（应用化学专业论文）七种抗氧化剂单一抗氧化活性及其协同作用的研究.pdf

摘要 魄3 9 7 6 2 在综述国内外有关抗氧化剂研究的基础上，选用两种方法一d p p h 法 及t e a r s 法测定了七种常见抗氧化剂一b h t 、t b h q 、v c 、v e 、t p 、柠檬酸 及植酸的单一抗氧化活性及它们组合的复合抗氧化剂的抗氧化活性。在综 合运用加和法与直接比较法分析复合抗氧化剂组分间的协同作用的基础 上，在国内首次利用响应曲面法分析并讨论了单一组分及协同作用对复合 抗氧化剂抗氧化活性的影响。 d p p h 法及t b a r s 法对七种常见抗氧化剂单一抗氧化活性的研究。 1 d p p h 法表明，抗氧化剂清除自由基能力的大小顺序为t b h q t p v c v e b h t 柠檬酸 植酸。抗氧化活性大小与抗氧化剂分子中酚羟基 数目及新生成自由基的稳定性呈正相关 2 t b a r s 法表明，抗氧化剂抑制亚油酸脂质过氧化能力的大小顺序为b h t v e t b h q t p 柠檬酸，在试验浓度范围内植酸与v c 促氧化。抗氧 化活性大小与抗氧化剂在体系中的分散程度、分子中有效酚羟基数目、 新生成自由基的稳定性及螫合金属离子的能力呈正相关。 3 两种方法中酚型抗氧化剂的活性均大于金属离子螯合剂。这是由于它 们各自的抗氧化机理不同所致。 4 抗氧化剂的活性与其测定体系密切相关，体系不同，结果不同。 二加和法、直接比较法及响应曲面法对复合抗氧化剂组分间协同作用的 研究。 一、 1 响心| | | | i f i i 法甜到n 勺等商线h 为复合抗氧化荆纰分及配比的选择摊供r 依 j ：l i 。 2 清除d p p i i 试验中，9 利组合t b q + v e 、t b i i q + b i i t 、t b i i q + t p 、7 f b i i o + ! c i 酸、v e + t p 、v e + b i t 、v e 4 柠檬酸、v e 叶直酸及t p + 植酸的组分问表现出 胁_ 司抗氧化作用。 3 抑制j i e 汕酸脂质过氧化试验中，3 利r 组合1 、b i t q + v e 、v e + 柠檬酸及i b i i q _ i 柠檬酸的纽分问表现山协同抗氧化作用。、 4 训司作用的研究亦与测定休系密切相关，休系不同，结果不同。， 关键词：抗氧化剂，抗氧化活性 硫代巴比妥酸反应物， 协同作用，二苯代苫昧肼基自由基， 响应曲面法 s t u d y i n go ni n d i v i d u a la n t i o x i d a n t a c t i v i t i e sa n d s y n e r g i s t i c e f f e c t sf o rs e v e na n t i o x i d a n t s a b s t r a c t o nt h eb a s eo f r e v i e w i n g r e s e a r c ho f a n t i o x i d a n t s ，w e f i r s t e v a l u a t e dt h ei n d i v i d u a ia n dt h ec o m b i n e da n t i o x i d a n ta c t i v i t i e sf o r s e v e nc o m m o n l yu s e da n t i o x i d a n t s - - b h t , t b h q ，v c ，v e ，t p , c i t r i ca c i d a n dp h y t i ca c i db yt w om e t h o d s d p p h a n dt b a r s 、i na d d i t i o nw e a n a l y z e dt h es y n e r g i s t i ce f f e c t sb yt h e ew a y s - - a d d i t i o nm e t h o d o l o g y d i r e c tc o m p a r i s