（食品科学专业论文）鸭蛋黄卵磷脂提取与精制研究.pdf

课题来源： 舢删删 y 1 7 , , , 1 , , j i l 3 l m l l 6 i ir f 1 4 j l lj i i l r i l l 。 浙江省科技厅重大科技攻关项目 2 0 0 4 c12 ol7 鸭蛋精深加工关键技术及产品研制 单位代码：10 339 研究生学号：2 0 4 1 7 0 6 3 硕士学位论文 鸭蛋黄卵磷脂提取与精制研究 论文评阅人： 答辩委员会主席： 答辩委员会成员： 论文答辩日期： 浙江大学硕士学位论文 一一 致 谢 本论文是在导师陈有亮副教授的精心指导下完成的。在两年的学习过 程中，陈老师严禁的治学态度、求实创新的精神使我受益匪浅。在论文完 成之际，谨向恩师致以最崇高的敬意和最忠心的感谢! 感谢林嘉老师对我的关怀! 感谢已毕业的杨燕军师兄、赵晓艳师姐对我的帮助! 感谢方英群师姐，刘文师弟对我的帮助! 最后感谢我的家人，他们在我成长的道路上付出了巨大的心血，没有 他们的关怀鼓励和支持，我不可能取得现在的成绩! 最后向参加论文评阅和答辩的全体专家致以最真诚的谢意1 2o ( j6 年5 月杭州华家池 浙江大学硕士学位论文 目录 摘要1 a b s t r a c t ：z l 前言：3 lh l j 吾：3 1 1 磷脂概述3 1 1 1 磷脂的定义3 1 1 2 卵磷脂的组成和结构4 1 2 卵磷脂的性质4 1 2 1 卵磷脂的物理性质4 1 2 2 卵磷脂的化学性质5 1 3 卵磷脂的生理功能6 1 3 1 增强机体活力6 1 3 2 促进神经传导提高人脑活j 6 1 3 3 作为抗氧化剂，延缓机体衰老6 1 3 4 乳化特性。7 1 3 5 美容保健作用7 i 3 6 抗衰老和抗疲劳的作用7 1 3 7 促进脂肪代谢，保护月- | 脏，防止出现脂肪肌和月i 。f i 豆| 化7 1 3 8 促进体内转f i l i 基代嘲的顺利进行8 1 3 9 免疫调节作用8 1 3 1o 卵磷脂及衍生物的抗肿瘤功能9 1 4 影响卵磷脂生理功能的因素9 1 4 1 v e 对巧| 4 磷脂牛理活性的影响9 1 4 2 v b 。：和叶酸对卵磷脂生理活性的影响9 1 4 3 温度对卵磷脂生理活性的影响9 1 4 4 光、空气对卵磷脂生理活性的影响9 1 5 卵磷脂的应用1 0 浙江大学硕士学位论文 1 5 1 在食品工业中的应用1o 1 5 2 在医药工业中1l 1 5 3 在化妆品中的应用11 1 5 4 在其他工业中的应用1 1 1 6 卵磷脂的提取方法1 2 1 6 1 溶剂提取法1 2 1 6 2 超临界二氧化碳萃取法13 1 7 卵磷脂的精制方法1 3 1 7 1 柱层析法13 1 7 2 乙酰化法14 1 7 3 高效液相色谱法1 4 1 7 4 半透膜法14 1 7 5 复合盐沉淀法15 1 7 6 酶催化精制提取法15 1 7 7 乙酸乙哺法15 1 。8 卵磷脂的测定方法1 6 1 8 1 薄层色潜扫描法16 1 8 2 高效液相色谱法。17 1 8 3 分光光度法17 1 8 4 紫外吸收光辔测定法：17 1 8 5 红外光谱分析18 1 8 6 其他方法】8 1 9 本论文的研究目的和意义1 8 2 材料与方法1 9 2 1 材料1 9 2 1 1 原料19 2 1 2 仪器19 2 1 3 试剂19 2 2 方法2 0 2 2 1 提取试验：2 0 浙江大学硕士学位论文 2 2 2 纯化试验2 2 2 2 3 测定方法2 3 3 结果与分析2 5 3 1 提取试验结果2 5 3 1 1 提取正交试验结果2 5 3 1 2 验证试验结果2 6 3 2 精制试验结果2 7 3 2 1z n c l ：沉淀法2 7 3 2 2 冷冻法2 8 4 讨论3 3 4 1 提取条件对卵磷脂得率的影响3 3 4 1 1 酶用量的影响3 3 4 1 2 乙醇浓度的影响。3 3 4 1 3 提取温度的影响3 4 4 1 4 提取时间的影响3 4 4 2 纯化方法对卵磷脂纯度和回收率的影响3 5 5 结论3 6 6 参考文献3 7 浙江大学硕士学位论文 鸭蛋黄卵磷脂提取与精制研究 摘要 卵磷脂是一种很好的天然乳化剂和营养补品，在食品，医药保健品以及化妆品行业 应用广泛。它广泛存在于动植物体内，以禽蛋卯黄中含量最为丰富，达千物质总量的8 一1 0 ，而鸭蛋黄比鸡蛋黄还高出0 5 1 ，所以丌发鸭蛋黄卵磷脂曼具经济性。 本文以鸭蛋黄为原料，采用乙醇提耳义法提h 义其中的卵磷脂，设计了y g | 人| 素l f 交试验， 结果表明，在蛋白酶添加量0 0 5 ，乙醇浓度9 0 ，提取温度4 0 。