（食品科学专业论文）南瓜中化学成分的提取分离与结构鉴定.pdf

南瓜中化学成分的提取分离与结构鉴定 摘要 南瓜即葫芦科植物南瓜( c u c u r b i tm o s c h a t ad u c & j 的果实，已 有数千年的食用和药用历史，在全国各地均有栽培。我国南瓜总产量 高达1 8 0 万吨，约占世界总产量的3 0 左右。南瓜不仅具有很好的食 用价值，现代研究发现，还具有降血糖、调血脂、降血压等功效。虽 然南瓜具有很高的营养价值和药用功效，但是南瓜中的化学物质研究 相对较少。为进一步揭示南瓜的药理活性化学物质基础，本论文对南 瓜的化学成分进行了系统的研究。 1 、采用正相硅胶柱色谱对南瓜氯仿提取物进行了分离，从氯仿 提取物中分离得到4 个化合物，即化合物i 、化合物i i 、化合物和 化合物。通过质谱、核磁共振等手段表征了化合物的结构，分别为： 顺1 5 一十八烯酸( c t s 一1 5 - v a c c e n i ca c i di ) 、硬脂酸( s t e r a r i ca c i di i ) 、顺 - 1 5 十八烯酸甲酯( c i s - 1 5 一v a c c e n i ca c i dm e t h y le s t e ri n ) 和蔗糖( s u g a r i v ) 。这四个化合物均为首次在南瓜中分得。 i 顺1 5 十八烯酸 l x ( m o s c h g l y c o l i p i dd 1 ；b u 3 经制备型高效液相分离，获得组分 x ( m o s c h g l y c o l i p i de ) 和i x i ( m o s c h g l y c o l i p i df ) 。通过波谱数据解析并 查阅相关文献，初步推测化合物、v l i 、i x 、x 、为新化合物。 m i x ( m o s c h g l y c o l i p i dd ) ；b u 3 经制备型高效液相分离，获得组分 x ( m o s c h g l y c o l i p i de ) 干i x i ( m o s c h g l y c o l i p i df ) 。通过波谱数据解析并 查阅相关文献，初步推测化合物、x 、为新化合物。 h o v im o s c h g l y c o l i p i da v i im o s c h g l y c o l i p i db r 。丫八八v 蝴冷一 i xm o s c h g l y c o l i p i dd 帅她一 m o s c h g l y c o l i p i df 该研究分得的化合物为南瓜活性成分的筛选打下了良好的基础。 关键词：南瓜，化学成分，分离，结构鉴定 i v i s o i 。a r n o na n ds t r u ( x u r ee l u c i d a r 兀o no f c h e m i q 址c o m p o s i h o nf r o m ，n 砭f r u i to f a b s l l r a c r p u m p k i ni st h ef r u i to fc u c u r b i t am o s c h a t ad u c hw h i c hb e l o n g st o c u c u r b i a c e a ef a m i l y i th a sb e e nu s e di nf o o da n dm e d i c i n ef o rt h o u s a n d s o fy e a r si nc h i n a t h et o t a lo u t p u to fp u m p k i ni s1 8m i l l i o nt o n si n c h i n a ，w h i c hi sa b o u t3 0 o fw o r l dt o t a lo u t p u t t h i sv e g e t a b l ei sv e r y p o p u l a ri nc h i n ab e c a u s ei ti st h o u g h tt op o s s e s sp h a r m a c e u t i c a le f f e c t s u c ha sl o w e r i n gs u g a ra n db l o o dp r e s s u r e b u tt h e r ei sl i t t l ek n o w l e d g e a b o u tt h e b i o a c t i v ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t sb e s i d e sp o l y s a c c h a r i d e si n p u m p k i n i n t h i ss t u d yw ef o c u so nt h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so fp u m p k i n 1 t h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n