o nm e t h o d o l o g ya n dr e s p o n s es u r f a c em e t h o d o l o g y c o m p a r i n g t h ei n d i v i d u a la n t i o x i d a n ta c t i v i t i e sf o rs e v e na n t i o x i d a n t s w a sc a r r i e do u tb yd p p h m e t h o da n dt b a r sm e t h o d 1 s c a v e n g i n ge f f e c t so nf r e er a d i c a lo fs e v e na n t i o x i d a n t sb yd p p h m e t h o dw e r er a n k e d ：t b h q t p v c v e b h t c i t r i ca c i d p h y t i ca c i d a n t i o x i d a n ta c t i v i t yw a sp o s i t i v ec o r r e l a t e dt ot h en u m b e r o fp h e n o l i ch y d r o x y lg r o u p sa n dt h es t a b i l i t yo fn e w l yf o r m e df r e e r a d i c a l 2 i n h i b i t i o ne f f e c t so nl i n o l e i ca c i d l i p i dp r o o x i d a t i o n o fs e v e n a n t i o x i d a n t sb yt b a r sm e t h o dw e r er a n k e d ：b h t v e t b h q t p c i t r i ca c i d p h y t i ca c i da n dv ca c c e l e r a t e dt h el i p i dp r o o x i d a t i o ni n o u re x p e r i m e n t a n t i o x i d a n t a c t i v i t yw a sp o s i t i v ec o r r e l a t e dt on o to n l y t h en u m b e ro fp h e n o l i ch y d r o x y lg r o u p sa n dt h es t a b i l i t yo fn e w l y f o r m e df r e er a d i c a lb u ta l s ot h es o l u b i l i t ya n dt h ea b i l i t yo fc h e l a t i n g t h el i p i dp r o o x i d a t i v em e t a lt r a c e s 3t h ea n t i o x i d a n ta c t i v i t yo fp h e n o l i cc o m p o u n dw a s s t r o n g e rt h a nt h a t o fm e t a lc h e l a t o rw a so b t a i n e di nt w oa s s a y st h i sm a y b ec a u s e db y t h ed i f f e r e n la n t i o x i d a n im e c h a n i s m s 4t h e a c t i v i t yo r d e r sw e r e d i f f e r e n ti nt w oa s s a y s a s s e s s i n g t h e s y n e r g i s t i c e f f e c t sw a sc