（基础兽医学专业论文）兽用吲哚美辛注射液的临床前研究.pdf

目录 目录 摘 要i a b s t r a c t i i i 第l 章文献综述一1 1 1 药理作用及应用l 1 2 制剂研究进展2 1 3 不良反应3 1 4 兽医临床应用4 第2 章引 言7 第3 章兽用吲哚美辛注射液的处方工艺研究9 3 1 材料9 3 1 1 仪器9 3 1 2 试药9 3 2 方法与结果1 0 3 2 1 处方筛选1 0 3 2 2 制备工艺1 2 3 3 讨论13 第4 章兽用吲哚美辛注射液的质量标准研究。1 5 4 1 材料一15 4 1 1 仪器。一1 5 4 1 2 试药15 4 1 3 实验动物- 1 6 4 2 方法与结果16 4 2 1 性状16 4 2 2 鉴别16 4 2 3 检查16 4 2 5 含量测定1 7 4 2 6 有关物质检查2l 4 3 讨论2 2 第5 章兽用吲哚美辛注射液的稳定性研究2 3 5 1 材料2 3 5 1 1 仪器。2 3 5 1 2 试药2 3 5 2 方法与结果2 4 5 2 1 光照试验一2 4 5 2 2 初均速法。2 4 5 2 3 加速试验2 5 5 2 4 长期试验2 6 5 3 讨论2 7 西南大学硕士学位论文 第6 章兽剧吲哚美辛注射液的部分安全性试验2 9 6 1 材料2 9 6 1 1 仪器2 9 6 1 2 试药2 9 6 1 3 实验动物2 9 6 2 方法与结果2 9 6 2 1 急性毒性试验2 9 6 2 2 蓄积性试验3 0 6 2 - 3 耐受性试验一3 2 6 2 4 刺激性试验3 2 6 2 5 溶血性试验3 3 6 2 6 对小鼠一般行为表现的影响3 4 6 2 7 对小鼠自主活动的影响3 4 6 2 8 对小鼠协调机能的影响3 5 6 3 讨论3 1 ； 第7 章兽用吲哚美辛注射液的部分药效试验3 7 7 1 材料3 7 7 1 1 仪器一3 7 7 1 2 试药3 7 7 1 3 实验动物3 7 7 2 方法与结果3 7 7 2 1 解热试验一3 7 7 2 2 镇痛试验3 9 7 2 3 抗炎试验4 2 7 3 讨论4 3 参考文献4 5 致谢4 9 在学期间发表的论文和申请的专利5 1 摘要 兽用吲哚美辛注射液的临床前研究 基础兽医学 寸旨导老师寸日寸兀y i j 雷曙光 罗永煌 摘要 吲哚美辛自1 8 6 0 年由德国默克公司上市以来，已广泛用于人医临床，主要治 疗人的非特异性发热、肾小球肾炎、先天性醛固酮增多症、痛经、腹绞痛、风湿 性及类风湿性关节炎等疾病，其制剂有肠溶片、胶囊、栓剂、乳膏、贴剂等，未 见注射液上市。本文研制的吲哚美辛注射液属国家三类新兽药，有望应用于猪、 羊、牛等动物的普通感冒、流行性感冒、其他原因引起的发热性疾患、风湿症等。 作者按农业部兽药注册办法( 中华人民共和国农业部第4 4 号令) 要求，对该 注射液处方工艺、质量标准、稳定性、部分安全性和有效性等进行了临床前的部 分研究，旨在为该注射液下一步的临床试验和新兽药注册积累资料。其主要内容 如下： 1 吲哚美辛注射液处方工艺研究。通过单因素试验和正交试验对二甲基甲酰 胺、二甲基乙酰胺、丙二醇、聚乙二醇4 0 0 等有机溶剂及其用量进行了筛选。结 果以3 0 - - 甲基甲酰胺、3 0 丙二醇和4 0 水为混合溶媒，无水亚硫酸钠为抗氧 化剂，乙二胺四乙酸二钠为金属螯合剂，乙醇胺和乳酸为p h 调节剂，制备出浓度 为2 0m g m l 以且初步有效期可达2 年以上的吲哚美辛注射液。 2 吲哚美辛注射液质量标准研究。对制备的吲哚美辛注射液进行了鉴别、检查、 含量测定等研究。结果，鉴别反应灵敏；装量差异、热原、澄明度、p h 值等检查 指标均符合注射液相关要求。吲哚美辛注射液含量测定采取 玎? l c 方法，其色谱 条件：色谱柱为u l t i m a t ex b c 1 8 ( 4 6m m x 2 5 0m i l l ，5r t r n ) ，流动相为o 1m o l l d 冰醋酸溶液一甲醇( 2 0 - 8 0 ) ，流速为1 0m l m i l l 1 ，检测波长为2 2 8n l l l ，柱温为 室温。结果，吲哚美辛注射液在2 0 - - - 1 0 0 0l x g m l l 浓度范围内与峰面积呈良好线性 关系，r = 0 9 9 9 3 ；平均回收率为1 0 2 3 ( n = 9 ) ，相对标准偏差( r s d ) 为1 0 3 ； 最低定量限为3n g ，最低检测限为0 9n g ；在该条件下测得吲哚美辛注射液的含量 为18 6 4 8 + 0 2 9 5m g m l 一。 