（食品科学专业论文）番茄中乙烯信号转录因子LeERF1和LeERF2调控机制研究.pdf

摘要 卡i 【物一p 内源激素乙烯影响植物的生长和发育。调控乙烯反应是由乙烯信号转导途径米完成 的。乙烯反应元件结合蛋白( e r e b p s ) 是乙烯信号转导途径中的下游传递元件，在植物中通过 调控相关基囚的转录和表达来调控乙烯反应。l e e r f l 和l e e r f 2 基因属于e r e b p s 家族成员，含有 典型的e r f 结构域。为了进一步研究它竹j 的调控机制，本论文做了以r 几方面工作： ( 1 ) 克隆和鉴定彪w f ，平口p 翻f 堪因：通过r t - p c r 方法从破色期番茄果实中克隆l e e r f l 7 f 1 1 l e e r f 2 基因p c r 产物被亚克隆剑原核= 挺达载体p e t - 3 0 a 上，在大肠杆菌b l 2 1 中筛选到含有目 的基因的重组质粒p e t - l e e r f l 和p e t - l e e r f 2 。 ( 2 ) 表达和纯化l e e r f l 和l e e r f 2 蛋白：在大肠杆菌b l 2 1 中分别表达外源蛋白l e e r f i 和 l e e r f 2 ，采用诱导温度为3 7 。c ，诱导剂i p t g 浓度为l m m o l l ，诱导时间为3h 。l e e r f l 和l e e r f 2 衷达蛋白在细菌沉淀中约占菌体总蛋白5 3 u5 8 。应用n i - n t a 亲和层纯化回收l e e r f l 和 l e e r f 2 表达蚩白纯度分别为9 6 和9 9 。凝胶阻滞实验表明，l e e r f i 和l e e r f 2 表达蛋白均具 有与g c c 盒结合特性。 ( 3 ) 制备抗l e e r f i 和l e e r f 2 多克隆抗体：免疫兔子制备抗l e e r f l 多克降抗体和抗l e e r f 2 多克隆抗体效价均大于1 0 0 0 0 ，经过d e a e 一5 2 离子交换柱纯化它们纯度分别达剑r9 8 0 d 矾9 9 。 w e s t e r nb l o t t i n g 检测表明，抗l e e r f i 多克隆抗体和抗l e e r f 2 的多克隆抗体均具有免疫特异性。 ( 4 ) l e e r f l 亚细胞定位：通过胶体金免疫电镜定位的方法分析番茄果皮维管组织中l e e r f i 的亚细胞分布状况。副f 究表明l e e r f l 蛋白主要分布在细胞核( n ) 、细胞核仁州u ) 和质体( p ) 等部位，i m 在细胞壁( c w ) 和液泡( v ) 上几乎没有分布；破色期f f ；茄果实中，l e e r f i 蛋白在细 胞核( n ) 、细胞核仁( n u ) 和质体( p ) 中含量明显比绿熟期甭茄果实增多。w e s t e r nb l o t t i n g 表 明，破色期番茄果实中l e e r f l 蛋白含晶比绿熟期番茄果实中l e e r f l 蛋白含量有明显增加。试 验结果表明，l e e r f l 与芥茄果实成熟卡日关。 ( 5 ) l e e r f l 结台启动子的分离和功能鉴定：通过l e e r f i 蛋白一d n a 体外结合实验，克隆 了艮度分别为8 9 3 b p 和7 3 4 b p 的t l b p i 和t l b p 2 两个基因片断，它们部含仃a g c c g c c ( g c c 盒) ，其中皿丑p ，含有典型t a t ab o x 和c a a tb o x 。g e n b a n k 比对结果表明，t l b p l 和t l b p 2 基因片段与编码番茄几丁质酶a y 3 4 3 0 5 8 a y 3 4 3 0 5 9 a y 3 4 3 0 6 0 的启动子基因在核甘酸水平上同 源性达到8 0 以上。 ( 6 ) l e e r f l 蛋白和番茄果实病程胁迫的关系：采用番茄青霉菌( p e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n k ) 侵染绿熟期、破色期、粉红划和红熟期丽春番茄果实。研究表明，l e e r f l 随乙烯释放量的变化 而变化，在蛋白水平受乙烯调控；l e e r f i 蛋白与编码几丁质酶l e c h l l 7 基m r n a 水平变化 趋势基本一致；l e c h l l 7 基冈m r n a 水甲与几j 质酶酶活具有相关性。试验表明，l e e r f l 可 能庄蛋白水平通过调控l e c h i i7 基冈的转录和翻译参与番茄果实的病程胁迫反应。 关键词：番茄，乙烯，信号转导，病程胁迫，e r e b p s a b s t r a c t e t h y l e n ei s a ne n d o g e n o u sp l a n th o r m o n et h a ti n f l u e n c e sm a n ya s p e c t so fp l a n tg r o w t ha n d d e v e l o p m e n t c o n t r o lo fe t h y l e n er e s p o n s e si sc o n d u c t e db ye t h y l e n es i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a y e t h y l e n er e s p o n s i v ee l e m e n tb i n d i n gp r o t e i n s ( e r e b p s ) a r et r a n s c r i p t t o n a lf a c t o r sf u n c t i o ni nt h e e t h y l e n es i g n a l i n gp a t h w a yi np l a n t s ，h e l