（发酵工程专业论文）cordyceps+militaris菌液体发酵及深加工技术的研究.pdf

i 薯 妻 本学位论文作者完全了解大连轻工业学院有关保留、使用学位论 文的规定，大连轻工业学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论 文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文 的内容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 是否保密( 是) ，保密期至2 0 1 0 年3 月3 1日为止。 学生签名：避导师签名： l 广年嗥月多日 ， t 。 ； 摘要 摘要 以蛹虫草( c o r d y c e p s r a i l i t a r i s ) c s 、口l 、b i 、c ，一2 、y 3 、f 口o - l 、a j ，、3 3 1 6 3 、3 3 2 2 3 、 t 。，+ l 菌的不同生长状态，筛选出适合麦芽汁为培养基的蛹虫草c s 菌种：以菌丝干重为 主要指标，参考发酵液情况，筛选出适合于麦芽汁为培养基的蛹虫草3 3 2 2 3 菌种。通 过活化，逐级扩培，过滤等一系列方法得到蛹虫草发酵液，作为研制蛹虫草保健饮料、 保健啤酒、保健口服液、胶囊的主要原料。 ( 1 ) 以感官评价为主要依据，通过正交试验方法得到所研制蛹虫草保健饮料的最佳 配方：蛹虫草发酵液法发酵饮料的最佳配方比例为：发酵液：草莓汁= 2 ：l ，初始p h 值 为5 5 ，发酵温度为3 2 c ，发酵时间为2 3 h ，保加利亚乳酸杆菌和面包酵母共生发酵。 所研制饮料产品用h p l c 检测腺苷，原发酵液4 6ug m l ，发酵饮料3 1 l - tg m l ； 比色法检测虫草酸，原发酵液6 8 6 8ug m l ，发酵饮料5 8 9 0pg m l 。证实蛹虫草保 健饮料中确实含有虫草的有效化学成分。通过整个实验，获得了赋予虫草生物活性的蛹 虫草保健饮料。 ( 2 ) 经过蛹虫草对麦汁进行一次发酵，然后“一次发酵液 与麦汁按3 ：7 混合进行酵 母的二次发酵，生产出与传统啤酒不同的保健啤酒。 以p h 值、还原糖、双乙酰、酒精分、腺苷、虫草酸等为指标，对保健啤酒进行检 测，考察“一次发酵液的加入对酵母生理的影响、对副产物生成的影响。结果表明： 通过添加“一次发酵液 生产的啤酒，各项指标均符合国家标准，与传统啤酒相比，该 啤酒含有对人体有益的生物活性物质一腺苷、虫草酸等，适应了现代人追求健康的心理。 ( 3 ) 以蛹虫草3 3 2 2 3 菌种，经过对麦汁的发酵，生产出大量菌体，再以人工蛹虫草 菌体为原料，添加各种辅助中药，拟定最合适的生产方案，于实验室中试制出具有医疗 保健功能的蛹虫草保健口服液及胶囊。 以水分、微生物限度、密度、糖度( 包括还原性糖和非还原性糖) 、p h 值、腺苷、虫 草酸等为指标，对蛹虫草胶囊和口服液进行检测。结果表明：含有蛹虫草有效成份的胶 囊和口服液制剂各项指标均符合国家质量标准，并含有对人体有益的多种生物活性成分， 且产品便于携带，易于吸收，优于传统的天然蛹虫草。 蛹虫草发酵液具有与蛹虫草同样的生物活性物质及营养成分，可做为原料生产出各 种保健产品。验证了以蛹虫草发酵液做为原料生产各种保健产品的可行性。 关键词：蛹虫草，麦芽汁，饮料，啤酒，胶囊和口服液，腺苷，虫草酸 、中 lt张蕾敷酝tlr-kr， 蠢、 上 a b s t r a c t t h ed i f f e r e n tg r o w t hs t a t e so fc o r d y c e p sm i l i t a r i sc s 、口l 、b t 、c i - 2 、y 3 、f 9 0 - t 、铂- s 、 3 31 6 3 ，3 3 2 2 3 ，乃矿乃jf u n g u so f t h i st h e s i ss e l e c to u t t ob e 疵f o rc o r d y c e p sm i l i t a r i sf u n g u s c sf u n g u sk i n dt h a tm a l tj u i c ei st h ec u l t u r em e d i u m , t h eo p t i m u ms t r a i n