r eb i ga n dr o u n d , i nt h e m i d d l eo fc e l l s 。l i v e rs 灯u c t u r eo fm i s ew i t hm e d i u md o s ea n dl o wd o s eo l i v ei u i c ew a s b a s i c a l l yn o r m a l ，l i g h t l yf e c u l e m , t u m i d , a d i p o s ed e t e r o p r a t l o n t h i sr e s u l ti n d i c a t e dt h a t c t s j na m o u n to f o l i v e j u i c e e f f e c t i v eo i lm a r l - a t c o h o la n dl i v e r - p r o t e e t i o n - v a r i o u sd o s e o fo l i v ej u i c eh a dd i f f e r e n te f f e c t so na l c o h o ld e h y d r o g e u a s ea c t i v i t y t h ea c t i v a t i o nr a t ew a s 1 6 2 9 f o rh i 痨d o s e ；1 5 0 8 0f o rm e d i u md o s e ；1 2 豫f o rl o wd o s e ，w h i c hd e m o n s t r a t e d t h a ta l c o h o ld e h y d r o g e n a s ea c t i v i t yg o th i g h e rw i t hi n c r e a s i n gd o s e s t u d i e so fe f f e c t so fd i f f e r e n t o l i v ej u i e e c o m p o n e n t s o n e e t o g e n e s e d a l c o h o l d e h y d r o g e n 器ea n da l c o h o ll i v e ri n j m yw 6 t em a d eo u tt h r e u g hi t s p a m t i o nb yd i a l y s i s p a c k a g e ( m d 2 5 ：m o l e c t d a rw e i g h t5 0 0 0 ) ，t h er e s d ts h o w e dt h a tt h ea c t i v i t i e so fl p o a 晓 a s 、i nm i s eb l o o ds e l a l l ：1 1w e r eo b v i o u s l yr e d u c e dw h i l es o d a c t i v i t yi nb l o o da n dg s h c o n t e n ti nh e p a t i cp l a s m i n c r e a s e dd i s t i n e t b , p 啪0 1 ) t h r o u g h d i a l y s a t eo f o l i v ej u i c e a f t e r3 0 d s f e e d i n gl i v e r 蛹u r e dm i s eg r o u p sw i t hv a r i o u sd o s eo fd i f f e r e n to l i v e u i c e c o m p o n e n t s ，r a i s ev a t hu n d i a l y z e do l i v ej u i c e , t h e i rh e p a t o c y t e ss w e l l e da n dp u t r e s c a n c e d ， e y t o p l a s t sb e c a m el o o s e ，t h en u m b e ro fc y t o p l a s tw & sv a r i o u s m a n yf a tv a c u o l e sc o m i ci n t o b c i 翟h e p a t i cl o b a t es t m e t u r eo fm i s ew i t hd i a l y z e do l i v ej u l c ew a sn o r m a l 。