（环境工程专业论文）石油降解细菌的表型特性和系统发育分析.pdf

p h e n o t y p l cc h a r a c t e r l s t l c sa n dp h y l o g e n e t l ca n a l y s i s o fc r u d eo i l d e g r a d i n gb a c t e r i a r u y a n g h a n ( c o l l e g e o fl i f es c i e n c e ，z h e j i a n gu n i v e r s i mh a n g z h o u c h i n a ，3 1 0 0 2 9 ) a b s t r a c t i s o l a t i o na n dc h a r a c t e r i s t i c so fc r u d e o i l - d e g r a d i n gb a c t e r i a t e ns t r a i n so fc r u d eo i l d e g r a d i n gb a c t e r i aw e r ei s o l a t e df r o mt h r e ed i f f e r e n ts o i ls a m p l e sb y s e v e nd i f f e r e n tm i n e r a lm e d i a t h ei s o l a t e sw e r e g r a m n e g a u v e a e r o b i c ，n o n s p o r e - f o r m i n gr o d s a jjo ft e ni s o l a t e sw e r ea b l et og r o wo nn a l k a n e sw i t hm e d i u ml e n g t h d i e s e lo i la n dc r u d eo i l b u t n o tp o l y c y c l i ca r o m a t i ch y d r o c a r b o n s b a s e do np h e n o t y p i cc h a r a c t e r i s t i c sb yb i o m 6 r i e u xv i t e km i c r o b i o l o g i c a li d e n t i f i c a t i o ns y s t e m s t r a i ne ，a 5 ，e v a 6 e 、，a 7 ，e v a 8 e v a 9w a si d e n t i f i e da sp s e u d o m o n a sa e r u g i n o s aw i t h9 9 i d e n t i t y 。 s t r a i ne v a l 0 e v a ”a n de v a l2 e x p r e s s e d 9 9 i d e n u t y t oa c i n e t o b a c t e r c a l c o a c e t i c u s - b a u m a n n f ic o m p l e xa n di e s st h a n1 i d e n t i t yt os p h i n g o m o n a s p a u c i m o b j l i s , s t r a i n e 、，a 1 3e x p r e s s e d9 5 i d e n t i t yt oa c i n e t o b a c t e rc a l c o a c a t i c u s - b a u m a n n f ic o m p l e xa n d4 i d e n t i t y t o 尺a l s f o n i a ( b u r k h o l d e r i a ) p i c k e 蝴o m a s i i ：a n ds t r a i n e v a l 4e x p r e s s e d9 7 i d e n t i t yt o a c i n e t o b a c t e r l w o f f i i u n i ia n di e s st h a n3 t oc o m a m o n a s a c i d o v o r a n s p h y l o g e n e t l ca n a l y s i s o fc r u d e o i l d e g r a d i n gb a c t e r i a p a r i a f s e q u e n c e so f 1 6 sr d n ao ft e nc r u d e o i l - d e g r a d i n g i s o l a t e sw e r eo b t a i n e d b y p c r a m p l i f i c a t i o na n ds e q u e n c i n g b a s e do np h y l o g e n e t i cc h a r a c t e r i s t i c s o f16 sr d n a 。s t r a i n e v a 5 e ，a 6 ，e 、，a 7 ，e 、，a 8 ，e 均w a si d e n t i f i e da sp s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a w h i c hb e l o n g e dt o b a c t e r i a y - p r o t e o b a c t e r i a 。p s e u d o m o n a c e a e m o r a x e l l a c e a eg r o u p 。p s e u d o m o n a s 。