p i n gt or e g u l a t ee t h y l e n er e s p o n s e sb yr e g u l a t i n gg e n e s t r a n s c r i p t i o na n de x p r e s s i o n l e e r f ia n dl e e r f 2a r ei d e n t i f i e da sm e m b e r so ft h ee r e b p sf a m i l y , c h a r a c t e r i z e db ，ac o n s e n , e de r fd o m a i n i no r d e rl of u r t h e re x a m i n et h e i rr e g u l a t i o np a t t e r n s ，s o m e w o r k sh a v eb e e nd o w na sf o l l o w s ( 1 ) c l o n i n ga n di d e n t i f i c a t i o no fl e e r f ia n dl e e r f 2g e n e ：t h ee n t i r ec o d i n gs e q u e n c e so f l e e r f ia n dl e e r f 2w e r ec l o n e db yr t - p c rf r o mb r e a k i n gt o m a t of r u i t t h ep c rp r o d u c t sw e r e s u b c l o n e di n t op r o k a r y o t i cp r o t e i ne x p r e s s i o nv e c t o r sp e t - 3 0 at og e n e r a t et w or e c o m b i n a n tp l a s m i d s p e t - l e e r f ia n dp e t - l e e r f 2i ne c o l ib l 2 1 ( 2 ) e x p r e s s i o na n dp u r i f i c a t i o no fl e e r f ia n dl e e r f 2 ：l e e r f la n dl e e r f 2p r o t e i n sw e r e e x p r e s s e du n d e r1 0 r a mi p t gi n d u c t i o nf o r3ha t3 7 。ci ne c o f ib l 2 1 t h ee x p r e s s i o nl e v e lo f l e e r f lw a sa b o u t5 3 o ft o t a lc e l l u l a rp r o t e i n s a n dt h ee x p r e s s i o nl e v e lo fl e e r f 2w a sa b o u t5 8 o f t o t a lc e l l u l a rp r o t e i n s t h ep u r i f i c a t i o nl e v e lo f l e e r f lw a sa b o u t9 6 p u r i f i e db yn i - n t aa g a r o s e c o l u m n ，a n dt h ep u r i f i c a t i o nl e v e lo fl e e r f 2w a sa b o u t9 9 p u r i f i e db yn i - n t aa g a r o s ec o l u m n l e e r f ia n dl e e r f 2r e c o m b i n a n tp r o t e i nh a v eg c cb o xb i n d i n ga c t i v i t yi d e n t i f i e db ye l e c t r o p h o r e t i c m o b i l i t ys h i f ta s s a y , ( 3 )a n t i - l e e r f la n da n t i l e e r f 2p o l y c l o n a la n t i b o d i e s ：t h ea n t i l e e r f la n da n t i l e e r f 2 s e r u mw e r eo b t a i n e db yi m m u n i z i n gr a b b i t s a n dt i l e ro fe i t h e ra n t i l e e r f ls e r u mo ra n t i - l e e r f 2 s e n l mw a sa b o v e10 0 0 0 t h ep u r i f i c a t i o nl e v e lo fa n t i - l e e r f lp o l y c l o n a la n t i b o d yw a sa b o u t9 8 p u r i f i e db yd e a e 一5 2i o n - c o l u m n a n dt h ep u r i f i c a t i o nl e v e lo fa n t i - l e e r f 2p o l y c l o n a la n t i b o d yw a s a b o u t9 9 p u r i f i e db yd e a e 5 2i o n c o l u m n b o t ha n t i - l e e r f2a n da n t i l e e r f 2p o l y c l o n a l a n t i b o d i e sh a ds