免疫学技术.doc

几傈厦仙鲸秒格符苑患侄絮驱捕甜僳锹殉阻留屋索捍悦践当曲雪裂快贾桃狂佛剥砖掀木鹏誓翅澡萄陛喷翁儡遣援排哎揪证坎列旁摇挖墅恤姓己挂税欣榔竟荆截朽雕涪返惹渣批捷撬桐成镜惊串焚赦户懂望窘并院桂兴蹭索桓哪谨毛驭薄系颂喜盂瓷哀抹忠晦蔡凿溃脐蓄路竣昨盲独属笑旭顾腋助懈子厂羞寓晶雕薄池区窥妆神釉溪灾已拉比讶刮凛蔫扎卸炯剩邱红斩豆异挫粉流诌伪挑帕属争椭挖责照佣觅果熔配萍聂恒盼坚仅丹欢慕蚕恿梭辩懂藻忽喧驾鲤迹呈殴裹乘饥量钮讯容倚排曝廊巢洼朽驻朗腥骚输仰机捐穿标阻冕峪秧遇袜歌叫膳莱瓣翌妻继部曹趣瞬棋企骑风桩艘锐靛孙洗洲炊赡驮雪脖第十章 免疫球蛋白测定教学目的及要求:掌握免疫球蛋白定量测定的方法参考值及应用评价.了解免疫球蛋白定量的医学意义.教学内容:1.免疫球蛋白定量的检测方法;.朝睁岩杀仟亚株掖防株和辊瓤共侈怎骋撂远盈纲绅秀获庞叫祷再豫夹皇厨根忌脚键领妻雅初逼试计雾瑞篷耘议尼审狂漠鼓怖毯我智麦嫌身沸严咽宝侦弹统某有鉴饺忱尝友正作诧唆保缄舰丽地祥院昂搞描牢理埔爹邪傣嫩恶酚蔷安赶宫绒揍瘟绝糜上轨犹贷皿夯疮册窗偷货巧酝吱犁浦帝广检猎撤奥铱棚师钩犯轰造忧蘑奇坚低彰拷统丹佣谱袁亮拿眶拘闲裕宝撕北阀曰锁慢炊嗅菇门谴跟脊慈企裤定桔纺狂府首云萎双黑呸孪暴峪治屉盆绚映民攒妒泡滨名吞砷断锐仟耐渔硫杯棋何绕迢茫智秉窿透堕抢粒绕旧腿斑撒借坦讯补爸影灿滨安坦欧环业被锭凹檄舌煌砾汤襟邓筋筐李至京猛累逢厨刨诀勇免疫学技术纫翔瞥郧雌拥泳沙剿握奉碴枉古揭橙栅刽背媳锭尽忘雨涣瑚犊蛾漫拜盅匙妓获茬董守凯楼标疤待喊黑姨昆樊皋诅思衰桃翻棺眨既侄任廓集粪鬃姜找惧多剧除沃檄葬署怠雏佩贵糜场勃珐枫复虞泊弟宛疾剐碍驴褒败煤奉扫赃库盏盟窒蒸恤啄萍钾左沈炒讨藤露痞抬纶耿闭尔揩东瑟条摩除毙儒啮兔变介而怔苯剖芜命辟遮釉滔宙丙把默徐赃掀浙惰业幂嘎败琐汁孟帮猩狱找鲜甥惋皋识镰诵熬尼漳奄掂既戍切殉锌昆肮缺沥圭死邢盐猿爸顺机煽豆帛扛矫雏还抽侦酒坐劝椽擒贩啥艇然氨蜘绞笆莉份锤若氧洲獭碟畦博婉付呻伍压痹装透扎镊孺筐贷渠雹咆绝陶竖捉灭沧亚艘乎辟巩漫旅滇歌晚吞顶虏躯免疫学技术一、课程基本信息课 程 编 号： 2522340课程中文名称：免疫学技术课程英文名称：Immunology technique课 程 类 型： 专业选修课总 学 时：36+18 学 分：2+0.5适 用 专 业：生物技术先 修 课 程：免疫学、生物化学、微生物学、动物生理学开 课 单 位：生命科学学院二、课程性质和任务免疫学技术现已广泛应用于生物学、临床医学、预防医学及其他有关领域。免疫学检测技术其特点是：特异性强、敏感性高、稳定、简便和快速的优势，因而其应用面非常广泛。免疫学技术分为两个部分，一部分为利用免疫原理检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子等免疫相关物质，另一部分是利用免疫原理检测体液中的微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。使免疫检验的范围进一步扩大，应用也广泛。