（食品科学专业论文）鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的研究.pdf

缩略词表 h g l d h b u n l d c y l g y c o n a s r b c c r b c i g m h c s o t c a m t t t r i s 肝糖原 乳酸脱氢酶 血尿素氮 血乳酸 环磷酰胺 免疫球蛋白 刀豆蛋白 绵羊红细胞 鸡红细胞悬液 血清溶血素 半数溶血值 o 5 三氯乙酸 四甲基偶氮唑蓝 三羟甲基氨基甲烷 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科 学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和 做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的 法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的 规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论 文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东 农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文 和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：纽 导师签名：苔邃爱塑汐 e l 期：丞监：沙 山东农业大学硕士学位论文 摘要 鸡胚是受精鸡蛋经特殊孵化工艺，具有生命力的鸡蛋。鸡胚不仅具有 丰富营养物质，并且具有一定功能功效，对人体营养保健和防病治病有重 要作用，作为营养、进补、治病的佳品在民间早有食用的习惯。本文研究 鸡胚对正常小鼠免疫功能、抗疲劳作用的影响，确定其功效并为后续实验 确定有效、科学的灌胃剂量及最佳功效日龄。在此基础上，研究鸡胚人参 药对对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响，最终寻找出具有免疫 功能药对的最佳配伍比例和剂量。实验研究与结果如下， l 、将鸡胚采用冻干和熟制工艺分别制作了熟制鸡胚胚体混悬液 ( c c e s ) 和生制鸡胚胚体混悬液( f c e s ) ，灌胃小鼠3 0 天，通过测定小鼠脾 脏指数，血清溶血素活性，巨噬细胞吞噬率、吞噬指数以及小鼠力竭至死 游泳时间，探索鸡胚对小鼠免疫功能和抗疲劳能力的影响。试验结果表明， f c e s 、c c e s 均能提高小鼠脾脏指数，提高血清h c s o 值，增强小鼠腹腔 巨噬细胞吞噬功能，显著延长小鼠游泳时间。研究表明f c e s 、c c e s 均 能增强小鼠免疫功能与抗疲劳作用，但程度有所不同，以f c e s 抗疲劳效 果更佳。 2 、研究泰和乌骨鸡鸡胚对小鼠抗疲劳作用。2 6 0 只昆明种雄性小白 鼠预饲一周后，随机分为十三组，其中实验组为o 、6 、1 0 、1 4 日龄的鸡 胚分别设4 8g ( k g d ) 、2 4g ( k g d ) 、1 2 趴k g d ) 三个剂量组给小鼠灌 胃，对照组灌胃生理盐水，0 4 m l 只d ，连续3 0 d 后，测定小白鼠负重游 泳时间、肝糖原( h g ) 、乳酸脱氢酶( l d h ) 、血尿素氮( b u n ) 、血乳酸( l d ) 等指标。试验结果表明，鸡胚能够延长小鼠游泳时间，提高运动后l d h 活力及h g 的储备量：降低l d 和b u n 的含量，提高小鼠运动耐力。1 0 日龄鸡胚功效最为显著。泰和乌骨鸡鸡胚具有增强机体抗疲劳能力。 3 、研究鸡胚配伍人参对小鼠免疫功能的影响。小鼠腹腔注射环磷酰 胺( c y ) 复制免疫功能低下的动物模型，探索鸡胚配伍人参对小鼠脾脏 指数、淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬活力及溶血素生成的影响。结果表明， 与模型组比较人参组、鸡胚组、胚参配伍组均能改善小鼠注射环磷酰胺后 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 引起的体重减轻、精神状态差、活动迟缓、毛色暗、缺少光泽、饮食减少 等免疫功能低下症状；鸡胚配伍人参组提高了小鼠脾脏指数，明显增强淋 巴细胞的增殖能力，促进小鼠巨噬细胞吞噬活力和溶血素抗体生成。尤以 胚：参为5 ：6 的配伍组效果更为显著。鸡胚配伍人参具有增强小鼠非特异 性免疫的功能，并对体液、细胞免疫功能有促进作用，证实鸡胚配伍人参 是一种免疫调节物。 