（食品科学专业论文）降解养殖水体亚硝酸盐的微生物制剂研究.pdf

独创性声明 幽删舢舢删删删f 删 y18 1 , 0 | i h0l un l l 15i d l u17l m i l l 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的内容以外，本论 文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文 的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：立孙 日期：加墨年易月f o 日 降解养殖水体亚硝酸盐的微生物制剂研究 s t u d yo nt h em i c r o b i a lp r e p a r a t i o nf o rn i t r i t e r e m o v a lo f a q u i c u i t u r ew a t e r 姓 2 0 0 8 年6 月 江苏大学硕士学位论文 摘要 我国是个渔业大国，近年来淡水养殖规模日益扩大，集约化、高密度养殖已 成为当前水产养殖业的主流模式。而随之出现的养殖水体水质恶化、水产养殖动 物疾病多发的问题制约了养殖经济效益的进一步提高，其中亚硝酸盐含量超标的 问题尤为突出。亚硝酸盐是氨在转化为硝酸盐过程中的中间产物，含量超标会对 鱼体产生毒害作用，严重的会使养殖动物大量死亡，对水产养殖业造成极大的危 害。因此它的含量是评价养殖水体水质的最要指标之一。 本论文通过对n 0 ：一降解菌株的筛选、菌株培养条件的优化、复合微生物制剂的 制备以及养殖水体环境对n o ；降解率的影响等方面进行了研究，初步探索了该复合 微生物制剂应用于降解养殖水体n 0 ：一的可行性。主要研究结果如下： 1 从虾塘淤泥中分离出一株光合细菌，初步鉴定为球形红假单胞菌。 2 分别对分离得到的光合细菌i 以及实验室保藏菌株植物乳杆菌、短乳杆菌、 热带假丝酵母进行了降解液体培养基中n o ：一的试验研究。结果表明，该四株菌株对 液体培养基中的n 0 。一均有很好的降解效果。在接种后第2 d ，光合细菌i 、植物乳杆 菌、短乳杆菌、热带假丝酵母的n 0 。一降解率分别为4 7 0 6 、9 8 1 、9 5 6 2 、9 5 5 1 ； 在培养的1 0 d 内n o 。一的最高降解率分别为9 9 9 6 、9 9 9 6 、9 9 9 4 、9 9 9 7 。 3 对选取的四株菌株进行降解养殖水样n 0 ：的试验研究。研究结果表明，光 合细菌i 、植物乳杆菌、短乳杆菌、热带假丝酵母在培养过程中对养殖水样中n o ：一 的最高降解率分别为8 5 8 7 、9 2 1 9 、8 1 2 5 、9 2 5 2 。其中，短乳杆菌在培养 的第1 2 d 有大幅度的反弹现象：光合细菌i 、植物乳杆菌、热带假丝酵母在被测的 1 0 d 内效果比较稳定。因此，选定光合细菌i 、植物乳杆菌、热带假丝酵母为试验 菌株，制备降解养殖水体n o 。一的复合微生物制剂。 4 对试验菌株的培养条件进行了优化。采用正交试验得到植物乳杆菌高密度 培养的最佳培养条件：总糖度7 的麦芽汁、2 水解植物蛋白粉、发酵温度3 5 、 p h8 、接种量7 ，在此条件下培养2 1 h ，培养液中的活菌数可以达到2 9 1 0 9 c f u m l ； 通过均匀设计试验得到热带假丝酵母的最佳培养条件：总糖度4 的麦芽汁、p h5 、 温度2 6 。c 、装液量2 5 i i l l 、接种量2 、转速1 0 0 r p m ，在此条件下培养3 6 h ，培养液 江苏大学硕士学位论文 0 d 湖值达到2 7 9 ；采用响应面分析设计方法对光合细菌i 的培养条件进行优化， 优化后的光合细菌i 培养条件为：n i - l c l0 9 9 9 、n a h c o 。1 6 8 9 、酵母膏0 6 9 、乙 酸钠2 5 9 、k 2 h p o 。0 4 9 、f e s o 。0 0 0 5 9 、m g c l 2 0 4 9 、n a c l 2 9 、温度3 0 c 、p h8 、接 种量8 9 、光照3 5 0 0 l x 、蒸馏水1 0 0 0 m l ，在此条件下培养5 d ，培养液o d 鲫可从 0 9 7 2 提高到1 3 4 3 。 5 采用正交试验确定了复合微生物制剂中菌株间的最佳配比。试验结果表 明，复合微生物制剂降解n o 。一的最优配比为光合细菌i ：植物乳杆菌：热带假丝酵 母= 1 ：2 ：l ( v v v ) ，以此配比组合的微生物制剂对养殖水样n o 。一的降解率为9 7 5 。 6 分别在2 5 和4 c 两种条件下贮藏，按0 5 的接种量接种，对该复合微生 物制剂的贮藏活性进行了研究。研究结果表明，2 5 条件下贮藏的发酵液存放3 0 d 时，接种培养4 8 hn 0 2 - 的降解率可达9 3 5 ，基本没有降低，而存放6 0 d 时，接种 培养4 8 hn 0 2 - 的降解率仅为8 6 3 ，其原因是微生物死亡率较高；而4 c 贮藏的发 酵液在存放9 0 d 时，接种培养4 8 hn o 的降解率仍可高达9 8 2 7 ，说明低温贮藏条 件下，复合微生物制剂降解n 0 ：一的性能保持良好。因此，该复合微生物制剂4 。c 条 件下贮藏期至少为9 0 d ，2 5 c 条件下贮藏期为3 0 d 。 7 探讨了复合微生物制剂的生物量与降解n o ：一能力的关系，结果表明在养殖 水样中菌体生长与降解n o ：一作用是同步关系。此外，对复合微生物制剂降解养殖水 体n 0 。一的特性进行了研究表明，养殖水体生态因子如初始n o 。一浓度、p h 值、温度、 溶氧以及接种量对微生物制剂降解n 0 ：一都有影响。其中，初始n o 。一浓度对复合微生 物制剂降解n o ：一的能力影响显著，当n o 。一浓度在5 m g l 以下时，其n o ：一降解率均在 9 5 以上，当n o 。