ti nt h ec h l o r o f o r me x t r a c ti np u m p k i n s w a ss e p a r a t e dw i t hs i l i c ag e lc o l u m nc h r o m a t o g r a p h yt oy i e l d4 c o m p o u n d s ：c i s - 1 5 - v a c c e n i ca c i d0 ) ，s t e r a r i ca c i d ( i i ) ，c i s - 1 5 - v a c c e n i c a c i dm e t h y le s t e r ( i ) a n ds u g a r ( i v ) ，e l u c i d a t e db ym sa n dn m rd a t a t h e s ec o m p o u n d sw e r ei s o l a t e df r o mp u m p k i nf o rt h ef i r s tt i m e v c o m p o n e n t sb u l ，b u 2a n db u 3 t h ec o m p o n e n tb u lw a si s o l a t e d b yh s c c cu s i n gat w o p h a s es o l v e n ts y s t e mc o m p o s e do f p e t r o l e u m c h l o r o f o r m m e t h a n o l n p r o p a n o la n dw a t e r ( 3 ：5 ：6 ：1 ：4 ，v v ) t oy i e l dac o m p o n e n tb u i - 2 t h ec o m p o n e n t sb u i - 2 , b u 2a n db u 3 w e r ei s o l a t e db yp r e p a r a t i v ei - i p l ct oy i e l dc o m p o u n d sv 二r e s p e c t i v e l y c o m p o u n d s v i - x 1w e r ee l u c i d a t e da sm o s c h g l y c o l i p i da - eo l lt h eb a s i s o fe s i m s ，e s i m s m sa n dn m r a n a l y s i s t h e s ec o m p o u n d sm a yb e n e wb a s e do no u rs e a r c h e si ns e v e r a ld a t ab a s e s m o s c h g l y c o l i p i da ( v d m o s c h g l y c o l i p i db ( v 田 c o m p o n e n t sb u l ，b u 2a n db u 3 t h ec o m p o n e n tb u lw a si s o l a t e d b yh s c c cu s i n g at w o p h a s es o l v e n ts y s t e mc o m p o s e do f l i g h t p e t r o l e u m c h l o r o f o r m m e t h a n o l n p r o p a n o la n dw a t e r ( 3 ：5 ：6 ：1 ：4 ，v v ) t oy i e l dac o m p o n e n tb u l - 2 t h ec o m p o n e n t sb u l - 2 ，b u 2a n db u 3 w e r ei s o l a t e db yp r e p a r a t i v eh p l ct oy i e l dc o m p o u n d sv r e s p e c t i v e l y c o m p o u n d s v i x 1w e r ee l u c i d a t e da sm o s c h g l y c o l i p i da f ，o nt h eb a s i s o fe s i - m s ，e s i - m s - m sa n dn m r a n a l y s i s t h e s ec o m p o u n d sm a yb e n e wb a s e do no u rs e a r c h e si ns e v e r a ld a t ab a s e s m o s c h 西y c o l i p i d a ( v i ) m o s c h g l y c o l i p i db ( v i i ) v i i m o s c h g l y c o l i p i dc ( v m ) m o s c h g l y c o l i p i de ( x ) m o s c h g l y c o h p i df ( ) ( d k e y w o r d s ：c u c u r b i t am o s c h a t ad u c h ，c h e m i c a lc o n s t i t u e n t s ， s e p a r a t i o n ，s t r u c t u r ee l u c i d a t i o n i x 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 本人为获得浙江工商大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的 材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 签名：立鱼叁型三：日期：加矽年一月订日 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解浙江工商大学有关保留、使用学位论文 的规定：浙江工商大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的 复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部 分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内 容相一致。 保密的学位论文在解密后也遵守此规定。 签名砬盛盔： 一、刖罱 第一章引言 第一节南瓜的研究概况 南瓜( c u c u r b i t m o s c h a t ao u c 丸) ，葫芦科( c u c u r b i t a c e a e ) 南瓜属的一年生蔓 生草本植物。南瓜茎长达l o 余米，全体被毛。茎 具五角棱，中空，节膨大。叶互生，阔卵形，近圆 形或心脏形，有时浅裂成五角形，长1 5 3 0 锄， 先端尖，基部深心形，叶缘略呈波状，有不规则的 小齿状，上面绿色，两面均被茸毛；叶柄比叶片稍 长，叶腋侧边生一卷须。花单性，雌雄同株，黄色； 友花萼片长，直立，多于顶端扩大而成叶状，先端 反卷，花冠钟状漏斗形，向外反卷，花丝顶端相合，密腺盘肥厚：雌花萼管在子 房上部平出，花冠漏斗状圆形，有假雄蕊3 枚，蜜腺盘肥厚，子房下位，柱头二 纵裂。瓠果。花6 7 月，果期8 9 月叽 早在1 9 3 6 年，我国园艺学家吴耕民先生依据法国罗典1 2 1 的分类意见，将南瓜 的3 个主要栽培种命名为：中国南瓜( c u c u r b i t m o s c h a t a d u c h 俗称窝瓜、番瓜等) 、 印度南瓜( c u c u r b i tm a x i m ad u d t 俗称笋瓜、 搅瓜等) 和美洲南瓜( c u c u r b i t p e p ol 俗称西 葫芦) 。根据考古资料及品种资源的分布考察 【3 】认为南瓜属植物土生土长起源于荚洲大 陆。具体说，南瓜的几个栽培种起源于美洲太 陆的两个中心地带：一是墨西哥和中南美洲， 是美溯南瓜、中国南瓜等栽培种的初生起源中 心。二是南美洲的秘鲁南部、玻利维亚和阿根 廷北部，是印度南瓜栽培种的初生起源中心。 见图1 1 。f i i 。u r e 。确1 - 。1 要蹁麓牌翳m 从2 0 世纪2 睥代起，美国、前苏联等国家 派出多批探险考察队赴墨西哥、危地马蜡、秘鲁等国调查南瓜栽培植物及其野生 近缘种的起源和分布，通过采集和考古发掘，得到了南瓜植物起源地及历史年代 的确凿证据。 美国怀特克等1 4 】在墨西哥奥克沙卡( 0 呶a c a ) 洞窟的考古发掘中的出土物显 示，早在公元前8 5 0 0 年，美洲南瓜就伴随着人类，而人类栽培它则在公元前4 0 5 0 年。怀特克等【5 1 还在墨西哥奥坎波( o c a m p o ) 洞窟和秘鲁胡阿沙- 黼( s u a c a p r i e t a ) 遗址的出土发掘中发现，最早的中国南瓜残片在公元前5 0 0 0 3 0 0 0 年就已 存在。至于南美洲唯一起源的印度南瓜，据卡特等的发掘报告，在秘鲁圣里约 哈纳颊俗强n i o h o l a s ) 遗址，出土的印度南瓜残片不早于公元前l s o o 年。 栽培南瓜植物的特性是：( 1 斌逆力强，耐粗放管理。( 2 ) 适应性强，分布地 域广，我国东西南北中，平原、丘陵、山地、高原，无处不适应。( 3 ) 产量高， 6 6 7m 2 般产2 0 0 0 3 0 0 0k g 以上，创世界记录的南瓜单瓜重达4 3 9k g ( 1 9 9 8 年1 0 月新华社转引美联社报导) ，( 4 ) 早中晚熟品种俱全，从播种到采收，最早的短蔓 型美洲南瓜需4 0 4 5 天，最晚的中国南瓜需1 2 0 天以上。( 5 ) 老熟南瓜耐贮藏，采 后可保存数月至次年。( 6 ) 南瓜植物全身无疲物，嫩果、老采、花、嫩稍、叶柄、 种子均可供人食用。伪果实加工成南瓜耪，在保健食品及糕点工业上应用广泛。 ( 8 ) 南瓜属植物被用作西瓜、甜瓜、黄瓜的砧木，抗士传病害。 目前南瓜在世界各地都有种植，其栽培面积以亚溯最多，其次为欧洲和南美 洲1 6 j 。