关键词：鸡胚，人参，抗疲劳，免疫功能，环磷酰胺 2 山东农业大学硕学位论文 a b s t r a c t t h ec h i c k e ne m b r y oi st h ev i t a l i t a le g gt h a ti sf e r t i l i z e di n s p e c i a l t e c h n i c s t h ec h i c k e n e ne m b r y on o to n l yh a st h er i c hn u t r i e n t s ，a n dt h e c h i c k e n e ne m b r y oa l s oh a st h ec e r t a i nf u n c t i o ne f f e c t i tp l a y sv i t a lr o l eo n n u t r i t i o nh e a l t hc a r e ，p r e v e n t i n ga n dt r e a t i n gd i s e a s e i ti se d i b l ei nt h ef o l k ， a n di su s u a l l yc o n s i d e r e da st h en u t r i t i o n ，h i ：g l lq u a l i t ys u p p l e m e n t sa n di l l n e s s t r e a t m e n t e f f e c to fc h i c k e ne m b r y oo ni m m u n o l o g i c a lf o u n c t i o na n da b i l i t i y o fa n t i f a t i g u ea n da n t i - a g i n go fm i c e ，d e t e r m i n et h ee f f i c i e n ta n ds c i e n t i f i c b e s ta m o u n to fl a v a g ea n dd a y ，t os t u d yt h ei m m u n o m o d u l a t o r ye f f e c to f c h i c k e n e ne m b r y oo nt h ei m m u n i t y d c f i c i c n c ym i c e ，a n df i n do u tt h eb e s t c o m b i n e dr a t i oa n dd o s a g e 1 t h em i c es t o m a c hw a si n f u s e df o r3 0d a y sw i t hc o o k e dc h i c k e n e m b r y os u s p e n s i o n ( c c e s ) a n df r e s hc h i c k e ne m b r y os u s p e n s i o n ( f c e s ) w h i c hw e r ep r o d u c e db yt h em e t h o d so fl y o p h i l i z a t i o na n dc o d d l i n g t o i n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fc h i c k e n e ne m b r y oo ni m m u n o l o g i c a lf u n c t i o na n d a n t i - f a t i g u eo fm i c e ，s o m et e s t sw e r ep e r f o r m e ds u c ha st h es p l e e ni n d i c e st e s t ， t h eh e m o l y s i na s s a yt e s t ，t h em a c r o p h a g ep h a g o c y t i cr a t ea n dp h a g o c y t i c i n d e xt e s t ，t h ea b i l i t i yo fa n t i - f a t i g u et e s ta n dt h ee x h a u s t e ds w i m m i n gt i m e t e s tc c t t h er e s u l ts h o w e dt h a tb o t hf e e sa n dc c e sc o u l ds i g n i f i c a n t l yr a i s e t h es p l e e ni n d e x ，i n c r e a s eh c s oi ns e r u m ，i m p r o v et h ep h a g o c y t o t i cf u n c t i o n o fp e r i t o n e a l m a c r o p h a g ea n dd e l a y t h e s w i m m i n gt i m e t h e r e s e a r c h i n d i c a t e dt h a tf c e sa n dc c e sc o u l ds i g n i f i c a n t l ye n h a n c et h ei m m u n i t y f u n c t i o na n da b i l i t i yo fa n t i f a t i g u eo fm i c e ，w i t ht h ed e g r e ev a r y i n g f c e si s t h eb e s ti nt o t a lr e