c ，提取时| h j h6 0 r a i n 时所提取粗卵磷脂效果最佳，可以制得卵磷脂含量约为8 0 的粗卵磷脂，磷脂得率达 到1 0 。对所提取的粗磷脂分别采用以下两种方法精镣l j ：( 1 ) z n c l 2 沉淀法，对不f 司浓度 z n c i ! 进行对比试验，结果表叫存z n c l 2 的添加姥为4 0 t t i ，卵磷脂的收j 棼i i j 达9 ( ) 8 。 ( 2 ) 冷冻法，试验分析了磷脂含鼍，乙醇浓度对精制结果的影n 吼彳! ；j 出、1 1 辚脂禽罨；：为3 乙醇浓度为9 0 1 t 寸，效果最佳。 将所得膦脂产品采用薄层十f 描法检测，相磷脂r p c 含量为5 9 2 ，精制磷脂t i ，p c 含量为9 9 5 。 本课题所研究的提耳义精制卵储脂的j ：岂确卟，成本低，为f ：j 化乍，“- 曲纯瞍l ：l f j 印磷 脂奠定了基础。 关键词：鸭蛋黄卵磷脂乙醇提取精制薄层于j 描 浙江大学硕士学位论文 a b s t r a c t t h ee x t r a c t i o na n dp u r i f i c a t i o no fl e c t h i ni ne g go fd u c k l e c t h i ni san a t u r ee m u l s i f y i n ga g e n c ea n dn o u r i s h m e n t i ti sw i d e l yu s e di nt h e f i e l d so ff o o d ，c o s m e t i ca n dp h a r m a c y l e c t h i nf r o md u c ke g gw a se x t r a c t e du s i n ge t h n 0 1 t h eo p t i m u me x t r a c t i l k o n c o n d i t i o n sw e r ed e t e r m i n e db yo r t h o g o n a le x p e r i m e n t ：t h ea m o u n to fp r o t e a s ew a s 0 0 5 ，t h ec o n c e n t r a t i o no fe t h a n o lw a s9 0 ，t h et e m p e r a t u r ew a s4 0 a n dt h e c o n t a c tt i m ew a s6 0 m i n t w om e t h o d st op u r i f yr o u g hl e c i t h i nw e r eu s e d ( 1 ) z n c l 2 p r e c i p i t a t o r w a su s e dt o p u r i f yr o u g hl e c i t h i n ，d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o nz n c l 2a r e u s e d ，a sar e s u l t ，w h e nt h ec o n c e n t r a t i o no fz n c l 2i s4 0 ，9 0 8 r e c o v e r yo fr e f i n e d e c t h i nw a so b t a i n e d ( 2 ) c o l dt e m p e r a t u r ew a su s e dt op u r i f yt h er o u g hl e c i t h i n ，w e a n a l y s i s e d t h ef a c t o r sw h i c hi n f l u e n c e dt h ep u r i f i c a t i o n t h eb e s tc o n d i t o n s ：t h e c o n c e n t r a t i o no fr o u g hl e c i t h i nw a s3 a n dc o n c e n t r a t i o no fe t h n o lw a s9 0 u s i n gt h i nl a y e rc h r o m a t o g r a p h yt om e a s u r ei t sc o m p o n e n t ，i nt h er o u g hl e c i t h i n t h ec o n t e n to fp h o s p h a t i d y i