我国自明初引入南瓜品种，李时珍在本草纲目中记载南瓜“出南番， 转入闽浙，今燕京诸处亦有之”。目前全中国各地均有栽培，主产于浙江、江苏、 河北、山东、山西、四川等地i 御。 自2 0 世纪8 0 年代末起，南瓜及南瓜产品以其极高的营养价值、食疗保健f 8 q 0 1 和防病治病i 儿j 的功能特性在国内外市场上倍受青睐。根据本草纲目、滇南 本草、本草再新等资料记载，南瓜叶、南瓜花、南瓜须、南瓜根、南瓜藤、 南瓜瓤均可入药，本草纲目中，谓其具有“补中、补肝气、益心气、益肺气、 益精气”之功效，将其与灵芝相提并论1 1 2 1 。中医史书滇南本草中记载：“南瓜 性温、昧甘无毒，入脾、胃二经，能润肺益气、化痰排脓、驱虫解毒，治咳嗽、 哮喘、肺痈、便秘等症”。本草再新；“平肝和胃，通经络，利血脉，滋阴水， 治肝风，和血养血，调经理气，兼去诸风。” 2 二、南瓜功能成分研究的进展 ( 一) 南瓜的营养成分 1 、南瓜肉的营养成分 南瓜营养丰富，含有较多的糨纤维、维生素、卢胡萝卜素，为低脂，低钠、 高膳食纤维、高维生素e 、高肛胡萝卜素、高钾、高钙食品；含有人体所需的1 7 种氨基酸，其中赖氨酸、缬氨酸、亮氦酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸等必需 氨基酸含量较高。南瓜多糖纯晶( 简称p p ) 由d 葡萄糖、d 半乳糖、i ，阿拉伯 糖、木糖和d 葡萄糖醛酸组成。南瓜中还含较多的类胡萝卜素。 张建农等i 廿1 对1 2 个南瓜品种进行了研究，表明南瓜含有较丰富的碳水化合 物、类胡萝卜素和维生素c 。其中碳水化合物含量最高的达1 0 ；类胡萝i - 素含 量高的达3 2 2m g k g ；维生素c 岔量也有较大的差异，含量在3 1 2 3 9m g k g 吴素玲0 4 1 对2 3 个南瓜品种进行品质资源的分析测定徭出结论，干物质含量 5 3 0 2 7 3 0 ，总糖含量1 4 5 5 3 6 铝，蛋白质含量8 5 3 1 4 0 0 ， 粗纤维含量8 2 3 1 3 6 4 ，果胶含量5 8 9 1 0 0 8 。吴增茹等l l s l 用高效 液相色谱法测定3 1 个南瓜品种( 1 3 个国外品种、1 8 - ? - 国内品种) 果肉中哆胡萝卜 素的含量有的高达8 7 3 5m g 1 0 0 9 ，甚至高于胡萝卜串嗲一胡萝h 索的含量( 文献报 道，胡萝卜较好的品种中b 胡萝卜素的含量为5 6m g l o o g ) 。 南瓜可提供丰富的膳食纤维和果胶物质。它们在胃中停留的时间长于已溶化 的食物，可使人维持较久的饱腹感；还能黏结和解除人体内细菌毒性、铅等重金 属及一些放射性元素，具有抗环境毒物的作用。南瓜中丰富的维生素a 原对保护 视力、预防眼疾有显著的作用。贺小琼等1 1 6 l 研究了南瓜粉的营养成份，结果表明； 每1 0 0g 南瓜粉中含脂肪2 2 9g 、粗纤维1 2 5 4g 、维生素e2 0 8 1m g 、, 8 - 胡萝h 素 1 2 0m g 、钠2 2m g 、钾3 0 5 0m g 、钙2 1 3n a g 。氨基酸分析结果表明，南瓜粉含有 人体所需的1 7 种氨基酸，其中赖氨酸、缬氨酸、亮氦酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、 苏氨酸等必需氨基酸含量较高，南瓜粉蛋白质质量较高。 孔庆胜【1 7 】研究了南瓜多糖的单糖组成，表明南瓜多糖由m 葡萄糖、d - 半乳 糖、l ，阿拉伯糖、木糖和d 葡萄糖醛酸组成。其摩尔比分别为0 1 8 1 ：0 0 8 3 ：0 0 6 9 ： 0 0 3 1 1 ：0 1 7 5 0 ，认为南瓜多糖有可能成为一种新的高效低毒的降血糖药物。 武维振等【1 8 】从南瓜皮中提取食用黄色素，对其工艺、性质及应用进行了探讨。 提取的色素为脂溶性色素，提取率3 1 左右。通过加入乳化剂的办法还可将它 制成水溶性色素，其最大吸收峰约在4 4 6n m 。经毒理实验证明，该色素安全、无 毒，且属胡萝h 素类物质，因而既有天然色素的作用，又有维生素的营养强化功 效，符合食品添加剂“天然”、“营养”、“多功能”的发展方向。 2 、南瓜籽营养成分 南瓜籽属脂肪型种子，不饱和脂肪酸含量较高，并含有较多的矿物质，其中， 南瓜籽含有丰富的铜、铁、锰、锌等微量元素，特别是含有丰富的铬，还富含胡 萝h 素和维生素，维生素e 含量较高。 王萍等【1 9 1 、周宝_ - , 2 1 z o l 、尹起范等【n 1 、殷国健阎等研究了南瓜种子的主要营 养成分组成及含量。南瓜籽含油量为4 8 6 1 ，粗脂肪含量为5 1 0 3 5 5 9 1 。 脂肪酸主要由棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、及少量的月桂酸、棕榈油酸、亚 麻酸、花生酸等成分组成，其中以油酸含量最高，占2 3 1 0 5 1 5 1 ，其次为 棕榈酸，占2 5 2 1 3 9 1 0 ，硬脂酸占6 8 9 、亚油酸占7 8 0 1 1 3 2 ，亚 麻酸占0 5 2 1 0 9 。不饱和脂肪酸占总脂肪酸的百分比为3 7 2 2 6 1 4 4 。 亚油酸与亚麻酸占总脂肪酸含量的8 6 4 1 2 1 9 。