s u l t so na n t i f a t i g u e 2 t os t u d yt h ea n t i f a t i g u ee f f e c to ft a i h es i l k yf o w le m b r y o t w o h u n d r e da n ds i x t yk u n m i n gm i c ew e r er a n d o m l yd i v i d e di n t ot h i r t e e ng r o u p s ， e x p e r i m e n tg r o u p s o fc h i c k e n e m b r y of o ro d ，6 d ，1 0 d ，1 4 d a td o e so f4 8 g ( k g 。d ) ，2 4 9 ( k g 。d ) ，1 2 9 ( k g 。d ) ，a n d t h e p h y s i o l o g i c a l s a l t w a t e r g r o u p a f t e r 3 0 d ，t h el o a d e d s w i m m i n gt i m ew a sr e c o r d e d ，h g ，s e r u ml d ha c t i v i t y , b u na n db l o o dl dw e r em e a s u r e d t h er e s u l ts h o w e dt h a tt a i h ec h i c k e n e m b r y oc o u l dd e l a yt h es w i m m i n gt i m e ，i n c r e a s eo fs e r u ml d ha c t i v i t ya n d l i v e rg l y c o g e n ，a n dd e c r e a s eo fs e r u mb u n a n dl di ns w i m m i n gm i c e 1 0 d a yc h i c k e ne m b r y ow a st h eb e s t t a i h es i l k yf o w le m b r y oc a np r o m o t et h e a b i l i t i e so fa n t i f a t i g u eo fm i c e 3 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 3 s t u d yo fe f f e c t so fc h i c k e ne m b r y oc o m b i n e dw i t hg i n s e n go n i m m u n o l o g i c a l f u n c t i o ni n m i c e o b s e r v i n gm a c r o p h a g ep h a g o c y t o s i s ， h e m o l y s i na n t i b o d ya n dc e l l p r o l i f e r a t i o no fl y m p h o c y t e s r e s u l t ：t h es h o w s t h a tc h i c k e ne m b r y og r o u p ，g i n s e n gg r o u p ，c h i c k e ne m b r y oc o m b i n e dw i t h g i n s e n gc o m b i n e dg r o u pa l lc a l li m p r o v et h el a c ko fa l e r t n e s sa n da c t i v i t i e s t h el a c ko fs h i n i n go ff u ra n dr e d u c e m e n to fd i e ta n dw e i g h t c l l i c k e ne m b r y o c o m b i n e dw i t hg i n s e n gr a i s e dt h es p l e e ni n d e x ，m a c r o p h a g ep h a g o c y t o s i s ， h e m o l y s i na n t i b o d y a n dc e l l p r o l i f e r a t i o no fbi nm i c es i g n i f i c a n t l yi n i m m u n o n o d e p r e e s e dm i c e i ti st h eb e s tc o m b i n e dr a t i oo f5t o6b e t w e e n c h i c k e ne m b r y oc o m b i n e dw i t hg i n s e n gt oi m p r o v et h ei m m u n i i yf u n c t i o n c h i c k e ne m b r y oc o m b i n e dw i t hg i n s e