支原体、衣原体检测PPT课件.ppt

支原体、衣原体检测,1,实验目的,掌握支原体、衣原体检测方法，结果判断、临床意义和注意事项。熟悉支原体、衣原的概念分类及其相应的检测原理了解衣原体、支原体检测的临床意义，分泌物的采集、培养方法。,2,支原体概念和分类,支原体是一类无细胞壁，形态上呈多形性，可通过除菌器，能在无生命的培养基生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。肺炎支原体、生殖器支原体、穿通支原体人型支原体（Mh）、溶脲脲原体（Uu）,3,衣原体概念和分类,衣原体是一类能通过除菌器，专性细胞内寄生，有独特周期生活的原核细胞微生物。沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体,4,支原体检测的临床意义,支原体的临床意义：可以引起呼吸道感染支原体肺炎，泌尿生殖道的非淋病性尿道炎，男性前列腺炎、附睾炎、不育，女性阴道炎、宫颈炎、盆腔炎、输卵管炎、流产等，还可造成新生儿感染如脑膜炎、脑脓肿、硬脑膜下脓肿。,5,衣原体的临床意义沙眼衣原体不仅可致眼部感染，而且可引起生殖泌尿系统感染、性病淋巴肉芽肿以及其他器官疾病，为人类发病率最高的性传播疾病；鹦鹉热衣原体可引起肺炎和毒血症；肺炎衣原体主要引起青少年急性呼吸道感染。,衣原体检测的临床意义,6,支原体、衣原体检测标本采集,支原体标本棉拭子样本尿道棉拭子、宫颈管棉拭子、咽拭子液体样本精液、羊水、前列腺液、血清标本衣原体标本主要为无菌棉拭子采集宫颈分泌分或尿道分泌物还可有咽拭子、眼结膜拭子、黏稠脓液、血液、痰液等,7,支原体、衣原体检测的原理,支原体检测原理Uu具有脲酶分解尿素产生NH3，Mh具有精氨酸脱羧酶分解精氨酸也产生NH3，使培养基PH值升高，培养基由黄色变为红色。药敏试验板上包被有抗生素，若所测的支原体对包被的抗生素敏感，其酶活性受到抑制，不引起颜色变化。衣原体检测原理金标法：利用已知特异性鼠抗衣原体抗体来检测标本中的衣原体抗原。,8,检测试剂和器材,1、微生物实验常规工具2、支原体、衣原体棉拭子标本3、支原体、衣原体检测试剂盒4、一次性无菌吸管和试管5、报告签,9,支原体试剂盒组成,培养基鉴定药敏一体板无菌吸管无菌矿物油,10,衣原体试剂盒组成,11,一、支原体试验步骤,1、从冰箱中取出支原体试剂盒恢复室温2、从试剂盒中取出UU-Mh培养瓶一瓶，反应板一条，在反应板写上病人的姓名。3、取一只一次性无菌塑料吸管，然后吸取100ul的培养液加入反应板上的左上第一孔(作为空白对照)。4、将采集的标本拭子插入培养瓶，在靠近液面上方的瓶壁挤压旋转拭子数次，使拭子中样本渗入，然后将拭子取出；5、充分混匀接种了标本后的培养基，然后分别吸取100ul加入反应板的各孔。(空白孔除外)6、各孔滴加2滴无菌液体石腊，盖上反应板盖，置35-37C孵箱，培养24-48小时。,12,临床实际操作过程示范,1、设阴性对照孔2、样本处理,3、加样本液4、加矿物油,13,5、加盖标记6、恒温孵育,7、孵育后鉴定板可出现现象,14,支原体检测操作简化示意图,15,鉴定药敏一体板的模型图,16,支原体检测结果判断,根据临床和标准对照试验确定解脲脲原体（Uu）104ccu/ml、人型支原体（Mh）104ccu/ml为Uu、Mh非致病值，非Uu、Mh感染的正常人群定性试验阴性,17,支原体药敏结果分析,18,支原体检测结果报告,19,二、衣原体操作步骤,1、取裂解管一支，竖立滴入裂解液A6滴，放入患者棉拭在管内充分挤压，转动约15次，后放置2分钟。2、再滴加裂解液B至刻度（约6滴），然后同样操作上述挤压步骤。3、挤压棉签（尽量挤干），弃去棉签，在反应板的加样孔处滴加入3滴（约100ul）裂解后的溶液。5-10分钟后观察结果。,20,衣原体操作一,21,衣原体操作二,22,衣原体检测结果判断,1、阳性：有两条红色带出现。一条位于测试区（T），另一条位于质控区内（C）。解释：标本中含有沙眼衣原体抗原。2、阴性：仅在质控区内（C）出现一条红色带。解释：标本中检测不出沙眼衣原体抗原。（或是没有、或是含量低于可检测范围）3、无效：质控区内（C）未出现一条红色带,23,结果现象,24,注意事项,1、本试验注意无菌操作，避免污染杂菌，故操作时请点燃酒精灯。2、检测试剂盒都应先从保存的冰箱