3 吲哚美辛注射液稳定性研究。光照试验( 照度4 5 0 0 5 0 0 l x ) 测定吲哚美辛 注射液对光的敏感性，初均速法预测吲哚美辛注射液的有效期；加速试验条件为： 温度4 0 士2 、相对湿度7 5 士5 ；长期试验条件为：温度2 5 士2 、相对湿度 两南大学硕十学位论文 6 0 士1 0 。结果，经1 0 天光照试验，吲哚美辛注射液的性状、澄明度、含量、 p h 值等指标未见明显变化；初均速法预测吲哚美辛注射液的有效期为2 2 1 年；加 速试验6 个月，吲哚美辛注射液的含量、p h 值、性状、澄明度等变化甚微；长期 试验1 2 个月，吲哚美辛注射液的含量略有下降，但与对照o 个月比较差异不显著 ( p 0 0 5 ) 。 4 吲哚美辛注射液部分安全性试验。采用改良寇氏法测定吲哚美辛注射的 l d 5 0 ，以剂量递增法测定其对小鼠的蓄积性和耐受性，常规法测定其对家兔的溶 血性和肌肉刺激性。结果，吲哚美辛注射液l d 5 0 = 5 0 2m g k g 一，该注射液对小鼠无 蓄积性和耐受性，对家兔无明显的溶血性和肌肉刺激性。 5 吲哚美辛注射液部分药效试验。用蛋白胨致热新西兰兔作解热试验，热刺痛 和醋酸刺痛法作镇痛试验，大鼠足趾肿胀法作抗炎试验。结果，吲哚美辛注射液 对蛋白胨致热的新西兰兔具有明显的解热效果，其解热作用与等体积的安乃近注 射液相当；对小鼠的热刺痛和醋酸刺痛具有明显的镇痛作用；对鸡蛋清致炎大鼠 的肿胀具有明显的抗炎作用。 关键词：吲哚美辛注射液；处方工艺；质量标准；稳定性；安全性 i l a b s t r a c t i i _ _ _ _ _ i _ _ _ _ _ ，_ _ _ - _ ! ，! ! ! ! ! ，_ 皂! p r e c l i n i c a ls t u d yo fi n d o m e t h a c i ni n je c t i o n u s i n gf o ra n i m a l s a b s t r a c t i n d o m e t h a c i nw h i c hw a sf r o mm e r c ko fg e r m a n yw a sg o n eo i lt h em a r k e ti n 18 6 0 i tw a sw i d e l yu s e di nh u m a nc l i n i c a l ，o f t e na ss t a n d a r dt r e a t m e n ti n n o n s t e r o i d a la n t i i n f l a m m a t o r yd r u g s c l i n i c a la p p l i c a t i o n so fi n d o m e t h a c i nw e r e r a r e l yr e p o r t e di nv e t e r i n a r y ，b u te x p e c t e dt ob eu s e do n c o m m o nc o l d ，i n f l u e n z a , o t h e r c a u s e so ff e b r i l e d i s e a s e s ，r h e u m a t i s ma n d s oo n t h a tw e r ec u r r e n t l yl i s t e d i n d o m e t h a c i n e n t e r i ct a b l e t s ，c a p s u l e s ，s u p p o s i t o r i e s ，p a t c he t c ，n oi t si n j e c t i o n t h e i n d o m e t h a c i ni n j e c t i o nt h i sa r t i c l ed e v e l o p e dw a san a t i o n a lt h r e en e wv e t e r i n a r yd r u g a c c o r d i n gt ot h em i n i s t r yo fa g r i c u l t u r eo ft h e ”v e t e r i n a r yu pa p p r o a c h ”( m i n i s t r yo f a g r i c u l t u r eo r d e