p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s ag r o u p s t r a i ne v a 伯，e v a l l e v a l 2 e v a l 3 e v a l 4b e l o n g e d t o b a c t e r i a ， y - p r o t e o b a c t e r i a ，p s e u d o m o n a c e a e m o r a x e l l a c e a eg r o u p m o r a x e l l a c e a e ，a c i n e f o b a c t e f b a s e do np h y l o g e n e t i ct r e eo f1 6 sr d n a e 、，a 5 e v a 6 e v a 7 。e 、，a 8 e ，a 9c l u s t e r e dw i t h p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a ；s t r a i ne v a l 0 e v a l l e v a l 2a n de v a l 3w e r ep o s i t i o n e di nac l u s t e r , b u tc l e a d yd i s t r i b u t e di nd i f f e r e n cs u b c l u s t e r s s t r a i ne v a l 0c l u s t e r e dw i t hd n a g r o u pc t t u l 3 ： s t r a i ne v a l lc l u s t e r e dw i t hd n a g r o u p3 ：e v a l 2c l u s t e r e dw i t hd n ag r o u p2 ：e v a l 3c l u s t e r e dw i t h d n a g r o u p1 3 t u l 5a n d s o m es t r a i n so f d n a g r o u p1 s t r a i ne v a l 4e x h i b i t e dm o s tc l o s el od n a g r o u p 7a n ds h o w e d g r e a ld i f f e r e n c et oo t h e rf o m ri s o l a t e s ! ! y ! 1 21 塑! ! ! ! ! 旦! ! ! ! ! ! 坠盟! 型盟l 旦i ! 唑! ! ! ! ! ! 型e ! 堕! ! ! 竖! 堕! ! ! ! ! 堕型! ! ! ! 坠型盟坠! ! ! ! 坠 i t sa n a l y s i so fc r u d eo i l - d e g r a d i n gb a c t e r i a 16 s 2 3 si n t e r n a lt r a n s c r i b e ds p a c e mw e r ea m p l i f i e db yp c rf r o mt e ns t r a i n so fc r u d eo i i d e g r a d i n gb a c t e r i a u s i n g g 1a n dl 1a sp d m e r p a i r , e a c ht e s t e ds t r a i n i n c l u d i n gp s e u d o m o n a ss p p a n da c i n e t o b a c t e rs p p g a v eac h a r a c t e r i s t i cp r o f i l ec o n s i s t i n go fd i f f e r e n tb a n d s t h em u l t i - b a n d p r o f i l e sf o r mf i v ea c i n e t o b a c t e rs p p r e p r e s e n t e dt h ec h a r a c t e r i s t i c so fa c i n e t 0 6 a f e r i ng e n u sa n d s p e c i e sl e v e l u s i n gg 1a n dp 2 a sp r i m e rp a i r , e x c e p tt h a te c o i ls t i l lp r o d u c e dt w o m a j o rb a n d s a l l o t h e rl e s t e ds t r a i n sp r o d u c e das i n g l eb a n d p c rp r o d u c t so fa c i n e t o b a c t e rs p p w e r es e q u e n c e d s u c c e s s f u l l yu s i n gg 1a ss e q u e n c i n gp r i m e ri nt h i ss t u d y a 16 s - 2 3 si t s r e g i o n o ft e nh y d r o c a r b o n d e g r a d i n g i s o l a t e sc o n t a i n e d p o t e n t i a l t r n a s e q u e n c e sf o rb o t hi s o l e u c i n ea n da l a n i n ei nt h eo r d e ro f16 sr r n a t r n a ”。