o fc o r d y c e p sm i l i t a r i s 3 3 2 2 3i nw o r to fs e l e c t e dw i t ht h ei n d e x e so fm y c e l i u m a n dl i q u i df e r m e n t e da sr e f e r e n c e b y w a y o fa c t i v a t i o na n de x p e l l i n gg r a d ee x p a n dt oe a r t hu pa n df i l t e r se t c as e r i e so fm e t h o d sg e t c o rd _ v c e p sm i l i t a r i st ob ef e r m e n t e dt h el i q u i d 。w e a r es u c c e e d e di np r o d u c t i o no fh e a l t h p i 0 t e c t i o nd r i n k ，b e e r ，c a p s u l e sa n do r a l l yl i q u i d i nl a b o r a t o r y , w h i c hi sb a s e do nm a k i n g i n g r e d i e n t sw i t hc o r d y c e p s m i l i t a r i sa n ds o m eo t h e rt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n e ( 1 ) w i t ht h es e n s eo r g a ne v a l u a t i o ng i v i n g f i r s tp l a c et ow i l lt h eb a s i s ，t h eo p t i m u m d i s p e n s a t i o no fw h a tb yw a yo ft h ed i a g o n a li n t e r s e c t i o nt r i a l m e t h o dg e t st od e v e l o po f p u p a sc h i n e s ec a t e r p i l l a rf u n g u sh e a l t hp r o t e c t i o nd r i n k ：c o r d y c e p s m i l i t a r i si sf e r m e n t e d ， 锄dt h a tt h eo p t i m u md i s p e n s a t i o np r o p o r t i o no fd r i n ki s t h el i q u i df e r m e n t i n gi sf e r m e n t e d t h a tt ot h el i q u i dl a w ：p r o p o r t i o n2o fs t r a w b e r r yj u i c e1 , i t s i n i t i a lp h sv a l u ei sf o r5 5 ， f e n n e n t st h et e m p e r a t u r ef o r3 2 cs ，a n dt h a tt h el a c t i ca c i db a c i l l u so f t i m ef o r2 3 h ，b u l g a r i a f e r m e n t i n gi sk n e a d e dd o u g hw r a p say e a s ti n t e r g r o w t h t of e r r t a e n t t h ed r i n kp r o d u c td e v e l o p e di sw i t hh p l cc h e c k o u ta d e n o s i n e ，4 6i ig m l ，3 1u # m l ， a n dt h ea c i d6 8 6 8l ag m l ，5 8 9 0ug m lt h a tt h ec o l o