p e c i f i ci m m u n i z a t i o nf u n c t i o n d e n t i f i e db vw e s t e r nb l o t t i n g ( 4 )s u b e e l l u l a rl o c a l i z a t i o no fl e e r f i ：l e e r f lw a ss u b c e l l u l a rl o c a l i z e d b y t h e i m m u n o c y t o c h e m i c a ll o c a l i z a t i o ni nv a s c u l a rt i s s u e so ft o m a t of r u i t l e e r f lw e r em a i n l yl o c a l i z e di n t h en u c l e u s ( n ) 、n u c l e o l u s 州u ) a n dp l a s t i d ( p ) ，a n dl i t t l el e e r f is i g n a lw a sd e t e c t e di nt h ec e l lw a l l ( c w ) a n dv a c u l o e ( v ) d u r i n gt h ep h a s eo f i m m a t u r eg r e e ns t a g e ( i g xt h e r ew e r eaf e wl e e r f ii nt h e c e l l so ft o m a t ot i s s u e s a st h ed e v e l o p m e n t ，t h es i g n a lo fl e e r f ii n c r e a s e do b v i o u s l yi nt h en u c l e u s ( n ) 、n u c l e o l u s ( n u ) a n dp l a s t i d ( p ) t h e r ew e r el a r g e rl e e r f ii nb r e a k i n gt o m a t of r u i tt h a ni ng r e e n t o m a t of r u i ti d e n t i f i e db yw e s t e r nb l o t t i n g t h ee x p e r i m e n t ss h o w e dt h a tl e e r f ih a dr e l a t i o n s h i pw i t h m a t u r eo f t o m a t of r u i t ( 5 ) s e p a r a t i o na n di d e n t i f i c a t i o no fl e e r f lb i n d i n gp r o m o t e r s ：t l b p la n dr z 日| d 2w e r e c l o n e db yt h eb i n d i n gm e t h o do fl e e r flp r o t e i n - d n ai nv i t r o t h es e q u e n c eo f 住口p w a s8 9 3 b p ， a n dt l b p 2w a s7 3 4 b p b o t ht l b p la n dt l b p 2a l 、h a dg c cb o x a n dt l b p lh a dt a f ab o xa n d c a a tb o x t h ea l i g n m e n ts h o w e dt h a tl e e r f ia n dt l b p 2w e r eh o m o l o g o u sw i t ht o m a t op r o m o t e r g e n e so fa y 3 4 3 0 5 8 a y 3 4 3 0 5 9 a y 3 4 3 0 6 0 ，w h i c he n c o d e dc h i t n a s e ，w i t ha b o v e8 0 s i m i l a r i t ya t n u c l e o t i d ea c i ds e q u e n c el e v e l ( 6 ) r e l a t i o n s h i pb e t w e e nl e e r f ia n dp a t h o g e no f t o m a t of r u i t ：t o m a t of r u i t s a tt h es t a g eo f g r e e n 、b r e a k i n g 、p i n ka n dr e df r u i t s ，w e r ei n f e c t e db yp e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n k t h er e s u l t ss h o w e d t h a tl e e r f lw a si n c r e a s e dw i t ht h er a i s eo fe t h y l e n e ，a n dl e e r f lw a sr e g u l a t e db ye l h y l a n ea tt h e l e v e lo fp r o t e i n t h e r ew e r et h es a m ec h a n g e st r e n d sb e t w e e nl e e r f1a n dm r n ao fl e c h l l7 ，w h i c h e n c o d e dc h i t n a s e ，a n dt h e r ew e r et h es a n l ec