t r n a a l a 2 3 sr r n a s e q u e n c e t h et r n a 。a n dt r n a a 。3i nt h e s et e ns e q u e n c e sh a ds a m el e n g t ho fs e q u e n c e sw i t h 7 7 b pa n d7 6 b p 。r e s p e c t i v e l y 1 nt h es e c o n d e r yt r n as t r u c t u r e s ，t h ep o s i t i o no fa n t i c o d o n f o rt r n a ”。 ( o a t ) a n dt r n a “。( t g c ) l o c a t e di n 3 5 - 3 7a n d3 4 3 6 ( c o r r e s p o n d i n gt ot r n a ”8a n dt r n a 吧 r e s p e c t i v e l y ) s e q u e n c e sa l i g n m e n ta n dp h y l o g e n e t i ca n a l y s i so f1 6 8r d n a a n di t ss h o w e d1 6 sr d n aa n d i t so fi s o l a t e sb e l o n g i n gt op s u e d o m o n a sa e r u g i n o s aw e r eh i g h l yc o n s e n ，e da n di t sw e r em o r e v a r i a b l ef h a n1 6 sr d n a o n l yt o t a if i v ev a r i a b l es i t e sw e r ef o u n di np a r t i a is e q u e n c e so f1 6 sr d n a ( a b o u tt h ef i r s t6 0 0 b pf r o m5 e n do f16 sr d n a ) a n dt h e s ev a r i a b l es i t e sa p p e a r e di nas m a l i5 0 b p r e g i o n ( r e g i o n4 0 0 - 4 5 0 ) s e q u e n c e s o ff i v ei s o l a t e sw e r ei d e n t i c a le x c e p tas i n g l eb a s ev a r i a b l ei n s t r a i ne ，a 9 t h er e s u l t so fs e q u e n c e a n a l y s i so fi t ss h o w e d s t r a i ne v a 5 ，e 、，a 6 e v a 7 e v a 8 ，e v a 9a n dt w o o t h e rs t r a i n so fp s e u d o m o n e sa e r u g i n o s ap o s i t i o n e di nag r o u pi n1 6 sr d n at r e e b u td i d n td i s p l a y t h ed i f f e r e n c e sa m o n gt h e s es t r a i n s t h e s ed i f f e r e n c e sc o u l db ec l e a r l ye x h i b i t e db yl t st r e e e ，a 5 e v a 6a n da t c c l9 6 6 0s h o w e dag r e a ts i m i l a r i t yt oe a c ho t h e r s t r a i ne v a 7 e 、，a 8a n dp a 0 1 s h o w e dag r e a ts i m i l a r i t yt oe a c ho t h e r s t r a i ne 、，a 9s h o w e ds o m ed i s t a n c ef r o mt h ec l u s t e ro fo t h e r s i xt e s t e ds t r a i n s s e q u e n c ea n a l y s i so f16 sr d n aa n dj t sf r o mi s o l a t e so fa c i n e f o b a c t e rs p p ( s t r a i n e v a l 0 e v a l l ，e v a l 2 e v a l 3 e v a l 4 ) r e v e a l e ds o m ed i s c r e p a n c y w i t hr e s u l t o f p h e n o t y p i c c h a r a c t e d s t i c es ot h a tt h ed e t e r m i n a t i o no fj s o l a t e sa ts p e c i e sl e v e la n dp h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i po f a c i n e t o b a c t e rs p p s t i l lw o u l dd e p e n do nf u d h e rs t u d y k e y w o r d s ：c r u d eo i l - d e g r a d i n gb a c t e r i a p h e n o t y p i cc h a r a c t e r i s t i c s p h y l o g e n e t i ca n a l y s i s 1 6 sr d n a 1 6 s 2 3 si t s ，p c ra m p l i f i c a t i o n b a c t e r i a li d e n t i f i c a t i o n 2 - 石油降解细菌的表型特性和系统发育分析 韩如呖 ( 浙江大学生命科学学院，杭州3 1 0 0 2 9 ) 摘要 f 1 石油降解菌株的分离和表型特性护 从三种不同土壤中分离和纯化得到1 0 个石油降解细菌菌株，菌株编号为e v a 5 ，e v a 6 ，e v a 7 ， e v a 8 ，e v a 9 ，e v a l 0 。