c h o i i n ee x t e n dt o5 9 2 a n di nt h er e f i n e dl e c i t h i n ，t h e c o n t e n to fp h o s p h a t i d y i c h o l i n ee x t e n dt o9 9 5 t h ep r o c e s so fe x t r a c t i o na n dp u r i f i c a t i o no fl e c i t h i ni sr e a s o n a b l ea n ds i m p l e t h ec o s li si o w s ot h e s ee s t a b l i s ht h ef o u n d a t i o nf o ri n d u s r i a i i z a l i o n k e y w o r d s ：d u c ke g gl e c i t h i ne t h n o le x t r a c t i o n p u r i f i c a t i o n l a y e rc h r o m a t o g r a p h y ， 浙江大学硕士学位论文 1 前言： 磷脂作为f l 常营养补品已经深得人心，并有着“头n t i 、助食品”、“人脑的黄会”、 “天然之精神安定剂”、“天然利尿剂”等美誉。在美国卵磷脂作为近6 0 年柬最重要的 营养保健品原料，总销量仅次于复合维生素和维生素e 而名列第三1 2 1 。f - id ，j ，卵磷脂已 经被世界卫生组织批准使用，被列为重要的营养补品和“九大长寿食- 5 之一”，这大大 的促进了卵磷脂的研究与了1 ：发。 近年来，世界卵磷脂发展迅速，年产量达到5 0 k t 。美国中央黄豆公司、a d m 公司、 r i c e l a n d 公司、德国l u c a sm a y e r 等公司生产的数十种卵磷脂几乎囊括了世界市场。 国内的卵磷脂产量远远不能满足市场需要，磷脂产量只占世界产鞋的1 4 0 ，发展4 ：k - i 当落后，幽内仪有l ：业化生产的火豆卵磷脂，- 宙“l 日l 质的蛋黄卵磷j j 旨令部依1 进1l ，根捌 市场需求分析，精制蛋黄卵磷脂在困内主要刖j ：食品、高档化：| 女i t 以艾阪药原料卟1 ， 面 我幽每年要高价从国外进1 35 0 0 t 以上的i 岛纯度卵磷脂以满足这些行业的前求，造战我闰 夕l - t r ：的人奄流失。 随管我圈经济的发展，人民q _ 活水平的提 ，麟脂的。i f i i ) j ( 旨；l | 谥增加。l - j 4 1 j - i ：，厅发 高品质的蛋黄卵磷脂i ，j 景斗分j “阔。 1 1 磷脂概述 1 1 1 磷脂的定义 l e c i t h i n 一词是出希腊语中“l e k i t h o s ”转变而束，广义上卵磷惜是多科，成分 1 ，j 混合 物，包括磷脂酰胆碱( p h o s p h o t i d y lc h o l i n e p c ) 、鳞脂酰乙醇胺( p h o s p h o t i d ) le t h a n o l a m i n e p e ) 、肌醇磷脂( p h o s p h o t i d y li n o s i t 0 1 p i ) 、丝氮酸磷脂( p h o s p h o t i d y ls e r i n e p s ) 、神经 鞘磷脂( s p h i n g o l i p i d s ) 、磷脂酰甘油( p g ) 、磷h 旨酸( p a ) 、v b i 、v b ：、v e 等。狭义 上的卵磷脂是指磷脂酰胆碱1 3 1 。 浙江大学硕士学位论文 1 1 2 卵磷脂的组成和结构 r z c 。一：c h吊 0 h 2 0 p o c h 2 c h 2 n + ( c h 3 ) 3 1 2 罗口磷脂的性质 1 2 1 卵磷脂的物理性质“1 纯净的巧i i 磷脂为白包蜡状固体，无臭，舆仃温和良好的味觉，在低温| 、i - j 结晶，存 夺气中放置段时i 臼j 后，易被氧化，彦吹色山i j 包变为黄褐包，久斯久之公变成伤：照色。 卵磷脂不削高温，1 0 0 。c 以上即氧化至分解，2 8 0 。c 时生成黑色沉淀。卵磷脂刁：溶j 二水， 但易吸水，吸水后可溶涨形成骨髓状的胶体。卵磷脂可溶于氯仿、石油醚、苯、乙醇、 乙醚不溶于丙酮，通常丙酮为卵磷脂的沉淀剂。经丙酮沉淀析出的卵磷脂晕颗粒状或 粉；i x 7 1 。 