r i m e t r yi st e s t e dt h ec o r d y c e p s m i l i t a r i s i sc o n f i r m e dt h a tc o r d y c e p sm i l i t a r i sc o n t a i n se f f e c t i v ec h e m i c a lc o m p o s i t i o no fc o r d y c e p s m i n t n r i si nt h eh e a l t hp r o t e c t i o nd r i n kr e a l l y b yw a yo ft h ew h o l ee x p e r i m e n t ，g a i nt o e n d o ww i t ht h ea c t i v ec o r d y c e p sm i l i t a r i sh e a l t hp r o t e c t i o nd r i n k so fc o r d y c e p sm i l i t a r i s l i v i n gt h i n g s ( 2 ) f i r s t l y ，t h em a l tj u i c ei sf e r m e n t e db yt h ec o r d y c e p sm i l i t a r i sc s s e c o n d l y , t h e f i r s t l i q u i d f e r m e n t e di sm i x e dw i t ht h em a l tj u i c ea c c o r d i n gt o3 ：7 l a s t l y , t h e m i x t u r ei s f e 姗e n t e db yy e a s t t h e n ，w ep r o d u c et h eh e a l t hp r o t e c t i o nb e e rw i t hd i f f e r e n c e t ot h e t r a d i t i o nb e e r w i t ht h ei n d e xo fp h sv a l u e 。d i a c e t y l ，a l c o h o lb r a n c h e s ，c o r d y c e p i c a c i d ，a d e n o s i n e ，w e t e s tt h eh e a l t hp r o t e c t i o nb e e rs oa st oi n v e s tt h ei n f l u e n c et ot h ey e a s t t h eo b j e c tl i s t i s b r i g h t ：b yw a yo fa d d i n g ”f i r s tl i q u i df e r m e n t e d ”，a l li n d e x e s f i tt h en a t i o n a ls t a n d a r dt o t h e 、 p r o d u c t i o no ft h em e d i c a la n dh e a l t hp r o t e c t i o nc a p s u l e sa n do r a l l yl i q u i di nl a b o r a t o r y , w h i c h i sb a s e do nm a k i n gi n g r e d i e n t sw i t hc o r d y c e p sm i l i t a r i sa n ds o m eo t h e rt r a d i t i o n a lc h i n e s e m e d i c i n e w i t ht h ei n d e x e so fm o i s u r e ，t h ea m o u n to fm i c r o o r g a n i s m ，d e n s i t y , t h es u g a r ( i n c l u d e d t h er e d u c i n go n ea n dt h es u g a rw i t h o u