l t u p a f i cc o r d r a d i a l l yr a n g e d t h ec e n t e ro f n a v e lv e i n t h ec e l l sw e r e p o l y h e d r a l m o n o e y t i c o c c a s i o n a l l y d i k 8 l y o c y t 。s t h ek a r y o n sw e r eb i ga n dr o u n d , 班t h em i d d l eo fc e l l s t h e s ep h e n o m e n a i n d i c a t e dt h a td i a l y z e do l i v e j u i c ec o u l de f f e c t i v e l yp r o t e c tl i v e rs l m e t m eo f m i s e t h e a c t i v e r a t e so fu n d i a l y z e da n dd i a l y z e do l i v ej u i c ew e r e s p e c t i v e l y3 0 2 a n d2 1 ，2 0 w h i c h 班 耀建农椿太麟单位静裳擞槛蔫疆护精艟难枣崭巍撬确藏成分的分离与宠 _ _ _ _ _ - _ _ w p _ _ _ _ - _ _ _ _ _ f _ h 一_ ” h n w _ 一 i n d i c a t e dt h a tt h ep r i n c i p l eo fd i a l y z e do l i v ej u i c ea n t i - a l c o h o la n dl i v e r - p r o t e e t i o nw a s r e a l i z e d 班a c t i v a t i r 培r a i s e a l c o h o l 采粕的g 8 s t 霸q u a l i t ya n dq u a n t 鼢o fd i a l y z e do l i v ej u i c ew 8 sa | l a 母神db ys a t u r n - 2 1 0 0 ，w h i c h s h o w e dt h a tn l ec o n t e n to ff l a v o n o i di nt h em i e m m o l e c u t eo l i v ew a g4 + 0 1 、t h eh i g h e s t t h e m a i n c o m p o n e n t si n c l u d e dn a p h t h e n o n e ，s n t f l t p y r a z o n e , 西髑了l 奴渤脚n 。强es e c o n dh 喾臻s t w a s2 1 9 a l c o h o l s ，w h o m a i nc o m p o n e n t si n c l u d e do l i v ea l c o h o l ，d o u b l er 融g ，e n a n t h o i _ 玎l o w e s to r t ei se n z y m e , w h i c hi so 0 6 f u r t h e r m o r e , t h e r ew e r eg a l l i ca c i da n do t h e r si n o l i v e 。t h o s ei n g f 。l i e d 撼c o n s t i t u t e dt h em a i n l yf u n c t i o t m lc o m p o l l e n t so f 鞠6 吨 c o h 。