南瓜种子蛋白质含量较高， 占种子干重的2 8 3 0 3 6 0 3 ：氨基酸含量较高，3 个种6 个品种的1 8 种氨基酸 中，谷氨酸含量均最高，占氨基酸总量的2 0 2 3 ；其次是精氨酸含量，占总 量的1 4 1 7 ；硫氨基酸( 甲硫氨酸和半胱氨酸) 含量最低，为7 1 5 9 8 3 。 8 种矿物质元素总量约占种子干重的2 0 8 ，由高至低依次是p 、m g 、k 、c a 、 f e 、z n 、n a 、m n 、c u ，含量分别为1 1 2 3 8 、6 5 5 8 7 、2 4 7 1 2 、0 2 3 1 6 、0 1 5 5 5 、 0 0 8 0 6 、0 0 6 3 7 、o 6 9 、0 0 1 3 1m g g ，s e 和c r 也有数微克。南瓜籽列入补铬食 品的行列，具有预防心血管疾病，促进胰岛素分泌、降低胆固醇，增强体质之功 效。籽用南瓜种子的主要5 种维生素含量由高至低顺序为：维生素e 、维生素b 。、 维生素b l 、维生素b 2 、维生素a ，6 个品种平均含量分别为9 2 9 、3 4 3 、6 0 、2 2 、 1 5 m g g 。 此外，南瓜花粉营养成分也很丰富。赵秀英等嘲研究了南瓜花粉的营养组成 成分。南瓜花粉主要是不饱和脂肪酸( 7 7 0 7 3 ) 组成。它们是1 个由阿拉伯糖葡萄 糖和半乳糖组成的杂多糖，以及葡萄糖、果糖及蔗糖等可溶性糖。 4 ( 二) 南瓜在医药领域中的应用 1 、降血糖、调血脂、降血压，防治动脉硬化 王琳例从1 9 8 5 年开始给部分患者服用南瓜，1 9 9 0 年开始在临床上重点观察3 0 例糖尿病患者，每天吃鲜南瓜5 g 以上，食用1 月后，病情均有不同程度的好转， 2 ，3 个月后疗效更为明显。部分患者尿糖、血糖恢复正常。陈智民等脚l 研究了南 瓜粉对人体的降血籍、降血压作用，结果表明：1 次服3 0g 南瓜粉，健康人和 n m d m 患者的7 0 9 0 血糖和收缩压降低，无低血糖和低血压症发生。 n m d m 患者服南瓜粉后饥饿感减轻，可协助饮食治疗。南瓜粉升胰岛的作用低 于降血糖作用，降收缩压作用高于降舒张压作用。研究表明陋2 7 l ，南瓜中的铬 是葡萄糖耐量因子，是辅助治疗糖尿病的有效成分 动物实验结果与人体实验一致。朱咸权等【勰j 通过动物实验观察几种食物和中 药的降血糖作用，结果表明，南瓜、麦麸及某些中药对正常大自鼠有明显的降血 糖作用。因此，糖尿病患者服用上述食物或中药可起到辅助助治疗的作用。熊学 敏等1 2 9 l 用南瓜多糖研究了四氧嘧啶糖尿病大鼠的降糖作用，治疗2 1d 后，模型 组血糖仍处很高水平，用药3 组血糖下降明显，与模型组相比差异有显著性。孔 庆胜1 3 0 j 研究了南瓜多糖对正常及糖尿病模型小鼠血脂的影响。南瓜多糖水溶液 2 0 0 、5 0 0m g k g 腹腔注入正常及糖尿病模型小鼠后，两者总胆固醇、低密度脂蛋 白下降，高密度脂蛋白增加。熊学敏等1 3 1 】对南瓜多糖有效部份进行提取、分离并 进行降糖作用的研究。将该多糖予以四氧嘧啶糖尿病造模大鼠( 3 - - s s k b ) ，连续 2 1d 后测定其空腹血糖的变化，以中药消渴丸作为阳性对照组，结果显示该南瓜 多糖具有明显降低四氧嘧啶糖尿病大自鼠血糖的作用，且效果优于消渴丸对照 组。张之佳等1 3 2 i 用超细南瓜粉喂饲实验性糖尿病家兔9d 后指标接近正常，与阴 性组的差异有显著性，机械精磨南瓜粉作用较缓慢，喂饲1 5d 后出现疗效。复方 超细南瓜粉对实验性糖尿病家兔的血糖( 代表取血瞬间) 和尿糖( 代表取尿当天) 作 用最好，喂饲6d 后基本恢复正常且与阴性对照组比较差异显著。各实验组的血 清总服固醇和血清( 浆) 甘油三脂在造模后第5 天达到最高值，超细粉及其复方在 继续喂饲4d 后疗效显著，机械精磨组则需7 d 出现疗效，表明超细粉及其复方具 有很好的降血脂、防治动脉硬化的作用 5 2 、驱蛔，治疗绦虫病 南瓜籽是古今都认为的有效驱虫剂。其有效成分是南瓜籽氨酸，可以驱除绦 虫、蛲虫、蛔虫等多种寄生虫，堪为驱虫的“爽口良药”，它驱虫的特点是无毒性， 不产生任何副作用，很适合老人与儿童寄生虫病和腹痛胀满等症。冯兰州【3 3 】研究 了南瓜子合并治疗绦虫的机理，在3 7 4 c 下通过猪带绦虫和牛带绦虫体外药物试 验，3 0 的槟榔煎液主要作用于绦虫前段，包括头节，活性成分是槟榔碱：丽 3 0 南瓜子水煎液或水提物则作用于绦虫中、后段节片，发生瘫痪作用，对头节 及未成熟节片无此作用。南瓜子活性成分是南氨酸，存在于非脂肪部分，水溶液 的抗热性强，用火煎煮不受影响。若将绦虫放在3 0 槟榔与3 0 南瓜籽混合液中， 约1 0m i n 后，全虫瘫痪，但将虫体取出放生理盐水液中1 5m i l l ，又恢复原有活动 力；二药合用取长补短，可发挥最大药效。文献报道，南瓜生吃可以驱蛔，成人 每次5 0 0 9 ，几童2 5 0 9 ，2 h 后再服泻剂，连照2 d ，试治l o 例，6 例驱出蛔虫最多 的达百余条。还有报道，用南瓜子煎服或炒熟吃儿童一般每次用5 0 1 0 0g ，于 早晨空腹时服。观察了5 6 例，5 1 例排出虫体，复查4 8 例，3 3 例转阴。文献报道， 临床试用南瓜子仁治疗血吸虫病具有一定的疗效，治后复查大便，部分患者转为 阴性，对急性病例尤有良好的退热作用。