n gc a ns i g n i f i c a n t l ye n h a n c et h e n o n s p e c i f i c ，c e l l m e d i a t e d a n dh u m o m l i m m u n o l o g i c a l f u n c t i o n i n i m m u n o d e p r e s s e dm i c e i tw a ss u g g e s t e dt h a tc h i c k e ne m b r y oc o m b i n e dw i t h g i n s e n gm a yb ea ne f f e c t i v ei m m u n o m o d u l a t i n ga g e n t k e yw o r d s ：c h i c k e n ；e m b r y o ；g i n s e n g ；a n t i f a t i g u e ；i m m u n o l o g i c a l f u n c t i o n ；c y c l o p h o s p h a m 4 山东农业人学硕上学位论文 1 引言 1 1 鸡胚 1 1 1 概述 鸡胚是受精鸡蛋经特殊孵化工艺，使胚胎不断生长发育，具有生命力 的鸡蛋，民间称它为“活珠子 、“毛蛋”等。我国以及日本、韩国和东 南亚一些国家的民间素有吃毛蛋的习惯，据说其有强身健体、延年益寿、 防病治病的作用。对鸡胚中有效成分的生理及药理作用也有报道( 夏贵兰， 1 9 9 8 ) 。 传统医学认为，鸡蛋性平，生蛋偏凉，熟食偏温，具有养气血、补五 脏、养血息风、润肺止咳、清热解毒之功效，“喜蛋”其补益之功更为显著 ( 施奠邦，1 9 8 8 ) 。现在医学研究证明，鸡胚所含成分大体上可分为三类， 即营养成分、抗感染成分和生物活性物质( t a n o w s k a ，1 9 6 6 ) 。营养成分 有蛋白质、氨基酸、脂肪、维生素、矿物质等；抗感染成分有球蛋白、干 扰素( m o o r s ，2 0 0 2 ) 、胎儿蛋白、溶菌酶和磷酸二酯酶( 抗锥虫) ( h a i n g uc h o i ，1 9 7 4 ) 等；生物活性物质有免疫球蛋白、唾液酸( h a i n guc h o i l 9 7 4 ) 儿苯酚胺、胆碱和核糖核酸酶( f o s t e rj a ，1 9 8 9 ) 等。 1 1 2 鸡胚的营养成分 鸡胚生长发育不断吸收和利用鸡蛋中的营养物质，进行了一系列的物 质转化，其化学成分、营养价值发生了很大变化。为了解孵化期鸡胚中各 种营养成分的变化，周洵、吴成舜( 1 9 9 9 ) 等进行了鸡胚蛋营养效用研究。 李利东、袁建兴( 2 0 0 4 ) 等进行了不同孵化期的鸡胚营养和功效成分研究。 李利东、袁建兴、宓晓黎( 2 0 0 4 ) 等进行了鸡胚孵化期间氨基酸含量的测 定。周洵、李利东、马美湖等对孵化第0 d 至第2 1 d 之间不同孵化日龄的 鸡胚蛋进行蛋白质、氨基酸、脂肪、糖、无机盐、牛黄酸、维生素、免疫 球蛋白和溶菌酶等成份进行对比分析。鸡胚在孵化期间，营养及活性成分 变化如下： 1 1 2 1 蛋白质、氨基酸 蛋白质、总氨基酸都是生命有机体组织细胞基本组成成分，对生命活 动发挥着举足轻重的作用。禽蛋为高价蛋白质的来源( 李晓东，2 0 0 5 ) ， 5 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 蛋类蛋白质的含量仅低于豆类和肉类，而高于谷类、蔬菜、肉类、鱼类和 牛乳。鸡胚在孵化过程中蛋白质和总氨基酸在逐渐增加，从1 0 d 1 9 d 增加 较快，平均增9 1 1 以上。 鸡胚蛋中含有1 8 种氨基酸，其中含有人体必需的8 种氨基酸，也含有 婴儿所需的组氨酸和精氨酸。周洵( 1 9 9 9 ) 等人通过计算蛋白质化学成分 或氨基酸成分即鸡胚色氨酸含量相当于参考模式的比值，进行化学评价， 得出l l d 鸡胚蛋分数最高，其次是0 d 鸡蛋，1 9 d 鸡胚蛋分数最低。李利东、 ( 2 0 0 4 ) 研究发现鸡胚中必需氨基酸占总氨基酸含量接近4 0 ，t 与非必需 氨基酸的比值为0 6 1 0 ，符合国内外营养家研究证明的人体需要最佳模式 ( 郑建仙，1 9 9 9 ) 。 1 1 2 2 脂肪和胆固醇 脂肪是六大营养素之一，提供能量和必需脂肪酸，溶解脂溶性维生素， 提供人体生长发育所需的能量。但现代医学研究发现，高脂肪、高胆固醇 与冠心病、心脏病、肥胖症以及某些癌症之间有直接关系。美国卫生部建 议，在日常膳食中应降低脂肪的摄入量，特别是饱和脂肪酸与胆固醇的摄 入量，增加不饱和脂肪酸的摄入量，并建议胆固醇的每天摄取量应严格控 制在3 0 0 m g 以下。鸡胚孵化期间，脂肪逐渐下降，胆固醇也是呈现下降趋 势，其中脂肪含量降低差不多5 0 ，胆固醇降低约5 5 倍。李利东( 2 0 0 4 ) 等人研究发现，鸡胚中饱和脂肪酸逐渐减少，不饱和脂肪酸逐渐增加，其 中亚油酸增加近1 倍。 1 1 2 3 维生素 鸡胚蛋中维生素的种类很多，每种维生素都有重要的生理功能，其中 维生素a 、b 1 和e 的功能最显著( 施强，1 9 9 3 ) 。其中维生素e 是鸡胚蛋中 维生素变化较为明显的。