e v a l l ，e ，a 1 2 ，e v a l 3 ，e v a l 4 。分离菌株均为好氧、革兰氏阴性、不形 成芽孢的杆菌。( 1 0 个菌株均能利用中等链长的烷烃、柴油和原油作为碳源，而不能以单环芳烃和多环 芳烃为碳源。菌株e v a l 0 e v a l l e v a l 2 和e v a l 3 能利用苯甲酸钠，但是仅菌株e v a l 3 能利用水 杨酸。1 7 根据b i o m e d e u xv i t e k 微生物鉴定系统得出的表型特性，可将分离菌株e v a 5 ，e v a 6 ，e v a 7 ， e v a 8 和e v a 9 鉴定为铜绿假单胞菌( p s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a ) 。e v a l 0 ， e v a l l ，e v a l 2 ，和 e v a l3 与醋酸钙鲍曼复合不动杆菌c i n e t o b a c t e r c a l c o a c e t i c u s - b a u m a n n i ic o m p l e x ) 的相似值分别 为9 9 ，9 9 ，9 9 ，9 5 ；e v a l 4 与a c i n e t o b a c t e r l w o f f i i j u n i i 的相似值为9 7 。 、 1 2 石油降解菌株基于l s sr d n a 的系统发育分析y 9 l ， 利用p c r 扩增和测序获得1 0 个石油降解菌株部分长度的1 6 sr d n a 序列根据1 6 sr d n a 序列， 可将菌株e v a 5 。e v a 6 ，e v a 7 ，e v a 8 e v a 9 鉴定为p s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a ，在系统发育上属 于b a c t e r i a ，y - p r o t e o b a c t e r i a ，p s e u d o m o n a c e a e m o r a x e l l a c e a eg r o u p ，p s e u d o m o n a s ， p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s ag r o u p ；而菌株e v a l 0 ，e v a l l ，e v a l 2 ，e v a l 3 ，e v a l 4 属于b a c t e r i a ， y - p r o t e o b a c t e r i a ，p s e u d o m o n a c e a e m o r a x e l l a c e a eg r o u p m o r a x e l l a c e a e ，a c i n e t o b a c t e r 在基于1 6 sr d n a 的系统发育树上，菌株e 、，a 5 e 、，a 6 ，e ，a 7 ，e 、，a 8 ，e ，a 9 与p s e u d o m o n a s a e r u g i r l o s 8 归于同一簇群，而菌株e v a l 0 ，e v a l l ，e v a l 2 ，e v a l 3 ，e v a l 4 与a c i n e t o b a c t e r 属的 各个种归于同一簇群。从a c i n e t o b a c t e r 属的系统发育树中可得出，菌株e v a l 0 ，e v a l l ，e v a l 2 和 e v a l 3 归于同一簇群的不同亚群。菌株e v a l 0 ，e ，a 1 1 和e v a l 2 分别与d n a g r o u p c t t u l 3 ，d n a g r o u p3 ，d n ag r o u p2 归于同一簇群。菌株e v a l 3 与d n ag r o u p1 - 3 ，t u l 5 和d n ag r o u p1 中的 部分菌株归于同一簇群菌株e v a l 4 最接近于d n ag r o u p7 ，与其它分离菌株关系较远。，+ - 3 ! ! ￥! 盟! 垫! ! ! 塑卫! 竖i 堂堂! ! ! ! ! i ! ! 箜! 业! ! ! ! i ! ! ! ! 堕! 堂竖! 竖笪! ! ! 匹垒! 丛塑丝些塑盟二! ! 丛 ir 3 石油降解菌株的i t s 序列分析 利用p c r 扩增和测序获得1 0 个石油降解菌株f t s 序列。( 利用g 1 和l i 引物扩增1 6 sr d n a - i t s 序列，不同的供试菌株具有不同的特征性d n a 条带，条带大小为3 0 0 b p 30 0 0 b p 。利用p 1 和p 2 引 物或g 1 和p 2 引物可扩增出全部分离菌株的i t s 序列的单一条带。不同的正向引物和l 1 配合能够扩 增出p 属菌株的单条带，而得到 属菌株的非特异性条带或未扩增出条, , g e u d o m o n a s a c i n e t o b a c t e r l t 带。