la n d i i v e v p r o t e c t i o n 氇鹎缸o l i v e k e yw o r d s ：o l i v e ；a n t i a l c o h o l ；l i v e r - p r o t e c t i o n ；f u n c t i o n ；m i 口o m o m e u i e ；f l a v o n o i d 福建农林大掌掌位论文 械榄解酒护肝磅能掌研究及功效成分的分两与量冠 独创性声明 本人声明，所呈交的学位( 毕业) 论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的 研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的 地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献 的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行 为，由本人承担应有的责任。 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名：三爹锣簪当 日期： 删占，p 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位( 毕业) 论文的规定，即学校有权送 交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以 采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。厂 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名：夕多红涉 日期：卯占名，厶 指导教师亲笔签名：却莹移 晶期：卯多彳，l ， 疆慧碡棒犬嘏学位静必辙嘲臼黼护肝功麓枣崭兜戡莉盏成分的：扩角- 与簟i ，巴 第一章引言 乙醇的代逡笈毒性辘理的研究器霉 酒作为我国最大的消费品之一，受到广大消费者的青睐。据报道 t - q + 涌对人体具有 广泛的药理作用，适量瓣饮澄有益人体的健康，但急性大量的饮濮露i l 起恶心、暇畦、 记忆力减避，注意力不集中，严重对蒜至可困呼嚷飘h 4 1 麻痹导数弼亡。长期饮潘可； 起 精神障碍，褥溃疡以及酒糟肝、脂肪脬b 5 】、肝硬优等疾病。禹此，根据匕酵猩人体内的 吸收代谢，扦发有效解灏产品越来越受到社会的荚淀。 l 。l 乙醇在人体逛蔽牧代逡龅研究 据报邋n 6 】州，饮洒，特别是烈性洒，一般通过口腔、食管、胃、肠粘膜钵吸收到体 内的各种缱织器官巾，并于5 r a i n 后即可出现于血激中。待l j 3 0 - 6 0 m i n 时，l m 波中的溉精 浓凄裁可遮到最高赢，空疆歌酒谗骧对的吸收率要高褥多。弱露研究表鹱1 1 7 尹4 ，胃 内可吸收2 0 的酒，十二指肠则吸收8 0 。一次饮用的瓣6 0 子1 h 内吸收，2 h 可全部吸 收。l g 酒精全部氧化可产昝1 2 9 1 7 j 的能蛩，但这种能鬣绝大部分以热的形式释放出来，吸 收零j 用相越较溷难。滔精在人搏内氧化耱撵渣速菠疆馒，所以被缀收屠嚣装褒缸渡帮菩 粗织中( 脑缀织中的酒精浓度是血液酒糟浓度的1 0 储) ，其中顿少繁酒精没有氧化分解直 接经肾从尿中排出，或缝肺从呼吸道呼出，或经皮肤汗腺蒸发排除。绝大多数酒精主要 奁翳整中代谢f 1 8 ，经z i 醇髓黛酶f a d 哟分解瑟形成乙醛，然看麟盎乙蘩驻氧酶捧为辅酶 而转变为_ 乙酰辅酶a ，并且可进一步降解为醋酸赫而再氧化为c 0 2 和h 2 0 ；或通过枸檬酸 循环而转变为其它生化上蘑要的化合物。当谣精被转变为乙醛并谶一步转变为乙酰辅酶a 时，n a d 是个羲助因子釉氢接受体。产生的n a d i t 敬交了n a d h 弓n a d 的滗倒以及 艇腱的氧他述覆状态，鞘辩于半 l 耱耐餐减低，甘油三三1 合成增鸯疆，腊藕过氧化增加，参 与枸橡酸循环活力减低，这可能是脂腑酸氧化减低的原凶。n a d h 可能作为冈酮酸盐转 变为乳酸盐韵氢载体，饮淫最g l 酸盐及稼酸浓疫升蘸。l 藤赢上曾商饮镬后的低血糖疟及 埔城瘸发作翥，便可黥用这一枫理解释。