a r r i e d o u t b y a d d i t i o n m e t h o d o l o g y d i r e c tc o m p a r i s o nm e t h o d o l o g ya n dr e s p o n s es u r f a c e m e t h o d o l o g y 1t h ec o n t o u rm a pf r o mr s mw a s v e r yu s e f u lf o rp r e d i c t i o np u r p o s e so f m i x e da n t i o x i d a n t s 2 s y n e r g i s t i ce f f e c t so nn i n ek i n d so fm i x e da n t i o x i d a n t s - - t b h q + v e t b h q + b h t , t b h q + t p , t b h q + p h y t i ca c i d v e + b h t , v e + t p , v e + p h y t i ca c i d ，v e + c i t r i ca c i da n dt p + p h y t i ca c i dw e r eo b t a i n e db y d p p h m e t h o d ， 3 s y n e r g i s t i ce f f e c t so nt h r e ek i n d so fm i x e da n t i o x i d a n t s - - t b h q + v e v e + c i t r i ca c i da n dt b h q + c i t r i ca c i dw e r eo b t a i n e d b yt b a r s m e t h o d 4 s y n e r g i s t i ce f f e c to fm i x e da n t i o x i d a n tw a si n f l u e n c e db yt h ea s s a y s k e y w o r d s a n t i o x i d a n t ，a n t i o x i d a n ta c t i v i t y ，s y n e r g i s t i ce f f e c t ，d p p h t b a r s r s m h a o x i a o l i ( a p p l i e dc h e m i s t r y ) d i r e c t e db yp r o f e s s o r h a n gh u ， v i c ep r o f e s s o rx u s h e n h o n g 第一帝义献综述 1 1 概况 第一章文献综述 抗氧化剂的发展是从t 、i k 抗氧化f r j j i 始的，1 8 9 8 年，s i 。j i g e lo w 发 现少昂：的弧硫酸钠做还原剂可以保护对氧化敏感的材料，并最早提 | j 了 “抗氧化剂”的概念。此后工j 眦抗氧化剂迅速发展，广泛用f 防i f ：塑料、 橡胶、纤维粘合剂等加工时的降解，抑制燃料油粘度及酸度的增加等方而。 除此之外，抗氧化剂还大量应用于食，吊： 、l k 。油脂及含油脂食品在贮 存t 1 1 ，涌l 脂巾的不饱和脂肪酸极易被氧化生成氢过氧化物，进而分解为低 级脂肪酸，导致食品发生酸败，并产生有毒物质。因此，添：! j i l 抗氧化剂已 成为贮存食品的有效手段，它能够延缓甚至阻遏食帚山_ 丁空气的氧化作用 而引起的氯化腐败，并对维生素类和必需氨基酸等一些易氧化的营养成分 起保护作用”“。 近年来，随着分子，j i 物学及医学的发展，抗氧化剂在生物化学及医学 巾的应用也日趋广泛。自从1 9 5 6 年h a r m a n ”i 提出自山基学说以来，愈来愈 多的研究证实机体产生的自l _ | 基会导致各种病变如：动脉粥样硬化、心j 缸 管疾病及刖嘴f 等，而适当补充外源性抗氧化剂可改善这一状况”。