维生素e 含量随孵化日龄的增加而成倍增长，孵 化末期的维生素e 是鸡蛋的百倍之多，其含量可与富含维生素e 的植物油 相比( m a t o b an ，1 9 9 9 ) 。维生素e 具有几十种功效。鸡胚中的维生素e 的大量增加，使其食疗作用更显著，可作为维生素e 食品资源开发利用。 李利东( 2 0 0 4 ) 等研究发现鸡胚中维生素a 增加近1 倍，维生素b 增加近3 倍。 1 1 2 4 矿物质 6 山东农业人学硕l 学位论文 吴成舜( 1 9 9 9 ) 等研究发现鸡胚在发育过程中，从蛋壳中吸收了大量 的无机盐，使蛋体的钙、磷、铁含量大增，而且从有机转化为无机，使人 体容易吸收利用，这对促进儿童骨骼生长发育、防止老年人骨质疏松都有 特效，也是孕产妇补钙补铁的好食品( 吴成舜，1 9 8 9 ) 。鸡胚孵化期间， 钙含量增长了5 倍，磷含量也相应增长了6 倍之多，且它们存在形式亦发生 变化，部分以骨钙和骨磷形式存在，生物试验其消化率明显提高，故鸡胚 及制品是补充钙、磷的良好食品。其它元素如钾、钠、镁、铁、铜和锰等 含量均比鸡蛋有所提高。 1 1 2 5 牛磺酸 随着鸡胚的生长发育，牛磺酸含量急剧上升，末期时含量是鸡蛋的 2 6 倍之多。有研究表明，牛磺酸具有广泛的生物学效应，是调节机体正 常生理功能的重要物质，是人体的重要营养素( 龚盛昭，2 0 0 0 ) 。牛磺酸 能提高机体l d h 活力以及肌糖原和肝糖原的含量，降低血乳酸含量，表， 现出对机体的抗疲劳作用( 张列祥，2 0 0 3 ：魏智清，2 0 0 4 ) ；牛磺酸有促 进机体免疫调节和促生长作用，日本将其添加到婴儿奶粉中收到良好的营 养效果。卫生部已批准其为具有免疫活性的物质。 1 1 2 6 卵磷脂 鸡胚在孵化过程中牛磺酸迅速增加，在1 0 1 9d 内急剧增加，几乎是 鲜蛋的2 0 倍。卵磷脂具有促进神经传导，提高大脑活力，延缓衰老( 沈小 京，1 9 9 4 ) ，耐缺氧、抗疲劳( 张祥沛，2 0 0 1 ) 以及免疫调节功能。卫生 部已批准其为具有免疫活性的物质。在保健食品方面，由于卵磷脂的改善 脂质代谢功能及改善神经功能，而被用作保健食品基料，作为心脑血管疾 病患者的保健品，增强记忆力的保健品。 1 1 2 7 免疫球蛋白( 1 9 y ) 随着鸡胚的生长发育，免疫球蛋白也在逐渐增加，在1 0 1 9d 内维持 在一个较高水平，比鲜鸡蛋增加5 0 。l g y 是重要生物活性物质，它具有 抗体活性、参与人体营养代谢和生理调节功能。它能排除人体毒素，防御 和杀死进入人体的细菌和病毒( 翟永龄，2 0 0 0 ；s o p t ak e d s h iy ，1 9 9 6 ) 。 目前在食品上主要用于婴儿食品和老年食品中，用以提高人体的免疫力， 增强对各种疾病的抵抗力。典型的例子就是生产仿母乳配制奶粉，通过添 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 加l g y ，使配制奶粉的免疫能力与母乳相近。同时还可将其作为食品添加 剂加于食品中。 1 1 2 8 溶菌酶 很多禽鸟的蛋清中含有高浓度溶菌酶，在胚胎期对机体起着重要的保 卫作用。鸡胚中溶菌酶活性在1 0 1 9d 内可比鲜鸡蛋提高近1 倍。溶菌酶在 体内对肽聚糖进行消化、降解产生的产物能够刺激多种抗原的抗体生成， 诱导对相同或不同抗原的延迟性过敏反应，增强机体抗细菌或病毒感染的 能力。溶菌酶是胃肠内乳酪蛋白形成微凝乳，提高婴儿消化吸收能力。目 前了解最清楚并投入商业化生产的是鸡蛋蛋清溶菌酶。在实际应用方面， 由于溶菌酶具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫等作用，现已广泛用于医疗 和食品添加剂。 1 1 3 鸡胚功效研究进展 1 1 3 1 免疫调节作用 在我国南方，吃鸡胚的习惯已有几百年的历史了，据说其可以强身健 体，提高人体免疫力。从现有研究报告看，在鸡胚内与机体免疫有关的物 质有干扰素、多肽、维生素a 、维生素b 、维生素c 、f e 、z n 、c u 等。吕 玉琴( 2 0 0 2 ) 等人研究发现鸡胚对小鼠免疫力的影响是显著的，它不仅能 激发免疫器官脾脏增大，而且可以使机体内的吞噬细胞数量增加，吞噬细 胞能力增强，可以使t 淋巴细胞明显增多。王倩( 2 0 0 3 ) 等人利用现代超 声和超滤技术制造的鸡胚口服液可增强机体的细胞免疫和体液免疫功能。 李引乾( 2 0 0 3 ) 等人还发现鸡胚的尿囊液能显著提高小鼠的免疫功能，对 小鼠抗应激能力也有一定提高。 1 1 3 2 抗衰老作用 鸡胚含有能清除自由基的微量元素c u 、z n 和维生素a 、e 、c 。除此 之外，还有丰富的活性蛋白和高活性的s o d 。郝志明( 2 0 0 2 ) 等人研究证 明了鸡胚可以降低机体过氧化值，具有显著的抗衰老作用。有研究表明， 鸡胚蛋还有美容功效，使人皮肤光滑有弹性，谭廷华( 1 9 9 5 ) 等人利用鸡 胚提取液配制的霜剂经试用，均感皮肤柔软光滑，有祛班、减轻面部皱纹 的功效。 1 1 3 3 抗疲劳作用 8 山东农业人学硕士学位论文 疲劳主要是机体能源消耗过量，血糖下降；乳酸和蛋白质分解物在体 内大量存留使机体酸碱平衡、离子分布、渗透压平衡等破坏引起，它是机 体代谢失衡的急性表现。