t r 基于1 6 sr d n a 和i t s 的序列比对表明，p s e u d o m o n a s 菌株的1 6 sr d n a 和i t s 序列高度同源， 差异仅仅涉及单个碱基的变化。在1 6 sr d n a 的5 。端6 0 0 b p 中，5 个变异位点集中于一段6 0 b p 区域， 其它序列则完全相同；i t s 序列的变异略大于1 6 sr d n a ，约5 0 0 b p 的i t s 序列中共有7 个变异位点。 而p s e u d o m o n a s 分离菌株之间相比，1 6 sr d j a 和i t s 序列的变异位点分别为1 个和4 个。 a c i n e t o b a c t e r 属分离菌株的i t s 序列差异较大。9 个a c 仃e f o b a c f e r 属菌株的i t s 序列共有4 个保守 区，其中两个保守区包含t r n a ”。序列( 6 8 - 1 5 4 ) 和t r n a “”序列( 2 1 5 - 2 9 5 ) ，另外两个分别位于1 6 s r d n a t r n a “8 序列之间( 3 4 6 2 ) 和t r n a 8 “序列一2 3 sr d n a ( 6 2 3 6 5 4 ) 之间。e v a l 0 ，e v a l l ，e v a l 2 ， a c i n e t o b a c t e rb a u m a n n f ia t c c l 9 6 0 6 丁，a c i n e t o b a c t e rs p a t c c l 9 0 0 4 ，a c i n e t o b a c t e rs p ， a t c c l 7 9 0 3 ，a c i n e t o b a c t e r c a l c o a c e t i c u s a t c c 2 3 0 5 5 拥有较大片段的共有序列，3 4 5 1 6 区域中只 有2 9 9 位点表现差异。与上述7 个菌株相比，e v a l 3 和e v a l 4 的i t s 序列在多个区域表现不同程度 的插入和缺失。 10 个菌株的j t s 序列中均含有异亮氨酸和丙氨酸转运r n a 。分离菌株i t s 中的t r n a 8 序列和 t r n a ”。序列均高度保守，前者长度7 7 b p ，反义密码子g a t 位于3 5 - 3 7 位，后者长度为7 6 b p ，反义 密码子t g c 位于3 4 3 6 位。 比较分别基于1 6 sr d n a 和i t s 序列的系统发育树可得出，p s e u d o m o n a s 属分离菌株和其它 p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a 菌株归于同一群，利用1 6 sr d n a 基本可将分离菌株鉴定至种，但是无法 揭示菌株之间的差异；而利用i t s 序列得到的树状图谱显示e 、，a 5 ，e ，a 6 与a t c c l 9 6 6 0 亲缘关系最 接近，e v a 7 ，e w 8 与p a 0 1 最接近，e 、，a 9 与其它4 个分离菌株差异较大。p s e u d o m o n a s 属分离 菌株的1 6 sr d n a 和i t s 分析结果大致与生理生化特性相符，i t s 序列更好地显示了菌株差异。 a c i n e t o b a c t e r 属分离菌株e v a l 0 ，e v a l l ，e v a l 2 ，e v a l 3 ，e v a l 4 的表型特性，1 6 sr d n a 和i t s 的分析结果存在一些矛盾，确定种水平分类的地位和该属各个种之间的系统发育关系仍需进一步研 究。、 本研究为国内首次利用1 6 sr d n a 序列分析不同分类单位的污染物降解细菌的系统发育地位及 其生物多样性，并利用1 6 8r d n a 和i t s 序列在分子水平揭示相近菌株的差异。 关键词：虿地睦鲣缉萱，塞型缱丝，丞绫蕉直盆近，1 6 s r d n a ，1 6 s 一2 3 si t s ，p c r 扩增 细菌鉴定 - 4 - r u y a n l h a np h e n o t y p i cc h a r a c t e r i s t i c sa n dp h y l o g e n e t i c a n a l y s i so fc r u d eo i ld e g r a d i n g b a c t e r i a c h a p t e r 1r e v i e w 1 1 b i o d e g r a d a t i o no f c r u d eo i lh y d r o c a r b o nb ym i c r o o r g a n i s m p e t r o l e u mh y d r o c a r b o n sa r eo r ec o m m o ne x a m p l eo fo r g a n i cc h e m i c a l s w h i c he n t e rl h e e n v i r o n m e n tf r e q u e n t l ya n di nl a r g ev o l u m e st h r o u g hn u m e r o u sr o u t e s t h em a j o rr o u t e sa r et h e s e e p a g e f r o mn a t u r a ld e p o s i t sa n dh u m a na c t i v i t i e si nt h ep r o d u c t i o n t r a n s p o r t a t i o na n ds t o r a g eo f p e t r o l e u mi n v o l v i n gt h er i s ko fa c c i d e n t a ls p i