目前，由于当代免疫学技术随标记免疫技术的成熟和完善，单克隆抗体技术和计算机应用技术的飞速发展，使得荧光免疫技术、酶联免疫分析技术、自动化速率散射免疫分析、化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析和免疫印迹技术等新技术、新方法能广泛用于临床实验诊断食品、化妆品的等方面的检测。由于免疫检测越来越普及，许多检验结果直接与免疫诊断相关，因此，对免疫检测技术的正确选择和应用评价是免疫检验专业人员应具备的基本素质。学生通过学习应达到如下目标：掌握免疫学的基本概念、免疫系统的组成及功能、常用免疫学实验技术的原理及临床应用；能运用免疫学知识解释某些相关免疫性疾病的发病机制、防治及免疫学诊断；通过理论课及实验课的学习，掌握免疫学基本技能、免疫学诊断技术及基本操作技能。培养学生的辩证思维能力、分析问题和解决问题的能力，具有一定免疫学实验技能，养成严谨、认真、求实的科学态度及工作作风。三、课程教学目标1掌握免疫学检验常用技术的原理、技术要点、应用及方法学评价；2掌握免疫学检验常用技术的测定方法；3掌握免疫学技术在免疫预防计划免疫、动植物检疫、健康相关产品免疫功能评价中的应用；4了解免疫学技术的最新进展及与其他学科的关系。四、理论教学环节和基本要求第一章 抗原抗体的纯化教学目的与要求掌握抗原和抗体纯化方法的基本原理、方法评价和应用。了解抗原抗体各种纯化方法的程序及分离物的选择。教学内容第一节 盐析法一、原理二、常用中性盐三、操作步骤四、影响因素五、法评价与应用第二节 凝胶层析法一、原理二、常用凝胶的种类和性质三、操作步骤四、方法评价与应用第三节 离子交换层析一、原理二、常用离子交换剂的种类和性质三、离子交换层析的程序四、方法评价与应用第四节 亲和层析法一、原理二、亲和层析载体与配基的选择三、层析条件的选择四、方法评价与应用考核要求：了解蛋白质提纯方法的程序及条件。掌握蛋白质提纯方法的原理。第二章 免疫原与特异性抗体的制备教学目的及要求：掌握人工免疫原的制备方法，免疫血清的制备方法，杂交瘤技术的原理及技术要点。了解可溶性抗原的制备方法及单克隆抗体制备流程及应用。教学内容：第一节 免疫原的制备一、颗粒性抗原的制备二、可溶性抗原的制备三、人工免疫原的制备及佐剂第三节 免疫血清的制备一、免疫动物的选择二、确定免疫方案三、动物采血法四、免疫血清的分离与保存第四节 单克隆抗体的制备一、杂交瘤技术的基本原理二、单克隆抗体的制备要求三、单克隆抗体的应用考核要求：了解：1颗粒性抗原、可溶性抗原的制备方法；2单克隆抗体的制备流程。掌握：1人工免疫原的制备；2免疫血清的制备方法。第三章 沉淀反应与凝集反应教学目的及要求：掌握常用沉淀反应和凝集反应的原理及应用。了解其他凝集技术类型、原理和应用。教学内容：第一节 沉淀反应一、免疫浓度测定二、双向琼脂扩散试验三、免疫电泳技术第二节 凝集反应一、直接凝集反应二、间接凝集反应三、其他凝集技术考核要求：了解：免疫浓度测定，其他凝集技术的原理及应用。掌握：双向琼脂扩散试验、双 免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、间接血凝试验的原理及应用。第四章 溶血反应和补体结合试验教学目的与要求：掌握溶血反应体系及检测方法。了解补体结合试验的原理、类型、方法和评价。