浙江大学硕士学位论文 1 2 2 卵磷脂的化学性质 从卵磷脂的化学结构我们很容易推知卵磷脂最重要的性质是具有两亲分子结构：两 个脂肪链为疏水基，磷酸和胆碱为亲水基，因此它是一种表面活性剂，具有一系列的界 面和胶体性质，如界面活性、乳化性、胶体性质、热性质及成盐和复合物等盹质。 1 界面活性8 1 卵磷脂不溶于水而易溶于多种有机溶剂，所以多研究它在油水界面上的。阡质。用天 然卵磷脂制备的乳状液的类型主要取决于油和水的比例。 ( ) g jn o 9 1 研究了卵磷脂、胆同醇和g , f f ：l 的l ：1 ( v ：v ) 混合物在f i 尉极，陆的几利哳h 水 体系中的界面作用，发现对所有的油水体系，卵僦脂降低界面张力的效果远超过肚| i 倒醇， 而l ：1 混合物的效果居于两者之| 日j 。说明卵 i ； 脂分子容易在界面 ：吸附和定向捌j 歹4 ， 而目当油i ：i d 的浓度增大时，其降低表由i 张力的效果更为明显。 2 优良的乳化性 由卡卵磷脂其有舣极。 ，k 分子结构：碳氛链成的8 旨胁黢具自爿川旨。p l ! ，含磷酸毛l i , f i lj t ! ! 碱摹具仃亲水性。对j 二一种油水彳i 相容混合体系，由于卵磷脂以簿膜状包崧往油f i j 外向， 从而大大降低油水界面张力的目的。亲油基与油相相连，亲水基与水十h , i ：日连，从l 蛐i “吏得 油相、乳化剂和水相形成一个整体。而其中的卯磷脂起剑个“桥梁”作用。 般认为 乳液类型e 要取决于卵磷脂的h i 。b 值，而卵磷脂的h l b 值是可变的( 2 6 ) 。 3 胶体性质1 表面活性剂分子在溶液中的浓度达到。疋极：度时，卵磷脂分j 二就会自动缔合成胶 团，_ j ：随着浓度的增大，次形成棒状胶柬八角彤的棒状胶束层状胶乘微 ? l j i x 液。住极f ， j 溶剂中卵磷脂的亲水基在外、油壁在内形成胶川：i f j 台刈：极。盹溶；i j , t - , ， 卵磷脂疏水基在外、亲水基存内形成反胶川。 4 卵磷脂的热性质1 卵磷脂的热稳定性及抗氧化性较差、彳i i 利高温、易水解，而f i 由于卵磷脂的物理加 工过程中，油脂的分离并不充分，加上本身脂盼酸的不饱和度，易与空气中的氧气发生 反应。因此，许多特性不能得到充分的发挥，使其应用受到一定的限制，使用日寸必须添 加抗氧化剂来增加其稳定性。目自西，利用化学方法丌发了没有不饱和键的卵磷脂 ：j j7 i - ：t 2 a ， 从而扩大了其应用范围。 5 由于卵磷脂分子中含有脂肪酸基【z ! p _ l ，斟此町产生皂化、水解、氢化、卤化、碘化、 气 浙江大学硕士学位论文 磷酸化、油酸重排及臭氧化等反应。 1 3 卵磷脂的生理功能 1 3 1 增强机体活力 卵磷脂是宅命的基础物质，存在于人体的每个细胞，更多地集中于，巴、肝、j j 巾等鼋 要器官。是构成生物膜的主要成分1 2 1 0 在食物中添加卯磷脂，可以为机体的新陈代谢 提供充足的原料和动力，从根本上增强机体活力。 1 3 2 促进神经传导提高大脑活力 卵磷脂足神经信息的传递揣乙酰必铖的= ；i 二受来源。捌研究，人体人脯仃15 0 亿 力个神经细胞，神经细胞之问的信息传递依靠乙酰月日碱进行，食物t 1 ，的卵辚脂经消化释 放出胆碱，胆碱随血液循环进入大脑，胆碱乙龇转移酶的作用下，与乙酰辅酶a 反， 生成乙酰胆碱。乙酰胆碱含量的增加能促进人脑神经突触迅速发达，从而使人船h ，的神 经细胞之1 8 j 的信息传递速度加快，提高注意力干i l 思维功能，记忆力也榭剑加灶13 1 。1 t - 1 ； 外卵磷脂还能改善或配合治疗各种神经官i - tl s ；i l l ：，有助于癫痫和痴呆等病癌的康复。 h 际卵磷脂协会手席、约物学家伊斯篇尔哈j 指出：“火剂域的卵磷脂一，j l i 父薄老年 人的记忆力和老化的脑细胞活力，特_ ) 0 是对f i 白：生长发育的儿童效果更加”1 4 1 。 1 3 3 作为抗氧化剂，延缓机体衰老 f 因为卵磷脂具有抗氧化功能，爿能修复损伤的细胞膜，延缓机体衰老。拆： i 主道， 随着年龄的增长，机体清除自由基的能力下降，过多自由基与游离或结合状态的1 i 饱和 脂肪酸作用，使其以链式或链式支链反应的形式f i 断形成脂质过氧化物m d a m d a 足 极为活泼的交连剂，迅速与磷脂酰乙醇股变联成荧光色素，然后蛋 ，i 质、日足类、脂类 结合形成板层状脂褐质，它可使细胞核、细胞器受压变形，影响神经原的l f 常代谢传递 功能。而卵磷脂对维持皮肤角质层水分含量的稳定和抑制角质层细胞脂褐质的形成均有 明显效果5 1 6 1 。 浙江大学硕士学位论文 1 3 4 乳化特性 由卵磷脂结构我们可以知道卵磷脂是天然两性离子表面活性剂。 卵磷脂具有良好的乳化功能，其良好的乳化性使得卵磷脂不仅能阻止胆剧醇在血管 内壁上的沉积、降低血清中的胆固醇水平，而且还能改善脂肪的吸收和利用i | 。