蛋白检验PPT课件.ppt

第八章体液蛋白质检验,目标：血浆中某些蛋白的功能及在疾病时的变化蛋白质主要的检验方法蛋白质检验的临床意义,1,第一节概述,一、血浆蛋白组成、功能及分类,二、个别血浆蛋白,三、疾病时血浆蛋白的变化,2,一、血浆蛋白组成、功能及分类,功能：,营养作用维持血浆胶体渗透压维持血浆pH值运输作用免疫与防御催化代谢调控凝血、抗凝血及纤溶作用,3,分类：,盐析：白蛋白、球蛋白醋酸纤维薄膜：白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、g-球蛋白和纤维蛋白原,4,5,SDS-PAGE电泳,6,二维电泳,7,功能分类：,载体蛋白：前白蛋白，白蛋白，载脂蛋白，铜蓝蛋白，运铁蛋白，给合球蛋白，血红素结合蛋白，甲状腺素结合蛋白免疫防御系统蛋白：IgG,IgM,IgD,IgE,IgA,补体系统凝血和纤溶蛋白：凝血因子7、8，凝血酶原，纤维蛋白原，纤溶酶原等酶：脂蛋白脂肪酶，卵磷脂-胆固醇酰基转移酶蛋白酶抑制剂：a1-抗胰蛋白酶，a1-抗糜蛋白酶，a2-巨球蛋白激素：胰岛素，促红细胞生成素参与炎症应答的蛋白：a1-酸性糖蛋白，C-反应蛋白,8,二、个别血浆蛋白质（来源、代谢、检验、临床意义）,（一）前白蛋白：,半衰期短，因而营养不良及肝炎时降低早,功能：组织修复材料；运载甲状腺素、视黄醇,临床意义：营养不良、恶性肿瘤、肝硬化、肾炎时降低,9,（二）白蛋白：,营养胶体渗透压运输,10,（三）a1-抗胰蛋白酶：,电泳：位于a1-球蛋白区带,功能:抑制多种蛋白酶。主要表现为抑制多形核白细胞吞噬作用后释放的弹性蛋白酶,临床意义：缺陷-细菌多形核白细胞释放的弹性蛋白酶-过度作用于弹性蛋白-肺气肿,11,（四）a-酸性糖蛋白,急性时相反应蛋白炎症时增高,12,（五）甲胎蛋白（AFP）：,胎儿时期产生的蛋白,肝癌：80%增高胰腺癌、肺癌、肝硬化：增高肝癌中15-20%AFP正常,胎儿产前诊断：高于正常时，易产生畸形,生殖细胞癌：AFP增高,13,（六）结合珠蛋白,与血红蛋白进行不可逆结合的糖蛋白,红细胞溶解-自由血红蛋白-与结合珠蛋白结合-进入肝细胞-降解（氨基酸、Fe再利用）,若红细胞破坏，引起血红蛋白释放增多，则结合珠蛋白减少,14,测定方法,电泳法,血浆中加过量血红蛋白-与结合珠蛋白结合为复合物-分离复合物测血红蛋白量-表示结合珠蛋白量,测复合物的活性,免疫化学法,15,（七）a2-巨球蛋白,主要的蛋白酶抑制剂：包住蛋白酶，使不与蛋白结合,婴幼儿、儿童：高雌激素：高（增加合成）低蛋白血症：高胰腺炎、前列腺癌：低,16,（八）铜蓝蛋白,主要功能：氧化还原作用-多酚或多胺氧化Fe2+-Fe3+,急性时相反应蛋白；协助Wilson病的诊断：遗传病，铜代谢障碍，铜蓝蛋白降低。,17,（九）转铁蛋白,结合铁、铜、锌等,红细胞溶解-自由血红蛋白-与结合珠蛋白结合-进入肝细胞-降解（氨基酸、Fe再利用）,急性时相（感染、组织坏死等）：升高血管内溶血：降低铁缺乏时：升高,18,（十）b2-微球蛋白,炎症、肿瘤、白血病、肾衰等：升高,19,（十一）C-反应蛋白,急性时相蛋白。