tr e d u c t i o n ) ，p hv a l u e ，a d e n o s i n ea n dc o r d y c e p i c a c i d e t c ， w et e s tt h ec o r d y c e p sp r o d u c t s t h eo b j e c tl i s ti sb r i n g h t ：b ya d d i n gt h ee f f c t i v ec o m p o n e n t p a r to fc o r d y c e p sm i l i t a r i s ，a l li n d e x e sf i tt h en a t i o n a lq u a l i t ys t a n d a r d m o r e o v e r , w i t hn a t u r a l c o r d y c e p sc o m p a r e d ，t h em e d i c a lp r o d u c t sa l s oc o n t a i nt h ea c t i v em a t e r i a l ss u c ha sa d e n o s i n e ， a n de v e nb e t t e rt ot a k ea l o n ga n da b s o r b t h el i q u i do fc o r d y c e p sm i l i t a r i sf e r m e n th a v ea l i k ea c t i v em a t e r i a l sa n dn u t r i t i o n i n g r e d i e n tw i t hc o r d y c e p sm i l i t a r & ，w h i c hc a nb em a t e r i a lt op r o d u c em a n yk i n d so fh e a l t h c a r ep r o d u c t i o n i tw a sv a l i d a t e df e a s i b i l i t y k e yw o r d s ：c o r d y c e p 8m i l i t a r i s ，m a l tj u i c e ，d r i n k ，b e e r , c a p s u l e sa n do r a l l y l i q u i d ， a d e n o s i n e ，c o r d y c e p i c a c i d i i i 目录 目录 摘要o ooooo 一一”i a b s t r a c t o o000 0000100 00aooooqo0 00 ooom o0i i 第一章绪论0 ooooo m oo 000000 0 00 1 1 1 蛹虫草的药理作用l 1 1 1 蛹虫草的镇静催眠作用2 1 1 2 蛹虫草的雄性激素样作用o 2 1 1 3 蛹虫草对药物引起免疫抑制的拮抗作用3 1 1 4 蛹虫革的抗肿瘤作用3 1 1 5 蛹虫草治疗老年性痴呆疗效观察4 1 1 6 蛹虫草的抗衰老作用5 1 2 蛹虫草的毒性研究6 1 3 蛹虫草有效物质成分的研究“6 1 3 1 无机元素6 1 3 1 1 种类6 1 3 1 2 含量7 1 3 2 氨基酸7 1 3 3 核苷成分8 1 3 4 多糖8 1 3 5 维生素8 1 3 6 特殊化学成分9 1 3 7 蛹虫草培养液成分9 1 4 蛹虫草的生物学地位及资源状况1 0 1 5 蛹虫草培养技术的研究! ”1 1 1 5 1 蛹虫草的快速培育法1 1 i v 目录 1 5 2 蛹虫草的固体培养1 1 1 5 3 蛹虫草的液体培养( 发酵) 技术1 2 1 6 蛹虫草的深加工0 0000 1 3 1 6 1 利用蛹虫草开发新型保健啤酒1 3 1 6 2 利用蛹虫草培养基酿制功能型酱油1 3 1 6 3 利用蛹虫草制造 三菌 复合保健口服液1 4 1 6 4 利用蛹虫草变异菌株生产保健药品1 4 1 6 5 利用蛹虫草生产食药真菌面粉1 5 1 6 6 利用蛹虫草生产药膳蛹虫草肉1 5 1 6 7 利用蛹虫草制造壮阳酒? “1 5 1 7 本论文研究的内容1 6 第二章蛹虫草的活化、选种、扩培和液体发酵17 ： 2 1 试验材料1 