此井，还霄一个微粒体己醇氧化系统( m e o s ) ， 这一酶系统熊被酒精诱导f 促进) ，表现翔电子显徽镜检查见到光霹内质列增搿三。 1 2 五酵毒瞧机理躲研究 据报道i 删，长藕过薰锾箍己酵，肝海乙醇代澍酶系被诱导合成加恢，其中主要是精 而内质网增生，导致m e o s 活性增强而使乙醛生成鼹增加，乙醇水平升高不明星。饮酒 后乙醇水平随时鲻延长聪堡壹线下降，两己醛浓瘦仍维持在较高的水平。乙翳程体内积 蓄，造成滑蕊晦羼疆增生，这样己醛就撺制了离俸扮纽胞线粒体静簸耗。在分离、纯他 的线粒体中，可见呼吸链上各种氧化酶的活性下降，线粒体体积膨大、变彤，晦膜道透 舶爿良棒j o 群阔目宣静，：橄榄翻 蕾护带姊摊群阔f 兜拽袖藏成分的分离帮印电 性增强，少数膨丈豹线粒体还会相互融爵箍成巨型的线粒体，这种线粒体键失了正常的 功能。出予瓤糕量藏步，裁睾巳磷酸他速度减慢，遴一步馕乏醛氧化减馒，导致己醛积累， 箕辩疆织损伤的程度避劳增强，强辨，过量酾z 酵可致鞋下代榭紊蔬 h o 】： 1 2 1 烟酰脒腺嘌呤二核酸( n a d h ) ，氯化态烟酰胺腺嘌呤二横酸( n a d l ) 比值升高 厶醇发已醛麓氢酶氧纯，消耗了夫爨的n a d + ，致接n a d h 辩h + 堆积，弼n a d + 不 足等致n a d h n a d + 强蘸升高；但由于臻筏体韵受撷及氧耗被抑制，r i 使n a d h 露巍 氧化减慢，糖酵解减慢；丙酶酸生械减少，草酰己酸也生成誉足，厶酰辅酶a 进入三 羧酸蓰受隰及氧他也减愎，遂就有利于耱臆酸合成； 翡臆酸蕊n a d 。不足氯纯毽减 漫，霞籍肪黻蔷积；秘q a d h 重耨氧纯减浸，孬蠖麟貔二羟蔼掰转变为a 辩黢嚣漓， 使甘油三醋合成增多。由于长期过量饮用乙醇，乙醇使脂库甘油兰兰酯水觯，向肝内输送 1 舫酸增强 己酵又磷特暴地增加对艟簸教消耗，易造盛勰碱供不波求，影鹅磷酸台成， 导致精蛋鑫台袋障碍，致搜翳缩藏孛瀚艚醛不舅输嬲，键傻籀虢拜糖形或。 1 , 2 2 乳酸，丙酮酸比值科、辩 由于n a d i i 重薪氧化减慢使n a d * 不足，不誊予乳酸髓氧转燮为丙醒酸，丙酮酸罐 燕，镭粟是；翳孛蘩异生甄褥鼗乏，液习壤空腹铰涟者，荔整垒甄盘糖矮陶 草蘸 乙酸生成减少，乙酰辅酶a 进入三羧酸彻底氧化减少，这不仅仅影响r 糖代谢也影响了 月肪及氨基数的彻底氧他。 1 2 3 舀鑫萋生成增期，清藤裁港耗垮多 机体芷常代谢产生少撼的自由基( r ) ，惹品醇极易与r 反应。乙氟蒸自由基 ( e 拼s o - ) ，皤w 与羟自由纂( o h 。) 作用，形成羟乙基自由鉴( c 眠e t 0 h ) 。这些自由慕均 可诱发距厦遗簌住反应，g j 起囊饕袋髓攫侥，导致翅胞缝掭及功能翦酸舔。诧并，急瞧 大量饮酒可能粗面内质网膜所结台的弗聚核蛋白体懈聚，丽使蛋誊i 质生物合成鼹抑。 1 3 解酒机蠼和解酒药物的研究 n q 1 3 。l 解淫桃蠼 l i 2 穗研究 通过研辩酒在体肉的代谢机理可以肴出，醉洒怒出于饮瀵过搬，超过了机体氧化漕 糖的速度，埘产生的蓄穰中毒。与滔糟代谢关系最为密切的两种魏是乙醇脱蜮酶( a d t o 期乙隧麓氢酶( a l d h ) ，若它懿活性强，臻滟齐垒+ 鬟琏a 不嚣醉，据体损伤邀枣。圜此o q “， 蠢关祥滔枫斑的研究氇楚秘绕乙醇麓戴臻和乙醛虢氯翡震开。 第一类解洒产品机理即是基于有效促进肝p - 4 5 0 酶a d h 和a l d h 等乙酵降解酶的 活力，船逮互t 熬降解两鲜毒，这类产品雾骥孛草药浸挺甥毙功蘸成分。 第二粪解酒产赫辊理避番篇特殊蚤囱分解酶永解鬣自质，璐戚小段j 抬虽由肚，蛋 自黯氍水解形成氨基酸，傻点渡中丙氨酸和亮氨酸浓魔提高，产生椽定n a d + ( n a d 楚 瑚蚺搠咄埔嶂位匏- 式樾枫肆尊r 护抒枇藏耩研囊 趣啪藏戚分的蔼离坷j 定 一个辅助嗣予和氢接受体) ，有效降低血中乙醇浓度。由于乙醇在氧化时，肝细胞施浆 觞n = m ) 1 4 jn a d + 比毽显著舞惠2 3 倍，造成德浆孛前氧 还艨电位发生馥变。氡蘸与 丙酮酸豹托值上升数倍，芷如l n 崔潍磷酸与磷鞭= 羟丙酮豹比值上升一样。乙醇氧讫 促使丙酮酸转化成乳酸，实际上可妨碍外加丙酮酸的氧化，线糙体内过量n a d h 抑制谷 氮醒鼗氢簿港程，彝样，n 臻戊二靛 罐爨璀酸酶鼹燮秘孳暴酸商荤醮乙酸鞠转变也帮受 到撺髑，这种改变的结粜使糖弊生反斑中至关重要的磷酸烯簿式薄酮酸柏台戒蹙耐黼抑， 血液中的糖寝降低，导致互羧酸循环和月s 肪氧化避礁的短暂减缓。