另外， 卵磷脂是血管细胞壁细胞的重要组分，其数量减少会使血管壁容易硬化。凶i n j 卵磷脂对 预防心血管疾病有重要作用引。 卵磷脂良好的乳化性，可以降低血液粘度，促进血液循环、改善m 液供养循环，延 长红细胞生存时间并增强造血功能。补充卵磷脂后，血色素含量增加，贫血症状有所缓 和。卵磷脂可应用于再生性障碍性贫血的配合治疗。 1 3 5 美容保健作用 卵磷脂具有乳化作用，叮以使体内的水分币油脂充分混合，将人鞋n 勺水分f 果存住人 体内。卵磷脂的亲水性町以使皮肤变得沽净光泽富有弹性，从向达剑延缓衰老的i - i 的， 卵磷脂被称为“可以吃的化：i 女品”。 用磷脂配制的膏、霜删和奶液町减少腹部，旧i z , 肪沉秋，促进女j 殳乳腺发育，彤俐i 哑 满18 1 。 3 6 抗衰老和抗疲劳的作用 对中、老年人来讲，随着年龄增大，生物膜将m 现老化特i d ：，凡u ij i j 醉麟瞄( ( h t l ) 和鞘磷脂卵磷脂( s w p c ) 比值增高，麟脂相对减少，服用磷脂呵重新修饰牛物膜，溶 解和清除老化的过氧化脂质，冈而叮以活化腑细胞，调节内分泌、延缓女1 殳绝绛期，治 疗并减少更年期综合症，延缓衰老进程，是粥r j ! 的h 强壮刺。卿僦脂nj ：曾锄胍i 部；五 力、延缓细胞衰老、提高机体附力方面有h 月显作用吼2 0 。缺氧试验和游泳抗疲，万i i - 实马缸 表明，卵磷脂能提高小鼠耐力，明显延长小鼠存活时l h j 和持续力竭游泳时l h j 眨。 1 3 7 促进脂肪代谢，保护肝脏，防止出现脂肪肝和肝硬化 磷脂能够阻止胆固醇在心脑血管壁和肝脏的沉积，并清除部分沉秋物，同时改善脂 浙江大学硕士学位论文 肪的吸收活力用，降低血粘度，改善血液供氧循环 1 4 1 。卵磷脂是维持体能胶体溶液稳 定性的必需物质，血浆磷脂过低，可出现脂血症，并导致脂质沉积，故其在血中浓度愈 高，则胆固醇及其他脂质就愈不易在组织中沉积。磷脂能与脂肪、胆固醇及蛋白质一起 构成脂蛋白。脂蛋白是脂肪的运转形式，可使肝内脂肪转运到肝外，适用于急性肝炎、 慢性肝炎、肝硬化、脂肪肝、防止动脉粥样硬化等1 2 2 1 。 脂肪肝的内因是胆碱一卵磷脂的缺乏而引起甘油三酯转运出肝发生障碍所致。而卵 磷脂缺乏是根本原因，因为胆碱是组成卵磷脂的一个成分，卵磷脂能与脂肪、胆固醇及 蛋白质构成脂蛋白，而脂蛋白易溶于血浆，是脂肪的一种转运方式，肝内脂肪则以脂蛋 白的形式运到肝外、除去肝内沉积的脂肪。动物试验证明，当体内胆碱缺乏时，由于体 内磷脂不足，影响体内脂蛋白的合成，结果肝内脂肪不能转运出而积聚于肝细胞发生脂 肪肝，肝功能减退，最终引起肝硬化。卵磷脂是合成脂蛋白的原料，因而对脂肪在体内 的转运和代谢过程起重要作用。若是体内卵磷脂不足，则可影响脂肪代谢，造成脂肪在 肝中的堆积，形成脂肪肝 2 3 1 。卵磷脂能促进胶原酶的活性，酶解已胶化的纤维，停止 或缓解肝脏纤维化眨引。卵磷脂能改善线粒体的功能，促进沉积在肝脏内脂肪的燃烧， 减少脂肪肝的发生1 2 5 1 。 1 3 8 促进体内转甲基代谢的顺利进行 在机体内，能从一种化合物转移到另一种化合物上的甲基称为不稳定甲基，该过程 称为转甲基过程( 或酯转换过程) 。体内酯转化过程有重要的作用，诸如：参与肌酸合 成( 对肌酸的代谢恨重要) 、。肾上腺素之类的激素合成并甲酯化某些物质以便使其从尿 中排出。胆碱是不稳定甲基的重要来源，可使体内转甲基反应顺利进行。 1 3 9 免疫调节作用 由卵磷脂组成的脂质体能够包容水溶性物质，一些抗原还能够通过共价键与脂质体 中质脂层结合，这一性质在免疫学上的应用已经受到重视。与其他脂质体相比，磷脂由 于其良好的生物降解特性，不会引起注射部位的肉牙肿，并且能够防止被包埋的抗原可 能引起的过敏反应 2 6 1 。某些卵磷脂还有抗病毒活性或增加抗病毒药物效力的作用 2 7 1 。 浙江大学硕士学位论文 1 3 1 0 卵磷脂及衍生物的抗肿瘤功能配8 1 关于卵磷脂及衍生物的抗肿瘤作用越来越受到人们的重视，p r i n c i p er 等对三种氮杂 磷脂的抗癌作用进行了药物屏障研究。结果表明，不同磷脂衍生物对肿瘤的抑制效果不 同，结肠癌和黑色素瘤对这三种药物敏感，而白血病只对其中一种敏感。 1 4 影响卵磷脂生理功能的因素 1 4 1 v e 对卵磷脂生理活性的影响 v e 是人体必需而又不能合成的一组脂溶性维生素，是人体内最重要的抗生理氧化 剂，它能与不饱和脂肪酸竞争性的与脂质过氧化基结合，以阻止过氧化作用的连锁反应， 从而抑制过氧化脂质的形成。