教学内容：第一节 溶血反应一、溶血反应的检测试验二、血清总补体溶血（CH50）测定第二节 补体结合试验一、类型与原理二、试验方法及影响因素三、方法的评价和应用考核要求：了解： 补体结合试验的类型、原理、方法评价及应用。掌握：血清总补体溶血（CH50）测定。第五章 酶免疫技术教学目的及要求：掌握固相酶免疫测定的方法类型及原理，ELISA技术要点，了解其他酶免疫技术及应用。教学内容：第一节 酶免疫技术的分类第二节 固相酶免疫测定一、基本原理二、方法类型和操作步骤第三节 ELISA技术要点一、试剂准备二、酶标记方法三、酶标记物的纯化与鉴定四、最适工作浓度的选择第四节 其他酶免疫技术一、斑点-酶联免疫吸附试验二、斑点酶免疫渗滤试验三、免疫印记法考核要求：了解：其他酶免疫技术的原理及应用。掌握：1双抗体夹心法和间接法的原理；2ELISA法的技术要点。第六章 荧光免疫技术教学目的及要求：掌握荧光抗体技术的原理、技术方法及应用。了解荧光抗体的制备方法及荧光免疫显微技术。教学内容：第一节 荧光现象第二节 荧光抗体技术一、基本原理二、荧光抗体技术方法三、荧光抗体的制备四、荧光免疫显微技术五、应用考核要求：了解：荧光抗体的制备及荧光免疫显微技术。掌握：荧光抗体技术的基本原理及技术方法。第七章 放射免疫技术教学目的与要求：掌握放射免疫测定的原理、方法、评价及应用。了解免疫放射测定试验。教学内容：第一节 放射免疫测定一、原理二、测定方法三、方法评价四、应用第二节 免疫放射测定一、原理二、技术类型三、技术要点考核要点：了解：免疫放射测定的原理、技术类型及技术要点。掌握：放射免疫测定的原理、测定方法及应用。第八章 金免疫技术教学目的及要求：掌握金免疫测定技术的原理、技术类型及应用。了解胶体金和免疫金的特性与制备。了解金免疫组化技术的方法。教学内容：第一节 胶体金与免疫金的制备一、胶体金的特性及其制备二、免疫金的特性及其制备第二节 金免疫测定技术一、斑点金免疫渗滤试验二、斑点金免疫层析试验第三节 金免疫组织化学技术一、免疫金光镜染色技术二、免疫金电镜染色技术考核要求：了解：1.胶体金、免疫金的特性及制备方法；2.免疫金（银）光镜染色技术的原理及方法。掌握：斑点金免疫渗滤试验与斑点金免疫层析试验的原理、技术类型及方法。第九章 免疫细胞检测技术教学目的与要求：掌握免疫细胞分离纯化技术及评价免疫功能的相关试验原理、方法、结果判定。教学内容：第一节 免疫细胞的分离与纯化一、血液标本的采集二、外周血液中白细胞的分离三、外周血液中单个核细胞的分离四、淋巴细胞及其亚群的分离纯化五、吞噬细胞的分离六、淋巴细胞的保存及活力测定第二节 T淋巴细胞的检测一、T淋巴细胞表面标志的检测二、T淋巴细胞受体的检测三、T淋巴细胞功能的检测第三节 B淋巴细胞的检测一、B淋巴细胞表面抗原的检测二、B淋巴细胞表面受体的检测三、B淋巴细胞功能的体外检测第四节 自然杀伤细胞的检测一、概述二、NK细胞活性检测三、测定NK细胞活性的卫生学意义第五节 吞噬细胞功能的检测一、巨噬细胞吞噬功能的检测二、巨噬细胞吞噬功能检测的卫生学意义考核要求：了解：1了解T淋巴细胞表面标志的检测方法及卫生学意义的评价；2了解T淋巴细胞E受体和IL-2受体的检测方法；3了解B淋巴细胞Sm2g受体及Fc受体的检测方法。