7 2 1 1 菌种k 1 7 2 1 2 培养基1 7 2 1 2 ：1 斜面种子培养基1 7 2 1 2 2 液体种子培养基1 7 2 1 2 3 发酵培养基1 7 2 1 3 主要原料与试剂1 8 2 1 4 主要试验设备1 8 2 2 试验方法1 8 2 2 1 麦芽汁的制备1 8 2 2 2 菌种的活化、选种1 8 2 2 2 1 菌种的转接与活化1 9 2 2 2 2 菌种选择1 9 2 2 2 3 菌种扩培与发酵1 9 2 3 实验结果和讨论1 9 第三章蛹虫草发酵液深加工技术的研究i ooooo 2 1 v 目录 3 1 试验材料与仪器设备2 1 3 1 1 试验菌种、菌种活化2 1 3 1 1 1 菌种l o o 2 l 3 1 1 2 培养基，2 1 3 1 1 3 活化一”2 l 3 1 2 试验材料2 1 3 1 3 仪器设备2 2 3 1 4 检测方法2 2 3 2 蛹虫草发酵饮料的研制2 3 3 2 1 蛹虫草发酵饮料研制试验工艺流程2 3 3 2 2 试验方法2 3 3 2 2 1 酒精度的测定_ 2 3 3 2 2 2 果汁、发酵液的混合与p h 值的调节2 3 3 2 2 3 灭菌条件2 3 3 2 2 4 发酵初始p h 值和温度的确定2 4 3 2 2 51 1 4 7 2 菌与面包酵母菌添加量的确定2 4 3 2 2 6 共生发酵的确定2 4 3 2 3 试验结果与分析2 8 3 3 蛹虫草发酵啤酒的研制2 9 3 3 1 试验方法2 9 3 3 2 一次发酵液检测3 0 3 3 2 1 镜检3 0 3 3 2 2 总酸测定3 0 3 3 3 啤酒发酵各项指标的检验与分析3 0 3 3 3 1 原麦汁浓度3 0 3 3 3 2a 一氨基氮3 0 3 3 3 3p h 值3 0 3 3 3 4 总酸3 l 3 3 3 5 糖度3 l 3 3 3 6 双乙酰3 2 3 3 3 7 酵母细胞数3 2 v i 目录 3 3 3 8 酒精分3 2 3 3 3 9 高级醇3 3 3 3 3 1 0 发酵度3 5 3 3 3 1 1 腺苷3 6 3 3 3 1 2 虫草酸( 甘露醇) 3 7 3 3 4 试验结果与讨论3 9 3 4 蛹虫草发酵口服液及胶囊的研制3 9 3 4 1 菌种选择与培养3 9 3 4 1 1 试验工艺流程0 o oq o ooooo o oo 80000 000 00 3 9 3 4 1 2 菌种选择结果与讨论4 0 3 4 1 3 试验菌的转接培养4 0 3 4 1 4 蛹虫草3 3 2 2 3 菌的发酵( 培养) 4 0 3 4 1 5 发酵液的检测4 1 3 4 2 蛹虫草胶囊和口服液的生产4 2 3 4 2 1 蛹虫草有效成分提取方法的选择4 2 3 4 2 2 制备蛹虫草提取液厶4 3 3 4 2 3 制备胶囊( 蛹虫草一蚁胶囊) 4 4 3 4 2 4 制备口服液4 5 3 4 3 蛹虫草胶囊和口服液的检测q b ooo0 0q o dq j 4 6 3 4 3 1 蛹虫草胶囊的检测q q o oboo 4 6 3 4 3 1 1 水分检测4 6 3 4 3 1 2 人体外溶解程度的检测4 6 3 4 3 1 3 微生物限度的检查”o oo oo 4 6 3 4 3 1 4 薄层色谱法定性鉴别腺苷4 7 3 4 3 1 5 虫草酸含量的测定4 8 3 4 3 1 6 蛹虫草胶囊检验结果4 9 3 4 3 2 蛹虫草口服液的检测：”5 0 3 4 3 2 1 色度的测定5 0 3 4 3 2 2 密度的测定0 00 5 0 3 4 3 2 3 固形物的检测5 0 3 4 3 2 4 微生物限度的检查5 l v i i h录 3 4 3 2 5 总酸的测定如5 l 3 4 3 2 6 糖度的测定5 1 3 4 3 2 7 薄层色谱法定性鉴别腺苷5 1 3 4 3 2 8 虫草酸含量的测定o 5 2 第四章结论5 3 参考文献5 5 致谢5 8 第一章绪论 第一章绪论 蛹虫草( c o r d y c e p sm i l i t a r i s ) 又名北冬虫夏草、北虫草、武式虫草，隶属真菌 门、子囊菌亚门、子囊菌纲、肉座目、麦角菌科、虫草属真菌，其无性阶段为轮枝菌 ( v e r t i c i l l i u m ) ，与我们家喻户晓的冬虫夏草( c o r d y c e p ss i n e n s i s ) 同属n ? 