j 匕外，灏鞘可通过减 少瓤痰中薅懿酸的释放搦剖器氯酸产生帮降低瞧浆中添氨黢滚麓。雕此，撬离璃萋酸浓 发，舂弱予飘基帮含碱耪飙飘诲审转纯巍翳脏，楚n a d + 蹙够和兰麓馥循环 粳删进行。 1 3 2 解酒产品的研究现状【1 1 3 】 醚着酒糟性嚣疯患者鲍增多，辫滔产晶的拜袭越寒越受到社会关注。爨蔼1 1 5 - 2 0 i ，霪 肉舞审场上的瓣溪产品主受分掰类。 其一，潲耩胃肠吸收抑制剂，邋避加强乙醇在辫舾道的首道教疵，降低斑中豹乙醇 浓崖。有关谢晒吸收掷锄荆，五加科橇鹈是研究最多抟一类植物。谴大鼠暇蹋己醇朝夫 参求提取物詹，整爨发现绦药缓六鬣盘中乙葬滚瘦弱显低子对照缀，翦疆驻注瓣帮竣有 这种效果，可见人参水摄取物可通过抑制乙醇吸收戡加强胃肠道甜过效应发挥解酒作用。 目前1 2 ”“，园证实产生妣种作用的主要成分是皂斌粪。另蠢资料报道【i 1 4 1 1 2 7 删，牛艟汁 中辩学磺酸西延迟雷擗空积掷镂乙醇穗精莲鹣疆收。 其二，酒精代谢增强剂，药物直接作用于肝彳弋谢酶系，加避芷醇及其代谢产物的排 除速率，减轻矮对组织的细施擐害。葛裰和葛花悬渡类产最中鼍巽糍代表性的解酒药糍。 璃代辩突进蛹瑚3 天骚霭艺醇曩，墓藏西森姣麴降低盘孛艺醇浓度。寿饔辩辫0 1 辫疆薹 菇为主的隧激保健品“葛施露”进行讲究，鼠轩乙醇代谢体外实骑中，乙醇+ 蔼辘露缀乙 醇的代谢量悬单纯乙醇鳃代谢量的1 3 侬。这提示葛托可以在加强乙醇代瑚环节发挥作 瓣。蠢本学者磷究 1 1 6 p “4 蔫蓬麓艺簿g l 起天体托罐器鬻鲢影螭，缝翻籍蔫獯瓣单蘸 提取错避行势离，对各个槲效部位进 乎翁理研究。绪幂袭艰，其中甲醇提取糊和包含于 其中的异黄黼豢成分能够翱愫z 醇盼代谢逛度，抑制嚣醇诱导小飙珈糖和甘油曼醋舟高。 2 擞撬翡繇健功效飘开发现状狲键 茹。l 裰褴鹣医疗豫犍价德 橄榄 c a n a r i u ma l b u m ( l o u t ) r a e u s c h ，亦称青粜、青榄、白榄，为橄榄科( b u r s e r a e e a e ) 橄榄辎麓登热常绿性赛本嚣紧宴，厦产于申蓬寓熬缝诞。攘橙暴实为辩强形，釜毒瞧， 菸主要箍群帮疆香、惠秘、公本、刘羧本、下溪奉、自来酗、长酱、擅头、苹僳等。荫 翦州，橄榄主鼹分雍在广家、祸建、广砾、台湾、翻川、浙江和嚣南等省区。橄榄中含 械辘# 并护舯糖麓事崭辩孰辅藏戚分岫劈荐岢l 崽 有多种营养f 1 2 0 】忧学成分肿1 ，其有丰鬻的营莽价谯和医疗保健律阁。在表带、增补 奉孳备要、本草缨髫、翻华子本簿中都对擞橇的蓦疆赞缀袋 其俸的擒述，阐稿 了被携翼商消滔解毒、清翻生滓，黪湍瞩嚷痛，有开冒、i - 气，j 泻等功教。现代科学 证明了橄榄以下的保健功散： 2 ，1 i 防霹箨藏作用p 2 1 裳剑剐、女日昕、溺袋簿。葛邈过m t t 法和培葬授连续稀释法辩究了穰橇澍凡种常觅镝 藏、霉箧利酵母蘧的抑制散应。结果辩明，橄榄浸搬液对大肠栉鞫、金黄色葡蔼球菌、 禧革耔藿、酿酒酵母、爨没逊酵母、熊蘸霉、黄瞎霉、黑栈霉簿渐萤具有撺测作用。 2 。1 + 2 渍疗粥喉黪瘸 t 2 2 嚣霸 郭少武静卅对青果片治疗急性咽炎进行了临床观察。结果表明，橄榄汁能蟛有效减轻 患者惫性咽炎的症状，其霄治疗咽喉肿瘫的作熙。撼糍段文军、孔庚壁报遴1 ，这辫藏 栗与赣橙中齿蠢丰富辫钙宙美。钙臻律舞骨癀皇簧拇或并，还鼹增加毛细疯蛰致密凄。 降低其通遴性，减少渗出，具挠炎、消强申、抗组胺作用，这与橄榄能治疗嘲喉劫效相符。 2 1 3 防止心血管疾病t m 作耀 段文军、耗囊星 删铡定了毒鬃中掰禽静豢蚤元囊，共研究丁箕雷量与堍效游美系。 特果表弱，橄榄中除含丈撬的锣外，逐村丰富的钾和镁，此3 种元索与高廊腻等心疯管 疾病毒关。钙可削弱血营的反应性，抑制血管对丧甲肾上腺素等的搬压反映：镁是鳃胞 内重耍幕离予，镁含量蠢可随盘心盘管缝缎薄有害元素摇锅、锈国鼹瞧，臻孬霹鞋曝轳 心血管不受搬害。 2 1 ，4 抗h b s a 槲b e a g 惟用 1 2 4 】 藐庚鬟、辩琵实、张鑫等1 4 “鼍对搬髓撬强塞a 簖 b 醯g 露研究裹暖，擞撩中没食子 敬具有抗f i b s a 簖- m e a g 髂功效。