心肌梗死、创伤、感染、手术、肿瘤浸润,结合细菌、真菌及原虫体内的多糖；结合卵磷脂、核酸,激活补体，引发调理作用，增强细胞吞噬功能，抑制血小板凝集和血块收缩,20,二、疾病时的血浆蛋白质,机理：炎症损伤-某些细胞因子-信号转导系统-转录因子-某些基因表达变化,（一）炎症、创伤：,前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白：下降其它：升高,21,22,肝巨噬细胞（枯否细胞（KupfferCell)）参与免疫调节,（二）肝脏疾病：,肝脏合成大多血浆蛋白；,急性肝炎时，可出现非典型的急性时相反应。,23,（三）肾脏疾病,蛋白尿：血浆蛋白丢失,小分子量蛋白丢失：下降,大分子量蛋白因代偿性合成增加：可增加,24,（四）风湿病,急性或慢性炎症,IgA,IgG,IgM升高。,炎症活动期a1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白等升高,25,（五）遗传缺陷,26,第二节体液蛋白质测定,许多疾病引起血浆蛋白种类和数量的变化,27,蛋白质测定方法：,免疫化学法：利用特异性抗体浊度测定、免疫扩散、免疫电泳、放射免疫、酶联免疫,电泳分离，观察图谱及半定量,化学方法：产生有色物质,28,一、血清总蛋白测定,两个假设：都是单纯蛋白；所有蛋白与化学试剂发生相同反应。,29,1.凯氏定氮法,蛋白+强酸消化-铵盐+碱-氨-酸滴定，测定总氮量-6.25,30,2.双缩脲法,31,+,甘氨酰甘氨酸,肽键,32,33,-CO-NH-碱性下与Cu2+络合成紫色化合物与蛋白量成正比。,简单、准确、重复性好,34,3酚试剂法（Lowry法）,酪氨酸残基和色氨酸残基与酚试剂的磷钨酸、磷钼酸-蓝色化合物,加上Cu2+,结合双缩脲法，提高灵敏度,适于测单一蛋白，且适用于蛋白含量较少的样品,35,4比浊法,酸性试剂+蛋白质-沉淀,5染料结合法,酸性条件下，蛋白质-NH3+酪，与染料中阴离子产生颜色反应。,氨基黑、考马斯亮兰,36,6紫外分光光度法,色氨酸、酪氨酸在280nm有吸收峰,保持蛋白活性,7折光测定法,溶于溶液中的固体可增加它的光折射率,固定波长、固定温度下，光折射率与蛋白浓度成正比,蛋白浓度（g/L)=1.45A280-0.74A260,37,血清总蛋白-临床意义：,升高：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等。,降低：白蛋白合成减少，或蛋白丢失,38,二、血清白蛋白测定,1.染料结合法,白蛋白与染料结合，球蛋白很少与染料结合,溴甲酚绿，溴甲酚紫,白蛋白（pH4.2,+)+BCG-蓝绿色化合物-OD与白蛋白浓度成正比,39,2.盐析法,球蛋白先沉淀,3.电泳法,4免疫化学法,抗原抗体反应；抗体过量,40,临床意义,合成减少,吸收减少,丢失过多,41,三、血清球蛋白测定,球蛋白中色氨酸占2%，而白蛋中仅0.2%,乙酰色氨酸+乙醛酸反应-紫色,42,四、血清纤维蛋白原测定,1.凝块测定法：加凝血酶血块-挑出双缩脲-比色,2.比浊法：13.3%硫酸铵,3.盐析,4.免疫化学法：,43,临床意义：,升高：急性时相反应蛋白。,降低：营养不良，严重肝损伤，血管内凝血，先天缺乏,44