医疗药品无菌检查法验证.ppt

无菌检查法验证,张荣玉,一、概述：1.1定义：系用于检查药典要求的无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。2.1验证的必要性和意义：确认所采用的方法检查供试品无菌的适合性。保证检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性；检查方法的完整性。与同药品无菌检查接轨。通过对不同品种、批号的无菌检查比较；对产品生产全过程进行质量监控。,二、存在问题:2.1专业人才少,缺乏相应的培训和管理。2.2工作量大,导致操作不规范。2.3检验方法缺陷，如直接种法可操作性差，引入污染的风险较大。2.4试验条件的影响环境影响培养基、稀释剂、冲洗液。所用品、器具清洁灭菌。,三、无菌检查的试验要求:3.1环境：10000级局部以下100级，布局符合无菌操作要求；或隔离系统（生物安全柜）。3.2人员：必须具备微生物专业知识，并经培训。3.3设备、器件、材料：经处理必须符合无菌要求，培养箱的温度指示装置要校验。3.4培养基：3.4.1按药典规定处方配制，采用经验证合格的灭菌程序灭菌。3.4.2保存：2-25避光保存；期限：非密闭容器3周，密闭容器1年。3.4.3培养基适用性、无菌性、灵敏度检查。,3.4.4灵敏度检查：3.4.4.1检查用菌株传代不得超过5代。3.4.4.2常用菌株：金黄色葡萄球菌（CMCC(B)26003)铜像假单胞菌CMCC（B）10104枯草芽胞杆菌CMCC（B）63501生孢梭菌CMCC（B）64941白色念珠菌CMCC（F）98001黑曲霉CMCC（F）980033.4.4.3菌液配制、保存、接种培养按药典要求。3.4.4.4结果判断：空白对照应无细菌增长，加菌液的培养基管均生长良好，培养基灵敏度符合要求。,3.5稀释液、冲洗液：3.5.1按药典规定配制后采用经验证的灭菌程序灭菌。3.5.2常用稀释液、冲洗液：0.1%蛋白胨水液PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液无菌0.1%氯化钠液中性磷酸盐缓冲液含0.1%聚山梨酯（吐温-80）的0.1%蛋白胨水溶液3.5.3依据供试品的特性选择稀释液、冲洗液。,四、无菌检查法验证:4.1原理:验证的所有环境、培养基、菌株、稀释液、冲洗液均与日常检查方法相一致、并符合相关规定。4.2验证分类：前验证：建立无菌检查方法时。再验证：修订检查方法时。定期验证：供试品组合或原检查条件改变。,4.3验证方案制定原则：供试品的抑菌性，敏感菌种选择;适当的方法消除或降低抑菌性。样品的预处理方式能有效抵消（或中和）产品的抑菌性。样品的预处理方式、检验过程、培养条件均不影响样品中微生物的生长。验证记录真实完整地记录所做试验。,4.4验证重点环节分布：,样品,需前处理,不需前处理,验证前处理方法对污染菌生长，检出影响,有抑菌作用,去除抑菌作用,通过验证实验判,无抑菌作用,验证抑菌活性去除方法的有效性及对污染菌检出物影响,检验,4.5验证方法：4.5.1制备验证试验菌液，按药典方法配制菌液。4.5.2选择配制适合的培养基、稀释液、冲洗液。4.5.3供试品的处理：验证所用的溶解剂、稀释剂、助溶剂、破乳剂等的有效性，使用量及微生物生长无影响。验证加热温度、离心速度和时间对微生物生长或分布无影响。不需前处理的供试品免做。,4.5.4无抑菌性样品的验证方法：依据产品溶解性和微生物限度选择合适的中性稀释剂溶解和稀释，用直接接种法验证，常用中性稀释液或淋洗液。4.5.5具有抑菌性样品的验证方法：确定抑菌作用（抑细菌、真菌试验验证），选择敏感菌株对供试品抑菌活性去除效果检验（阳性菌回收试验）。消除样品抑菌性的方法验证：,化学钝化中和法（化学试剂中合法）：利用化学（生物）专属性灭活，常用钝化剂有：对氨基苯甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。薄膜过滤法和直接接种法也可用。对化学中和剂不敏感的样品，用酶中和，如-内转氨酶。