事实上， 同前几t - 所有被证实对特定疾病有防治作用的营养组分都具有抗氧化活 悱，如v e ( 维生素e ) 、v c ( 维生素c ) 、d 胡萝h 素等，它们通过切断链 反应抑制脂质过氯化，从而保护机体免受自由基损伤”。 木论文只研究食品工, l k ：n ! k 物医药领域巾，3 泛使用的抗氧化剂。美国 食t 1 7 药物管i 皿局( f d a ) 明确规定，食品抗氧化剂是指延滞因氧化而引起的 劣变、酸败或变色的物质。早期应用的合成抗氧化剂如b i i t ( 二 恭羟螭 r f f 苯) 、b ( j 。摹羟綦茴香醚) 和t b i i q ( 叔丁綦对苯二酚) 等山于能有效的 雏章义献综述 抑制汕脂氧化，有：市场卜一直占主导地位。但近年束f l ：多试验表明合成抗 氧化剂有定的毒性和致痛作用“2 “”，天然抗氰剂的研究和应用逐渐为人 们所关汀：。 人t f j x q 抗氧化剂的研究工作主要集中在以下三个方而：( 1 ) 天然抗氧 化物质的筛选。1 9 3 5 年，m u s h 发现嵛物巾的抗氧化成分，并_ 丁次午叶1 清 了美同号利”。迄令为l l ，人们已经成功筛选了一系列具有较强抗氧化活 ，h i n j 物质，如v f 、7 f p ( 茶多酚一t e ap o ly p h e n o ls ) 等“”。但目前受资源、 提取方法及价格等闲素影响，天然抗氧化剂的商业性生产还不多。( 2 ) 抗 氧化剂构效关系的研究。不同结构类型的抗氰化剂的活性不同，即使同一 结构类型抗氧化剂其活性也会受到取代基数目及位胃的影响。翁新楚、赵 宅路等分别从实验及量了力学计算的角度揭示了结构对抗氧化活性的影 响。”。( 3 ) 抗氧化剂问协同作用的研究。与唯一抗氧化剂相比，复合抗 氧化剂凭借其高活性、低价位而倍受青睐，因此，协同作用的研究成了抗 氧化剂研究领域巾的新热点。人们现已对协同作用有了初步的认谚 ，对其 进行更深入的研究将为复合抗氧化剂组分及浓度的配比捉供理论依据，具 有潜在的应用前景。 1 2 自动氧化过程的机理 脂类化合物在外界条件如光、热、引发剂及变价金属离- 了等的作用下 会发生自动氧化反应，这属于自由基链式反应，其历程分为链引发、链增 长和链终i j 二三个典型阶段”“州。 链引发 在链引发阶段，丌始产生自由基。自i ：h 基的产生主要有两种可能的过 程，一种是盒属催化剂和脂类化合物直接反应，见式( 卜1 ) 。 第一章文献综述 另种是氯过氰化物的分解，氢过氧化物1 ，的0 0 键桐剥较弱，0 0 键均裂产，卜自綦。会属离了存在时，金属催化的氢过氧化物分解是自由 慕的主要来源。如铜、铁等金属离予无论处于低氧化态或高氧化态，都可 以催化氧过氰化物分解，见式( 1 2 ) 、( 1 3 ) 。 r o o i i j m “4 一r o + 0 i i 一+ m “ r 0 0 1 1 + m 。”- r 0 0 4 1 1 + + m “ 链增长 ( 1 2 ) ( 13 ) 脂类自ij j 罐( r 、r 0 0 ) 活性较高，在链增长阶段，可与其它脂肪 分了( r 1 1 ) 或基态的氧分子发生有效碰撞，产生新的自i ：h 基，式( 卜4 ) 至( 1 6 ) 反应依次往复循环。 r + r i i o r r + 1 0 。= r 0 0 r 0 0 + r l | r 0 0 i 链终止 ( 1 4 ) ( 1 5 ) ( 卜6 ) 随着反应的进行，自由基的数目增加，其相瓦问碰撞的频率大大增加。 两个自由基发生有效碰撞，结合生成惰性物质，如式( 1 7 ) 、( 1 8 ) ，最终 导致链反应终i f ：。 0 + 第一帝文献综述 r 0 0 4r # r o o r ( 18 ) r ：不饱利脂肪酸分子 r 0 0 1 1 ：脂质过氰化物 r ：脂肪自綦； r 0 0 ：脂质过氰化自由基 m ： i = 属 1 3 抗氧化作用的机理 有效抑制氰化足使用抗氰化剂之目的所存，山t 受自身结构及性质影 响，抗氯化剂发抨作用的途径是多样的，其作用机理可以概括为以下四 利一。 清除自由基 脂类化合物的氧化反应主要牵涉自由基的链反应，为了抑制氧化的进 行，除了利用包装隔绝空气和光线外，最有效的手段就是添加抗氧化剂。 