rn o 4 4 ) r e q u i r e m e n t s ，t h ei n j e c t i o nf o r m u l a t i o na n dp r o c e s s ，q u a l i t y s t a n d a r d s ，s t a b i l i t y ，s a f e t ya n de f f i c a c yo fs o m eo t h e rp a r to ft h ep r e c l i n i c a ls t u d i e s w e r es t u d i e d , n e x tt op r o v i d et h ed a t af o rn e wv e t e r i n a r yd r u gr e g i s t r a t i o na n dc l i n i c a l t r i a l s t h em a i nc o n t e n t sw e r ea sf o l l o w s ： p a r t1 ：f o r m u l aa n dp r e p a r a t i o nt e c h n i q u es t u d yo fi n d o m e t h a c i ni n j e c t i o n t h e a m o u n to fd i m e t h y l f o r m a m i d e ，d i m e t h y l a e e t a m i d e ，p r o p y l e n eg l y c o l ，p o l y e t h y l e n e g l y c o l 4 0 0a n do t h e ro r g a n i cs o l v e n t sw e r es c r e e n e dt h r o u g hs i n g l ef a c t o re x p e r i m e n t s a n do r t h o g o n a lt e s t 1 1 1 ei n i t i a lp e r i o do fm j e c t i o nw a sp r e d i c t e db yi n i t i a la v e r a g er a t e m e t h o d t h er e s u l t sw e r ea sf o l l o w ：3 0 d i m e t h y l f o r m a m i d e ，3 0 p r o p y l e n eg l y c o l a n d4 0 w a t e rw e r ea sm i x e ds o l v e n t , a n h y d r o u ss o d i u ms u l f i t ew a sa sa n t i o x i d a n t s ， e d t a n a 2w a sa sam e t a lc h e l a t o r , e t h a n o l a m i n ea n dl a c t i ca c i dw e r ea sap hr e g u l a t o r t h ei n d o m e t h a c i ni n j e c t i o nw a sp r e p a r e d2 0 m g m li n d o m e t h a c i n , t h ei n i t i a lp e r i o d w a su pt o2y e a r s p a r t2 ：1 1 1 eq u a l i t ys t a n d a r d s t u d yo fv e t e r i n a r yi n d o m e t h i c o ni n j e c t i o n i d e n t i f y i n g ，e x a m i n i n g ，a s s a yo fi i n d o m e t h i c o ni n j e c t i o nw e r ed e t e r m i n e d r e s u l t s ： t h ei d e n t i f i c a t i o n s ，c o n t e n tu n i f o r m i t y , p y r o g e n ,c l a r i t y , p h ，m e tt h er e l e v a n t t 1 i 两南大学硕士学何论文 r e q u i r e m e n t so fi n j e e t i o n 乃ec o n t e n to fi n d o m e t h i c o ni n j e c t i o nw a sd e t e r m i n e du s i n g h p l cm e t h o d 。