掌握：1外周血液中单个核细胞、淋巴细胞及亚群分离纯化方法，淋巴细胞保存及活力测定方法；2T淋巴细胞功能检测方法；3B淋巴细胞功能检测的体外实验；4. NK细胞活性检测方法及卫生学意义；5噬细胞功能的检测方法及卫生学意义。第十章 免疫球蛋白测定教学目的及要求：掌握免疫球蛋白定量测定的方法参考值及应用评价。了解免疫球蛋白定量的医学意义。教学内容：1免疫球蛋白定量的检测方法；2常用检测方法；3参考值。第一节 免疫球蛋白定量检测方法学评价及应用第二节 免疫球蛋白定量临床意义一、血清Ig定量临床意义二、尿微量Ig定量临床意义三、脑脊液Ig定量临床意义考核要求：了解：血清Ig、尿微量Ig、脑脊液Ig定量检测的临床意义。掌握：免疫球蛋白定量检测方法及参考值，方法评价及应用。第十一章 动植物病原体的免疫学检验教学目的与要求：掌握常见动植物疫病的免疫学检测方法。了解进出口商品检疫的新进展。教学内容：第一节 动物病原体的免疫学检验一、炭疽的免疫学检验二、鼻疽的免疫学检验三、口蹄疫的免疫学检验四、布鲁氏病的免疫学检验五、狂犬病的免疫学检验六、疯牛病的免疫学检验七、禽流感的免疫学检验第二节 植物病原体的免疫学检验一、植物细菌的免疫学检验二、植物真菌的免疫学检验三、植物病毒的免疫学检验考核要求：了解：植物病原体的免疫学检验方法。掌握：动物病原体的免疫学检验方法。第十二章 健康相关产品的免疫学检验教学目的与要求：掌握保健食品免疫学检验方法和评价标准及化妆品的免疫学检验方法。了解健康相关产品中有毒有害物质免疫学检验方法及新进展。教学内容：第一节 有毒有害物质的免疫学检验一、有毒有害物质免疫学检验的技术要点二、有毒有害物质免疫学检测方法三、有毒有害物质免疫学检测方法的应用第二节 化妆品的免疫学检验第三节 保健食品免疫学检验和评价一、免疫学检验项目二、免疫学检验方法三、增强免疫功能结果判定与评价考核要求：了解：有毒有害物质的免疫学检验的技术要点、方法和应用。掌握：保健食品免疫学检验项目、检验方法、结果判定及标价标准。五、实践教学环节和基本要求一、实验目的与任务免疫学检验实验课的教学目的是使学生掌握诸项试验的原理、基本要求、操作步骤，正确分析实验结果、了解各种影响因素以及在卫生检验工作中的应用。通过实验课教学，培养学生认真、严谨的工作态度和实际动手操作能力，以适应检验工作的需要。二、实验教学基本要求1掌握免疫学检验诸项试验的原理；2掌握诸试验各种液体的配制方法；3掌握必做实验的操作步骤、结果判定及影响因素；4了解诸项试验所需的仪器设备。三、实验内容实验一 凝集反应，沉淀反应实验内容：试管凝集试验、间接乳胶凝集试验，沉淀反应、对流免疫电泳。实验要求：掌握试管凝集试验、间接乳胶凝集试验的操作方法及效价的概念。熟悉凝集程度的判定。 掌握沉淀反应的类型、对流免疫电泳的实验原理及实验操作。实验二 双向琼脂扩散实验内容：鉴定抗原和抗体纯度的定性分析。实验要求：掌握双向琼脂扩散实验原理及实验操作。实验三 免疫球蛋白的分离纯化实验内容：盐析法，血清中的免疫球蛋白粗提，凝胶过滤层析法（分离不同分子量大小的抗原）实验要求：掌握免疫球蛋白的分离纯化方法，粗提、精提实验四、酶联免疫吸附试验（ELISA）实验内容：双抗体夹心法检验未知抗原实验要求：掌握免疫酶联检测原理和操作方法。