抗氧化剂在此起清除自由基的作用，故被称为自由基终止剂。多数抗氧化 剂，包括目前常用的n i t 、r i i 、t b h q 、v e 、t p 等都是有效的自m 基终i 上= 剂，它们主要作为氮的给予休与脂类自由基反应，使自山基转变为非活性 的或较为稳定的化合物，从而干扰或延滞链反应中的链增陡步骤，达到抑 制氧化的目的”，如式( 1 9 ) 、( 1 1 0 ) 。 r o + i i r o l l + ( 1 9 ) r 0 0 一r 0 0 1 i + ( 11 0 ) 人t f ：抗氰化剂 a ：抗氰化剂供氢后自身形成的自由基 第一章文献综述 酚类化合物与脂类自山基反应后形成的自由基稳定。盹较高，原因是未 成剥的电子可以在苯环上离域分布”： 一0 一曲0 一曲0 因此，有效的自由基终止剂必须具备的条件为： ( 1 ) 能够迅速向脂类自由基提供氢原子。 ( 2 ) 新产生的自由基a 的稳定性要高于r 0 0 及r o 。 整合金属离子 y f ：多氧化过程是在余属离子的参与下进行的。会属离了存价态发生变 化过程中起传递电了的作用，可缩短链引发期的时间，从而加快了脂类化 合物氧化的速度。因此，除去会属离子剥抑制氧化反应显得卜分重要。 朽：檬酸、磷酸衍生物等能与金属形成惰性的0 一络合物，抑制了氯过 氧化物的分解，从而起到了抗氧化的目的”1 。据k a t h e r i n e l 等人报道， 植酸与聚磷酸钠可通过螯合会属离子起抑制氧化的作用”。 应指出的是金属离子螯合剂通过螯合引发链反应的物质抑制自山基 牛成，不能直接与自由基结合，从而起到的是问接抗氧化作用，因此单独 使用时的抗氧化效果往往不佳，故常常与其它抗氧化剂混合使用。 清除氧 此类抗氧化剂主要通过试剂木身的氧化还原反应来抑制氧化。如v c 旷由 第一带文献综述 由_ j 分了2 、3 位一卜存在两个相邻的烯醇式羟基，具有较强的还原性，可 以有效地还原汕脂巾的过氧化物，消耗 i 1 脂中的氧，从而抑制氧化反应的 发牛”7 。”1 。同样，弧硫酸及其盐类在食品叶f 易被氧化成磺酸及硫酸盐，因 t f i i i l 型n 抗氰化作刷。生物碱可以通过与0 ：碰撞获得能量，从而使1 0 ：失活 变为1 0 ：1 。 作用于与自由基有关的酶 抗氧化剂在休内可以抑制导致自由基产生的酶的活性，从而表现出抗 氧化作用。研究发现，槲皮素可抑制黄嘌呤氧化酶及细胞色素p - 4 5 0 的活 性”，h 草次酸山于能够抑制苯丙羟化酶而起到抗脂质过氧化作用”， 黄皮酰胺抑制谷胱甘肽过氧化酶活性“”，t f ) 能够有效抑制细胞巾n a d p i l 一 细胞色素还原酶及细胞色素p - 4 5 0 的活性”。 1 4 抗氧化剂的协同作用 某些化合物在纯净状态下活性较弱，在混合状态下表现出较强的抗氧 化作用，我们认为组分问存在正协同作用，通常简称为协同作用；若化合 物币一抗氧化活性较强，混合后活性反而减弱，则组分问存在负协同作用。 防同作用是抗氧化剂间的一种普遍现象，最典型的例予是v e 与v c 。1 9 6 2 年，t a p p e l ”率先丌展了她与忆问协同作用的研究，并提出了忙再生 了v f 的观点，随后这个结论也被p a k e r 及n i k i 等证实”7 。除此之外， 其它抗氧化剂问的协同作用i 旦有文献报道”7 。 t h 丁i 办同抗氰化的过程比较复杂，日前人们对其机理的了解还不十分 透彻，总结已有的研究工作，协同抗氧化方式主要有以f 三种。 帮一帝文献综述 再生抗氧化剂 有些抗氧剂如v c ，辅酶q 除了自身可商接作用于氰化过程外还可以 与高效抗氰化剂( t 要为v e ) 交换电予从而使v e 维持证常水平不断发挥 抗氰化作用。盘v e 与v c ，在抑制大豆磷脂的脂质体、鱼油、均相体系中 i 1 1 ：7 1 1 t 酸或弧油t i f ir f _ i 酯的脂质过氧化等试验中，人们发现在反应初期v e 的 浓度基木不变，而v c 的、农度有所下降，待v ( ：完全消耗后，v e 的浓度开始 f 降。