没赞予酸是一种被证明的重要活性物顼，将没食子酸 与临床常用的抗己肝中药$ 4 荆云芝肝豢、乙肝宁、己肝冲剂在相间的条件f 进行实验， 缡果显示设赣予酸藐秘曼a 酗g 麓教票擐于乏群宁、不器摔裁莓| ： 云芝琵索。 2 2 裰榄翔工产品静歼发现袄1 1 2 s 撇槐作曲食品原料，属于特种魇 | l l ，是营葬繁宙量全面、合理和具省多种医疗 僳毽琏裁鲍食蘸。据擐道嘲j 每l o 链撇楗皋瘫禽锈2 0 4 r a g 、嚣艟6 5 5 9 ，辩撬仁蠹蛋 鑫囊1 6 6 4 、g 精5 9 。蚪。藏井辙撩中还含毒丰富鹈维生豢鞫钙。虽然擞横其有缀 高的开发价值，但是由于 们射橄榄保健功效的认识不足和技术歼发水平的制约，使橄 榄曲开发仅停霹在糨拯王阶段。鞋翦歼缝糖撤榄系剜产品“8 眷： 2 2 ，1 藏裰耩 由于橄榄孵果不易橼时间储藏，胼默橄榄果实采摘后般毙阚食赫腌糊+ 鼷于，制 4 福冀密韩夫掌掌位论文橄榄解蕾护肝功艇掌研究a 糖敲成分的分离茸囊定 成碱橄榄。戚橄榄可傈存l 2 年不变质，一般作为蜜饯加工原料( 碱橄榄坯) ，也可直 接用于销售。 2 2 ，2 橄榄蜜饯 蜜饯是橄榄加工的传统产品，是必橄榄和食糖为主要原料加+ t 。而成。橄榄蜜饯作为 休闲食品深受消费者的喜欢，近年来，蜜饯制作工艺不断更新，新开发出许多新品种， 如：大福果( 千态凉果) 、和顺橄榄( 黑褐色，昧甘甜爽口，略有原果风味) 、去皮酥、 十香橄榄、捶花橄榄等。 2 2 3 冰橄榄 球橄榄是橄榄加工的新产品，是以新鲜橄揽为原辩，采用酶法去皮工艺，结合低温 渗糖和速冻工艺制作而成。酶法去皮工艺很好地解决了橄榄果皮i 易主除的问题，而低 温渗糖技术很好地保存了橄榄原有的风味，最大限度地保存了橄榄的营养成分。 2 2 4 橄榄洒制品 橄榄滔是以橄榄为原料，利用现代生物技术，经发酵特殊工艺酿制，精心勾兑调味 而成的发酵酒。橄榄发酵酒分橄榄全果发酵和橄榄纯汁发酵，橄榄酒生产也可用橄榄果 直接浸泡粮食滔。橄榄酒在人体保健功能、口感、色香味等方面均有其独到之处，足可 与葡萄酒相媲美。 2 3 橄榄解酒护肝的哿 究现状l b 6 】 橄榄的解酒功效在农书、增补本草各要、本草纲目、同华子本草中都做 了具体的描述。但未见有现代科学对橄榄单一组分解酒护肝研究的相关报道，国外剥橄 榄的研究主要是油橄榄i 舶删。因此，h 前国内外对橄榄单一组分解酒护盯的研究仍是空 白。但是目前国内已宥学者开始关注橄榄的解酒护肝功效，以下是对以橄榄和枳棋子组 成的橄榄解滔饮为原料，研究了橄榄解酒饮对小鼠急性滔精性肝损伤的影蚋。 2 , 3 1 彭勃，苗明二，王颖芳等1 5 0 人以橄榄和枳棋子组成的橄榄解酒饮，研究了橄榄解酒 饮对 1 2 7 小鼠急性酒糟性肝损伤的骑治效果。结果表明：以橄榄和杭梗子组成的橄榄解 酒饮可显著降低疵清a k t 、a s t 及肝脏组织a u 、水平，改善肝组织病理状态，促进肝细 胞损伤恢复。 23 2 彭勃，凿明三，朱平生，王颖芳川等人以橄榄和枳棋子组成的橄榄解洒饮研究了 不掏翔量撇撬解溪饮对小鼠急性酒精性新损伤胃肠组织病理学的影响。结果表明，橄榄 解酒饮大剂量组胃肠粘膜充血不明显，腺上皮出现轻度脱落；中小剂量组粘膜各层已基 本恢复正常，说明檬撬解淫钦有良姆雏保护胃肠邋粘膜的作用。 2 3 3 彰勃，苗明三，朱平生，王颖芳”蝽人以橄榄和枳棋子组成的橄榄解涌饮，研究了 撇榄解酒饮对大鼠急牲酒耩性瓣损伤羟f 细胞超微结构影响。结果表明，被榄解酒饮能是 疆建农林犬掌掌位论文橄榄躺l 薯h 产肝功能掌研兜a 功藏成分的分离与 定 著保护肝细胞线粒体，促进肝细胞代谢，增强细胞功能，对急性酒精性肝损伤有显著的 保护作用。 2 4 本项目研究的目的及意义 中国有着悠久的酒文化历史，“无酒不成席”，无论是家庭中的婚丧嫁娶，还是工作 中或生活中的送往迎来，都少不了频频举杯，甚至一醉方休。但饮酒过量会严重影响人 们的身体健康，急性大量饮酒可引起恶心、呕吐、记忆力减退、注意力不集中，严重时 甚至可因呼吸肌麻痹导致死亡。长期饮酒引起精神障碍、胃溃疡以及酒精肝、脂肪肝、 肝硬化等疾病。因此，寻找有效的解酒方法，开发各种解酒产品受到越来越多的关注， 成为科学研究的热点。 橄榄 c a n a r i u ma l b u m ( l o u r ) r a e u s e h ，亦称青果，为橄榄科橄榄属植物，是南方 珍稀果品之一，已被列入卫生部首批既是食品又是药品的物品名单。