稀释中和法：利用降低供试品的相对浓度，将样品稀释至最低抑菌浓度下进行。薄膜过滤法：利用体积差异分离，通过薄膜过滤，微生物被截于滤膜，培养薄膜观察有无微生物生长。各方法组合运用，效果更好。,验证方法:a.验证分组：A组:样品组,适当方法中和样品,加入少量验证微生物(接种量少于100cfu)。B组:对照组,0.1%蛋白胨或PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液,加少量微生物(接种量少于100cfu).C组：阳性对照组，不经中和处理，将实验菌株直接接种于培养基中(接种量少于100cfu)。,b.结果分析:A组与B组微生物生长数量相似，表明中和剂的中和方式有效消除了样品的抑菌性，如果B组与C组的微生物数量相似，表明样品预处理用中和剂的毒性、检测程序和培养条件等均不影响微生物生长。样品如无抑菌性，省去B组试验，A组与C组直接比较。A组微生物生长数量不及C组微生物生长数量，表明试验用器具材料或培养条件等方面存在对微生物生长不利因素。c.为考查验证方法的稳定性和重现性，验证至少需3个不同批次的同类样品，分别进行3次验证实验。,五、供试品无菌检查验证:5.1按药典要求确定检验数量、检验量、设立阳性对照和阴性对照。5.2供试品无菌检查方法和检验条件与验证方法相同。5.3直接接种法验证试验：5.3.1供试品有抑菌时，按培养基灵敏度试验的菌种，向该种无菌检查培养基内加入该微生物，每种培养基接2瓶，每瓶接种量控制10-100cfu之间。5.3.2参照药典规定确定培养基用量，按无菌检查要求向上述其中一瓶加入规定量供试品，另一瓶为阳性对照。5.3.3将种好的容器按药典规定温度培养14days。,5.3.4验证结果评价：供试品与阳性对照相比、供试品容器内微生物生长不明显，说明有抑菌性。可使用中和剂如比温-80。-内酰胺酶等消除抑菌效果。中和剂不能消除抑菌作用，适当增加培养基体积稀释。5.4薄膜过滤法验证试验：5.4.1薄膜过滤法验证试验供试品有抑菌特性时，在同型号的每个过滤器加规定定量的供试品（容器数及每容器的过滤体积）。淋洗至少3次，淋洗液为100ml/次，最后一次淋洗液中，接种验证用菌株（10-100cfu）；取另一滤器不过滤供试品，重复上述淋洗操作，作为阳性对照。分别将灵敏度实验的菌种及相应培养基逐一试验。,5.4.2供试品和阳性对照接种后、培养基容器按药典菌株要求温度下培养，时间不超过14days。5.4.3使用新的滤膜过滤器（不同厂家或批号、型号）重新进行样品试验组、蛋白胨对照组和阳性对照组的验证确认。5.4.4验证结果评价：供试品培养基容器内可见微生物生长明显（混浊），与阳性对照组比较结果相似，则在无菌检查试验中必须过滤与验证试验相等量的供试品、淋洗液。淋洗相同次数及使用相同量的培养基。供试品培养基容器内与阳性对照结果相比微生物生长不明显，应增加淋洗次数、重复上述试验。,六、验证合格标准:6.1平皿菌落计:6.1.1通常用于药品防腐剂防腐效力测试和微生物限度检查中。计数每毫升（或克）样品的微生物含量。6.1.2每种试验菌每组至少重复3次（3个不同批次的样品）。6.1.3合格标准：A组（样品试验组）验证微生物平均生长数量不低于C组（阳性对照组）验证微生物平均生长数量的70%，检验方法通过验证。,6.2直接接种法：6.2.1培养基能中和抗菌剂的抑菌性，并适合广谱微生物的生长，包括样品种潜在微生物生长。6.2.2每种试验菌种每组实验至少独立重复3次。如需要改变产品和培养基比率达到中和效果。6.2.3合格标准：3批（不同批次的样品）在14days内所有样品试验组中培养基都显示大量的微生物生长，则相应的试验方法通过验证。,6.3薄膜过滤法：6.3.1适用于无菌检查和生物限度坚查，样品必须能被过滤。需溶解的样品应验证该样品的溶解方式及整个试验过程，试验用具和材料及培养条件等不会影响样品中固有的微生物的生长。6.3.2样品试验组、样品溶液通过薄膜，用适量淋洗液淋洗3次，在最后一次淋洗液中接入少量（10-100财富）验证菌。淋洗后，将滤膜转移到固体培养基（或液体培养基中）培养。样品抑菌性强、则应进行中和处理，再验证中和效果。