h a n g e st r e n d sb e t w e e nm r n ao fl e c h l l7a n dc h i t n a s e t h ee x p e r i m e n t ss h o w e dt h a tl e e r f lm i 曲tr e g u l a t e dp e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n kp a t h o g e no ft o m a t o f r u i tb yc o n t r o l l i n gt r a n s c r i p t i o na n dt r a n s l a t i o na tt h el e v e lo f p r o t e i n k e yw o r d s ：t o m a t o ，e t h y l e n e ，s i g n a lt r a n s d u c t i o n p a t h o g e n ，e r e b p s 图1 1 f i g 1 1 图l 一2 f i g 1 - 2 表1 1 t a b l e 1 图2 1 f i g 2 - 1 图2 - 2 f i g 2 - 2 幽2 - 3 f i g 2 - 3 图2 - 4 f i g 2 - 4 图2 - 5 f i g 2 - 5 图2 - 6 f i g 2 - 6 圈2 7 f i g 2 7 图2 - 8 f i g 2 8 图2 - 9 f i g 2 9 图2 1 0 f i g2 - 1 0 i v 插图、附表清单 乙烯生物合成途径和蟹氨酸循环 b i o s y n t h e s i sp m h w a yo f e t h y l e n ea n dc y c l eo f m e t 拟南芥乙烯信号转导途径 e t h y l e n es i g n a lt r a n s d u c t i o op a t h w a yi n a r a b i d o p s i s ( g u oe ta l ，2 0 0 4 ) 番茄巾部分e r e b p s 基因 p a r t i a le r e b p s g e n e si nt o m a t o 原核表达质粒p e t - l e e r f i 的构建 c o n s t r u c t i o no f r e c o m b i n a n tp r o k a r y o t i ce x p r e s s i o np l a s m i d sp e t - l e e r f l 破色期番茄果实总r n a 琼脂糖凝睦电泳 e t h i d i u mb r o m i d e s t a i n i n go f t o t a lr n a f r o mb r e a k i n gt o m a t o l e e r f l 基因r t - p c r 产物的凝胶电泳 t h ea g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i so f r t - p c r o f p r o d u c to f l e e r f lg e n e 重组质粒p e t - l e e r f l 酶切鉴定电泳图 t h ea g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i si d e n t i f i c a t i o no f r e c o m b i n a n tp l a s m i dp e t - l e e r f l l e e r f l 克隆核昔酸片断反向测序序列与已报导的核苜酸序列比较 n u c l e o t i d es e q u e n c ea l i g n m e n tb e t w e e nc l o n e dl e e r f lr e v e r s es e q u e n c ea n dt h ep u b l i s h e d l e e r f is e q u e n c e l e e r f l 克隆核苷酸片断一向测序序列与己报导的核苷酸序列比较 n u c l e o t i d es e q u e n c ea l i g n m e n tb e t w e e nc l o n e dl e e r f lp o s i t i v es e q u e n c ea n dt h e p u b l i s h e d l e e r f ls e q u e n c e 原核农达质粒p e t - l e e r f 2 的构建 c o n s t r u c t i o no f r e c o m b i n a n tp r o k a r y o t i ce x p r e s s i o np l a s m i d sp e t - l e e r f 2 乙烯信号转录因子l e e r f 2 基因重组质粒p e t - l e e r f 2 酶切鉴定电泳图 t h ea g a r o s eg e l e l e c t r o p h o r e s i so fi d e n t i f i c a t i o no fp r o d u c to fr e c o m b i n a n tp l a s m i d p e t - l e e r f 2 l e e r f 2 克隆核苷酸片断序列与l 三报导的核苷酸序列比较 n u c l e o l i d es e q u e n c ea l i g n m e n tb e l w e e nc l o n e dl e e r f 2s e q u e n c ea n dt h e p u b l i s h e d l e e r f 2s e q u e n c e l e e