在我国已有2 0 0 0 多 年的栽培和利用历史，它不同于国外的油橄榄( o l c ae u r o p a e al ) 。其药用价值在我国传 统中医典籍中多有记载，本草纲目记载其能“开胃下气，止泻生津液，止烦渴，治咽 喉痛”；滇南本草记之橄榄能“治一切喉火上炎，大头瘟症，解鱼毒、酒、积滞”。 橄榄作为一种重要的特色资源具有很高的市场开发价值，目前国内对橄榄的开发主 要集中于蜜饯产品或咸胚半成品，产品形态单一，无法充分利用橄榄的保健价值，这严 重制约了橄榄产业的发展，随着消费者健康意识的不断提高，已不满足于橄榄粗加工产 品的消费。因此，如何有效地利用橄榄这一天然植物的保健功效，开发适合健康消费潮 流的产品，丰富橄榄深加工产品品种成为当务之急，而对橄榄功能学作用的研究和功效 成分的筛选是基础。本课题的研究将为橄榄保健功效的利用提供科学的理论依据。 福建农林大掌掌位论文橄榄解洱护肝功能掌研兜a 功效成分的分离与l 定 第二章橄榄汁解酒护肝动物实验研究 摘要：目的：观察橄榄汁对小鼠急性酒精性肝损伤的防治效果和橄榄汁对乙醇脱氢酶激 活率的影响。方法：按照保健食品功能学评价程序，采用白酒灌胃法造模，连续3 0 d 后， 检测小鼠血清脂质过氧化( l p o ) 值和小鼠全血的过氧化物歧化酶( s o d ) 的活性，制 作肝组织病理切片，关镜下观察；并用瓦勒一霍赫( v a l l e & h o c h ) 法 1 2 8 1 体外激活乙醇 脱氢酶。结果：与阳性对照组相比，一定剂量的橄榄汁能够显著降低小鼠血清的脂质 过氧化( l p o ) 值和提高小鼠全血的过氧化物歧化酶( s o d ) 的活性，有效地保护小鼠 肝组织：橄榄汁能够有效的激活乙醇脱氢酶，且橄榄汁剂量越大乙醇脱氢酶激活率越 高。结论：橄榄汁具有良好的防醉、解酒护肝和体外激活乙醇脱氢酶的作用。 关键词；橄榄；解酒；抗氧化护肝 橄榄 c a n a r i u ma l b u m ( l o u r ) r a e u s c h 是福建省特色果品资源，被列入卫生部首批 既是食品又是药品的物品名单，具有很高的市场开发价值。但由于目前对橄榄的保健功 效基础研究相对滞后，对橄榄的利用仅限在粗加工，无法充分体现橄榄的保健价值。为 了更好地开发利用橄榄保健功效，提升橄榄的产业价值。本文以橄榄汁为原料，对橄榄 汁解酒护肝进行了动物实验研究，为进一步开发利用橄榄资源提供了科学的理论依据。 1 材料与方法 1 1 材料与仪器 1 1 1 材料与药品 橄榄鲜果，购自福州大世界橄榄有限公司，品种为惠圆、长营、小惠圆； 药品：标准葡萄糖、6 苯酚、浓硫酸、丙酮、氯化铝、三氯化铁、邻苯三酚、双蒸 水、甲醇、t b a 溶液、l t e p 标准液、冰醋酸( 市售分析纯) ； 氧化型辅酶i ( m 气d + ) ( 购自中国医药集团上海化学试剂公司) 、乙醇脱氢酶( 购自 s i g m a 公司) ： 二锅头( 红星牌) 市售； 解酒护肝胶囊( 胆维他) 市售： 试剂盒南京建成生物工程研究所。 1 1 2 实验动物 昆明种小鼠，体重1 8 2 2 9 ，由福建医科大学实验动物中心提供，动物品种品系i c r ， 等级c l ，动物合格证号：s c x k ( 闽) 2 0 0 4 0 0 0 2 。 1 1 3 主要仪器 2 0 0 0 型u v - 2 0 0 0 型分光光度计尤尼柯( 上海) 仪器有限公司； 7 福建审淋大掌掌位论文橄榄黛l r 护肝功能孽崎竞覆功藏成分的分离- 茸 定 7 2 3 0 g 数显分光光度计上海分析仪器总厂； 高速混匀器i l ( a 公司； 电动玻璃匀浆机宁波新芝科器研究所； f 4 5 0 0 荧光分光光度计日立公司； 回转式切片机上海仪表厂： 梅特勒一托利多a b 2 0 4 一n 电子天平梅特勒一托利多仪器( 上海) 有限公司； t d l 5 型低速台式大容器离心机上海安亭科学仪器厂； d s 1 型高速组织捣碎机上海精密仪器仪表有限公司； 求精微量移液器广州器化医疗设备有限公司； 恒温水浴锅国华电器有限公司； p h s 3 c 型精密p h 计上海精密仪器仪表有限公司。 1 2 方法 1 2 。