一浓度高于5 m g l 时，对n 0 ：一的降解率下降；p h 的影响作用最小； 较适合的培养条件为温度3 5 c 、接种量0 5 、静置培养。复合微生物制剂在此条 件下培养2 4 h ，n o 降解率可达9 9 3 1 9 6 。 8 对复合微生物制剂降解n 0 2 _ 的机制进行了初步探索。在n o 。一被降解完全时，培 养液中检 空气体， 关键词： 江苏大学硕士学位论文 a bs t r a c t c h i n ai saf i s h i n gg i a n tn a t i o n r e c e n ty e a r sh a v ew i t n e s s e da q u a c u l t u r eb e c o m i n g l a r g e s c a l ea n di n t e n s i v ed a yb yd a y ；h i g h - d e n s i t ya q u a c u l t u r ef a r m i n gh a sb e c o m et h e k e y m o d ei n t h e a q u a c u l t u r ei n d u s t r y m e a n w h i l e ，a q u a c u l t u r e w a t e rs y s t e m d e t e r i o r a t i o na n dd i s e a s eo fa q u a t i ca n i m a l ，a r i s i n gf r o mt h ea q u a c u l t u r ef a r m i n g i n d u s t r y ，h a v ep r e v e n t e d t h ea q u a c u l t u r ef r o mb e i n g i m p r o v e df u r t h e r n i t r i t e o v e r - d e n s i t yp r o b l e ms h o u l db em o s t l yo u t s t a n d i n g n i t r i t ei st h ei n t e r m e d i a t ed u r i n g t h ep r o c e s so fa m m o n i at r a n s f o r m i n gi n t on i t r a t e ，a n dn i t r i t ec o n c e n t r a t i o ni nw a t e ri s o n eo ft h em a i nr e f e r e n c e st oi d e n t i f ya q u a c u l t u r ew a t e rs y s t e mq u a l i f i e do ru n q u a l i f i e d a c c o r d i n g t os c r e e no fn 0 2 。d e g r a d i n g s t r a i n ，o p t i m i z i n g c u l t i v a t i o no f b i o d e g r a d e db a c t e r i a , t h ep r e p a r a t i o no fc o m p o u n dm i c r o b i a lp r e p a r a t i o n ，a n dh o w n 0 2 b i o d e g r a d i n gr a t ew a si n f l u e n c e db ya q u a c u l t u r ew a t e re n v i r o n m e n t ，t h i st h e s i s d i s c u s s e dt h ep o s s i b i l i t yo fc o m p o u n dm i c r o b i a lp r e p a r a t i o nt ob eu s e di nt h ep r o c e s so f n 0 2 b i o d e g r a d a t i o ni na q u a c u l t u r ew a t e rs y s t e m t h em a i nr e s u l t sw e r ea sf o l l o w s ： 1 i s o l a t i o nas t r a i no fp h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i af r o ms e d i m e n to fs h r i m pp o n d ， w h i c hw a si n i t i a l l yi d e n t i f i e da sr h o d o b a c t e rs p h a e r o i d e s 2 n 0 2 - b i o d e g r a d a t i o nc a p a c i t yo fl i q u i dm e d i u mw i t hs o d i u mn i t r i t eu s i n g p h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i a - ii s o l a t e da n dl a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m 上a c t o b a c i l l u sb r e v i s ， c a n d i d af 唧泐腼s t o r e di nl a b o r a t o r yw e r es t u d i e d ，a l lr e s u l t so fw h i c hw e r ep r o v e dt o h a v eav e r yh i g hc a p a c i t yt ob i o d e g r a d en i t r i t e n 0 2 。