砀ec h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o nw a sa sf o l l o w ：西es e p a r a t i o nw a s p e r f o r m e do nt h eu l t i m a t e c l s c o l u m n 皿1 em o b i l ep h a s ec o n s i s t e do f0 i m o l l - 1 g l a c i a la c e t i ca c i d - m e t h a n o l ( 2 0 ：8 0 ) a n dt h ef l o wr a t ew a s1 o m l r a i n 1 n l ed e t e c t i o n w a v e l e n g t hw a s2 2 8 n ma n dt h ec o l u m nt e m p e r a t u r ew a sr o o mt e m p e r a t u r e r e s u l t s ： t h el i n e a rr a n g eo fd e t e r m i n a t i o nw a s2 0 9 9 m l - 1 mo o o l x g m l 1w i t ht h ec o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n tw a s0 9 9 9 3 。t h ea v e r a g er e c o v e r i e s ( 玎= 9 ) w a s1 0 2 3 ，t h er s dw a s 1 0 3 a n dt h el o qw a s3 n g l o dw a so 9 n g 1 1 1 ec o n t e n to fv e t e r i n a r yi n d o m e t j a c i n i n j e c t i o nw a s18 6 4 8 * 0 2 9 5 m g m l p r a t3 ：t h et h e r m a ls t a b i l i t yr e s e a r c ho fi n d o m e t h i c o ni n j e c t i o n t h ep e r i o do f v a l i d i t yo fi n d o m e t h i c o ni n j e c t i o nw a sp r e d i c t e dt h r o u g ht h e i n i t i a l e q u a l s p e e d m e t h o d a c c e l e r a t e dt e s tc o n d i t i o n s ：t e m p e r a t u r ew a s4 0 4 - 2 ，r e l a t i v eh u m i d i t y w a s7 5 4 - 5 ：l o n g 。t e r mt e s tc o n d i t i o n s ：t e m p e r a t u r ew a s2 5 c4 - 2 c ，r e l a t i v e h u m i d i t yw a s6 0 4 - 10 t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ei n d o m e t h i c o ni n j e c t i o nc a nb e s t o r e d2 11y e a r sa tr o o mt e m p e r a t u r e ；a c c e l e r a t e dt e s ta n dl o n g - t e r mt r i a l w e r e r e s p e c t i v e l yf o r6m o n t h sa n d1 2m o n t h s ，t h er e s u l t so fc h a r a c t e r , c l a r i t y , p