l l ( b a l b ae ta 1 ，1 9 9 8 ) t h es p i l lo fm o r et h a n2 0 0 0 0 0 b a r r e l so fc r u d eo i if r o mt h eo i ft a n k e re x x o nv a l d e zi np r i n c ew i l l i a ms o u n d a l a s k a h a sr e f o c u s e d a t t e n t i o no nt h ep r o b l e mo fh y d r o c a r b o nc o n t a m i n a t i o ni nt h ee n v i r o n m e n t ( l e a h ya n dc o l w e l l ， 1 9 9 0 ) t h eg 叫w a r i n1 9 9 1r e s u l t e di nt h ew o r s tm a n m a d ee n v i r o n m e n t a id i s a s t e r , w i t hm i l l i o n so f g a l l o n so fc r u d eo i i r e l e a s e df r o mt h ed e s t r o y e do i lw e l l si n t ot h ew a t e r sa n ds u r r o u n d i n gi a n d f o r m i n gm o r e t h a n3 3 0o i ll a k e s ，c o v e r i n ga na r e ao f4 9k m 。s u c hr e l e a s eo fl a r g eq u a n t i t i e so fo i l t om a r i n ea n dt e r r e s t r i a le n v i r o n m e n t sp r e s e n tal o n gt e r mt h r e a tt oa l lf o r m so fl i f e ( b a l b ae ta 1 1 9 9 8 ) t h e s ei n c i d e n t sh a v ep r o m p t e dt h ed e v e l o p m e n ta n dr e f i n e m e n to ft e c h n i q u e sf o rd e a l i n gw i t h o i l p o l l u t i o n ，w h i c h i n c l u d ep h y s i c a l c h e m i c a la n db i o l o g i c a lm e t h o d s ( s w a n n e l le ta l ，19 9 6 ) b i o d e g 阳d a t i o no fh y d r o c a r b o n sb yn a t u r a lp o p u l a t i o n so fm i c r o o r g a n i s m sr e p r e s e n t so n eo ft h e p r i m a r ym e c h a n i s m sb yw i t hp e t r o l e u ma n do t h e rh y d r o c a r b o np o l l u t a n t sa r ee l i m i n a t e df r o mt h e e n v i r o n m e n t s ( l e a h ya n dc o l w e l l 19 9 0 ) a sa no i is p i l jc o u r t t e r m e a s u r e b i o r e m e d i a t i o nh a sb e e n d e f i n e da st h ea c to fa d d i n gm a t e d a i st oc o n t a m i n a t e de n v i r o n m e n tt oc a u s ea na c c e l e r a t i o no ft h e n a t u r e ib i o d e g r a d a t i o np r o c e s s e s ( s w a n n e l ie ta 1 ，19 9 6 ) 1 1 1c h e m i c a la n dp h y s i c a lc h a r a c t e r i s t i c so fc r u d eo i lh y d r o c a r b o n s c r u d eo i ih y d r o c a r b o n sc o n t a i nac o m p l e xm i x t u r eo fc o m p o u n d so fw h i c hc a nb ed i v i d e di n t o f o u rc l a s s e s ：t h es a t u r a t e d s t h ea r o m a t i c s ，t h ea s p h a l t e n e s ( p h e n o l s ，f a t i ya c i d s ，k e t o n e s e s t e r s ， a n dp o r p h y r i n s ) a n dt h er e s i n s ( p y r i d i n e s ，q u i n o l i n e s c a r b a z o l e s ，s u l f o x i d e s a n da m i d e s ) ( l e a h y a n dc o l w e l l 19 9 0 ) o ft h ev a r i o u sp e t r o l e u mf r a c t i o n s 。