其次v e 能防止卵磷脂酸化，而酸化后的卵磷脂生理活性 减半，因此将v e 和卵磷脂同时摄取，可以使卵磷脂发挥事半功倍的效果。v e 有助于 卵磷脂发挥生理活性，反过来，卵磷脂也能促进人体对v e 的吸收。这是因为v e 是脂 溶性物质，卵磷脂兼有脂溶性和水溶性的特点，故能有效的促进v e 在体内的吸收。 1 4 2 v b ，：和叶酸对卵磷脂生理活性的影响 卵磷脂在体内合成时v b l 2 及叶酸是转甲基的必要因素，因此磷脂中添加v b ，2 和叶 酸，有利于卵磷脂在体内的合成。 1 4 3 温度对卵磷脂生理活性的影响 卵磷脂渤在常温下生理活性最高，而随着温度的升高其活性逐渐降低，当超过一 定限度，卵磷脂的生理活性会显著降低至丧失。 1 4 4 光、空气对卵磷脂生理活性的影响 卵磷脂含有不饱和脂肪酸，在光、空气中容易氧化生成一系列过氧化脂质。过氧化 脂质是一种含有游离基的有毒物质，在体内积累可以破坏细胞和其正常的生理功能，促 9 一一一一一一一一 浙江大学硕士学位论文 使疾病的发生，降低卵磷脂的保健功能 3 0 1 。 1 5 卵磷脂的应用 卵磷脂是一种天然的乳化剂，广泛应用于食品、化妆品、医药、纺织、皮革等工业。 卵磷脂可用作乳化剂、防粘剂、粘稠度调节剂、防溅剂、控制晶体形成、分散剂、脱膜 剂、抗氧化剂和湿润剂等。 1 5 1 在食品工业中的应用 由于卵磷脂具有的生理功能作用在其他乳化剂中几乎没有，于是日本健康、营养食 品协会认定卵磷脂为特定保健用食品原料。另一方面，对于个别的机能作为乳化剂存在 许多缺点。因此，作为食品乳化剂的卵磷脂不能作为主剂，只能作为助剂配合使用。 卵磷脂在健康食品以外的食品用途，主要利用作为乳化剂的效果，保湿作用，抗氧 化作用等。 l 保健食品 卵磷脂很早就作为健康食品，与油脂性维生素混合入植物油脂使用。目前发现其具 有较多的生理功能引人注目。美国食品和药物管理局( f d a ) 将卵磷脂列为公认安全物 质，联合国粮农组织( f r o ) 和世界卫生组织( w h o ) 专家委员会报告规定对卵磷脂 的摄取量不做限量要求 3 1 1 。 2 婴) l - 孚l 品 蛋黄中的卵磷脂含有独特的脂肪酸( 例如：花生四烯酸和d h a ) ，这在大豆和其他植 物的卵磷脂中都未曾发现。3 脂肪酸( 例如d h a ) 目前已经作为饮食中必须摄取的物 质，它对大脑以及视觉都有重要的作用【3 2 】。最近研究表明，乳幼儿期的摄取脂肪酸平衡 非常重要，花生四烯酸是母乳特别是初乳中含量最多的6 系脂肪酸，对乳幼儿的生长 发育起很大作用。 1 0 浙江大学硕士学位论文 1 5 2 在医药工业中 1 5 2 1 直接应用于医药 高纯度的卵磷脂比普通磷脂乳化性能好，作用的p h 值更宽，可辅助治疗降低胆固醇 及神经紊乱，以及作为脂肪注射液中的乳化剂。可用于制作脂质体，脂质体能够用来缓 解关节炎病人的疼痛，因为脂质体可以到达关节疼痛处。给患糖尿病的老鼠饲味包含胰岛 素的脂质体，其血液中的葡萄糖量下降【33 1 。利用脂质体可以使一种不溶于水的药物运输 到白血病细胞1 3 4 1 。脂质体在药物传输方面的应用主要是用来加强药物的溶解，保护一些 敏感成分免受破坏，增强药物在细胞内的吸收并改变药代动力学及生化再分配【3 5 1 。 1 5 2 2 作为合成其他药物的原料 将磷脂酶d 作用于p c 时，可生产磷脂酸和胆碱，供人们使用。磷脂酶d 和其他酶 的单独作用或结合使用，已经用于医疗工业中制备稀少的磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和 其他特殊结构的磷脂，磷脂酸核苷酸可以作为抗癌药物，磷脂酰唾液酸能延长药物的半 衰期1 3 6 1 0 1 5 3 在化妆品中的应用 蛋黄磷脂涂在皮肤上感觉舒服，易吸收，而且还具有分布均匀，可以保湿的特性，因此被 应用于化妆品行业【3 7 】。蛋黄磷脂安全、无毒、并且能被生物降解。它与皮肤磷脂很相似， 能够补充皮肤中磷脂的缺乏。蛋黄磷脂不仅能够减少皮肤油脂的分泌而且能够提高皮肤 对化妆品中的活性物质的吸收【3 引。蛋黄磷脂是保湿霜、洁面乳、洗发水、浴液、口红、 防晒护肤品、眼霜等的基本原料。也可以加到肥皂等日用品中【3 9 】。氢化蛋黄磷脂目前已 经应用于脂质体以及其他化妆品的生产中，脂质体通过稳定化妆品不同中的成分如保湿 剂、皮肤呵护剂、防晒遮光剂、维他命，以及能使皮肤变褐的原料，提高了化妆品的价值。 1 5 4 在其他工业中的应用 在橡胶工业中用作脱膜剂、湿润剂，增加塑性，有助于橡胶在溶媒中分散及橡胶的 浙江大学硕士学位论文 硫化作用。 在饲料工业中添加磷脂，不仅可以改进饲料的物理状态，为动物提供必需脂肪酸， 而且，由于磷脂是动物脑、神经组织、骨髓、心、肝、脾不可缺少的组成部分，是生物 膜的重要组分，对幼龄动物的生长发育非常重要。 