h ，e t c c h a n g e dl i t t l e ，t h ec o n t e n to fi n d o m e t h i c o nd e c l i n e dal i t t l e ，b u tt h a th a dn os i g n i f i c a n t d i f f e r e n c ec o m p a r e dw i t ht h ei n i t i a lp r o c e s s ( p 0 0 5 ) p a r t4 ：t h ep a r ts a f e t yt e s to fi n d o m e t h a c i ni n j e c t i o n t h el d s oo fi n d o m e t h a c i n i n j e c t i o nw a sd e t e r m i n e db yi m p r o v e dk a r b e rm e t h o d 功ea c c u m u l a t i o na n dt o l e r a n c e w e r ed e t e r m i n e db yi n c r e a s e dd o s eg r a d u a l l yi nm o u s e ，c o n v e n t i o n a lm e t h o dw a su s e df o r t h ed e t e r m i n a t i o no fi t sh e m o l y t i ca n dm u s c l ei r r i t a t i o n n l er e s u l t ss h o w e dt h a t i n d o m e t h a c i ni n j e c t i o nl d s o = 5 0 2 m g k g 1 ；t l l ei n j e c t i o nw a s1 1 0a c c u m u l a t i o na n d t o l e r a n c ei nm o u s e ，w a sa l s on os i g n i f i c a n th e m o l y s i sa n dm u s c l ei r r i t a t i o nt or a b b i t s p a r t5 ：p h a r m a c o d y n a m i cp a r tt r i a l so fi n d o m e t h a c i ni n je c t i o n p e p t o n ew a s i n d u c e df e v e ri nr a b b i t su s i n gf o ra n t i p y r e t i ct e s t ，t h e r m a ls t i n ga p p a r a t u sa n da c e t i c a c i dw r i t h i n gt e s tu s i n gf o ra n a l g e s i a , r a t sp a ws w e l lt e s tu s i n gf o ra n t i i n f l a m m a t o r y r e s u l t ：i n d o m e t h a c i ni n j e c t i o ns h o w e db e t t e ra n t i p y r e t i ce f f e c t ，w h i c hw a ss a m ea s i s o c h o r i cm e t a m i z o l es o d i u mi n j e c t i o n , i nf e b r i l er a b b i t st a tp e p t o n ew a sa st h ef e v e r t h ei n d o m e t h a c i ni n je c t i o nh a db e t t e ra n a l g e s i ce f f e c ti nh o ta n dc h e m i s t r yr a wm o u s e ， b e t t e ra n t i i n f l a m m a t o r ye f f e c ti ns w e l lr a t s k e yw o r d s ：i n d o m e t h a c i ni n j e c t i o n ；f o r m u l at e c h n o l o g y ；q u a l i t ys t a n d a r d ；s t a b i l i t y r e s e a r c h ；s a f e t y i v 第1 章文献综述 第1 章文献综述 一吲哚美辛研究概况及其在动物上的应用 吲哚美辛又名消炎痛，自1 9 6 3 年由默克公司研发上市以来广泛用于人医临 床，常用于治疗人的非特异性发热、肾小球肾炎、先天性醛固酮增多症( b a t t e r 综合症) 、痛经、腹绞痛、风湿性及类风湿性关节炎等 1 】。