尿液常规检查方法PPT课件.ppt

尿液常规检查方法,罗晶,1,尿液有形成分检查,尿液有形成分是检查通过尿液排出体外能在显微镜下观察到的有形物，是来自肾脏或尿道脱落的细胞、还是肾实质发生病理改变形成的管型、感染的微生物、寄生虫及各种生理和病理性的结晶。1：检查方法光学显微镜、仪器法、特殊显微镜法（透射电镜法、偏振光显微镜法、相差显微镜法）尿沉渣显微镜法是目前尿有形成分检查的金标准。2：方法学评价（1）显微镜检查1）直接镜检法：简便但阳性率低，重复性差，易漏诊。适用于外观浑浊尿有形成分增多的标本。2）离心法：细胞阳性率高，但繁琐、费时结果易受离心的尿量、转速和时间影响。,2,3）定量尿沉渣计数板法：使尿沉渣检查更符合标准化的要求。4）染色法（ternheirener-Malbin、巴士染色法、特殊染色）有助于识别细胞、管型等（二）仪器法：灵敏度高、重复性好、速度快但目前尿沉渣分析仪特异性扔有待提高。,3,尿液化学检查方法,一：尿液酸碱度测定（一）定义尿液酸碱度是反映肾脏调节机体内环境体液酸碱平衡能力的重要指标之一，通常简称为尿液酸度。尿液酸度分两种：可滴定酸度和真正酸度。前者可用酸碱滴定法进行滴定，相当于尿液酸度总量，后者是指尿液中所有能离解的氢离子浓度，通常用pH来表示。（二）检测方法及评价1.试带法：用pH广泛试带浸入尿液中，立即取出与标准色板比较测定。用肉眼判断出尿液的pH，或用仪器判读结果。本法操作简单，可目测或用尿液分析仪检测，是目前最广泛应用的筛检方法，但试带易吸潮变质，易影响准确性。2.指示剂法：常用的指示剂为0.4g/L溴麝香草酚蓝溶液，显示黄色为酸性尿；显蓝色为碱性尿；显绿色为中性尿。本法操作简单，但溴麝香草酚蓝的pH变色范围为6.07.6，当尿液pH偏离范围时，检测结果不准确。黄疸尿、血尿易干扰指示剂法。3.滴定法：本法可检查尿液酸度的总量。临床上，可用于观察尿液酸度的动态监测，但操作复杂。4.pH计法：用pH电极能直接精确地测定出尿液的pH。本法精确度较高，可用于酸负荷试验后尿液pH检查，对于肾小管酸中毒的定位诊断、分型、鉴别诊断，有一定的应用价值，但需要特殊仪器，且操作更繁琐。,4,（三）质量控制1.标本必须新鲜：陈旧标本可因尿C02挥发或细菌生长使pH增高，也可因细菌和酵母菌作用，使尿中葡萄糖降解为酸和乙醇而pH减低。2.试带法：试带应满足生理和病理尿pH的变化范围，未被酸、碱污染，未吸潮变质。3.指示剂法：一般指示剂多不易溶于水，配制指示剂溶液时，应先用少许碱液（如NaOH稀溶液）助溶后，再加蒸馏水稀释到适当浓度，以满足指示剂颜色变化范围，因为指示剂的解离质点状态与未解离质点状态呈现不同的颜色。4.滴定法：氢氧化物溶液浓度必须标准。5.pH汁法：应经常校准pH计，确保仪器在正常良好状态下检测。（四）参考值在正常饮食条件下，晨尿多偏弱酸性，多数尿标本pH5.56.5，平均pH6.0。随机pH4.58.0。尿可滴定酸度为2040mmol/24h尿。,5,二：尿液蛋白质检查（一）定义尿液中蛋白质超过150mg/24h或超过100mg/L时，蛋白定性试验呈阳性，即称为蛋白尿。（二）检测方法及评价1.尿蛋白定性试验：为蛋白尿的过筛试验。（1）试带法：利用pH指示剂的蛋白误差原理。本法对清蛋白较敏感，对球蛋白不敏感，仅为清蛋白的1/1001/50，且可漏检本周蛋白。尿液pH增高可产生假阳性。本法快速、简便、易于标准化，适于健康普查或临床筛检。（2）加热乙酸法：为传统的经典方法，特异性强、干扰因素少。能同时检出清蛋白及球蛋白尿，但敏感度较低，一般在0.15g/L左右。本法能使含造影剂尿液变清，可用于鉴别试验。（3）磺基水杨酸法：又称磺柳酸法。操作简便、反应灵敏、结果显示快，与清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周蛋白等均能发生反应；敏感度高达0.050.1g/L，因而有一定的假阳性。被NCCLS作为干化学法检查尿蛋白的参考方法，并推荐为检查尿蛋白的确证试验。2.