疗程结束后，部分病例的肝脾肿大、血 象、肝功能、心电图等均有不回程度的改善。还有报道，治晚期血吸虫腹水，以 带柄的南瓜蒂置于瓦上焙焦存性，研磨吞服，每次约0 5g ，每e 1 3 次连服2 3 周，服药期间忌盐，注意休息及补充营养。观察3 4 例，4 例药后尿量显著增加， 腹水逐渐消失；2 2 例腹围有所缩小，体重减轻，但尿量增加不显，腹水消失迟缓， 2 8 例无效。蒋次鹏l 蚓综述南瓜子与槟榔二药合用治疗猪带绦虫病和牛带绦虫病， 驱虫率均为1 0 0 ，无1 例失败。通过临床和实验研究，充分肯定其疗效，一直沿 用至今，不失为我国中医药的特效药方。 3 、治疗前列腺疾病 南瓜籽仁粉剂对长期膀胱刺激症患者的临床疗效及对尿流动力学的影响，表 明该制剂能明显改善各种原因所致的尿频、尿急等症状，提高膀胱顺应性，增加 膀胱初感容量，但对尿流串检查各项参数影响不大。南瓜子制剂可用于各种原因 所致的膀胱刺激征的对症治疗。南瓜籽油中含有一种可称为雄激素的活性生物触 媒剂成分，能够消除前列腺的初期肿胀，调整膀胱及尿道功能，缓解前列腺增生 症状等，对泌尿系及前列腺增生具有良好的治疗和预防作用。特别是南瓜籽油配 合棕榈的提取物用于治疗良性前列腺增生具有很好的疗效。 4 、对胃肠溃疡病有一定的食疗作用 南瓜含有丰富的果胶，可保护胃肠道不受粗糙食物刺激，促进溃疡愈合。南 瓜粥有抑制胃酸分泌过多的功效，因而溃疡病患者食用南瓜粥尤为适宜。目前， 俄罗斯营养学家已将南瓜列为胃与十二指肠溃疡患者食谱中必不可少的内容 5 、具有一定的抗癌及升高血浆白细胞、淋巴细胞的作用 徐国华等i 明以小鼠s 1 8 0 、艾氏腹水癌为动物模型，通过灌胃给予南瓜多糖， 按1 0m 咖l 每天o 4m l ，连续给药7 天，第8 天处死动物。结果表明，南瓜多糖对 s 1 8 0 、艾氏腹水癌的抑癯率分别为3 7 3 和3 3 3 ，胸腺增重率为8 3 对自 细胞及淋巴细胞数的影响，南瓜多糖组明显高于安瘤乳组。对红细胞、血小板计 数及血浆白蛋白水平均无显著影响。南瓜多糖组血浆s o d 活性升高，m o 含- 量 有不同程度的降低，但无显著差异，红细胞免疫吸附肿瘤细胞能力增强。 6 、抗过敏 南瓜子氨酸是从葫芦科中找到的一种水溶性非蛋白氨基酸、其化学名称为3 氨3 羧基毗咯烷酸。以往用它作为驱虫剂。不久前科研工作者发现它还有可抑制 组氨酸脱羧酶活性，从而降低血清和组织中组胺浓度的作用。组胺是变态( 过敏) 反应的介质，用南瓜子氨酸作为抗过敏、减轻和治疗变态反应是一种最简便且宝奉 全的方法。南瓜子氨酸适用于天然过敏源或滥用美容药物引起的各种过敏症，是 目前治疗变态反应所形成的过敏症最安全和最简便的方法。南瓜籽油可以有效地 预防湿疹和抗过敏作用。 7 、减少胆石的发生 南瓜中含有较高含量的膳食纤维，膳食纤维能吸附胆汁酸、胆固醇变异原的 有机分子，食用膳食纤维后，能显著抑制总胆固醇浓度升高。膳食纤维还能降低 胆酸及其盐类的合成与吸收，从而阻碍中性脂肪和胆固醇再吸收，限制胆酸肝肠 循环，进而加快了脂肪物的排泄，因而可预防胆石症1 3 6 1 。 8 、其它功能特性 南瓜中含有丰富的维生素e j i 邗胡萝卜素。维生素e 具有很强的抗氧化作用， 能有效地保护肌体免受一些氧自由基和过氧化物的损害，并可能具有一定的抗衰 7 老作用。口胡萝h 素在肌体内能转变为人体具有重要生理作用的维生素a ，维生 素a 对上皮细胞的正常生长和分化、维持正常视觉、促进骨骼发育及肌体抗癌防 癌等方面具有重要生理作用网。 第二节南瓜化学成分的研究现状及意义 一、南瓜化学成分研究的现状 在崇尚回归自然的理念下，从天然产物中提取分离的有效成分广泛应用于医 药，保健食品，食品添加籍以及化妆品等行业，深受消费者亲昧，具有广阔的发 展前景。随着科学的发展及新技术新方法的应用，从天然产物中提取分离有效成 分的研究与开发获得了前所未有的发展，在世界范围内掀起了从天然产物中提取 分离有效成分懿热潮。我国南瓜资源丰富，南瓜的药理活性为人们历共知，然丽 对于南瓜中天然产物的分离研究较为肤浅，鉴定的化合物主要有； 1 、卢谷甾醇 2 、豆甾烯醇 图1 - 2 争谷甾醇的化学结构式 f i g u r e1 - 2t h es t r u c t u r e0 f ，一s i t o s t e r o l 图1 - 3 豆甾烯醇的化学结构式 f i g u r e1 - 3t h e s t r u c t u r eo fs t i g m a s t e r o l 3 、大豆脑苷 4 ，蔷薇酸 5 、夕一胡萝卜苷 图1 _ 4 大豆脑苷的化学结构式 f i s u r e1 4t k 蛐船o fs o y a - c e r e b r o s i d e 图1 - 5 蔷薇酸的分子结构 f i g1 - 5t h es t r u c t u r eo fe u s c a p h ca c i d 图1 6 卢胡萝h 苷的化学结构式 f i g u r e1 - 6t h e 甜n l c h i r eo f f l - d a u c o s t e r o l 二、南瓜化学成分研究的意义 南瓜在我国种植面积广、品种多、资源丰富，是一种亟待开发的理想的天然 保健食品资源。