。 蛹虫草是由子座( 即草部分) 与菌核( 即虫、蛹的尸体部分) 两部分组成的复合体。 冬季幼虫蜇居在土里，菌类寄生其中，汲取营养，幼虫体内充满菌丝而死。到了夏季， 自幼虫( 蛹) 尸体上生出幼苗，形似草，夏至前后采集而得口1 。国内于1 9 5 8 年在吉林省 首次发现蛹虫草并通过鉴定，认为它与冬虫夏草是同一个属，定名为蛹虫草 ( cm i l i t a r i s ( l ) l i n k ) 。蛹虫草天然资源世界性分布很少。在我国主要分布在北方， 以东北三省为主，陕西、云南、广东等地也有分布h 洲。 冬虫夏草为我国特有的名贵药用真菌，主产于云南、贵州、四川、青海和西藏的3 5 5 k m 的高山上1 。由于生长环境和寄生条件特殊，天然资源非常紧张。李时珍在本草 纲目中指出，蝉花能主治“d , j l 天吊惊痫、夜啼、心悸”。蝉花包括蝉草和蝉蛹草等 多种寄生于蝉体上的虫草菌。清朝吴仪若所著本草从新中首次将蝉花称为冬虫夏草。 蛹虫草的药用价值与冬虫夏草相似h - 引，亦为我国特有的一类具有神奇药用与滋补功能的 珍贵药用真菌。 1 1 蛹虫草的药理作用 据新华北草纲要记载阳1 ，蛹虫草具有“性平、味甘，有益肺。肾，补精髓，止血 化痰等功效，用于肺结核及老人虚弱、贫血等症，为珍贵的中药材。目前，蛹虫草已 广泛应用于临床，在治疗冠心病、心率失常、高血脂症、慢性肝炎、肝硬化、慢性肾炎、 肾功能衰竭、慢性阻塞性肺病、原发性血小板减少性紫癜、肿瘤、性功能障碍及老年性 疾病等方面发挥着日益重要作用o i 。 现代中医学巨著中华药海记载n 刀：蛹虫草，别名北冬虫夏草( 吉林) ，性味甘 平，入肺、肾二经。功效主治：益肾补阳，用治肾阳不足，髓海空虚，眩晕耳鸣，健忘 不寐，腰膝酸软，阳痿早泄等症；止血化痰，有益肺阴，秘经益气，对肺肾不足、久咳 虚喘、劳咳痰血者有较好疗效。此外，在药理上蛹虫草与冬虫夏草同样具有镇静，抑肿 瘤，提高免疫力等作用n 3 j 毛惦1 。全国中草药汇编记载n 引：蛹虫草( 北虫草) 的子实体 第一章绪论 及虫体也可作为冬虫夏草入药。 表1 - 1 蛹虫草与冬虫夏草的功能及作用 t a b 1 - 1t h ef u n c t i o na n de f f e c to fc o r d y c e p sm i l i t a r i sa n dc o r d y c e p ss i n e n s i s 1 1 1 蛹虫草的镇静催眠作用 蛹虫草含有8 种维生素乜朋，具有调节中枢神经系统的作用，对植物性神经系统具有 外周抗胆碱作用，能降低副交感神经兴奋性，故蛹虫草具有抗惊厥、镇静功能。并对心 悸、失眠有较好的治疗作用3 1 。 韦会平等认为，人体神经系统含有大量磷脂，冬虫夏草中含磷较高，推测其与临床上 的催眠、镇静等神经调节作用有关，柞、桑蚕蛹草磷的平均含量为冬虫夏草的2 5 倍。 蛹虫草能明显减少小鼠的自主活动，有镇静安神作用。蚕蛹草和冬虫夏草均能与戊 巴比妥钠产生协同的催眠作用。蚕蛹草和冬虫夏草均能对抗戊四氮引起的惊厥，而呈现 抗惊厥作用心引。此外，蚕蛹草和冬虫夏草均能延长小鼠游泳时间，增强小鼠耐疲劳能力 1 2 4 。由于蛹虫草的镇静作用，减少了实验动物不必要的肌肉紧张与无效的肌肉活动，而 使耗氧量降低幢5 1 。 1 1 2 蛹虫草的雄性激素样作用 蛹虫草能增强睾丸的生精与内分泌功能，并能修复腺嘌呤引起的睾丸功能障碍，使 第一章绪论 大鼠血清睾酮含量增加。同时使其体重及皮腺、精囊、前列腺的重量显著增加，有明显 的雄性激素样作用。临床证明，蛹虫草对肾虚所致的阳萎早泄有良好的治疗保健作用汹1 。 另据陈桂宝所作蛹虫草药理作用研究1 报道，用蛹虫草治疗肾虚腰痛、糖尿病、蛋 白尿等肾功能障碍者也收到了较好的治疗效果。 1 1 3 蛹虫草对药物引起免疫抑制的拮抗作用 冬虫夏草作为补益类中药，对其药效成分及生物学活性的研究已有几十年的历史， 应用也越来越广泛。蛹虫草的药效成分及活性研究主要是在二十世纪9 0 年代开始的。 由于蛹虫草和冬虫夏草具有一些相同的药效成分，是同属类药用真菌，一些学者在研究 蛹虫草的活性时常与冬虫夏草做对照。李宇彬选用冬虫夏草做阳性对照。实验结果显 示蛹虫草具有拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用和对抗由环磷酰胺诱导产生的细胞微核的 抑制作用。