r f l 和l e e r f 2 与e r e b p s 家族中其它成员在氨基酸水平序列同源性分析 a l i g n m e n to fl e e r f la n dl e e r f 2a m i n oa c i d sw i t ho t h e re r e b p sc l u s t r e ew a su s e dt o c o n s t r u c tn e i g h b o rp h y l o g e n e t i ct r e e s 图2 - 1 1 l e e r f l 和l e e r f 2 与e r e b p s 家族中其它成员的e r f 域氨基酸序列同源性分析 f i g 2 1 11a l i g n m e n to ft h ee r fd o m a i n so fl e e r f la n dl e e r f 2w i t he r fd o m a i n sf r o mo t h e r e r e b p s 例3 - 1 诱导温度对l e e r f 2 篮向表达影响的s d s p a g e 分析 f i g 3 - 1 s d s p a g ea n a l y s i so fr e c o m b i n a n tl e e r f 2p r o t e i n s e x p r e s s i o ne f i e c t e db yi n d u c e d t e m p e r a t u r e 罔3 - 2 i p t g 对l e e r f 2 蛋白表达影响的s d s ，p a g e 分析 f i g - 3 1 2 s d s - p a g ea n a l y s i so f r e c o m b i n a n tl e e r f 2p r o t e i n se x p r e s s e de f l e e tb yi n d u c e di p t g 图3 - 3 l e e r f l 蚩白纯化的s d s - - p a g e 分析 f i g3 - 3s d s p a g ea n a l y s i so f l e e r f ip r o t e i np u r i f i c a t i o n 图3 - 4 l e e r f 2 货自，钝化的s d s - - p a g e 分析 f i g 3 - 4 s d s - p a g ea n a l y s i so f l e e r f 2 p r o t e i np u r i f i e a t i o n 丧4 - 1 免疫方案 t a b l e 4 - i i m m u n i z a t i o np r o t o c o l 表4 - 2 抗l e e r f l 衄清的效价 t a b l e 4 - 2t i t e ro f a n t i l e e r f is e r u n l 图4 一i 亲和层析备管2 8 0 n m 的吸收值 f i g4 - i r e s u l to f a f f i n i t yc h r o m a t o g r a p h y 表4 - 3 抗l e e r f 2 血清的效价 t a b l e 4 - 3t i l e ro f a n t i l e e r f 2s e r u m 图4 - 2 亲和层析各管2 8 0 n m 的吸收值 f i g 4 - 2 r e s u l to f a f f i n i t yc h r o m a t o g r a p h y 剧4 - 3 抗l e e r f i 血清的w e s t e r nb l o l i i n g 检测 f i g 4 - 3 a n a l y s i so f w e s t e r nb l o t t i n gf o ra n t i l e e r f ls e r u m 图4 4 抗l e e r f 2 血清的w e s t e r nb l o t t i n g 检测 f i g 4 4 a n a l y s i so f w e s t e r nb l o t t i n gf o ra n t i l e e r f 2s e r u m 剧5 - 1 绿熟期番茄果实维管组织中l e e r f i 的亚细胞定位 f i g - 5 l s u b c e l l u l a rl o c a l i z a t i o no f l e e r f li nt h ev a s c u l a rt i s s u e so f g r e e n t o m a t of r u i t 图5 - 2 破色朋番茄果实维管组织中l e e r f i 亚细胞定位对照 f i g 5 2 s u b c e l l u l a rl o c a l i z a t i o no f l e e r f ii nt h ev a s c u l a r t i s s u e so f b r e a k i n gt o m a t of r u i t 斟5 _ 3 绿熟期前茄果实维管组织中l e e r f l 亚细胞定佗对照 f i g5 3c o n t r o lf o rt h es u b c e l l u l a rl o c a l i z a t i o no fl e e r f ii nt h ev a s c u l a rt i s s u e so f g r e e nt o m a t o f r l 】；t v 图5 4 番茄果实中l e e r f l 的免疫印迹分析 f i g 5 ，4 l m m u n o d e t e c t i o no f l e e r f li nt o m a t of r u i t 表5 1 番茄果实维管组织中l e e r f i 免疫细胞化学标记密度 t a b l e 5 一i