d e n s i t yw a sf o u n dt od e c l i n eb ya v e r yl a r g es c a l e t h en e x td a ya f t e rt h et e s t i n gb e g i n s ，p h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i a - i , l a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m ，l a c t o b a c i l l u sb r e v i s ，a n dc a n d i d at r o p i c a l 括b i o d e g r a d a t i o n r a t e st on 0 2 w e r e4 7 0 6 ，9 8 1 ，9 5 6 2 ，9 5 5 1 ，a n dw h i c hr e a c h e dt h eh i g h e s t p o i n tv a l u eo f9 9 9 6 ，9 9 9 6 ，9 9 9 4 ，9 9 9 7 i n1 0c u l t i v a t e dd a y s 3 p e r f o r m i n gn 0 2 b i o d e g r a d i n gt e s t i n go nt h o s ef o u rs e l e c t e db a c t e r i a s i tw a s d i s c o v e r e d t h a t ，t h eh i g h e s tb i o d e g r a d a t i o n r a t eo fp h o t o s y n t h e t i c b a c t e r i a - i , l a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m ，l a c t o b a c i l l u sb r e v i s ，a n dc a n d i d af r d p l c 口融w e r e8 5 8 7 ， 9 2 1 9 ，8 1 2 5 a n d9 2 5 2 r e s p e c t i v e l y t h en 0 2 b i o d e g r a d a t i o nr a t ea s s o c i a t e dw i t h l a c t o b a c i l l u sb r e v i sr e b o u n d e db yav e r yl a r g es c a l e1 2 恤d a y sl a t e r ；a n dt h en 0 2 b i o d e g r a d a t i o nr a t e sa s s o c i a t e dw i t hp h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i a - i , l a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m a n dc a n d i d at r o p i c a l 西k e p tv e r ys t a b l ew i t h i nt h e1 0c u l t i v a t e dd a y s t h e r e f o r e ， 江苏大学硕士学位论文 p h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i a - i , l a c t o b a c i l l u sp 肠n m r u ma n dc a n d i d at r o p i c a l i s w e r e s e l e c t e da st h et r a i n so ft e s t i n gb a c t e r i a s ，a n dw o u l db eu s e df o r t h ef u r t h e rp r o c e s s i n g o fc o m p o u n dm i c r o b i a lp r e p a r a t i o n 4 t oo p t i m i z et h ec u l t u r em e d i u ma n df e r m e n t a t i o nc o n d i t i o n s t h ec u l t u r a l c o n d i t i o n so fl a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u mw e r eo p t i m i z e da sf o l l o w sb yo r t h o g o n a lt e s t ： m a l te x t r a c tm e d i u m7b i x ，h y d r o l y z e dp l a n tp r o t e i np o w d e r2 ，t e m p e r a t u r e3 5 c ，p h v a l u e8 ，i n o c u l a t i o nv o l u m e7 ；2 1 hc u l t i v a t i o np e r i o di nt h ec o n d i t i o n ，t h ev i a b l ec e l l s n u m b e rc o u l d r e a c h2 9 x 1 0 9 c f u m l t h eb e s tc u l t i v a t i o nc o n d i t i o n so fc a n d i d a t r o p i c a l i sw e r ea sf o l l o w sb yu n i f o r md e s i g nt e s t ：m a l te x t r a c tm e d i u m8b i x ，p h v a l u e5 ，c u l t u r et e m p e r a t u r e2 6 。