国产苯扎贝特片人体相对生物利用度的研究.doc

国产苯扎贝特片人体相对生物利用度的研究中国临床药理学杂志 2000年第4期第16卷 论著作者：谭力钱峰张杰凌树森单位：南京军区南京总医院临床药理科,南京210002关键词：苯扎贝特；高效液相色谱法；相对生物利用度摘要目的：观察20名男性健康志愿者随机交叉口服单剂量200mg国产和进口苯扎贝特片后血药浓度变化，进行药代动力学和相对生物利用度研究；方法：用反相高效液相色谱测定苯扎贝特血药浓度，用3P87药代动力学程序计算有关药代动力学参数，其主要药代动力学参数经三因素方差分析；结果：国产和进口苯扎贝特片的血药浓度-时间曲线均符合口服吸收一室模型，主要药代动力学参数Tmax分别为2.380.89 h和2.160.79 h，Cmax分别为6.221.30mgL-1和6.571.23 mgL-1，T1/2分别为1.670.43h和1.490.35h，AUC012分别为20.323.98 mghL-1和19.803.65 mghL-1；两种制剂的主要药代动力学参数均无显著性差异(P0.05)；结论：以进口片为标准参比制剂，国产片的相对生物利用度为102.68.3%，双单侧t检验结果提示，两种制剂生物等效。 Relative Bioavailability of Bezafibrate Tablet in Healthy VolunteersTAN LiQIAN FengZHANG JieLING SHu-Shen(Department of Clinical Pharmacology,Nanjing General Hospital of Nanjing Military Region,Nanjing 210002)AbstractObjective:The pharmacokinetic profiles and the bioavailability of domestic tablets of bezafibrate were studied in 20 healthy volunteers.Methods:A single oral dose of 200mg bezafibrate domestic or imported tablet was given to each volunteer according to a crossover design.The concentrations in plasma were measured by HPLC.Results:The results showed that the plasma concentration-time curves of the domestic and imported products were fitted to one-compartment model.The main pharmacokinetic parameters of bezafibrate were:AUC012 20.323.98 mghL-1 and 19.803.65 mghL-1,Tmax 2.380.89 h and 2.160.79 h;Cmax 6.221.30 mgL-1 and 6.571.23mgL-1;t1/2 1.670.43h and 1.490.35h for domestic and imported tablet respectively.The pharmacokinetic parameters obtained from our studies showed no significant difference between domestic and imported tablets (p0.05).Conclusion:The relative bioavailability of two products was 102.68.3 %.The results showed that both formulations were bioequivalent.Key wordsbezafibrate;bioavailability苯扎贝特(bezafibrate)为一种降血脂药物，为较新苯氧芳酸衍生物,在临床上用于治疗以高胆固醇和高甘油三酯为特征的脂肪代谢紊乱病人1。经国内外多年使用，证明其降脂效果好而药物不良反应较小。由于国内尚未有该产品生产，且有关苯扎贝特在中国人体内的药代动力学未见报道，故我们研究了国产与进口苯扎贝特片在正常男性体内的药代动力学过程并评价国产片的生物等效性，为苯扎贝特片的临床合理用药提供依据。材料与方法1.药品及试剂试验片：苯扎贝特片，江苏昆山龙灯制药有限公司（每片200 mg，批号990906），对照片：必降脂（Bezalip）片，德国宝灵曼药厂（每片200 mg，批号 755140-01）；苯扎贝特标准对照品（江苏昆山龙灯制药有限公司提供，批号3092303，含量99.6%）；内标:双氯灭痛(中国药科大学提供，含量99.7%）；甲醇（HPLC级，江苏淮阴精细化工研究所）；其它试剂均为市售分析纯级，所有水溶液均用二次蒸馏水配制。2.仪器Waters 高效液相色谱仪系统，包括 510泵， 490E紫外检测器（Waters 公司，美国）； 7725六通进样阀（ Rheodyne公司，美国）； WDL-95色谱工作站（中科院大连化学物理研究所）。3.血浆中苯扎贝特浓度测定方法3.1色谱条件色谱柱：DiscoveryC18 5m(2504.6mm)(SUPELCO公司，美国）；流动相:甲醇-0.01molL-1醋酸钠缓冲溶液(pH4.0)-0.5 molL-1四丁基溴化铵(76:24:0.2);流速1.0 mlmin-1;检测波长 232 nm,灵敏度0.015AUFS;进样量20l。3.2血浆样品处理与测定取肝素抗凝血浆200l,加入100.0gml-1的内标15l，50l1molL-1 HCl酸化，用乙醚:正己烷（2:1，v/v）2.0 ml提取，振荡 1min，离心( 3000 rmin-1，5min)，取上清液1.6ml,40下空气吹干。残渣用400l 流动相溶解进样（低浓度样品用200l流动相溶解）。3.3标准曲线制备及最小检测浓度于200 l空白血浆中分别加入不同量的苯扎贝特标准品，使其浓度分别为0.05，0.10，0.25，0.50，1.00，2.50，5.00，10.00mgl-1,按前述方法处理分析。以血浆中苯扎贝特浓度(C)对苯扎贝特与内标的峰面积比(Y)作线性回归，回归方程为Y=0.258C+0.0255,r=0.9998。