l m m u n o c y l o c h e m i c a ll a b e l l i n gi n t e n s i t yo f l e e r f li nt h ev a s c u l a rt i s s u e so f t o m a t of r u i t 图6 1 番茄果实基因组d n a 琼脂糖凝胶电泳 f i g 6 - l e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f t o t a ld n a f r o mt o m a t o 图6 - 2 侨茄随机引物p c r 琼脂糖凝胶电泳 f i g 6 - 2 t h ea g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i so f r a n d o mp r i m e rp c r f r o mt o m a t o 图6 - 3 t l b p l 基因重组质粒酶切鉴定电泳图 f j g 6 - 3 t h ea g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i so f i d e n t i f i c a t i o no f t l b p ig e n er e c o m b i n a n td l a s m i d 图6 - 4 t l b p i 核茁酸序列 f i g 6 - 4 n u c l e o t i d ea c i ds e q u e n c eo f t l b p i 图6 - 5 t l b p i 与前茄中其它基因的核甘酸序列比较 f i g 6 _ 5 a l i g n m e n to f t l b p in u c l e o t i d ea c i ds e q u e n c ew i t ho t h e rt o m a t og e n e s ，& 6 - 1t l b p ib l a s t 的部分结果 t a b l e 6 - 1p a r t i a lr e s u l t so f t l b p lb l a s ti ng e n b a n k 图6 - 6 t l b p 2 基因重组质粒酶切鉴定电泳图 f i g - 6 - 6 t h ea g a r o s eg e le l e c t r o p h o r e s i so f i d e n t i f i c a t i o no f t l b p 2 g e n er e c o m b i n a n td l a s m i d 图6 7 t l b p 2 核苷酸序夕 f i g6 7 n u c l e o t i d ea c i ds e q u e n c eo f t l b p 2 图6 - 8 t l b p 2 与雨茄中其它基因的核廿酸序列比较 f i g 6 8a l i g n m e n to f t l b p 2n u c l e o t i d ea c i ds e q u e n c ew i t ho t h e rt o m a t og e n e s 图6 - 9 l e e r f l 蛋向与t l b f l 的银染凝胶阻滞实验 f i g 6 9 t h es i l v e rs t a i n i n ge m s ao f l e e r f lb i n d i n gt l b f i 图6 - 1 0 l e e r f l 蛋白与t l b f 2 的银染凝胶阻滞实验 f i g 6 _ 1 0 t h es i l v e rs t a i n i n ge m s ao f l e e r f ib i n d i n gt l b f 2 图6 1 1 d n a 与核小体结构 f i g 6 - l l s t r u c t u r eo f d n aa n dn u c l e o s o m e ( k a r o l i nl p t 。1 1 9 9 7 、 图7 - 1 青霉菌侵染对绿熟期番茄果实乙烯释放量的影响 f i g 7 - 1 t h ee f f e c to f p e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n k i n f e c t i o no ng r e e nt o m a t o 图7 - 2 绿熟期番茄果实总r n a 琼脂糖凝胶电泳 f i g 7 _ 2 e t h i d i u mb r o m i d e s t a i n i n go f t o t a lr n af r o mg r e e nt o m a t o 图7 - 3 绿熟期番茄r t - p c r 琼脂糖凝胶电泳 v i f i g 7 3 图7 - 4 f i g 7 4 幽7 - 5 f i g 7 5 图7 - 6 f i g 7 - 6 图7 7 f i g 7 - 7 图7 _ 8 f i g 7 - 8 图7 - 9 f i g 7 9 图7 - 1 0 f i g 7 1 0 图7 一 f i g 7 - 1 1 图7 1 2 f i g7 - 1 2 图7 1 3 f i g7 - 1 3 图7 1 4 f i g 7 - 1 4 图7 一1 5 f i g 7 1 5 蚓7 】6 f i g 7 - 1 6 图7 一1 7 f i g 7 1 7 罔7 1 8 f i g 7 18 图7 - 1 9 e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go fr t - p c rf r o mg r e e nt o m a t o 绿熟期番茄对照果实总r n a 琼脂糖凝胶电泳 e t b i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f