在涂料和油漆中添加磷脂，主要是利用磷脂的表面活性作用，缩短加热时间，防止 颜料沉淀，增加光亮度，避免分层，增加覆盖力和流平性、分散性、湿润性。 在农业生产中尤其在水果的储藏中应用广泛，卵磷脂能被果皮吸收，保持果皮湿润， 防止病菌侵害，抑制病菌的生长繁殖，起到灭菌作用，延长水果的保鲜期1 4 0 1 。 1 6 卵磷脂的提取方法 1 6 1 溶剂提取法 卵磷脂的提取常用溶剂提取法，卵磷脂为两性分子，既具脂溶性又具亲水性。卵磷 j i m 厶匕一, 溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂中成透明溶液，也能溶于水成为胶体状态，但不 溶于丙酮，且不同的卵磷脂在有机溶剂中的溶解度不同，故可用这些溶剂来提取分离磷 脂。 溶剂提取法是一种传统的分离提纯卵磷脂的方法。它是根据各种成分在溶剂中的溶 解性质的不同，选用对有效成分溶解度大，对不需成分溶解度小的溶剂，将有效成分从 原料组织中溶出的方法【4 1 1 。从有机溶剂从提取方式上分为单一溶剂提取法和混合溶剂提 取法。单一溶剂提取法是将定量的蛋黄与热脂溶剂一起搅拌，过滤，至滤液透明，滤 液在水浴上蒸干、称重、检测。s i m 2 1 提出了乙醇提取法生产卵黄卵磷脂，粗提卵磷脂 进行超临界萃取可制得8 2 的磷脂。混合溶剂提取法是采用二元溶剂抽提，然后用丙酮 沉淀、干燥、检测。谢宪章3 1 采用甲醇一乙醇冷浸法抽提卵黄卵磷脂，试验得出当氯 仿一甲醇，氯仿一乙醇，甲醇一乙醇体积比分别为1 ：2 ，1 ：3 ，1 ：4 时，提取效果最 佳。赵彬侠4 4 1 用乙醇一乙醚二元混合溶液为提取剂，提取卵磷脂，制得了纯度为6 8 2 的卵磷脂。 1 2 浙江大学硕士学位论文 1 6 2 超临界二氧化碳萃取法 超临界流体萃取( s u p e r c r i t i c a lf l u i de x t r a c t i o n ，简称s f e ) 是近年来兴起的一种新型分 离技术f 4 5 1 0 它是利用物质在临界点附近发生显著变化的特性进行物质的萃取和分离。 超临界c 0 2 提取卵磷脂的操作是：以蛋黄粉为原料，在2 5 3 5 m p a ，4 5 7 5 。c 下，用超 临界c 0 2 抽取2 5 h ，抽提出中性脂质，得到的蛋黄粉在常温下用3 - 5 的9 5 乙醇抽提， 然后去除乙醇，可得高纯度得卵磷脂【4 6 1 。或用超临界c 0 2 萃取中性脂质后，再用超临界 c 0 2 与乙醇夹带剂萃取残留在蛋黄粉中的磷脂，所获取萃取物再蒸发乙醇夹带剂t 4 7 。 这种方法可避免大量有机溶剂的使用，但由于最初的超临界二氧化碳脱脂法的生产及设 备投资较大，因而影响了工业化装置的投产。 1 7 卵磷脂的精制方法 1 7 1 柱层析法 用氧化铝、硅胶等固态物质作吸附剂，用适当溶剂淋洗分离混合物的吸附色层法是 种古老的方法。一般采用吸附柱层析和离子交换柱层析。 吸附柱层析 吸附柱层析的对象主要不是离子型的物质，也不是高分子物质，而是中等分子量的 物质。这类物质的极性可以有很大范围，从非极性的烃类化合物到水溶性的化合物均可。 所用吸附剂多是具有极性的物质。样品的吸附能力随其分子基团的极性和数目的增加而 增强哺引。吸附柱层析是以吸附剂为固定相，当移动相中的溶质在通过固定相时，由于它 们的吸附和解析能力不同，使它们在柱内的移动速度不同，从而达到分离的目的。 离子交换柱层析 离子交换柱层析是以离子交换树脂为固定相的层析分离方法。离子交换树脂作为固 定相，它是一类带有官能团的网状骨架。当溶液流过柱时，由于溶质分子带有不同性质 的电荷和不同的电荷量，因而在固定相和移动相之间可发生可逆交换作用，使各溶质移 动速度产生差异，从而达到分离目的别。 浙江大学硕士学位论文 1 7 2 乙酰化法阳1 脑磷脂能与醋酸或乙酸乙脂发生酰化反应，而卵磷脂则无此反应，利用该原理，将 脑磷脂进行酰化，然后用有机溶剂进行萃取，使卵磷脂得到纯化。s t e f a n o v 采用乙酰化 法用向日葵脂制备高纯磷脂，其方法是：将磷脂溶于氯仿吡啶溶液，在室温下加醋酸 进行酰化反应，反应完毕后用乙醚萃取，然后用丙酮沉淀，沉淀物又用乙酸溶解，可制 备高纯度卵磷脂【5 1 】。 1 7 3 高效液相色谱法 h p l c 法是7 0 年代迅速发展起来的一种分离分析技术。由于它的高效、快速、灵 敏，不需要高温操作等特点，在生命科学中得到广泛的应用。h p l c 法是利用物质在两相 中吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。