,6.3.3蛋白胨对照组：不加产品的稀释液，其他操作及实验条件与样品试验组相同。验证中和用钝化剂（针对需预处理的样品）、过滤器和滤膜材质是否会对微生物产生影响）。6.3.4阳性对照组：将与上述两组等量同种验证菌液（10-100cfu）直接种到固体培养基表面（或液体培养基中）。比较蛋白胨对照组和阳性对照组微生物的情况，估算滤器和滤膜造成微生物的损失量。6.3.53次试验（3个不同批次的样品）结果评价：上述3组试验结果间差异均在70%以上（固体培养基）或培养14days内所有试验组的液体培养基微生物均有生长，则认为验证微生物的回收率基本相同，相应的微生物验证方法同过验证。,七、验证试验结果的评价与报告:7.1分析评价主要包括有：7.1.1对每个验证试验的菌株、每次验证试验的数据及其有效性和合理性评价。7.1.2验证试验数据所表明的检品预处理方式、检验用器具、材料、培养条件等的合理性是否符合规定要求，它们与药品检验的规程要求是否符合。7.1.3验证试验数据最后要说明该药品的微生物检测方法是否准确、有效、可靠与可行，是否有较好的重现性。最后得出结论。,7.2验证试验报告内容包括有：7.2.1验证试验药品的名称，待验证检验方法的有效登记号。7.2.2验证试验用菌株名称、菌号、试验室控制号、转种代数。7.2.3验证菌株的制备和接种记录。7.2.4验证供试品的预处理方法、检验用具和材料、检测步骤以及培养条件等。7.2.5验证试验结果的评价及结论。7.2.6验证条件：包括验证试验的原始记录，包括验证菌株的制备和接种量复核、验证试验结果等。,无菌验证范例（注射剂无菌检查方法）,一、材料：1.1样品：品名、规格、批号、生产批号。1.2培养基稀释液：硫乙醇酸盐液体培养基、批号；改良马丁液体培养液，批号；营养肉汤培养基，批号；营养琼脂培养基，批号；0.1%蛋白胨涤养，PH7.10.2；培养基和稀释液来源。1.3验证试验用菌种：所用菌代数。金黄色葡萄球菌（26003）；铜绿假单胞菌（10104），枯草芽孢杆菌（63501）;生孢梭菌（64941）；白色念珠菌（98001）；黑曲霉菌（98003），上述菌种的来源及传代数。1.4仪器和滤器：HTY-2001A集菌仪；全封闭无菌试验过滤培养器，批号及生产厂商。,二、验证方法：2.1菌液制备：取经34培养18-24h的金葡萄、铜绿假单胞菌，枯草孢芽菌的新鲜肉汤培养物1ml，加入无菌0.9%氯化钠溶液9ml，10倍稀释至10-5、10-7均为50-100cfu/ml，备用。取经34培养18-24h的生孢梭菌硫乙醇酸盐液体培养物1ml。加入无菌0.9%氯化钠溶液9ml，10倍稀释至10-7均为50-100cfu/ml，备用。取经24培养的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml，加入无菌0.9%氯化钠溶液9ml，10倍稀释至10-7均为50-100cfu/ml，备用。取经24培养一周的黑曲霉料面培养物，加入无菌0.9%氯化钠溶液10ml，洗下孢子；吸出孢子悬液，过滤除去菌籽，收集菌液至另一无菌试管，取菌液0.1ml，加入无菌0.9%氯化钠溶液9.9ml，稀释至10-7均为50-100cfu/ml，备用。,2.2菌液计数：每种菌液接种工作皿、取平均值。计数结果列表（略）。2.3方法验证及结果：直接种法：取样品12支，分别接种8支硫乙醇酸盐和4支霉菌液体培养基2ml/支后，再按要求加入相应阳性菌液（30-100cfu/ml)。置规定温度培养3-5days，逐日观察、记录微生物生长情况。列表（略）。薄膜过滤法：取样品1支，将样品过滤于封闭式滤器（3连筒/套）。用0.1%蛋白胨氯化钠溶液500ml冲洗后，再分别加入金黄色葡萄球菌，枯草杆菌50-100cfu/筒，同时做平均稀释液对照组。将稀释液对照滤筒和阳性菌的验证过滤筒置于规定温度下培养3-5days。逐日观察、记录微生物生长情况，列表（略）。2.4阳性对照：稀释剂+培养液，不加对照菌液，其它操作同前供试品试验，并计数试验菌液的计数。,三、结论：选择无菌检查方法，确定阳性对照菌和0.1%蛋白胨水溶液的冲洗量。