土壤线虫卵检查方法课件.ppt

土壤线虫卵检查方法,江西省寄生虫病防治研究所,漂浮法原理,先用碱性溶液和已经处理过的土壤样品充分混合，用比重比虫卵重的溶液把虫卵漂浮到液体表面，从而收集进行镜检。,几种漂浮液和蠕虫卵比重,饱和硝酸钠溶液1.358-1.365饱和硫酸锌溶液1.180饱和盐水1.175-1.200华支睾吸虫卵1.170-1.190姜片吸虫卵1.190日本血吸虫卵1.200钩虫卵1.055-1.080鞭虫卵1.150蛲虫卵1.105-1.115受精蛔虫卵1.110-1.130未受精蛔虫卵1.210-1.230,采样与处理,1、菜田取从土表及表层以下2cm处泥土；2、厕所、庭院、厨房取表层土；（无土层或土量不够，以鞋底刮取的土样替代）3、每份粪样50-100g；4、土样取回后自然晾干；5、晾干土样挑去粗大杂物，压碎土样大颗粒；6、收集孔径3mm粗筛后2mm过筛土样。,方法,1、取土样5g于15ml离心管，加5%NaOH溶液至10-14ml刻度；2、颠倒充分混匀（重复34次，每隔10min），2000rpm，4min；3、倾去上部的NaOH，加入饱和NaNO3搅拌混匀，2000rpm，4min；4、离心后，再加饱和NaNO3满至管口，覆上18mm18mm盖玻片；5、静置15min后，取下盖玻片置载玻片上镜检（每样做两管，取平均值为计数结果）；6、一份样品计数34张盖玻片。,土壤线虫卵生活力测定法,在土壤线虫卵生活力测定法中，可选用直接镜检法，染色法和培养法，以直接镜检为常用。土壤蛔虫卵直接镜检法：是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各种形态，以鉴别其死活。鉴别受精卵和未受精卵；鉴别有生活力和失去生活力(变性卵)的受精卵和含有幼虫卵的形态。,土壤蛔虫卵生活力鉴别要点,未受精蛔虫卵形态多为长椭圆形，有时呈不规则形，大小平均为80984060m，一般为黄褐色，有时蛋白质壳发育不全，有时完全失去蛋白质壳，卵内经常充满大大小小油滴状的卵黄细胞。,未脱蛋白膜和脱蛋白膜未受精蛔虫卵,受精蛔虫卵形态,活受精蛔虫卵蛋白质壳为黄褐色，脱蛋白质壳的为无色透明；平均大小为50704050m；外层卵壳厚，内层薄，有屈光性，最外层蛋白质壳也很厚，呈乳状或花纹状突起；卵内有一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间，有半月形空隙，卵内卵黄颗粒清晰而致密。含有活幼虫卵虫体的前后部没有颗粒，中部颗粒清晰而有金属光泽，有立体感，镜检时，注视或轻压，可见有轻微蠕动，强压后，有时可挤出幼虫。,活受精蛔虫卵形态,未脱蛋白膜,脱蛋白膜,含4个卵细胞（脱蛋白膜）,桑椹期（脱蛋白膜）,含幼虫的活受精蛔虫卵,死受精蛔虫卵(变性卵)卵细胞移向一端，使卵壳两端呈现有大小不等的半月形空隙；卵内脂肪变性，形成空泡，很像未受精卵；卵细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色；卵细胞向不定部位呈球状收缩；卵壳的一侧或两侧，一端或两端向内凹陷或破裂；卵细胞颗粒减少或消失;只有蛋白质壳，而缺内容物。含死幼虫虫卵幼虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光泽，缺乏立体感，镜检时久久不见蠕动，稍稍加热或轻压，不会蠕动；强压时，虽能挤出幼虫，但也不改变其原来的卷曲状态。,死受精蛔虫卵形态,未脱蛋白膜,脂肪变性胞质空泡,脱蛋白膜,含幼虫死卵,卵细胞崩解,卵细胞皱缩,上部形成空泡,卵细胞不规则裂开,卵胚变形,卵壳内幼虫变形,活受精蛔虫卵,卵细胞崩解的死受精蛔虫卵,空泡化死受精蛔虫卵,含幼虫的活受精蛔虫卵,含幼虫的的活受精蛔虫卵,卵壳内幼虫变形的死受精蛔虫卵,2019/12/16,19,可编辑,内含物变形死受精蛔虫卵,活鞭虫卵,含幼虫的活鞭虫卵,鞭虫卵（细胞质形成空泡）,螨卵,螨卵,美蓝、伊红、硼砂染色法鉴别蛔虫卵死活,1、美蓝、伊红、硼砂染液（简称M.E.B）的配制将0.2g美蓝加入100ml蒸馏水中煮沸10min，加入硼砂0.5g，再煮沸10min，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解后过滤备用。（pH为1011，在室温中可放置1.5年）。2、脱蛋白膜将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用1min，并经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白膜。,3、染色镜检虫卵沉淀物加M.E.B染色液各一滴于载玻片上，上覆盖玻片，静置35min后镜检。吸取虫卵沉淀物1滴放入小试管内，加入染色液染30分钟，再用蒸馏水洗23次，吸取沉淀物镜检。（活虫卵卵壳、内含物不着色，死虫卵卵壳、内含物染成蓝色）,土壤钩虫卵的检查,虫卵及幼虫在体外的发育条件温暖(25oC30oC)、湿度(60%80%)、荫蔽、氧足的疏松泥土发育快（58天）,虫卵,24h脱壳,杆状蚴,以细菌及其分解有机物为食,58天蜕皮两次,丝状蚴,感染期,1、取表层23cm土样，在500ml塑料烧杯中定量至300ml刻度（约300g表层土）后放入保鲜袋，注明土样编号，在记录本注明取样点、种植物类型、户主姓名、采样份数等基本信息。2、分样筛（20目，直径20cm）筛网面上铺上2层棉纸（棉纸直径28cm），随后倒入样本土，用大镊子将颗粒较大的土块压细后将土铺展均匀。,土壤钩蚴分离方法,3、将铺好的分样筛放入搪瓷盘（或不锈钢脸盆）中，加入45的自来水，至水的液面稍没过筛网面的棉纸为止。4、将搪瓷盘（或不锈钢脸盆）放入水浴箱（或温箱）中，水温控制在45左右，放置1.5小时。5、取出分样筛，将搪瓷盘（或不锈钢脸盆）中的水倒入三角量杯（烧杯）中进行自然沉淀半小时。6、缓缓弃去上清，留底部50ml或更少的液体，于平皿中解剖镜镜检，进行十二指肠钩虫和美洲钩虫钩蚴的鉴别和计数。,钩蚴分离注意事项,1、土样应在早上10点前采集完毕；2.、采集的土样在近一段时间内没有喷过杀虫剂；3、若分离后水太浑浊，可进行水洗和半小时沉淀的步骤，重复多次。,两种钩虫丝状蚴的鉴别要点,美洲钩虫,钩虫丝状蚴的鉴别,十二指肠钩虫,食管矛,