c ，2 5 0 m ls h a k eb o t t l ef i l l e dw i t h2 5 m l l i q u i dm e d i u m ， i n o c u l a t i o nv o l u m e2 ，r o t a t i o ns p e e d1 0 0 r p m ；u n d e rt h e s ec u l t i v a t i o nc o n d i t i o n s ，3 6 h l a t e rc u l t i v a t e dl i q u o ro d 5 6 0v a l u ew a sa b l et or e a c h2 7 9 b yt h em e a n so fr e s p o n s e s u r f a c em e t h o d o l o g y ，t h eo p t i m a lc o n d i t i o n so fp h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i a - 1w e r ef o u n d ： n i - h c l0 9 9 9 ，n a h c 0 31 6 8 9 ，y e a s te x t r a c t0 6 9 ，c h 3 c o o n a2 5 9 ，k 2 h p 0 40 4 9 ， f e s 0 40 0 0 5 9 ，m g c l 20 4 9 ，n a c l2 9 ，t e m p e r a t u r e3 0 c ，p hv a l u e8 ，i n o c u l a t i o nv o l u m e 8 9 ，l i g h ti n t e n s i t y3 5 0 0 l x ，d i s t i l l e dw a t e r1 0 0 0 m l ；5 dc u l t i v a t i o nt op h o t o s y n t h e t i c b a c t e r i a - i , c u l t i v a t e dl i q u o ro d 6 6 0v a l u ec o u l db ei n c r e a s e dt o1 3 4 3f r o m0 9 7 2 5 d e t e r m i n a t i o nt h eb e s t p r o p o r t i o nb e t w e e nd i f f e r e n tk i n d s o fb a c t e r i ai n c o m p o u n dm i c r o b i a lp r e p a r a t i o nb yo r t h o g o n a lt e s t t e s t i n g r e s u l t ss h o w e dt h a t ， c o m p o u n dm i c r o b i a lp r e p a r a t i o nb i o d e g r a d a t i o nc a p a c i t yt on 0 2 c o u l db eb e s tw h e n d i f f e r e n tk i n d so fb a c t e r i ap r o p o r t i o nw a s ：p h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i a - i ：l a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u m ：c a n d i d at r o p i c a l i se q u a l e dt oi ：2 ：i ( v v f v ) ，u n d e rw h i c ht h ec o m p o u n d m i c r o b i a lp r e p a r a t i o nb i o d e g r a d i n gr a t et oa q u a c u l t u r en 0 2 。c o u l dr e a c h9 7 5 6 t h ec o m p o u n dm i c r o b i a l p r e p a r a t i o n w a sp r e s e r v e da t4 ca n d2 5 。c r e s p e c t i v e l y ，i n o c u l a t i o n v o l u m e 0 5 ，t h ea c t i v i t yo ft h ec o m p o u n dm i c r o b i a l p r e p a r a t i o nw a ss t u d i e d f r o mr e s u l t s ，a f t e r3 0 ds t o r a g e ，i n o c u l a t e dt h ef e r m e n t a t i o n l i q u i di n2 5 。ck e e p i n g ，t h eb i o d e g r a d i n gr a t et oa q u a c u l t u r en 0 2 。c o u l dr e a c h9 3 5 a f t e r4 8 hc u l t i v a t i o n ，t h ea c t i v i t ym a i n t a i n e dg o o d ；a f t e r6 0 ds t o r a g e ，t h eb i o d e g r a d i n g r a t et oa q u a c u l t u r en 0 2 。