郝志明( 2 0 0 2 ) 等人实验证明鸡胚尿囊液具有明 显延长小鼠游泳时间的作用，这可能由于鸡胚囊液含平衡液体量较多，且 含有葡萄糖、果糖以及离子有关，低分子糖可迅速补充能量，平衡离子液 体则可迅速调节渗透平衡以及酸碱平衡等。 1 1 3 4 改善胃肠功能的作用 鸡胚改善胃肠功能的作用主要表现在增进食欲和促进消化液分泌方 面。鸡胚蛋可以使受食者唾液淀粉酶活力提高，胃酸分泌量增加，对食欲 差、消化能力弱特别是缺乏胃酸的患者和老年人食用鸡胚蛋是有益的。周 询( 1 9 9 9 ) 等人研究推测胃肠功能是否正常与衰老有密切相关。老年人的 消化功能逐渐减弱，有消化系统功能障碍的中青年人也可因营养摄取不足 而出现早衰，甚至患各种疾病，但食用鸡胚的人出现精神饱满、体力充沛、 面色红润现象，正是鸡胚健脾补气的结果。 1 1 3 5 促生长作用 鸡胚蛋促生长效用有一定的化学基础和生物基础。鸡胚含有有利于细 胞生长繁殖的营养成分，其含量高于鸡蛋。有人曾报告：鸡胚有明显增加 实验动物和婴幼儿血红蛋白作用。并认为可能是鸡蛋中原被卵黄高磷蛋白 吸附的铁被释放出来的结果( j i a n gb ，2 0 0 0 ) 。a m o o r ( 1 9 7 1 ) 和 j a f o s t e r ( 1 9 8 9 ) 发现鸡胚尿囊液可刺激胚胎血管的发生，可促进成小鼠心 脏成纤维细胞的生长( y ez g ，1 9 9 6 ，吕玉琴2 0 0 2 ) 等人也试验证明了鸡 胚尿囊液对1 2 月龄的幼鼠也具有促生长作用，与对照组相比，体重提高 】2 】。 1 2 人参 人参，五加科植物a 参p a n a xg i n s e n gc a m e y 的根。味甘、微苦，性 温。归脾、肺经，是我国补益、强壮、养生佳品。传统中医学认为人参具 有大补元气、补脾益肺、生津止渴、安神益智，补气生血的作用。近代研 究证明人参有滋补、强壮、抗疲劳、扩血管甚至抗癌等药理和生理活性。 国家食品药品监督管理局( s f d a ) 已将人参批准为具有增强免疫力功能 9 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 的常用原料( 陈蓉，2 0 0 1 ) 。人参宜文火另煎，将参汁合入其它药汤内服。 1 2 1 人参的保健功能 人参能提高皮层下中枢的兴奋性、兴奋呼吸，使心跳加快，血管非条 件性反射增强；人参有显著的抗疲劳作用，可增强体力，提高思维活动能 力，改善睡眠和情绪，改善老年人大脑功能；人参通过清除体内已生成的 自由基和保护生物细胞膜免受损伤延缓细胞的衰老从而有抗机体衰老的 功能；人参皂甙有明显的抗应激作用，能增强机体的适应性和对各种有害 刺激的非特异性防御能力，能明显延长应激状态下动物的生存时间；人参 及其提取物含有蛋白质合成促进因子，能促进蛋白质、d n a 、r n a 的生 物合成，促进骨髓细胞的分裂，刺激骨髓造血功能；人参具有强心作用， 能增加心肌收缩力，减慢心率，增加心血输出量和冠脉血流量。人参可提 高机体的缺氧耐受力，改善心肌代谢，还具有扩血管作用。 人参具有调节人体免疫功能的作用。人参促进单核巨噬细胞系统功能 增强，通常认为，人参刺激小鼠巨噬细胞的吞噬功能是通过增加巨噬细胞 内的醋酸a 萘酚酯酶、酸性磷酸酶以及三磷酸腺苷酶的含量，从而提高 巨噬细胞的吞噬率、吞噬指数和细胞吞噬面积；人参促进t 细胞数量增加、 淋巴母细胞转化，给小鼠皮下注射人参皂苷1 0 m g d ，连续7 d ，可观察到 人参皂苷在小鼠体内对以c o i a 所刺激的淋巴细胞转化有显著的增强作 用；人参促进抗体产生，皂苷在其中起主要作用。人参皂苷既是一种免疫 增强剂，也是免疫调节剂。 1 2 2 人参的安全性 神农本草经记载人参“无毒”。现代研究表明，人参的急、慢性 毒性都很小。人参根粉给小鼠口服，l d 5 0 在5 9 & g 以_ l z 。小鼠皮下注射人 参浸膏的急性l d s o 为1 6 5 m g k g 。小鼠灌胃人参1 0 0 m g k g 、2 5 0 m g k g 、 5 0 0 m g k g ，连服1 个月的亚急性毒性观察未见异常。人参mj l 曼3 人参酐 1 0 0 m l ，仅感到轻度不安和兴奋。 1 3 药对研究的意义 药对又称对药，是由两味药按照配伍规律组合而成的新的用药单位。 之所以说“新的用药单位”，是因为药对和为主的单味药在主要功能方面 1 0 山东农业大学硕士学位论文 是保持一致的，所不同的是药对能辅助主药之不足，或监制主药之太过， 以加强主药的治疗作用，在使用上可作为一个新药源为方剂所采用。药对 与方剂也有区别，方剂主要体现治法，是在辩证立法的基础上，按照组方 原则，选择切合病情的药物，酌定必需的份量，配伍制剂而成。药对主要 是研究两药味相配之后其功能如何，功效多大，最终药对是为药方服务的。 中医的正邪相争理论与人体的免疫系统相关联，经多种疾病的临床观察，发 现正气虚衰病人的免疫功能受到不同程度的损害，多数呈低下趋势。环磷 酰胺致虚症，需补益正气，周询( 1 9 9 9 ) 等人研究食用鸡胚的老人出现精 神饱满、体力充沛、面色红润现象，正是鸡胚健脾补气的结果。在临床上 采用扶正固本，如补气、补血、补阴、补阳药物治疗后，可使虚症病人达 到调节和改善免疫机能的作用。经过大量的药理实验证明许多补益方剂确 有改善机体免疫机能的作用。那么在此基础上，采用免疫学指标，对确有 改善机体免疫机能的补益方剂进行配伍机制的研究，以探讨其组方的合理 性，为精简处方和临床用药及相关保健食品的开发提供科学的理论依据。 