有关激活单核巨噬细胞系统的机制在对冬虫夏草的研究中啪1 认为：它可能直 接激活本系统，也可通过包括t l c 和补体备解素系统在内的各种级联活化得以实现。 该实验所设给药剂量参考了以往冬虫夏草的水煎剂给药的剂量，在蛹虫草吞噬功能 和抗微核形成实验中显示低剂量组与高剂量组无明显差异，表明了蛹虫革的高效性，与 冬虫夏草相比它们可能存在药效成分含量的差异或药效成分的差异。已知虫草素( 3 一 脱氧腺苷) 的含量在蛹虫草中就远高于冬虫夏草n 引，而成为蛹虫草的特效成分。在抗环 磷酰胺的细胞下降实验中，蛹虫草和冬虫夏草都具有明显的抵抗白细胞的降低作用，既 可抑制白细胞的降低程度，也可在较短的时间内使白细胞数目恢复到较高的水平，这种 作用与浓度成正向关系。高剂量组明显优于低剂量组。 1 1 4 蛹虫草的抗肿瘤作用 蛹虫草是麦角菌科的一种药用真菌，据白求恩医科大学、四j i i 中药研究所、浙江中 药研究所和全国第五、六届药用真菌学术会有关文献报道，蛹虫草中有效成分虫草素 ( 3 一脱氧腺苷) 含量为冬虫夏草的3 5 倍，这一结果比李楠等所做的略高。虫草素 能激活巨噬细胞产生细胞毒素直接杀伤癌细胞1 。另据同本新汉药北虫草之疗效一 书记载，虫草素能干扰细胞r n a 和d n a 的合成，促进细胞分化，改变细胞骨架分布， 抑制不正常细胞( 癌细胞) 的分裂并能作为区别细胞中不同的r n a 聚合酶的工具。杨企 震等2 1 应用蛹虫草治疗4 9 例不同癌症，初步表明蛹虫草在临床上对鼻咽癌、贲门癌、 胃癌、肝癌等确有一定疗效，坚持服用2 - - - 3 个疗程后患者症状和体征均有改善，特别 3 第一章绪论 对脾肾阳虚症患者疗效更佳。未见明显毒副反应。蛹虫草治疗癌症的远期疗效尚待继续 观察。 在癌症的治疗实践中，放疗和化疗除直接杀伤肿瘤细胞外，对宿主的免疫系统也造 成损害，由此抗肿瘤药物的药理研究已从化疗治疗发展到免疫治疗。冬虫夏草系我国传 统滋补强壮类名贵药材，具有补肾益肾等多种功效，是扶正祛邪的良药。现代药理学研 究证明，冬虫夏草主要是通过调节机体的免疫功能而发挥其生物学效应啪洲】。由于其野 生资源贫乏且价格昂贵，故不断寻找其代用品用于有关疾病的防治已日益受到重视。 蚕蛹草和冬虫夏草对小鼠$ 1 8 0 瘤块均有明显的抑制作用，并能延长荷瘤小鼠寿命， 预防给药可减少小鼠荷瘤率，并能抑制小鼠l e w i s 肺癌生长，减少自发肺癌转移灶。药 物机理实验证明，蚕蛹草和冬虫夏草均可促进脾淋巴细胞转化，间接反应体内t 一淋巴细 胞的增强，并能激活巨噬细胞的吞噬活性。喉癌细胞曲线和集落形成曲线，说明蚕蛹草 和冬虫夏草对癌细胞均有直接抑制作用b 材。由蛹虫草中提取的虫草素( c o r d y c e p i n3 一 脱氧腺苷) 是抑制小鼠艾氏腹水癌、人鼻咽癌k b 细胞的有效成分。蚕蛹草和冬虫夏草 即有抑制肿瘤生长，又有提高机体免疫力的作用，对体衰难于耐受化疗或放疗的病人， 显示出治疗优势。 近年通过对人工蛹虫草菌丝的生物活性研究，发现其亦具增强机体免疫力和抑制肿 瘤生长的作用。由于体细胞d n a 突变是化学致癌作用的机理，故有利于平等采用程序外 d n a 合成检测法，研究蛹虫草菌丝对癌诱变剂一甲基甲烷磺酸脂所致小鼠脾淋巴细胞d n a 损伤的影响，探讨了蛹虫草抑制剂化学因素致癌作用的机制，认为其作用剂量可能是： ( 1 ) 蛹虫草可能使甲基甲烷磺酸脂的化学结构发生变化，使其不在具有致突变性；( 2 ) 蛹草可能作用于d n a 某种成分，使甲基甲烷磺酸脂难以以共价键和d n a 碱基结合，使d n a 具有抗突变性。 刘民培，刘琦。州等用实验的方法认证了人工蛹虫草子实体对荷瘤小鼠免疫功能的影 响。用人工蛹虫草子实体( c m ) 3 0 0 m g k g 和6 0 0 m g k g 的剂量对s 1 8 0 荷瘤小鼠体内连续 灌胃1 0 天，分别对有关免疫指标进行检测。结果表明，c m 两个剂量组对合成抗绵羊红 细胞( s r b c ) 抗体( 血清溶血素) 及其抗体形成细胞、n k 细胞活性、网状内皮和单核巨 噬细胞系统的吞噬功能、以及t n f - b 和i l - z 的分泌水平等均有显著提高n 。这些表明， c m 对荷瘤小鼠的多项免疫指标均的明显的增强效应，这在其扶正抗癌的作用中具有重要 意义矧。 1 1 5 蛹虫草治疗老年性痴呆疗效观察 4 第一章绪论 随着社会的进步，人口出生率下降，以及医疗卫生保健的不断完善，世界人口越来 越趋向老龄化，老年性痴呆患者也不断增多。