该药通过抑制机体内前 列腺素的合成而产生解热镇痛及抗炎作用 2 1 。中国药典2 0 1 0 年版收载有吲哚 美辛的肠溶片、贴剂、栓剂、乳膏和胶囊剂【3 】。但中国兽药典一直未收载吲 哚美辛及其制剂，且该药在动物临床上的研究及应用报道甚少。本课题组近年来 一直从事吲哚美辛在动物上的应用研究，所研制的兽用吲哚美辛注射液，已经申 请专利并公开( c n l 0 1 7 3 2 2 4 9 a ) 【4 j 。本文概述了吲哚美辛的药理作用、临床应用、 制剂研究和不良反应等，旨在展望吲哚美辛在兽医临床上的应用前景。 1 1 药理作用及应用 1 1 1 解热、镇痛、抗炎作用 吲哚美辛通过抑制环氧合酶的合成，减少前列腺素的生成，使体温调节中枢 的调定点下调，恢复机体正常产热和散热的平衡，可用于治疗非特异性发热【5 1 。 魏亚平等【6 j 用吲哚美辛治疗剖宫产术后发热5 0 例，结果平均体温恢复正常时间为 0 8 + 0 6 1 d ( p o 0 5 ) ，表明吲哚美辛可有效治疗剖宫产术后发热。 吲哚美辛能够降低外周和中枢的前列腺素生成，从而减弱有害刺激引起的外 周和中枢敏感化，使有害刺激引起的炎症疼痛反应减轻，可用于治疗关节痛、肌 肉痛、偏头痛、痛经、肾绞痛等【5 1 。贾天成等【7 】用吲哚美辛胶囊剂、噻庚啶、心 得安治疗偏头痛，将典型病例分为3 组，分别服上述3 种药物，观察一年，另选 一组进行联合给药，结果联合用药组有效率为9 2 5 ，显著高于任何单一用药组 ( p d c ，即辅料影响顺序为二甲基甲酰胺的用量 乙醇胺的用量 乳酸的用量。 其优化水平组合为a l b 3 c l d 3 。即低浓度吲哚美辛注射液处方组成为：吲哚美辛 o 5g ，二甲基甲酰胺1 0 ，乙醇胺2 5 ，无水亚硫酸钠0 3 ，e d n 蝌a 2 0 1 ， 乳酸适量( p h 值8 0 8 2 ) ，注射液用水加至1 0 0 m l 。 3 2 1 2 高浓度的吲哚美辛注射液处方筛选 以当前上市的人用吲哚美辛制剂的量( 以片剂为例：2 5m e , 片) 来换算，主 药浓度为5m g m l 1 的吲哚美辛注射液完全满足人医临床需要。但是对于兽医临 床而言，尤其是猪、牛、羊、马等动物，主药浓度5 m g m l 。1 的吲哚美辛注射液存 在给药体积大，不便于临床应用的缺点。为此，本课题组又对高浓度吲哚美辛注 射液的处方进行了筛选。从3 2 1 1 ”可以看出当二甲基甲酰胺的比例在2 0 ( v ) 以内时，2 ( w v ) 吲哚美辛注射液稳定性差，所得处方的有效药物含量低。为 此，本课题组又提高了二甲基甲酰胺的用量，其中无水亚硫酸钠为抗氧化剂、 e d t a n a 2 为金属螯合剂，具体设计如下： 两南大学硕七学位论支 表3 3 高浓度吲哚美辛注射液的处方设计 t a b3 - 3f o r m u l ad e s i g no fh i g hc o n c e n t r a t i o ni n d o m e t h a c i ni n j e c t i o n 吲哚美辛( g ) 二甲基甲酰胺( m l ) 丙二醇( m l ) p h 值 1 群2 5 3 4 13 03 0 7 6 l 9 存 1 0 群 1 l 毒 1 捌 2 5 3 3 5 2 5 3 4 3 2 。5 3 3 8 2 5 3 5 6 2 5 3 6 4 2 5 3 4 5 2 5 3 3 4 吲哚美辛( g ) 2 5 3 4 3 2 5 3 4 2 2 5 3 2 8 2 5 3 5 3 二甲基甲酰胺( m l ) 3 0 3 0 3 0 4 0 3 0 3 0 4 0 4 0 4 0 5 0 聚乙二醇( m l ) 3 0 3 0 3 0 4 0 7 9 6 8 4 3 7 6 4 8 0 6 8 5 2 8 6 2 p h 7 5 9 7 9 6 8 6 3 7 6 8 1 3 # 2 5 3 4 2 5 050-一 经过初均速法热稳定性试验初步筛选出合格的处方为：1 群、2 群、4 f j 、5 群、8 群、 9 撑、1 3 # 。