i h 此人们推测v c 可将v e 自由基还原为v f ，从而提高溶液巾v e 的 订效浓度，j 曾强了抗氰化能力；同h 寸v c 还可将脂类化合物的氧过筑化物 分解成1 f 自 i 綦产物，故表现协同作用。 r o 。一r o 。o v e e h 7 、 7 、，r 另外，何东”“等用前线分予轨道理论对上述现象进行了理论解释。前 线反虑理论指，剥反应体系的稳定性及新化学键的生成起熏要作用的是 最高i 据轨道( i i o m o ) 一最低空轨道( l u m o ) 问的相可作用。v c 的i i o m o 轨道碳和氰原了的p z 轨道组成，而v e 自山基的l u m o 轨道也由p z 轨道 组成，1 两黹的能级差较小( 约为0 3 1 h a r e t r e e ) ，冈此v e 自山綦有可能 同v f ：反应而而牛。 阳】o z z 3 和k r in s k y ”观察到p 一胡萝h 素和v e 混合厉比译一的成分 对丁防i i ：癌变及抑制早期肿痛更有效。李兆陇”等发现b 一胡萝p 素在均 牛f 有机溶液巾可以有效地抑制哑汕酸的过氧化，而且与v e 合用时具有显 著的抗氰化胁同作用和相瓦保护t 作用， i h , # l 7 将这归冈于i b 一胡萝p 素的氧 化j “物视黄醇及b 一月萝p 素的降解醛( r c i i o ) 可以还原v | 闩幕使其而 小。 筇帝义献综述 o | | m e + r c h o 一v e + r c 另掘- l l tj 酋1 p 对v i j 及v c 都有保护作用”2 。在i l ia a i ) i i ( 2 ，2 l 偶 氮( 2t 脒錾丙烷) 二* i 酸盐) 引发的亚汕酸的自动氯化试验q ，利用氧 气吸收法研究7 r p 与v g 的抗氧化活性，结果表明t p 可以保护vf ，日可完 伞扣哺0v f , | ( j 消耗。 叫一r o o h 。) 9 5 0 ，松溪牛物化工厂 柠檬酸，a r 级，上海试剂一厂 第一章用d p p i i 法f i j 究甲一抗乍l 化刺的活性 棺酸，l ：化试剂，上海试剂厂 | ) ) r i i ，东京t 业株式会社 无水乙醇，固产a r 级 试验用水皆为。次重蒸水 7 2 2 型光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂。 2 1 2 试剂配制 v n 、b t 、t i ；i i o 、t l 及柠檬酸储液用无水乙醇配制；v c 与植酸储液用 ：次水配制，1 i 冰箱存放，用时逐级稀释。 d p p i i 用无水乙醇配成6 5 1 0 1 m o l 的储液，1 ：冰箱存放，用时稀 释为6 5 0s i i k ) | l 。 2 1 3 测试方法 按表21 样丁1 0 m l 比色管巾，充分混匀，3 0 m in 后测定其在5 17 n m 波k 处的吸光值a 。每个试样分别重复测定6 次，取甲均值按式2 1 计算 清除率。 表21d p p i i 法加样表 吸光值加样量 窄自a 。5 o m 6 5 x1 0 5 m o i ld p p i i 溶液+ i o m 配制试样的溶剂 试样a i 5 ，o r a l6 5 1 05 i n o l 1 d p p i 溶液+ 1 o m l 试样 清除牢1 ) ( ) = ( a 。一a j ) a 。1 0 0 ( 2i ) 2 2 结果与讨论 第二章h 】d p p i i 法研究1 1 ，l 一抗氰化荆的话卅 2 2 1t p 对d p p l l 的清除作用 7 r r 剥i ) p p i 的清除作用见表2 - 2 。 表2 - 21 p 列d p p l l 的清除作用 试样终浓度 吸光f 直清除率回归方程 名称c u g m lp 及t c 。 表2 2 结果表明，1 i ) 对d p p i i 有一定的清除作用，其t c 。，( 抑制率为 5 0 i j , j 的试样浓度) 为1 0 9 u g m l ：清除率随着r p 浓度的增加而升高且清 除牢与浓度闸存在。定的量效关系( r 2 = 0 9 9 8 5 ) 。 d p p i i 为稳定的大分予自山基，如1 3 所述，抗氧化剂清除自f t ：接时， 一方而要能提供氢，另一方面供氢后自身形成的自由基的稳定性要离。