w a so n l y8 6 3 a f t e r4 8 hc u l t i v a t i o n ，t h ec a u s ew a st h eh i g h m o r t a l i t yo fc e l l i n o c u l a t e dt h ef e r m e n t a t i o nl i q u i di n4 ck e e p i n ga f t e r9 0 ds t o r a g e ， t h eb i o d e g r a d i n gr a t et oa q u a c u l t u r en 0 2 w a s9 8 2 7 a f t e r4 8 hc u l t i v a t i o n ，i tw a s d i s c o v e r e dt h a tt h ea c t i v i t yo ft h ec o m p o u n dm i c r o b i a lp r e p a r a t i o nc o u l dm a i n t a i n e d i v 江苏大学硕士学位论文 w e l li n c r y o p r e s e r v a t i o n t h e r e f o r e ，i tw a ss u g g e s t e dt h a tt h es t o r a g et i m ei n4 c k e e p i n gw a s9 0 da t l e a s ta n d3 0 di n2 5 。ck e e p i n gf o r t h ec o m p o u n dm i c r o b i a l p r e p a r a t i o n 7 t h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h eb i o m a s so ft h ec o m p o u n dm i c r o b i a lp r e p a r a t i o n a n dt h ec a p a b i l i 哆o fn 0 2 d e g r a d i n gw a sd i s c u s s e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a t s y n c h r o n o u sr e l a t i o n s h i pe x i s t e db e t w e e nt h ec e l lg r o w t ha n dn 0 2 。d e g r a d i n gi n a q u a c u l t u r es y s t e m i na d d i t i o n ，t h e c h a r a c t e r i s t i co ft h e c o m p o u n dm i c r o b i a l p r e p a r a t i o no nd e g r a d i n gn 0 2 o fa q u a c u l t u r ew a t e r ，i tw a sf o u n dt h a tt h ee c o l o g i c a l f a c t o r si na q u a c u l t u r ew a t e rh a di m p o r t a n ti n f l u e n c eo nt h en 0 2 d e g r a d i n gr a t e ，f o r i n s t a n c e ，i n i t i a lc o n c e n t r a t i o no fn 0 2 。，p hv a l u e ，t e m p e r a t u r e ，d i s s o l v e do x y g e na n d i n o c u l a t i o na m o u n t a l o n gw i t ht h ei n c r e a s i n go fn 0 2 。i n i t i a lc o n c e n t r a t i o n ，t h en 0 2 d e g r a d i n gr a t ed e c r e a s e dg r a d u a l l y ，w h e nt h en 0 2 i n i t i a lc o n c e n t r a t i o nw a sb e l o w 5 m g l , t h en 0 2 。d e g r a d i n gr a t ew a sa b o v e9 5 b a s i c a l l y ，w h e nt h en 0 2 i n i t i a l c o n c e n t r a t i o nw a sa b o v e5 m g 化t h en 0 2 。d e g r a d i n gr a t ed e c l i n e dl a r g e l y t h e i n f l u e n t i a la c t i o no fp hv a l u ew a st h el e a s t ，t h es u i t a b l ec o n d i t i o n sw e r et e m p e r a t u r e 3 5 ，i n o c u l a t i o nv o l u m e0 5 ，a n ds t a t i cc u l t u r e a f t e r2 4 hc u l t i v a t i o ni nt h es u i t a b l e c o n d i t i o n s ，t h en 0 2 。