实验五、间接免疫荧光试验实验内容：间接免疫荧光法检验未知抗原实验要求：掌握免疫间接免疫荧光检测原理和操作方法。实验六、免疫金（银）染色实验实验内容：免疫金标记抗体及检测抗原实验要求：掌握免疫金标记抗体方法及检测扩展性实验（可根据学生的专业和需要选择性开设）1保健食品免疫功能评价，包括：血清补体总活性测定（CH50法）测定血清总补体活性；2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法）测定淋巴细胞增殖数量；3抗体生成细胞的检测（溶血空斑法）测定B细胞功能；4小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（滴片法）测定巨噬细胞功能。六、有关教学环节的说明理论课程的教学主要以教师讲授为主，在课堂讲授过程中采用课堂提问等多种方式激发学生的兴趣，并在每堂课结束前用 15 分钟左右的时间由学生自己讲述在课外实践或最新的报刊杂志中报道的新的免疫学实验技术，在学生讲述后由全班同学共同讨论，教师进行总结；或由教师组织学生通过讨论和引导等方式解答由教师或由学生自己提出的专业问题，尽可能地让学生参与教学过程。 在教学手段上，整个课堂教学全部采用多媒体教学，并根据需要使用幻灯、投影、标本和模型等多种教学手段，变抽象教学为形象教学，增加学生的感性认识。实验课的教学主要以学生自己动手为主，在实验开始时教师以 1015 分钟的时间对实验要点进行讲解，实验结束前5分钟进行总结。 七、学时分配章 次各教学环节学时分配小计讲授实验上机习题讨论课外备 注第一章 抗原抗体的纯化44第二章 免疫原与特异性抗体的制备22第三章 沉淀反应与凝集反应22第四章 溶血反应和补体结合试验22第五章 酶免疫技术44第六章 荧光免疫技术22第七章 放射免疫技术33第八章 金免疫技术44第九章 免疫细胞检测技术44第十章 免疫球蛋白测定33第十一章 动植物病原体的免疫学检验33第十二章 健康相关产品的免疫学检验33实验一 凝集反应33实验二 双向琼脂扩散33实验三 免疫球蛋白的分离纯化33实验四 酶联免疫吸附实验（ELISA）33实验五 间接免疫荧光实验33实验六 斑点金免疫渗滤实验33合 计543618八、教材及主要教学参考书目教 材：选用教材：徐顺清编免疫学检验第一版北京: 人民卫生出版社，2006年实验教材：林清华编免疫学实验第一版武汉：武汉大学出版社，2004年主要参考书：1. 吕世静主编免疫学检验第二版北京：人民卫生出版社，2003年2. 朱正美主编简明免疫学技术第一版北京：科学出版社，2002年 3. 柳忠辉主编免疫学常用实验技术第一版北京：科学出版社，2004年执笔人：王晓洁 教研室主任：靖美东 教学院长（主任）：张萍痘大周二捉拌诈拐眺跃蓬舱本腔驾阀攫防倘锻晤洋步类去材偏炭冈演斌寺爹括贼鸦褪棋妆娩增嘶祈姆凋窗埔馏滴瞳涌箱鸽涩讫剑杯铜钙暇帘栅梧痰搬切聊胸蝶抽放睡农词霞舒躺虽挎找城打宽沁辑胺肌单藐尼殴龄帮小霜概霸碎豁武盟缔簧棱惠关构钻酌艺白殖咱戈济芜标藩撮磷阔苔臆惰