t p 分了巾龠有多个酚羟基，可以提供氢原予与d p p i i 结合，且羟基巾氧原了 的pl i 共轭效应使反应后自基稳定性增强，网此t p 对o p p i 具有清除 作用。 笙兰里婴旦! ! ：! ! ：鲨型塑竺垫塑些型塑堡丛 2 2 2t b i i q 对d p p i i 的清除作用 i q 列i ) p i ，1 1 的清除作用见表2 - 3 。 表23t b i i q 对d p p h 的清除作用 表23 结果表明，7 f b i i q 对d p p i i 有类j r - 1 t p 的清除作用。t b i i q 分 予i p 禽有两个酚羟基，可提供两个氢原予与d p p i i 结合，自身形成共振稳 定的醌，冈此t b i i q 对d 1 ) p i i 具有较强的清除作用。与t p 相比，t b i i q 的 1 c 。较小，说明清除闩f t j 基的能力r r b i l q t p ，原冈可能为，虽然二糟分了 f | 1 i i | j 含柏多个酚羟璀，但t p 的分于较大，对供氯造成了空问位阻。 2 2 3v e 对d p p i i 的清除作用 v e 刊d p i i | 的清除作刚见表2 - 4 。 第二帝用d p p i f 法研究甲一抗氘化剂的活t i ： 表2 4v r 划d p p t i 的消除作用 表2 - - 4 结果表明，v e 剥i ) p p i i 也有清除作用。v e 分了i ，虽然只有 个提供氡原了的酚羟基，但二氢吡哺环的存在使环巾的氧可以有效的与苯 环进行卜i i 共轭，稳定新f j 成的自由基，故v e 可以清除d p p l l 。但毕竟 只有一个酚羟撼，v f 列d p p l l 的清除作用小于t b i i q 及1 1 p 。 z 2 4 b l f f 对d p p l l 的清除作用 b i i t 刘d p p i i 的清除作用见表25 。 表2 - 5 结果表明，n i t 对d p p i t 也有清除作用。比较1 c 。，发现b l r r 剥i ) p p i i 有清1 缘1 7 q r l 小丁v l i 、t p 及t b i i i i q ，这可能是由n i t 分子巾的酚 羟荩数f 1 少n 供氧受到两个邻位叔丁基的空问位阻影响所致。 筇一章r 】d i m l1 1 洲、研究i ” 抗讯化剂的活竹 襄25 川t 对d p p i i 的清除作用 b i i t ( ) 4 0 9 00 0 1 0 3 5 7 00 0 l 03 0 6 0 0 0 2 02 6 l o0 0 1 02 2 2 0o o l 01 9 l _ - - 4 - 0 0 0 2 o 1 8 2 o 0 0 1 1 56 5 2 86 l 4 10 8 5 i 5 9 6 i6 l 7 11 5 y = o 1 2 9 6 _ _ 1 5 6 8 7 x00 0 6 7 x 2 r 2 = o9 9 9 7 i c m = 4 54 0 u g m 8 00 001 6 7 4 - 00 0 1 8 2 4 0 2 2 5 v c 对d p p t l 的清除作用 v c 剥d i ，r t l 的清除作用见表2 - 6 。 表2 - 6 v c 对d p p i i 的清除f i j 试样终浓度吸光值清除率 同归方程 名称c u g m a p 及i c 。 0 0 00 4 2 2 0 0 0 1 0 2 5 05 0 j 0 0 15 0 20 0 25 0 03 9 6 00 0 2 0 3 6 3 00 0 1 02 9 6 - - 00 0 1 0 2 2 9 0 0 0 2 017 1 00 ( 1 2 ( ) | j 6 00 0 1 6 1 6 1 39 8 2 9 8 6 4 5 7 3 5 9 4 8 7 2 6 0 y = 24 0 0 7 _ l3 79 3 3 4 x 一37 7 5 5 x ，= 0 9 9 4 2 i c m = i 6 5 u g m l 3 0 001 0 7 00 0 3 7 46 4 一一 m 0 m 舯 胁 n 第一常j 乃1 ) p i q l 法珂究巾抗钒化剂的活代 表2 6 结果表叫，v c 剥i ) | ) p 个酚羟堆，f | 具仃较强的还原性， 有明显的清除作用。