尿蛋白定量试验检查方法有：沉淀法、比色法、比浊法、染料结合法、免疫测定法和尿蛋白电泳法等。,6,（三）质量控制1.试带法：必须使用标准合格的试带，并严格按照注意事项操作（参见尿液分析仪及临床应用一章）。2.加热乙酸法：控制加酸量及盐类浓度，加酸过少、过多，导致远离蛋白质等电点时，可使阳性程度减弱。如尿液盐类浓度过低，又可致假阴性，此时可加饱和氯化钠溶液12滴后，再进行检查。3.磺基水杨酸法：使用某些药物（如青霉素钾盐、复方新诺明、对氨基水杨酸等）及有机碘造影剂时，以及尿内含有高浓度尿酸、草酸盐或粘蛋白时，可呈假阳性反应。此时，可通过加热煮沸后浊度是否消失予以鉴别。4.注意方法间差异，加强质量控制用于尿蛋白定量的各种方法之间存在较大差异；应尽力作到：标本、试剂合格，操作规范，结果有可比性。（四）参考值定性试验：阴性。定量试验：0.1g/L；或0.15g/24h。,7,三、尿液糖检查（一）定义正常人尿液几乎不含或仅含微量葡萄糖，一般尿糖定性试验为阴性。尿糖定性试验呈阳性的尿液称为糖尿，葡萄糖是尿糖的主要成分，偶尔亦可见乳糖、半乳糖、果糖、戊糖等。葡萄糖是否出现于尿液中，主要取决于3个因素：血糖浓度；肾血流量；肾糖阈：当血糖浓度超过8.88mmol/L时，尿液中开始出现葡萄糖。（二）检测方法及评价1.班氏法：利用葡萄糖的还原性，是传统尿糖定性试验方法。本法是非特异性测定葡萄糖的试验，可检出多种尿糖，简便，但易受其他还原物质干扰，倾向于淘汰。2.试带法：采用葡萄糖氧化酶法。本法检测葡萄糖的特异性强、灵敏度高、简便快速，适用于自动化分析。3.薄层层析法：操作复杂、费时、成本高，多用于临床或基础研究，临床上一般情况少用。,8,（三）质量控制1.班氏法：试验前，必须首先煮沸班氏试剂，避免试剂变质。维生素C可使其假阳性。2.试带法：避免假阳性：假阳性可见于尿标本容器残留强氧化性物质如漂白粉、次亚氯酸等或低比密尿等。避免假阴性：尿液含有高浓度酮体、维生素C、阿斯匹林；使用氟化钠保存尿液；标本久置，葡萄糖被细菌或细胞酶分解，可引起假阴性。3.容器清洁：不含氧化性物质入漂白粉、次亚氯酸，否则易导致班氏法假阴性而试带法假阳性。4.高比密及高酮体尿：可使试带法糖定性呈假阴性。5.及时送检：尿液必须信笺，若长时间放置，细菌繁殖等造成假阴性结果。（四）参考值定性试验：阴性。定量：0.565.0mmol/24h。,9,四：尿液酮体检查（一）定义尿酮体（KET）是尿液中乙酰乙酸（占20%）、-羟丁酸（占78%）及丙酮（占2%）的总称。酮体是机体脂肪氧化代谢产生的中间代谢产物，当糖代谢发生障碍、脂肪分解增高，酮体产生速度超过机体组织利用速度时，可出现酮血症，酮体血浓度一旦超过肾阈值，就可产生酮尿。（二）检测方法及评价1.试带法基于传统的湿化学亚硝基铁氰化钠法而设计，是目前临床上最常用的尿酮体筛检方法。检测过程简易快速，尤其适合于床边检验。应注意不同试带对丙酮和乙酰乙酸的灵敏度不一。2.湿化学法（1）Rothera法：在碱性条件下，亚硝基铁氰化钠可与尿中的乙酰乙酸、丙酮起反应呈现紫色，但不与-羟丁酸起反应。（2）Gerhardt法：高铁离子（Fe3+）与乙酰乙酸的烯醇式基团发生螯合，形成酒红色复合物。3.片剂法基本原理为亚硝基铁氰化钠法。（三）质量控制细菌在体内外可导致乙酰乙酸的丢失；室温保存，丙酮易丢失，密闭冷藏可避免挥发，但试验时标本应置于室温中恢复温度后再检测。（四）参考值定性：阴性。定量：酮体（以丙酮计）170420mg/L；乙酰乙酸20mg/L。,10,五、尿液胆红素检查（一）概述血浆胆红素有3种：未结合胆红素（UCB）、结合胆红素（CB）和-胆红素。成人每日平均产生250350mg胆红素，其中，约75%来自衰老红细胞中血红蛋白的分解，另25%主要来自骨髓内未成熟红细胞的分解及其他非血红蛋白的血红素分解产物。UCB不溶于水，在血中与蛋白质结合不能通过肾小球滤膜。UCB入肝后在葡萄糖醛酸转移酶作用下形成胆红素葡萄糖醛酸，即为CB。CB相对分子质量小，溶解度高，可通过肾小球滤膜由尿中排出。