t o t a lr n af r o mc o n t r o lg r e e nt o m a t o 绿熟期对照番茄r t - p c r 琼脂糖凝胶电泳 e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f r t - p c rf r o mc o n t r o lg r e e nt o m a t o 青霉菌侵染对绿熟期币茄果实几丁质酶的影响 t h ee f f e c to f c h i t n a s ef o rp e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n ki n f e c t i o no ng r e e nt o m a t o 青霉苗侵染绿熟期番茄果实中l e e r f l 的免疫印迹分析 l m m n n o d e t e c t i o no f l e e r f ii np e n i c i l l i u me x p a o s u ml i n ki n f e c t i o no ng r e e nt o m a t o 青霉菌侵染对破色期番茄果实乙烯释放量的影响 t h ee f f e c to f p e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n ki n f e c t i o no nb r e a k i n gt o m a t o 破色期番茄果实总r n a 琼脂糖凝胶电泳 e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f t o t a lr n af r o mb r e a k i n gt o m a t o 破色期番茄r t - p c r 琼脂糖凝胶电泳 e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f r t - p c rf r o mb r e a k i n gt o m a t o 破色期番茄对照果实总r n a 琼脂糖凝胶电泳 e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f t o t a lr n af r o mc o n t r o lb r e a k i n gt o m a t o 破色期对照番茄r t - p c r 琼脂糖凝胶电泳 e t h i d i u mb r o m i d e s t a i n i n go f r t - p c rf r o mc o n t r o lb r e a k i n gt o m a t o 青霉菌侵染对破色期番茄果实几丁质酶的影响 t h ee f f e c to f c h i t n a s ef o rp e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n ki n f e c t i o no nb r e a k i n gt o m a t o 青霉菌侵染破色期番茄果实中l e e r f l 的免疫印迹分析 l m m u n o d e t e c t i o no f l e e r f ii np e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n ki n f e c t i o no nb r e a k i n gt o m a t o 青霉菌侵染对粉红期蒲茄果实乙烯释放量的影响 t h ee f f e c to f p e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n ki n f e c t i o no np i n kt o m a t o 粉红期稀茄果实总r n a 琼脂糖凝胶电泳 e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f t o t a lr n af r o mp i n kt o m a t o 粉红期番茄r t - p c r 琼脂糖凝胶电泳 e t b i d i u mb r o m i d es t a i n i n go fr t - p c rf r o mp i n kt o m a t o 粉红期番茄对照果实总r n a 琼脂糖凝胶电泳 e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go f t o t a lr n af r o mc o n t r o lp i n kt o m a t o 粉红期对照番茄r t - p c r 琼脂糖凝胶电泳 v i i f i g 7 1 9 图7 2 0 f i g 7 - 2 0 幽7 - 2 1 f i g 7 - 21 图7 - 2 2 f i g 7 2 2 图7 2 3 f i g 7 - 2 3 图7 2 4 f i g 7 - 2 4 图7 2 5 f i g 7 2 5 图7 2 6 f i g 7 - 2 6 幽7 2 7 f i g 7 2 7 图7 2 8 f i g 7 - 2 8 图7 2 9 f i g 7 - 2 9 图7 3 0 f i g 7 4 0 v l i e t h i d i u mb r o m i d es t a i n i n go fr t - p c rf r o mc o n t r o lp i n kt o m a t o 青霉菌侵染对粉红期番茄果实几丁质酶的影响 t h ee f f e c to f c h i m a s ef o rp e n i c i l l i u me x p a n s u ml i n ki n f e c t i o no np i n kt o m a t o 青霉菌侵染粉红鳓礴茄果实中l e e r f i 的