最小检测浓度为0.025mgl-1。3.4方法精密度与回收率分别于200l空白血浆中加入高(10.0 mgL-1)、中(2.5 mgL-1)、低(0.25 mgL-1)三种浓度的苯扎贝特标准品，按照前述测定方法操作后，计算日内及日间误差。回收率是以其峰面积与流动相配制的相应标准品直接进样得到的峰面积进行比较，测定方法的绝对回收率,结果见表1。Table 1.Precision and recoveries of bezafibratefrom human plasma (n=7)Concentration(mgL-1)Within-dayRSD(%)Between-dayRSD(%)Recovery(%)199.05.22.503.706.62103.65.810.04.032.25101.73.04.相对生物利用度试验设计与方法4.1试验对象20名男性健康志愿者，年龄22.61.3岁,体重66.17.1 kg,身高 173.04.3cm。受试前均签署“知情同意书”；均经血常规，生化及心电图检查；肝、肾功能指标均在正常范围值之内，心电图均属正常范围。试验前两周及试验中禁服其它药物，试验期间禁忌烟、酒、茶及过分油腻食物。本试验经南京军区南京总医院医学伦理委员会审查批准。4.2 给药方案受试者随机分为两组（每组10人），交叉服用200mg国产和进口片，用200 ml温开水吞服。服药前取空白血，服药后在0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,4.0,6.0,8.0,12.0h 自肘静脉取血3ml于含肝素钠的洁净试管中，离心(3000rmin-1,10min)分离血浆后，依血样测定方法测定血浆中药物浓度。受试期间进食统一低脂肪饮食。一周后接受交叉给药。5.数据处理及统计分析数据处理：采用3p87药代动力学程序，由计算机模拟确定模型，并计算有关药代动力学参数。运用梯形法计算曲线下面积（AUC012）；达峰时间（Tmax）和达峰浓度（Cmax）为实测值。生物利用度估算：以进口苯扎贝特片（必降脂片）为对照，求算国产苯扎贝特片的相对生物利用度；其估算公式为：F=AUC012（国产）/ AUC012（进口）100%统计分析：通过三因素方差分析和双单侧t检验法检验两种制剂的主要药代动力学参数，并对生物等效性进行评价。结果1.色谱行为图1分别为空白血浆中加入标准品，空白血浆及受试者服药后的色谱图。从图中可知，苯扎贝特峰及内标峰分离良好，不受血浆内源峰干扰；其保留时间分别为：苯扎贝特4.6min,内标峰7.1min。Fig1.Chromatograms(A) blank plasma;(B) blank plasma spiked with5.0gml-1 bezafibrate and 7.5gml-1 internal standard;(c) a plasma sample after oral 200mg bezafibratePeak 1 bezafibrate,Peak 2 internal sandard2.血药浓度20名健康志愿者交叉给予苯扎贝特国产片和进口片后的血药浓度平均数据经时曲线见图2。受试者口服单剂量苯扎贝特后血药浓度検奔淝?甙纯诜?环渴夷湍夂辖霞选虼吮臼匝椴捎?P87药代动力学计算程序按一房室模型进行拟合计算。主要药代动力学参数见表2。Table 2.Pharmacokinetic parameters of bezafibratefollowing a single oral dose(200 mg) of twobezafibrate formulations in normal subjectsParameterDomesticImportedKa(h-1)0.840.431.030.70t1/2(h)1.670.431.490.35Tmax(h)2.380.892.160.79Cmax(mgL-1)6.221.306.571.23AUC012(mghL-1)20.323.9819.803.65CL/F(Lh-1)9.311.989.522.20MRT(h)3.440.703.230.54F(%)103.08.0(meanSD,n=20)上述结果表明，国产和进口苯扎贝特片口服吸收迅速，单剂量给药后2h左右达到峰值，其峰值浓度较高，分别为6.221.30 mgL-1和6.571.23 mgL-1；消除半衰期较短，T1/2分别为1.670.43h和1.490.35h，其012h 的药时曲线下面积分别是20.323.98 mghL-1和19.803.65 mghL-1。3.统计分析在上述试验中，以进口片为参比、国产片为待测试剂，它们的Tmax以及经对数转换后的AUC012和Cmax用三因素方差和双单侧t检验进行统计分析。三因素方差分析结果列于表3。Table 3.Analysis of three-way ANOVAFF(1-0.05)ln AUC012ln CmaxTmaxFormula1.502.910.2064.41Period0.9133.400.5734.41Subject23.96.833.832.20结果显示AUC012及观察值Cmax和Tmax在制剂间，周期间的F值均小于F(1-0.05)的临界值，即P0.05。表明两药在制剂和周期间无显著性差异；但在个体间F值均大于F(10.05)，即P0.05，表明个体间有显著性差异。用双单侧t检验统计结果知：AUC096的t1值为13.3,t2值为10.9；观察值Cmax的t1值为5.12,t2值为8.52;Tmax 的t1值为3.15,t2值为2.24;均大于t(10.05) =1.73，故两种制剂具有生物等效性。4.国产苯扎贝特片的相对生物利用度和生物等效性评价以进口苯扎贝特片（必降脂片）为对照，算得国产苯扎贝特片的平均生物利用度F=(102.68.3)%,均在80%120%范围；经双单侧t检验，两种制剂具有生物等效性。讨论本实验建立的苯扎贝特HPLC测定方法简单，灵敏度高，线性关系好。根据苯扎贝特的出峰特点本实验选取双氯灭痛作为内标，对苯扎贝特没有干扰，两峰分离完全。实验中用乙醚-正己烷（21）混合液作为提取剂，回收率高，血浆物质干扰少。流动相中加入离子对试剂四丁基溴化铵使得苯扎贝特峰和内标峰与血浆内源物峰分离更好，峰形更漂亮。经过反复试验，本实验选用甲醇-0.01molL-1醋酸钠缓冲溶液(pH4.0)-0.5 molL-1四丁基溴化铵(76:24:0.2)作为流动相，分离效果好。结果显示，国产片和进口片的主要药代动力学参数无显著性差异。本实验中受试者口服单剂量的苯扎贝