n - a l k a n e so fi n t e r m e d i a t el e n g t h ( c 1 0 c 2 0 ) a r et h ep r e f e r r e d s u b s t r a t e sa n dt e n dt ob em o s tr e a d i l yd e g r a d a b l e w h e r e a ss h o r t e rc h a i nc o m p o u n d sa r er a t h e r m o r et o x i c l o n g e rc h a i na l k a n e sk n o w na sw a x e s ( c 2 0 c 4 0 ) a n dd i f f i c u l tt od e g r a d ed u et ot h e i r p o o rw a t e rs o l u b i l i t ya n db i o a v a i l a b l i t y b r a n c h e dc h a i na l k a n e sa r ea l s od e g r a d e dm o r es l o w l yt h a n t h ec o r r e s p o n d i n gn o r m a la l k a n e s ( b a l b ae ta 1 1 9 9 8 ) h i g h - m o l e c u l a r - w e i g h t a r o m a t i c sa n d p o l a rc o m p o u n d s e x h i b i t e x t r e m e l y l o wr a t e so f d e g r a d a t i o n ( l e a h ya n dc o l w e l l 1 9 9 0 ) ，w h i c hd e p e n d st oal a r g ee x t e n to nt h e i rm o l e c u l a rw e i g h t s a m o n gm a n yo t h e rf a c t o r s ( b a l b ae ta 1 1 9 9 8 ) m o s to ft h el i t e r a t u r ec o n c e r n i n gt h em i c r o b i a l t r a n s f o r m a t i o no fp a hh a sc e n t e r e do nt h e l o w e r - m o l e c u l a r - w e i g h tc o m p o u n d s s u c h a s - 5 - r u y a n s lh a n p h e n o t y p i c c h a r a c t e r i s t i c sa n dp h y l o g e n e t i ca n a l y s i so fc r u d eo i ld e g r a d i n gb a c t e r i a n a p h t h a l e n e ，a n t h r a c e n e a n d p h e n a n t h r e n e ，b u t m o r er e c e n ts t u d i e sh a v ed e s c r i b e dt h e c a p a b i l i t i e so fo t h e rm i c r o o r g a n i s m s t om e t a b o l i z eh i g h e rm o l e c u l a rw e i g h tc o m p o u n d s ( b a l b ae ta 1 1 9 9 8 ) c y c l o a l k a n ed e g r a d a t i o nr a t e sa r es o m e w h a tv a r i a b l ea n dm u c hs l o w e rt h a nt h a lo fa l k a n e s h i g h l yc o n d e n s e da r o m a t i ca n dc y c l o p a r a f f i n i cs t r u c t u r e s ，t a r s b i t u m e na n da s p h a l t i cm a t e r i a l s h a v et h eh i g h e s tb o i l i n gp o i n t sa n de x h i b i tt h eg r e a t e s tr e s i s t a n c et ob i o d e g r a d a t i o n a s p h a l t e n e s a r et h ep r o d u c to fp e t r o l e u mh y d r o c a r b o n si n s o l it h a t a p p e a rt o b er e s i s t a n tt om i c r o b i a l d e g r a d a t i o n d u et o r e s i d u a im a t e r i a l si n e r tc h a r a c t e r i s t i c s i n s o l u b i l i t ya n ds i m i l a r i t yt oh u m i c m a t e r i a l s i ti su n l i k e l yt ob ee n v i r