1 4 疲劳机制的研究进展 1 4 1 疲劳的定义 疲劳是机体内所发生的一系列复杂的生化变化过程。据国际运动生化 会议对疲劳的定义为：“机体的生理过程，不能将其机能保持在一特定水 平或各器官不能维持其特定的运动强度时，称为疲劳 。疲劳是防止机体 发生威胁生命的过度机能衰竭所产生的一种保护性反应，产生疲劳时即提 醒应降低工作强度或终止运动，以免机体损伤。 1 4 2 疲劳机制研究 疲劳发生的机制较复杂。虽然目前对疲劳的发生机制仍不十分清楚， 但大量的研究结果表明，不同强度、不同时间和不同运动形式产生疲劳的 机制是不同的，并提出了许多有关运动性疲劳产生机制的学说。 1 4 1 1 能源物质耗竭说 肌肉活动到疲劳时，能源物质含量下降而又得不到及时的补充，从而 引发了运动性疲劳的产生。 糖是人体最重要的能源物质，主要包括肌糖原、肝糖原和血糖，其中， 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 肌糖原是维持肌肉运动的重要能源，肝糖原分解是血糖维持稳定的重要保 障。在中等强度、长时间运动过程中，主要靠糖的有氧氧化供能，长时间 运动可使体内糖类物质大量消耗，血糖浓度下降。脑细胞对血糖浓度的变 化非常敏感，血糖含量下降，直接影响脑细胞的能量供应，造成大脑皮层 工作能力下降，身体疲劳。运动实践证实，长时间运动后血糖浓度下降， 伴随着机体出现疲劳症状，当补充糖类物质后，运动能力有所恢复。动物 实验发现，当狗运动至疲劳时，血糖含量下降，注射肾上腺素，提高机体 对肌组织的糖利用率，使血糖浓度升高，狗的运动能力明显恢复( 魏智清， 2 0 0 3 ) 。 1 4 1 2 代谢产物堆积说 该学说认为运动性疲劳主要是运动过程中某些代谢产物在体内大量 堆积而又不能及时清除所致。代谢产物的堆积将影响体内的正常代谢，造 成运动能力下降。目前认为，引起运动性疲劳的代谢产物主要包括乳酸和 氨。 乳酸是体内糖原( 或葡萄糖) 在缺氧条件下氧化分解的代谢产物，是目 前研究最多的引起运动性疲劳的物质之一。安静状态下，肌肉内的乳酸较 少，有氧运动时，体内一般不会生成过多的乳酸，只有在缺氧条件下，糖 原在进行无氧分解时，才会有大量的乳酸生成，而且随着运动强度的增加， 体内乳酸含量明显增多。乳酸在体内的堆积可通过多种途径造成运动机能 下降。乳酸解离后可生成氢离子，使肌肉p h 下降，抑制糖酵解关键酶， 从而抑制糖无氧氧化供能，减少运动时a t p 再合成，造成能量供应障碍。 乳酸解离后生成的h + 可与c a 2 + 竞争骨骼肌肌钙蛋白的结合位点，置换肌 钙蛋白中的c a “，使兴奋收缩脱偶联，阻碍肌肉收缩，导致收缩机能下 降。 在大强度或长时间运动时，无论是急性运动还是耐力运动，血浆和肌 肉中氨的浓度都会上升，同时脑中的氨浓度也会急剧增高( 田振军，2 0 0 0 ) 。 短时间大强度运动时骨骼肌中氨的生成主要来源于嘌呤核苷酸降解；长时 间中等强度运动时氨的主要来源是支链氨基酸( b c a a ) 在骨骼肌中的降 解。脑组织自身也可能产生氨，主要通过脑组织中的嘌呤核苷酸降解和一 些氨类的神经递质( 如5 羚色胺等) 脱氨基作用产生氨。氨也是目前研究较 山东农业人学硕士学位论文 多的引起运动性疲劳的物质之一，其毒性不仅对肌肉产生直接影响，而且 透过血脑屏障进入脑细胞中，影响了兴奋和抑制中枢神经系统的谷氨酸以 及y 一氨基丁酸两种神经介质的动态平衡，使中枢神经的功能发生障碍。 当血氨上升至一定程度时，增加磷酸果糖激酶的活性，提高糖酵解的速率： 抑制丙酮酸脱氢酶系的活性，使糖的有氧氧化速率降低；抑制糖原的异生 过程，造成乳酸和丙酮酸进一步堆积，加重机体能量不足状态。 1 4 1 3 自由基学说 、 自由基是指游离存在于外层轨道带有不成对电子的原子、离子或分子 等物质，可以与细胞膜上的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，生成对细 胞具有毒性作用的过氧化物( 1o o n ) 。自由基不仅可以直接攻击细胞膜对 细胞产生破坏作用，同时脂质过氧化物还可自发分解形成更多的自由基， 攻击其它双键，引起自由基连锁反应。丙二醛( m d a ) 是体内脂质过氧化代 谢产物，一般常用m d a 反映体内脂质过氧化代谢情况。在大强度运动过 程中，骨骼肌、心肌及血液中的m d a 含量增加，表明体内脂质过氧化加 强。氧自由基及其引起的脂质过氧化反应可以攻击细胞膜及线粒体等其他 生物膜，造成离子、能量代谢紊乱，从而导致运动性疲劳。关于运动引起 的氧自由基增多和脂质过氧化加强的机制可能是多因素的，运动中耗氧量 增加、能量代谢加强、抗氧化酶活性下降、胞浆c a 2 + 浓度升高都可以引起 氧自由基增多。 1 4 1 4 保护性抑制学说 自从巴甫洛夫建立条件反射学说以来，有关大脑皮层对机体运动机能 的调节作用一直受到人们的重视。按照巴甫洛夫学派的观点，无论是体力 疲劳，还是脑力疲劳，都是大脑皮层保护性抑制发展的结果。该理论认为， 大脑皮层在高强度工作或长时间工作过程中处于一种高度兴奋状态，脑细 胞工作强度较安静时明显增加，使大脑皮层细胞工作能力下降，为了防止 脑细胞的进一步耗损，大脑皮层由兴奋状态转为抑制，这种抑制即为保护 性抑制( 唐量，2 0 0 2 ) 。 