,35、功与失每个人都有一不的理想，这种理想决定着他的努力判断的方向。就在这个意义上，我从来不把安逸和享乐看做是生活目的的本身-这种基础，我叫它猪栏的理想。照亮我的道路，并且不断地给我新的勇气去愉快地正视生活的理想，是善、美、真。-爱因斯坦（美国）无论何时，不管怎样，我也绝不允许自己有一点灰心丧气。-爱迪生（美国）对我来说，信念意味着不担心。-杜威（美国）希望贯穿一切，临死也不会抛弃我们。-波普（美国）希望永远在人的胸膛汹涌。人要经常感觉不是现在幸福，而是就要幸福了。-波普（美国）毫无理想而又优柔寡断是一种可悲的心理。-培根（英国败的岭，可以用这五个字来表达-我没有时间。-富兰克林（美国）马云语：今天很残酷，明天更残酷，后天会很美好，但绝大多数人都死在明天晚上。马云语：今天很残酷，明天更残酷，后天会很美好，但绝大多数人都死在明天晚上。想要有空余时间，就不要浪费时间。-富兰克林（美国）忽视当前一刹那的人，等于虚掷了他所有的一切。-富兰克林（美国）时间不可空过，惟用之于有益的工作；一切无益的行动，应该完全制止。-富兰克林（美国）如果说时间是最宝贵的东西，那么浪费时间就是最大的挥霍你热爱生命吗？那么别浪费时间，也别和不值得交往的人来往.陈帅佛语懒鬼起来吧！别再浪费时间，将来在坟墓内有足够的时间让你睡的。-富兰克林（美国）人生太短暂了，事情是这样的多，能不兼程而进吗？-爱迪生（美国）真正的敏捷是一件很有价值的事。因为时间是衡量事业的标准，一如金钱是衡量货物的标准；所在在做事我有两个忠实的助手，企业在市场竞争中输赢的关键在于其核心竞争力的强弱，而实现核心竞争力更新的惟一途径就是创新。一项权威的调查显示：与缺乏创新的企业相比，成功创新的企业能获得20甚至更高的成长率；如果企业80的收入来自新产品开发并坚持下去，五年內市值就能增加一倍；全球83的高级经理人深信，自己企业今后的发展将更依赖创新。23、不创新，就灭亡福特公司创始人亨利?福特24、可持续竞争的惟一优势来自于超过竞争对手的创新能力著名管理顾问詹姆斯?莫尔斯25、创新是做大公司的惟一之路管理大师杰弗里26、顾客是重要的创新来源管理学家汤姆?彼得斯27、创新是惟一的出路，淘汰自己，否则竞争将淘汰我们英特尔公司总裁安迪?格罗夫28、创造性模仿不是人云亦云，而是超越和再创造哈佛大学教授西奥多?莱维特29、创新就是创造一种资源管理大师彼得?杜拉克第五章管理就是沟通、沟通再沟通P69松下幸之助关于管理有句名言：“企业管理过去是沟通，现在是沟通，未来还是沟通。”管理离不开沟通，沟通已渗透于管理的各个方面。正如人体内的血液循环一样，如果没有沟通的话，企业就会趋于死亡。30、管理就是沟通、沟通再沟通通用电器公司总裁杰克?韦尔奇31、沟通是管理的浓缩沃尔玛公司总裁萨姆?沃尔顿32、管理者的最基本能力：有效沟通英国管理学家L?威尔德33、不善于倾听不同的声音，是管理者最大的疏忽美国女企业家玛丽?凯34、企业管理过去是沟通，现在是沟通，未来还是沟通日本经营之神松下幸之助第六章管理就是决策P81美国著名管理学家赫伯特?西蒙指出：“决策是管理的心脏，管理是由一系列决策组成的，管理就是决策。”35、管理就是决策美国著名管理学家赫伯特?西蒙36、世界上每100家破产倒闭的大企业中，85%是因为企业管理者的决策不慎造成的世界著名的咨询公司美国兰德公司37、正确的决策来自众人的智慧美国社会学家T?戴伊38、一个成功的决策，等于90%的信息加上10%的直觉美国企业家S?M?沃尔森39、犹豫不决固然可以免去一些做错事的可能，但也失去了成功的机会美籍华裔企业家王安博士40、在没出现不同意见之前，不做出任何决策美国通用汽车公司总裁艾尔弗雷德?斯隆41、不要把所有的鸡蛋放在同一个篮子里美国经济学家托宾42、一次良好的撤退，应和一次伟大的胜利一样受到奖赏瑞士军事理论家菲米尼43、抓住时机并快速决策是现代企业成功的关键美斯坦大学教授艾森哈特44、决不能在没有选择的情况下，作出重大决策美国克莱斯勒汽车公司总裁李?艾柯卡45、如果有一个项目，首先要考虑有没有人来做。如果没有人做，就要放弃，这是一个必要条件。联想集团总裁柳传志第七章爱你的员