我国南瓜总产量高达1 8 0 万吨，约占世界总产量的3 0 左右。目 9 前人们种植南瓜主要是为了取得南瓜籽，仅有不到1 0 的南瓜果肉用于食用和食 品加工，近9 0 的果肉因无法外运销售与加工只好任其腐烂，造成食品资源的极 大浪费，非常可惜 3 8 1 。尽管南瓜的诸多营养保健功能早已为人们所熟知，但近年 来关于南瓜的研究主要在南瓜多糖上【剪郴j ，有关活性成分的确切分子结构少见报 道。 随着人们对营养健康要求的不断提高，人们对具有保健功能的食品或药品不 再盲目，丽是要求知道是何种有效成分起主导作用或者起协同作用。因此，南瓜 作为一种极具开发潜力的资源，研究其中的化学成分具有很大的现实意义。 第三节本课题的研究思路 本研究是中德科学基金 i s o l a t i o n ，s t r u c t u r ee l u c i d a t i o n ，a n db i o l o g i c a l s c r e e n i n go f b i o a c t i v en a t u r a l p r o d u c t s f r o ms e l e c t e d 帮a d i t i o n a lv e g e t a b l e si nc h i n a ” 的一部分，该研究总的目标是苦瓜、冬瓜、丝瓜、南瓜中的生物活性物质的筛选 与结构鉴定。本研究总的目标是分离南瓜中的化学成分，并对获得的单体进行结 构鉴定。 1 0 第二章实验部分 第一节南瓜提取物的制备 一、实验材料 浙江淳安千岛湖天鹰绿色食品有限公司精制冻干南瓜粉1 0k g 。 二、实验仪器 旋转蒸发仪：r b 5 2 型旋转蒸发仪( 上海博通) 。 真空泵：s h 乙d 循环水式真空泵( 河南巩义市英峪豫华仪器厂) 。 冷凝装置：d i j b - 系列型低温冷却液循环泵( 郑州长城科工贸有限公司) 。 冷冻干燥机：f 弘l 冷冻干燥机( 北京博医康技术公司) 三、试剂 氯仿( a r ) ，甲醇( a r ) 、乙酸乙酯( a r ) ，正丁醇o 气r ) 、乙醇( a r ) 、9 5 乙醇等， 购自华东医药股份有限公司。 四、实验方法 将南瓜粉1 0 k g 用9 5 乙醇常温浸提两次，每次用乙醇5 0 l 浸提钙小时， 并搅拌数次。提取液减压浓缩至无醇味后，浓缩物分散于1 0l 蒸馏水中，用等 体积德氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，依次萃取两次，萃取液浓缩回收溶剂。浓 缩物冷冻干燥。 五、结果与讨论 1 0 硌南瓜粉通过图2 - 1 的流程提取，得氯仿萃取物( c 宦) 1 3 0g 、乙酸乙酯 萃取物5 0g 、正丁醇萃取物7 0g 。氯仿、乙酸乙酯、正丁醇为极性低、 极性中等、极性较强的试剂，依次萃取可得到极性低、极性中等、极性较强的南 瓜提取物，便于迸一步的分离纯化。 1 l 南瓜粉1 0 蚝 j r9 珊乙醇提取 乙醇提取物 厂监气 氯仿萃取物 产j 气 乙酸乙酯萃取物水相 厂气 正丁醇萃取物水相 图2 - 1 南瓜化学成分提取流程图 f i g u r e 2 - 1 e x t r a c t i o n p r o f i l e o f p u m p k i n w i t hd i f f e r e n t p o l a r i t ys o l v e n t s 第二节氯仿萃取物( c e ) 中化学成分的分离 一、实验材料 氯仿萃取物( c e ) ，上一节提取所得。 薄层层析色谱：s i l i c ag e l6 0f 2 5 4 ( m e r c k 德国) 。 二、实验仪器 玻璃色谱柱1 5 0 锄x 1 0 锄，5 0 c m x 3 锄，2 0 c l n x2 c m ，1 0 c i n x l c m 。 部分收集器：b s z 1 0 0 自动部分收集器( 上海沪西分析仪器厂) b i i c h if r a c t i o nc o l l e t i o n b - 6 8 4 f 德国b i i c h i ) 。 旋转蒸发仪：r e 5 2 型旋转蒸发仪( 上海博通) 。 真空泵：s h z - d 循环水式真空泵( 河南巩义市英峪豫华仪器厂) 。 冷凝装置：d l s b 系列型低温冷却液循环泵( 郑州长城科工贸有限公司) 。 冷冻干燥机：f d 1 冷冻干燥机( 北京博医康技术公司) 。 三、试剂 氯仿( a r ) ，甲醇( a r ) 等，购自华东医药股份有限公司。 四、实验方法 将2 5 堍l o o 2 0 0 1 b 的硅胶缓慢连续不问断地填入半径为1 5 0c i i i 长，直径为 1 0c l n 的玻璃柱中，边填加边用软木塞轻轻敲打柱的两侧，使填料压实。用氯仿 洗脱硅胶柱大约3 个柱体积，用以平衡色谱柱。将氯仿浸膏1 3 0g 溶解于氯仿甲醇 中，与2 5 0g1 0 0 2 0 0 目硅胶混合拌样，拌样干燥后，用研钵研磨成粉末状。将 得到的拌样粉末加到柱的顶层，并在拌样上平面铺一层硅胶及一块脱脂棉，用以 保护样品平面的平整。