d e g r a d i n gr a t ec o u l dr e a c h9 9 3 1 8 p r e l i m i n a r yr e s e a r c ho i lt h em e c h a n i s mo fd e g r a d i n gn 0 2 f o rt h ec o m p o u n d m i c r o b i a lp r e p a r a t i o nw a ss t u d i e d v n l e nn 0 2 。w a sd e g r a d e dc o m p l e t e l y , t h ea m m o n i a n i t r o g e na n dn i t r a t ec o u l dn o tb ed e t e c t e di nc u l t u r es o l u t i o n ，e x t r a c t e dt h eg a so f l u t a f i o nb o t t l e sb yh e a ds p a c es o l i dp h a s em i c r o e x t r a c t i o n ，t h ec o m p o s i t i o no f g a sw a s d e t e c t e du s i n gg c m s ，t h ep r i m a r yc o n j e c t u r ew a st h a tt h ea p p r o a c ho fn 0 2 。d e g r a d i n g w a sn 0 2 - - n - - - n 2 k e yw o r d s ：p h o t o s y n t h e t i cb a c t e r i a ，l a c t o b a c i l l u sp l a n t a r u m ，c a n d i d at r o p i c a l i s ， o p t i m i z i n gc u l t i v a t i o n ，c o m p o u n d m i c r o b i a l p r e p a r a t i o n ， a q u i c u l t u r e w a t e r , n 0 2 d e g r a d i n gr a t e v 江苏大学硕士学位论文 目录 第一章绪论1 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 第二章 2 1 2 2 2 3 养殖水体中亚硝酸盐的污染与危害。1 1 1 1 养殖水体中氮素的循环过程。1 1 1 2 养殖水体中亚硝酸盐的污染1 1 1 3 亚硝酸盐对养殖动物的危害。2 养殖水体中亚硝酸盐的稳定性及降解机理。2 1 2 1 影响养殖水体中亚硝酸盐积累的主要因素2 1 2 2 养殖水体中亚硝酸盐的降解机理。3 降解养殖水体中亚硝酸盐的方法7 1 3 1 传统方法及存在问题7 1 3 2 微生物方法8 国内外关于微生物法降解养殖水体中亚硝酸盐的研究进展。8 复合微生物制剂的研究及存在问题1 2 立题依据与主要研究内容。1 3 养殖水体n 0 2 - 降解菌的筛选1 5 引言1 5 试验材料与仪器设备1 5 2 2 1 水样1 5 2 2 2 菌种来源1 5 2 2 3 培养基1 5 2 2 4 试验仪器与设备1 6 试验方法1 6 2 3 1光合细菌的富集培养1 6 2 3 2 光合细菌的分离纯化1 6 2 3 3 菌种鉴定方法1 7 2 3 4 n 0 2 标准曲线的绘制1 7 v i 江苏大学硕士学位论文 2 3 5 菌种活化培养方法。1 7 2 3 6 发酵液的制备1 8 2 3 7 水质测定指标及方法1 8 2 3 8n 0 2 - 降解率的计算1 8 2 3 9 光合细菌i 降解液体培养基中n 0 2 的试验1 9 2 3 1 0 光合细菌i 降解养殖水样n 0 2 。的试验。1 9 2 3 1 1乳酸菌降解液体培养基中n 0 2 - 的试验一1 9 2 3 1 2 乳酸菌降解养殖水样n 0 2 的试验1 9 2 3 1 3热带假丝酵母降解液体培养基中n 0 2 的试验1 9 2 3 1 4 热带假丝酵母降解养殖水样n 0 2 的试验1 9 2 4 结果与讨论2 0 2 4 1 光合细菌i 的分离及初步鉴定。2 0 2 4 2n 0 2 - 标准曲线的绘制2 0 2 4 3 光合细菌i 降解液体培养基中n 0 2 - 的试验2 0 2 4 4 光合细菌i 降解养殖水样n 0 2 的试验2 1 2 4 5 乳酸菌降解液体培养基中n 0 2 - 的试验2 2 2 4 6 乳酸菌降解养殖水样n 0 2 - 的试验2 3 2 4 7 热带假丝酵母降解液体培养基中n 0 2 - 的试验2 4 2 4 8 热带假丝酵母降解养殖水样n 0 2 - 的试验2 5 2 5 小结2 6 第三章养殖水体n 0 2 - 降解菌培养条件的优化。2 7 3 1 引言2 7 3 2 试验材料与仪器设备2 7 3 2 1 水样2 7 3 2 2 菌种2 7 3 2 3 培养基2 7 3 2 4 试验材料2 8 3 2 5 试验设备。2 8 3 3 试验方法2 8 v t t 江苏大学硕士学位论文 3 3 1 麦芽汁的制备2 8 3 3 2 菌种活化方法2 8 3 3 3 发酵液的制备一2 8 3 3 4 活菌数的测定2 9 3 3 5 培养条件的优化。2 9 3 3 6 生长曲线的绘制3 0 3 4 结果与讨论。3 0 3 4 1 植物乳杆菌培养条件的优化3 0 3 4 2 植物乳杆菌生长曲线的测定3 1 3 4 3 热带假丝酵母培养条件的优化3 2 3 4 4 热带假丝酵母生长曲线的测定3 4 3 4 5 光合细菌i 培养条件的优化。3 5 3 4 6 光合细菌i 生长曲线的测定。4 0 3 5 小结4 1 第四章复合微生物制剂的制备及贮藏活性4 2 4 1 弓