当两相作相对移动时，被测物质在两项 之间进行反复多次的分配，这样使原来微小的分配差异产生了很大的效果，达到分离 分析及测定一些物理化学常数的目的。在h p l c 中，固定相( 对于分离卵磷脂和甘油磷 脂来讲是固体) ，溶剂用泵加到很高的压力，一般在2 1 1 2 8 0 m p a 之间，有时接近 2 8 3 2 m p a 。磷脂在专用色谱柱中被吸收，通过溶剂系统按不同流速分离出磷脂混合物中 的各组分【5 2 】。 1 7 4 半透膜法 此种分离方法主要是利用膜对组分的选择透性而将特定组分分离出来，半透膜上分 布着一定孔径的大量微孔。孔径的大小决定了分离物质的分子量或粒度大小。通过膜的 组分以膜两侧的浓度剃度为推动力进入到膜的另一测。利用膜的这种被动传递形式将组 分分离开来。粗卵磷脂中含有一定量的蛋白质、中性脂肪、脑磷脂，鞘磷脂等杂质，它 们的粒度大小、分子量与卵磷脂有较大的区别，所以它们通过半透膜的难易程度也不同， 由此卵磷脂得到分离。有关文献报道【5 3 】，用己烷异丙醇混合溶剂溶解的粗磷脂通过聚 丙烯半透膜，收集流过膜的溶液，蒸发溶剂，可使粗卵磷脂得到纯化。日本也在试验应 用膜分离技术制备高纯度的卵磷脂，将磷脂溶于溶剂中，形成微胶囊，根据不同分子量 进行膜分离，得到不同分子量的磷脂组分，从而制得高纯度卵磷脂产品。 1 4 浙江大学硕士学位论文 1 7 5 复合盐沉淀法 卵磷脂可以与金属离子发生配合反应，形成配合物，生成沉淀。利用此种性质，可 以把卵磷脂从有机溶剂中分离出来，由此除去蛋白质。脂肪等杂质，再用适当的溶剂分 离出无机盐和磷脂杂质( 主要是脑磷脂和鞘磷脂) ，这样可以大大提高卵磷脂的纯度。 c a c l 2 、m g c l 2 、z n c l 2 均可与卵磷脂发生配合反应形成复盐，但c a c l 2 、m g c l 2 提取卵磷脂 较低，且毒性较大，所以z n c l 2 是较理想的沉淀剂。据资料报道【5 4 1 ，用z n c l 2 纯化卵磷 脂的具体方法是：将l o o g 粗卵磷脂溶于1 l 9 5 的乙醇中，再加入4 5 9 z n c l 2 ，生成淡黄 色卵磷脂z n c l 2 复盐沉淀，离心分离此沉淀物，在氮气保护下，用2 5 m l 冰丙酮与沉淀物 混合，搅拌l 小时，可得到含量高达9 9 5 的卵磷脂。 1 7 6 酶催化精制提取法 卵黄卵磷脂中除含有磷脂酰胆碱外还含有磷脂酰肌醇，磷脂酰乙醇胺和磷脂酸等磷 脂，而采用磷脂酶可以将这些磷脂转化为磷脂酰胆碱，这样可大大提高磷脂酰胆碱的含 量，提高其有效成分的纯度，或将其转化成其他可利用的磷脂。l e k h 等人( 1 9 8 9 年) 采用 酶法来提高卵磷脂中乙酰胆碱的含量，所采用的酶来源于卷心菜中的磷脂酶，其研究结 果可将含磷脂酰胆碱8 0 的大豆卵磷脂和含磷脂酰胆碱为7 5 的卵黄卵磷脂的磷脂酰 胆碱含量分别提高为9 5 和1 0 0 k 5 5 1 0 1 7 7 乙酸乙酯法“6 1 将粗卵磷脂溶于乙酸乙脂中，将溶液冷却至一i o c ，然后离心分离沉淀，可以得到纯 度很高的磷脂，其中卵磷脂含量5 0 8 。由于乙酸乙脂是安全溶剂，用这种纯化技术得 到的产品可以用于医药，食品及化妆品。 浙江大学硕士学位论文 1 8 卵磷脂的测定方法 1 8 1 薄层色谱扫描法 薄层色谱是一种物理化学分离技术，其吸附剂一般是极性的，组分的分离程度是随 着吸附剂、被分离物质，展开剂性质的不同而有差异。当把涂布着极性吸附剂的干薄层 板放入展开剂中时，由于毛细管效应使展开剂开始进入有不同直径的毛细管相互连接的 薄板中，其流动速度与展开剂的表面张力，粘度以及吸附剂性质相关，此时，点在薄板 上的样品随着展开剂的移动而移动。由于被分离组分的极性差异使它们与吸附齐u 和展开 剂的亲和力产生差别，致使展开时各组分在薄板上移动速度不一样。被分离物质中与吸 附剂亲和力强的组分留在接近接近样品滴加点较近的地方，而与吸附剂亲和力弱的组分 在离原点较远的地方，从而使各组分分离开薄层色谱可以进行定性和定量分析。在定量 分析中使用薄层扫描仪方便快捷。薄层扫描仪是通过一束长宽可以调节的一定波长一定 强度的光照射到薄层斑点上，进行整个斑点的扫描，同时使用仪器测量通过斑点时光束 强度的变化而达到定量的目的【5 7 1 。 薄层色谱h 8 1 是一种物理化学分离技术，其吸附剂一般是极性的，组分的分离程度 随着吸附剂、被分离物质、展开剂的性质不同而有差异。当把薄层板放入展开剂中时， 由于毛细管效应使展开剂开始进入有不同直径的毛细管相互连接薄板中，此时点在薄板 上的样品随着展开剂的移动而移动。由于被分离组分的极性差异使他们与吸附剂和展开 剂的亲和