-胆红素的反应性与结合胆红素相似，但它是未结合胆红素与清蛋白通过非酶促反应形成的共价结合物，通常在血浆中含量很低。当血中CB增高，超过肾阈值时，结合胆红素即从尿中排出，尿胆红素试验可呈阳性反应。（二）检测方法及评价1.重氮法干化学试带法多用此原理，操作简单，且可用于尿自动化分析仪，目前多用此法作定性筛检试验，如果反应不典型，应进一步分析鉴定。在尿液pH较低时，某些药物或其代谢产物如吡啶和依托度酸可引起假阳性反应；尿兰母产生橘红色或红色而干扰结果。VitC浓度达1.42mmol/L和亚硝酸盐存在时，可抑制重氮反应而假阴性。2.氧化法Smith碘环法最为简单，但灵敏度低，目前已很少使用；Harrison法操作稍繁，但灵敏度较高。（三）质量控制胆红素在阳光照射下易转变为胆绿素，因此检测时应使用新鲜尿液标本，为避光宜用棕色容器收集标本。VitC、亚硝酸盐和某些药物，可引起假阴性结果。（四）参考值定性：阴性。,11,六、尿液尿胆原和尿胆素检查（一）概述结合胆红素排入肠腔转化为尿胆原，从粪便中排出为粪胆原。大部分UBG从肠道重吸收经肝转化为结合胆红素再排入肠腔，小部分UEG从肾小球滤过或肾小管排出后即为尿UBG。无色UBG经空气氧化及光线照射后转变成黄色的尿胆素。尿胆红素、UBG及尿胆素，俗称尿三胆。由于送检的标本多为新鲜尿标本，UBG尚未氧化成尿胆素，故一般检查胆红素和UBG，又俗称尿二胆。（二）检测方法1.尿胆原：湿化学Ehrlich法：UBG在酸性溶液中，与对二甲氨基苯甲醛（Ehrlich试剂）反应，生成樱红色化合物。具体操作是：于试管中加新鲜尿液5ml，加Ehrlich试剂0.5ml，混匀，室温下反应10min，在白色背景下，直持试管，从管口向管底观察反应的色泽，如为阴性，可直接报告；如呈阳性反应，需将尿液稀释后继续试验，报告出现阳性的最高稀释倍数。试带法：检测原理基于Ehrlich法。UBG检测已成为尿分析仪试带法分析项目组合之一，用于疾病的尿筛检。采用Ehrlich醛反应方法，可用于定性和定量。2.尿胆素：用湿化学Schleisinger法。,12,（三）质量控制1.尿胆原排出后易氧化为尿胆素，故应以新鲜尿作及时检查，否则导致结果假阴性。维生素C等还原性物质易抑制Ehrlich法检测尿胆原。2.如尿中含有结合胆红素，加Ehrlich试剂后显绿色，干扰尿胆原检测。可加氯化钡溶液吸附胆红素，离心沉淀后上清进行Ehrlich试验。3.尿胆原排出量每天波动很大，夜间和上午量少，于午后24h达高峰，同时尿胆原的清除与尿pH相关。嘱患者服碳酸氢钠，碱化尿液，收集午后24h排出的尿液进行测定，可提高尿胆原检出的阳性率。（四）参考值尿胆原定性：阴性或弱阳性（1：20稀释后阴性）。尿胆素定性：阴性。,13,七、尿血红蛋白检查（一）概述血红蛋白为含血红素的色素蛋白，正常人血浆中含有50mg/L游离血红蛋白，尿中无游离血红蛋白。当有血管内溶血时，红细胞破坏，血红蛋白释放人血液形成血红蛋白血症。若血红蛋白超过结合珠蛋白所能结合的量，则血浆存在大量游离血红蛋白，当其量超过1000mg/L时，血红蛋白可随尿液排出。其特点为外观呈浓茶色、红葡萄酒色或酱油色，隐血试验阳性。（二）检测方法及评价1.湿化学法常用邻联甲苯胺法、氨基比林（匹拉米洞）法等，操作简单，但试剂稳定性差，特异性较低；尿液中混入铁盐、硝酸、铜、锌、碘化物等均可使结果呈假阳性；尿液中含有过氧化物酶或其他对热不稳定酶也可呈假阳性。2.试带法基本克服了湿化学法试剂不稳定的弱点，但尿液中含有对热不稳定酶、尿液被氧化剂污染或尿路感染时某些细菌产生过氧化物酶，可致结果呈假阳性；大剂量的VitC或其他还原物质导致假阴性；甲醛可使反应假阴性，大量亚硝酸盐则可延迟反应。试带法除与游离血红蛋白反应外，也与完整的红细胞反应，但在高蛋白、高比密尿液中，RBC不溶解，试带灵敏度减低。3.胶体金单克隆抗体法灵敏度高、特异性强、操作快速、使用方便，基本克服了化学法试带法的缺点。,14,（三）质量控制标本应新鲜。湿化学法所用试剂必须准确、可靠，3%过氧化氢易变质、失效