1 橄榄汁的制取 鲜橄榄一去蜡皮一清洗一去核一打浆一滤布粗滤一高速离心过滤一橄榄汁 1 2 2 橄榄主要成分的测定 1 2 2 1 橄榄多糖的测定 标准曲线溶液的配制：精确称取经干燥的标准葡萄糖2 0 m g ，用蒸馏水定容至5 0 0 m l ， 分别吸取0 2 、0 4 、0 6 、0 8 、1 0 、1 2 、l _ 4 、1 6 m l ，各加入蒸馏水至2 o m l ，加入 6 苯酚溶液1 0 m l ，再迅速加入浓硫酸5 o m l ，显色后在冷水中冷却，在波长4 9 0 n m 处测 定吸光度，以蒸馏水代替糖溶液作空白对照。 样品的测定：上述不同品种的橄榄浸提液中，取“长营”5 8 m l ，“惠圆”6 1 m l ，“小 惠圆”6 0 m l 。加入5 倍的乙醇沉淀，沉淀后离心，将得到的沉淀溶于水，于1 0 0 m l 容量 瓶中定容，为待测液。吸取待测液1 0 m l ，按同上的步骤测定，测吸光度，以标准曲线计 算多糖含量。 1 2 2 2 橄榄多酚的测定 分别吸取上述不同品种的鲜橄榄汁l m l 于1 0 0 m l 容量瓶中，依次加入2 m l0 1 0 0 m o l l f e c l 3 ：2 m lo 0 0 8 m o l f lk 3 f e ( c n 6 ) 2 m lo 1 0 m o l 1h c l ，定容至刻度。用l c m 的比色杯， 在6 9 5 n m 波长处，测定吸光度。用单宁酸为标准物作标准曲线。 样品的制备：吸取“长营”橄榄汁5 m l 用5 0 r e t o o l 1k h 2 p 0 4 - n a o h 缓冲液透析1 6 h ， 得到的透析物稀释定容至1 0 0 m l 。吸取“惠圆”橄榄汁5 m l 用5 0 m m o l lk h 2 p 0 4 一n a o h 缓冲液透析1 6 h ，得到的透析物稀释定容至1 0 0 m l 。吸取“小惠圆”橄榄汁5 l 用5 0 m m 0 1 1 k h 2 p 0 4 - n a o h 缓冲液透析1 6 h ，得到的透析物稀释定容至l o o m l 。 苎兰! 竺查竺竺苎竺查苎苎苎竺竺兰苎竺! 兰墨兰苎苎竺竺竺! ! 竺兰 邻苯三酚自氧化速率的测定：在室温( 2 0 。c 2 2 。c ) ，取5 m l ，5 0 m m o l l ，p h8 2 的 t r i s h c l 缓冲液，加5 m l5 0 m m o l l 的邻苯三酚溶液，摇匀，在3 2 5 n r n 下立即测定。每隔 0 5 分钟测光密度一次( 以p h8 2 的t r i s h c l 缓冲液为空白) 。自氧化速度控制在0 0 6 0 0 0 6 5 0 d m i n 。( 一般以测定3 5 m i n 平均计) 1 2 2 3 总黄酮的测定 分别吸取上述不同品种的鲜橄榄汁0 5 m l ，加1 a 1 c 1 3 的蒸馏水溶液至1 0 m l ，摇匀， 1 0 m i n 后比色。用l c m 的比色杯，在4 2 0 n m 波长处。以i a i c l 3 溶液为空白，测定消光 度( e ) 。 根据消光值等于1 时，相当3 2 0 1 tg 酮甙计算总黄酮含量： e 3 2 0珞5 0 黄酮甙( m g g ) 2 五万卫v x m 0 5 x l 式中：e 样品消光度；v 总样品总溶液量( m 1 ) ； v 吸取的样品量( m 1 ) ；m 一样品质量。 1 2 3 橄榄汁激活乙醇脱氢酶的体外实验 乙醇脱氢酶活性测定方法：采用瓦勒一霍赫( v a l l e & h o c h ) 法【1 2 9 1 5 3 】并稍加改良后 检测乙醇脱氢酶活性。在测定管中加入焦磷酸钠缓冲液1 5 m l ，混合后在2 5 | 。c 下，加盖 温育5 m i n 。温育后的测定管立即加入乙醇脱氢酶o 1 m l ，摇匀后立即用分光光度计测定 吸光度( a 3 4 0 ) 值，以后每隔1 0 s 读数一次，连续测定5 m i n 。以对照管调定零点，不加 药物的反应组为测定乙醇脱氢酶活性的空白对照组。 乙醇脱氢酶活性计算方法：以a 对时间作图，取反应最初线性部分，计算a 3 4 0 n m 1 0 s 的增加值，根据n a d h 在3 4 0 n m 处的摩尔消光系数为6 2 计算酶的活力单位。a d h 的 活性以每分钟n a d h 生成的纳摩尔数表示。 抑制( 激活) 率计算： 抑制( 激活) 率( ) = i 酶活性无药对照组- 酶活性加药测定组l 酶活性无药对照 组x 1 0 0 上述每种中药实验均重复3 次，