最优处方如下： 吲哚美辛2 5 3 4 1g 二甲基甲酰胺3 0m l 丙二醇3 0m l 乙醇胺1m l 无水亚硫酸钠0 3 0 1 3 g 乙二胺四乙酸二钠0 0 1 4 3 g 乳酸 适量( p h 7 5 7 8 ) 注射用水加至1 0 0 m l 3 2 2 制备工艺 ( 1 ) 称量：准确称取吲哚美辛、无水亚硫酸钠、7 , - - 胺四乙酸二钠，分别盛 于洁净的容器内备用； ( 2 ) 配制：取二甲基甲酰胺3 0m l 、丙二醇3 0m l 和乙醇胺1m l 置洁净的 烧杯内，加入吲哚美辛2 5 3 4 1g ，搅拌，充分溶解； ( 3 ) 取注射用水1 0m l 至洁净的另一烧杯内，加入无水亚硫酸钠0 3 0 1 3g 和 如 加 们 加 柏 赫 璐 斜 璐 甜 僻 磷 第3 章兽用吲哚美辛注射液的处方工艺研究 7 , - 胺四乙酸二钠0 0 1 4 3g ，搅拌，使其充分溶解，转入( 2 ) 内，混匀； ( 4 ) 在( 2 ) 中，加入乳酸适量，调p h 值至7 5 7 8 ，加注射用水至全量，混 匀，分别用o 4 5 岬和o 2 2g m 的微孔滤膜过滤，检验合格后，进行灌封，1 2 1 灭菌3 0 分钟。 按上述处方、工艺，在重庆市吉亨动物药业有限公司中试3 批吲哚美辛注射 液( 批号为：2 0 0 9 1 0 0 8 ，2 0 0 9 1 0 0 9 ，2 0 0 9 1 0 1 0 ) ，每批1 万支( 5 m l ：1 0 0 r a g ) 。 3 3 讨论 吲哚美辛在水中几乎不溶，溶于乙醚、乙醇、氯仿、甲醇等有机溶剂。由于 吲哚美辛不溶于水，在强酸强碱条件下易被水解，因此选用合适的溶媒成为研制 吲哚美辛注射液的关键。由于低浓度的吲哚美辛注射液不便于大动物临床应用， 因此研制出高浓度的吲哚美辛注射液具有积极意义。在高浓度吲哚美辛注射液中 对于有机溶剂的用量和p n 值控制是筛选本注射液处方的关键。 经过筛选吲哚美辛注射液的处方组成为：2 吲哚美辛、3 0 - 甲基甲酰胺、 3 0 丙二醇、1 乙醇胺、0 3 无水亚硫酸钠、o 0 1 e d 口州a 2 、乳酸适量、注射 用水加至1 0 0 m l 。其中吲哚美辛为主药，无水亚硫酸钠为抗氧剂，e d t a n a 2 为金 属螯合剂，乙醇胺和乳酸均为p h 调节剂。在此处方中，吲哚美辛本身不溶于水， 加入乙醇胺有助于增加吲哚美辛溶解度，但溶液碱性较强对动物的刺激性较大， 因而选用乳酸回调p h 值至7 5 7 8 ( 最佳为7 6 ) ，降低了该注射液的刺激性。 西南大学硕七学位论文 1 4 第4 章兽用吲哚美辛注射液的质量标准研究 第4 章兽用吲哚美辛注射液的质量标准研究 药品质量标准是新药研发与注册申报的重要组成部分，是衡量药物质量可控 的重要手段，同时也是为了深入研究制备工艺对药物性质的影响。本章参照中 国药典2 0 0 5 年版吲哚美辛及其制剂项下的内容重点考察了吲哚美辛注射液的含 量测定方法，并参照“制剂通则 项下的要求对吲哚美辛注射液的性状、鉴别、 检查、含量及有关物质分别进行了研究【3 6 1 。 4 1 材料 4 1 1 仪器 u 18 0 0 型紫外分光光度计：日立高科技贸易有限公司； 高效液相色谱仪：s p d m 2 0 a 检测器，l c 2 0 a d 泵，l cs o l u t i o n 液相色谱工作 站，日本岛津公司； m e 2 1 5 s 型电子天平：德国s a r t o r i u s 公司； k q 2 5 0 d b 型数据控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司； p h s 3 c 型精密p h 计：上海虹益仪器仪表有限公司； y b 2 型澄明度测定仪：天津大学无线电厂； d k b 5 0 q a 型恒温水槽：上海精宏实验设备有限公司； 三用恒温水浴箱：北京市医疗设备厂； 高压灭菌锅：上海申安医疗仪器厂； s h z _ - i i i 型循环水真空泵：上海亚荣生化仪器厂。 