在发达国家老年性痴呆已成为老年病第四 位死亡之因。同时老年性痴呆的核心症状为智力减退及较广泛的认知功能障碍，从而明 显影响老年人生活质量。因此老年性痴呆已成为世界各国老年精神卫生领域急需研究的 主要疾病之一。由于老年性痴呆的发病机制较为复杂，确切原因还不是十分清楚，故目 前还缺乏特异有效药物。虽然有报道啪一们用特可林( t a c r i n e ) 等拟胆碱制剂，通过增 加患者脑中突触问隙可利用的乙酰胆碱制剂含量来治疗老年性痴呆取得一定进展，然而 这类药物除对患者心血管、前列腺等带来不良副作用外，有时还可导致意识模糊，甚至 谵妄，加重患者认知功能障碍。因此，积极探讨对老年性痴呆疾病既具有治疗保健作用， 又无明显副作用的新型药物具有临床价值。 沈均等。州试用蛹虫草治疗老年性痴呆收到良好效果，通过姗s e 检查，结果明显优 于单纯抗氧化剂对照组，这显然与蛹虫草所具有的抑制自由基反应诱导的线粒体肿胀及 脂质过氧化反应，提高血浆皮质醇、睾丸酮含量，增强机体单核巨噬细胞吞噬功能等多 方面药理活性作用有关h 1 4 2 1 ，同时由于蛹虫草属于可食用的药用真菌，故几无明显反应， 因此非常适合老年性痴呆的长期治疗。 1 1 6 蛹虫草的抗衰老作用 随着自由基医学研究的进展，人们越来越关心过氧化脂质和自由基所造成的组织损 伤。陈顺志h 幻等以小鼠肝匀浆脂质过氧化水平为观察对象，发现在不同的组织中产生的 过氧化脂质水平不同。同一浓度的蛹虫草以心肌匀浆中抑制率最高，脑匀浆中的抑制率 最低。研究证实，蛹草有明显的拮抗超氧阳离子( 0 2 一) 和组织匀浆产生过氧化脂质的作 用，对心肌细胞也有保护作用嘶1 。 虫草酸能清除人体自由基，显著增加细胞能荷值，降低血压，扩张心脑血管血容， 调节血液粘稠度，抑制脂质在血液及血管壁的沉积h 劓。 近年来通过对蛹虫草性质与功效的研究，发现蛹虫草具有与传统的抗衰老药物如人 参、牛黄、黄芪等同样的清除体内o ：一的作用，并且对o h 自由基也有清除作用“铂。o h 自由基是生物系统中氧化能力更强于0 ：。的一种活性氧，是脂质过氧化作用的主要引发 剂，也是许多进行性衰老过程的积极参与者。通过王琦的实验测试，发现野生蛹虫草子 座、培植蛹虫草子座及发酵菌丝体对o h 的5 0 清除率需约o 8ug ，略低于培植蛹虫草 子座对o h 的5 0 清除率所需量，但远高于培植蛹虫草发酵菌丝体的需要量。 5 第一章绪论 1 2 蛹虫草的毒性研究 贡成良，徐承智等h 5 1 所做小鼠毒性试验证明：家蚕蛹虫草大、小鼠雌、雄性经口l d 舳 大于1 0 0 9 k g 体重，根据急性毒性分级标准，其大、小鼠急性经口毒性属于实际无毒 类。致癌、致突变、致畸试验阴性。家蚕蛹虫草大鼠3 0 d 喂养试验各项指标均未见明显 毒性反应，其最大无副作用剂量为4 0 9 k g 体重。 陈桂宝等人m 1 也做了类似试验：一次灌胃的急性毒性：取小鼠5 0 只，随机分组， 每组1 0 只。1 次灌胃剂量为7 2 、l o 3 、1 4 7 、2 1 0 、3 0 o g 生药k g ，观察7 天动物死 亡数。实验期间各剂量组均无动物死亡，也未观察到明显的毒副反应。实验表明，蛹虫 草口服灌胃l d 翮 3 0 9 生药k g 。连续给药的毒性：每日以剂量1 0 3 和7 2 9 生药k g 连续灌胃7 天( 累计剂量为5 0 4 和7 0 1 9 生药k g ) ，停药后继续观察3 天，在连续灌 胃给药第5 天时死1 鼠外，余无动物死亡。实验中观察到有的小鼠体重稍有减轻外，无 明显的毒副反应。 通过以上两个试验可证明，蛹虫草无毒。 1 3 蛹虫草有效物质成分的研究 蛹虫草主要化学成分为虫草素、虫草酸( 甘露醇) 、虫草多糖、氨基酸、s o d 及一些 人体必需的微量元素h 。此外，国内外学者h 巩蛐例一订近年来还从蛹虫草中分离出多种单体 化合物，药理表明其粗提物及多个单体有多种生理活性。姜泓等啼2 1 从人工蛹虫草子实体 中分离出7 个化合物，分别鉴定为3 一脱氧腺苷( 3 一d e o x y a d e n o s i n e ，1 ) ，腺苷 ( a d e n o s i n e ，2 ) ，n 6 一甲基腺苷( n 6 一m e t h y l a d e n o s i n e ，3 ) ，0 5 一乙酰基虫草素 ( 扩一a c e