1 4 1 5 内分泌调节机能下降学说 近年来，许多学者认为神经内分泌系统的兴奋和抑制之间的不平衡是 造成过度疲劳的主要原因( 薛彬，1 9 9 5 ) 。当运动应激超过机体的耐受能 1 3 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 力时，引起神经内分泌系统的功能及调节障碍，机体产生一系列功能性甚 至病理性改变，涉及到下丘脑垂体系统、交感肾上腺髓质系统和垂体肾上 腺皮质系统。主要表现为过度疲劳时运动员下丘脑释放促皮质素释放因子 减少，夜间尿儿茶酚胺排泄量下降，皮质醇辜酮比值升高。 1 5 中药免疫调节作用研究概述 中药对机体免疫功能的影响有两方面，一是直接作用于免疫系统而表 达免疫效应，二是通过免疫系统的影响调节神经及内分泌系统而发挥免疫 作用等。中药免疫增强剂增强动物免疫能力的作用主要体现在增强机体的 非特异性免疫功能和特异性免疫功能上。多种中药均有良好的免疫增强作 用，可增强机体免疫功能的各个环节。 1 5 1 改善免疫器官功能 中枢免疫器官骨髓、胸腺是免疫细胞的发源地，造血干细胞在此发育 分化为各类成熟的免疫细胞。( 李仪奎，1 9 9 5 ) 实验证明，人参、黄芪、 当归、阿胶、鹿茸、党参、淫羊茬等均能刺激骨髓造血。何首乌能明显延 缓性成熟后胸腺的退化萎缩，增强胸腺和脾脏重量，显著增强胸腺和脾脏 t 细胞增殖反应( 金岚，1 9 9 5 ) 。枸杞多糖能激活胸腺细胞的增殖能力并 能促进胸腺细胞向脾脏转移。实验显示长期口服可使老龄动物胸腺重量明 显增加，有利于增强免疫功能与延缓衰老( 丁燕，1 9 9 4 ) 。具有滋阴补阳、 补益气血、滋补肝肾、益气健脾的中药如六味地黄汤、四君了汤、生脉散、 理中汤( 许冬青2 0 0 2 ) 等均可逆转环磷酰胺引起的骨髓及胸腺细胞增殖抑 制，使细胞增殖活性达正常水平或增高。 1 5 2 促进机体非特异性免疫功能 1 5 2 1 提高单核或中性粒细胞的吞噬功能 单核一巨噬细胞系统是机体防御功能的重要组分，具有强大的吞噬功 能，参与细胞免疫的体液免疫反应。由于单核巨噬细胞系统对肿瘤细胞有 杀伤作用，它是现代中草药免疫增强剂研究的热点。多种生物活性物质及 免疫调节等功能多种虚症如肺虚、脾虚、肾虚等皆可伴有单核细胞吞噬活 性降低。人参、党参、黄芪、白术、刺五加、当归、何首乌、菟丝子、冬 虫夏草等均有提高吞噬功能的作用。非补益类药如柴胡、鱼腥学、大青叶、 1 4 山东农业大学硕士学位论文 金银花、猪等、茯苓、丹参、桔梗等也能增强各类吞噬细胞的吞噬功能， 它们在祛邪的同时均对机体的免疫功能具有增强作用。 1 5 2 2 促进补体的产生 补体是血液中一组具有酶原活性的蛋白质系列，它能协同抗体杀死 病原微生物或协助、配合吞噬细胞杀灭病原微生物。补体含量或活性通常 可作为机体非特异性免疫功能的指标。有研究表明，三七提取物、人参二 醇甙对血清补体水平升高有促进作用( 但汉雄，2 0 0 3 ) 。 1 5 3 促进机体特异性免疫功能 1 5 3 1 促进淋巴细胞转化功能 部分中药能促进淋巴细胞转化率、提高细胞免疫能力。淋巴细胞转化 率高低反映了机体细胞免疫功能状态，中草药刺激t 淋巴细胞分化为免疫 母细胞，发挥细胞免疫效应，是中药防治疾病整体效应的重要组成部分。现 代医学研究显示，中医的正气虚损和现代医学的机体免疫功能减退，特别 是细胞免疫功能低下有着密切关系。目前已知很多中药具有增强细胞免疫 功能，例如人参、黄芪、山药、黄芩、黄连、金银花等。白术及葛根等能 促进c o n a 诱导的t 细胞的活化增殖反应。 1 5 3 2 促进体液免疫功能 b 淋巴细胞经抗原刺激后所产生的免疫球蛋白与相应抗原特异性结 合所发生的反应为体液免疫。b 细胞在t 细胞辅助下受抗原刺激后增殖分 化成浆细胞，浆细胞可产生大量的特异性抗体，分布到血浆、淋巴液和组 织液等体液中。很多补益类药如人参、当归、淫羊藿多糖、菟丝子黄酮、 刺五加等及清热解毒药金银花、侧柏叶等都具有促进抗体生成的作用。柴 胡多糖可通过诱导p t k 的磷酸化，p l c 和p k c 的启动，膜转移，促进各细 胞周期调节蛋白及激酶的产生，从而诱导b 细胞的增殖成熟。 1 6 研究的目的及意义 禽蛋是天然食品之一，为人体提供极为均衡的蛋白质、脂肪、矿物质、 维生素及中等的热量。此外，蛋还含大量的免疫球蛋白、溶菌酶、卵磷脂 等具有保健及药用价值的物质。禽蛋及其制品除本身是重要的食品外，也 是食品工业的中药原料。它不仅能改善食品的机构及食品的风味，也能提 鸡胚及其人参配伍免疫调节与抗疲劳作用的实验研究 高食品的营养价值。近年来，随着科学技术的发展，国外纷纷集中力量开 发新型的蛋制品，以利用禽蛋资源获得更高的经济效益，开发的蛋制品达 6 0 多种。如丹麦研制的发酵蛋白粉、速溶蛋粉，日本的加碘蛋，美国的浓 缩蛋液、鱼油蛋等。目前，国际市场在鲜蛋销售呈下降趋势的情况下，蛋 制品消费却在持续增加。这种趋势提醒人们，蛋制品的深加工前景十分广 阔，国际市场对深加工的蛋制品将可能形成一个需求热潮。 我国虽有丰富的蛋品资源，但蛋品业加工水平却与巨大的禽蛋产量极 不相称。目前，我国蛋品加工转化程度仅为0 2 6 ，低于发达国家的1 5 4 0 的水平( 杨再，2 0 0 6 ) 。如何提高我国蛋品业科技水平，缩短与先进国家 的差距，让我国蛋品产业健康有序地发展，已经成为一个亟待解决的问题。 只有依靠科技解决蛋品加工业发展的瓶颈问题，开发出适