4 1 2 试药 吲哚美辛注射液：规格5 m l ：1 0 0 m g ，批号：2 0 0 9 1 0 0 8 、2 0 0 9 1 0 0 9 、2 0 0 9 1 0 1 0 ， 重庆市吉亨动物药业有限公司试制； 吲哚美辛对照品：供含量测定用，批号1 0 0 2 5 8 2 0 0 4 0 3 ，四川省药品生物制品 检定所： 甲醇：色谱纯，批号2 0 0 9 0 3 0 4 ，天津四友精细化学品有限公司； 冰乙酸：色谱纯，批号2 0 0 8 1 2 0 5 ，成都市科龙化工试剂厂； 乳酸：分析纯，成都市科龙化工试剂厂； 氢氧化钠：分析纯，成都市科龙化工试剂厂； 氯化钠：分析纯，成都市科龙化工试剂厂； 重铬酸钾：分析纯，成都市科龙化工试剂厂； 1 5 西南大学硕士学位论文 无水亚硝酸钠：分析纯，成都市科龙化工试剂厂。 4 1 3 实验动物 中国家兔3 只，雄性，体重在1 5 - 1 8 埏，购自重庆医科大学动物实验中心。 重庆医科大学实验动物中心，实验动物生产许可证号：s c x k ( 渝) 2 0 0 7 0 0 0 1 ； 西南大学药学院实验动物使用许可证号：s y x k ( 渝) 2 0 0 9 0 0 0 2 。 4 2 方法与结果 4 2 1 性状 肉眼观察3 批( 2 0 0 9 1 0 0 8 、2 0 0 9 1 0 0 9 、2 0 0 9 1 0 1 0 批，下同) 吲哚美辛注射液 的颜色及澄明度，结果均为淡黄色或黄色的澄明液体。 4 2 2 鉴别 参照中国药典2 0 0 5 年版二部吲哚美辛鉴别项，取吲哚美辛注射液适量( 约 相当于吲哚美辛1 0m g ) ，加入2 0 n a o h 溶液2 滴，混合均匀取溶液l m l ，加 0 0 3 重铬酸钾溶液0 3m l ，加热煮沸，放冷，加硫酸2 3 滴，置水浴上缓缓加 热，应显紫色；另取溶液1m l ，加0 1 亚硝酸钠溶液0 3m l 。加热至沸，放冷， 加盐酸o 5m l ，应显绿色，放置后，渐变黄色。 按照上述要求对3 批吲哚美辛注射液液进行检查。结果显示3 批注射液的显 色反应呈正反应，符合规定。 4 2 3 检查 4 2 3 1p h 检查 按照中国兽药典2 0 0 5 年版一部附录“p h 值测定法”要求，检查3 批吲 哚美辛注射液的p h 值均在7 4 7 9 范围。 4 2 3 2 装量检查 参照中国兽药典2 0 0 5 年版一部“注射液装量检查”要求，取3 批吲哚美 辛注射液各1 0 支，将注射液分别用相应体积的干燥注射器及注射针头抽尽，然后 注入经标化的量具内，在室温下检视。每支的装量均不得少于其标示量。该注射 液的装量为5m l 支，经检视，本品3 批各1 0 支装量均符合规定。 4 2 3 3 澄明度检查 按照农业部发布的兽药澄明度检查标准规定对本品进行检查。取3 批吲哚美 辛注射液各4 0 支进行检查，结果其澄明度均符合规定要求。 1 6 第4 章兽用吲哚美辛注射液的质量标准研究 4 2 3 4 热原检查 参照中国兽药典2 0 0 5 年版一部附录“热原检查法”要求，对吲哚美辛注 射液进行热原检查。 ( 1 ) 体温测定：兔箱固定法，每组1 只家兔。将涂有液体石蜡( 润滑作用) 的肛表顺肠腔方向，先下后平行轻插入至肛表刻度3 7 处( 约6e r a ) 。保留1 5r a i n ， 轻取出读数。隔1 5m i n 后再测体温，取两次体温值的平均值为正常体温。正常体 温在3 8 3 - - 3 9 6 。 ( 2 ) 给药 耳缘静脉注射吲哚美辛注射液o 4 5m l k 9 1 ，速度缓慢注射完毕后 每隔3 0 m i n 测定体温，测3 次一 一计算体温升高值，即3 次体温中最高值 正常体温( 若为负值以o 计) 。 ( 3 ) 结果判断：合格条件：3 只家兔体温升高数 0 6 c 且3 只兔体温升高数和 1 4 c 。不合格条件：3 只家兔中有2 只或2 只以上体温升高数o 6 c 。 经过预试筛选合格的家兔进行试验，试验结果如下表： 表4 - 1 吲哚美辛注射液热原检查结果 t a b4 - 1p y r o g e nt e s tt a b l eo fi n d o m e t h a c i ni n j e c t i o n 由上表可知，吲哚美辛注射液热原检查体温升高度数最大为o 4 c ，3 只家兔 升高温度的和为0 8 ，表明该注射液热原检查符合规定。 4 2 5 含量测定 ， 4 2 5 1 色谱条件 色谱柱：u l t i m a t ex b c 1 8 ( 4 6i 砌2 5 0i t i n l ，5 岬) ；流动相：0 1m o l l d 冰醋酸溶液甲醇( 2 0 ：8 0 ) ，0 4 5p a n 滤膜过滤待用；检测波长：2 2 8m ；流速： 1 0 0m l m i n 1 ，进样量：2 0 此；柱温：室温。在上述色谱条件下，吲哚美辛与各 杂质峰及溶剂峰分