然后用氯仿甲醇溶剂体系进行梯度洗脱，溶剂梯度变化 为氯仿、氯仿：甲酵= 2 0 0 ：1 、氯仿：甲醇= 1 0 0 ：1 、氯仿：甲酵= 5 0 ：1 、氯仿：甲醇= 2 0 ：1 、 氯仿：甲醇= 1 0 ：1 、氯仿：甲醇= 9 ：1 、氯仿：甲醇= 8 ：2 氯仿：甲醇- 7 ：3 、甲醇，用1 1c 检 测洗脱液中的组分以确定梯度的变更。收集各溶剂体系的洗脱液，浓缩干燥。所 得的各组分，改进洗脱液的比侈，用较小的硅胶层析往反复柱层析，以获得较纯 的组分或化合物。 l 氯仿甲醇洗脱粗分 厂t _ 丁 了- l 反复桂层析l 反复柱层析l 曼摹挂层析l 反复桂层折 障晶藤品峰器品匪三 一 第三节大孔树脂粗分南瓜正丁醇萃取物( b e ) 一、实验材料 正丁醇萃取物( b e ) ，第一节提取所得。 薄层层析色谱：s i l i c ag e l6 0f 2 5 4 ( m e r c k 德国) 。 二、实验仪器 玻璃色谱柱：1 5 0 c l n x l 0 锄，5 0 c 1 1 1 x 3 c m ，2 0 锄x2 c m ，1 0 c l n x l c m 。 部分收集器：b s z - 1 0 0 自动部分收集器( 上海沪西分析仪器厂) b f i c h if r a c t i o nc o l l e t i o nb - 6 8 4 ( 德国b a c m ) 。 旋转蒸发仪：r e - 5 2 型旋转蒸发仪( 上海博通) 。 真空泵：s h 7 - - d 循环水式真空泵( 河南巩义市英峪豫华仪器厂) 。 冷凝装置：d l s b - 系列型低温冷却液循环泵( 郑州长城科工贸有限公司) 。 冷冻干燥机：f d 1 冷冻干燥机d e 京博医康技术公司) 。 三、试剂 氯仿( a r ) ，g ( a r ) 、乙酸乙酯等，购自华东医药股份有限公司。 四、实验方法 将5k gd 0 4 0 2 型大孔树脂填入半径为1 5 0c l n 长，直径为1 3 锄的玻璃柱 中，依次用0 2 n h c i 、蒸馏水、0 2 n n a o h 、蒸馏水各冲洗不少于3 倍柱体积， 然后用9 5 7 , 醇冲洗至流出液遇水不呈乳白色，最后用蒸馏水冲洗大孔树脂柱至 无醇味，平衡2 4 h 后上样。将南瓜正丁醇萃取物7 0g 用1 5 0g 已处理好的d 0 4 0 2 型大孔树脂混合拌样，然后将拌样加于大孔树脂柱上层，最后在其上端铺一层大 孔树脂及脱脂棉。依次用蒸馏水、2 0 7 , 醇、4 0 , 醇、6 0 7 , 醇、8 0 乙醇和 9 5 醇洗脱大孔树脂柱，用t l c 跟踪洗脱液中的组分，以确定洗脱液的更换。 各梯度洗脱液旋转蒸发，冷冻干燥。 五、结果与讨论 1 4 南瓜正丁醇萃取物7 0g ，经d 0 4 0 2 型大孔树脂柱色谱分离( 图2 3 ) ，得到 2 0 、4 0 、6 0 、8 0 和9 5 乙醇洗脱组分分别为f r 2 0 ( 1 1 3g ) 、f r 4 0 ( o 7 6g ) 、 f r 6 0 ( 6 4 1g ) 、f r 8 0 ( 3 2 7g ) 、f r 9 5 ( 1 6 6g ) 。各组分的t l c 结果如图2 4 ，其中f r 2 0 有2 个主斑点，f r 6 0 有3 个斑点，f r $ o 有6 个斑点，f r 9 5 组成较复杂。从t l c 谱图可以看出，d 0 4 0 2 大孔树脂洗脱能够对b e 的分离起到较好的作用。f r 6 0 量 较多、且组成较简单，便于进一步分离纯化。 0 0 4 0 2 型大孔树脂 预处理 上样 9 秘乙醇 醇 冼貌部分洗脱部分 洗脱部分 洗脱部分洗脱部分 洗脱部分 图2 - 3 南瓜正丁醇相提取物柱层析流程图 f i g u r e2 - 3i s o l a t i o no f e x t r a c tb eb ym a c r o p o r o u sa d s o r p t i o nr e s i nc o l u m nc h r o m a t o g r a p h y 图2 - 4 大孔树脂洗脱结果t l c 图 展开剂：氯仿甲醇水( 6 5 ：3 5 ：1 0 ) ，显色剂：1 0 硫酸乙醇溶液总：b e ，2 0 ：f r = 2 0 ， 4 0 ：f r 4 0 、：f r 6 0 、8 0 ：f r 8 0 , 9 5 ：f r9 0 f i g u r e2 - 4t h et l ca n a l y s i so f f i c ef r a c t i o n sf r o mm a c m p o r o ma d s o r p t i o nr e s i nc o l u m n c h r o m a t o g r a p h y d e v e l o p i n gs o l v e n ts y s t e m ：c h l o r o f o r m m e t h a n o - w a t e r ( 6 5 ：3 5 ：1 0 , v v ) , c o l o r i z i n gr e a g e n t ：1 0 s u l f u r i ca c i de t h a n o ls o l u t i o n 第四节h s c c c 分离f r 6 0 一、实验材料 f r 6 0 ，第三节分离所得。 薄层层析色谱：