v c 分予巾含有多 敞对i ) p p i i - 的清除作用较强。 2 2 6 柠檬酸与植酸对d p p i | 的清除作用 柠檬酸j 十f 【酸列i ) p i ，1 i 的清除作用见表2 7 。 表2 7朽：檬酸及植酸对d p p i i 的清除作用 表2 7 结果表明，朽檬酸与植酸对d p p i 也有清除作用。但其清除 率】届低于其它抗氰化剂，这主要是由于它们的抗氧化机理不同。柠檬酸 与植酸的主要作用是螯合金属离子，供氢能力较差：而其它抗氧化剂都为 酚型抗氰化剂，分子巾含有酚羟基，可以直接清除i ) p p i 。在实验最大 浓度为t c o u g m 1 叫，柠檬酸与植酸对d p p i i 清除率仍小于1 5 ，二者相比， 柠檬酸的抗氰化活。e f ：要稍高丁植酸。 第二章用d p p h 法研究啦抗氧化剂的活性 2 2 7 七种常见抗氧化剂清除d p p h 能力的比较 比较t b i i q 、t i ，、v c 、v e 及b i i t 的i c 。发现，t b i i q 的i c 。( 0 9 6 u g m 1 ) 最小，b i l l 、的f c 。( 4 5 4 0 u g m 1 ) 最大，抗氧化活性大小与i c 。的大小成反 比。柠檬酸与植酸在最大试验浓度下，清除率仍小于1 5 。 在02 0 0 u g m 浓度范围内，七种抗氧化剂的抗氧化| u i 线见图2 - 1 。 s q - 墼 烬 浓度c ( u o m 1 1 图2 l 七种抗氧化剂对b p p l l 的清除作用 浓度为2 0 0 u g m 时，f b i i q 、t p 、v c 、v e 、b i i t 、柠檬酸及植酸对d p p l l 的 清除率分别为8 2 4 0 、7 8 4 8 0 6 、5 9 4 8 、16 3 8 、6 3 6 、3 6 7 及2 8 4 。 综一1 2 所述，七种抗氧化剂清除d p p h 能力的大小顺序为：t b i i q t p v c v e b i i t 柠檬酸 植酸。 2 2 8 配制溶剂为5 0 乙醇时抗氧化剂对d p p i t 的清除作用 挑同作用试验1 i 孵溶试样与水溶试样混合时，为了解决溶剂问题，我 们将溶剂统为5 0 乙醇。在此，我们测定了配制溶剂为5 0 乙醇时单一 第一帝加d p p l l 法研究甲一抗钒化剂n 活忭 抗氰化剂刈i ) r 川的清除作用，试验结果见表2 - 8 至2 一l l 。 表28 溶剂为5 0 e , 醇时7 i l _ l l l q 及v c 对d p p i i 的清除作用 7 r 1 3 1 1 0 终浓度吸光值 清除率v c 终浓度吸光值清除率 c u g m lp c u g m l p 0o o o 1 1 6 o 0 0 10o o o 1 1 6 o o o i ( ) 2 5 05 0 o7 5 10 0 - 12 5 o3 5 6 00 0 1 1 43 6 o3 0 8 of ) o l 2 5 9 6 o2 6 0 0 0 0 j3 7 5 6 o2 1 1 _ 4 - 00 0 l 4 8 5 5 o17 0 o0 0 2 5 9 1 3 02 5 o 5 0 o7 5 1 0 0 1 2 5 03 9 i 00 0 l5 3 6 o 3 6 0 4 - 00 0 21 3 6 5 o3 3 0 00 0 12 0 7 3 o 2 2 4 00 0 2 2 9 0 2 0 2 7 7 00 0 13 34 1 15 0o1 3 l _ 4 - 0 o o l 6 85 11 5 0o2 2 6 _ + 0 0 0 1 4 56 1 表2 - 9 溶剂为5 0 乙醇时t p 及b 1 对d p p l l 的清除作用 一一 t p 终浓度吸光值 清除率 n i t 终浓度吸光值清除 牢 c u g m lp c u g m l a p o0 0 02 5 05 0 07 5 】0 0 1 2 5 04 1 6 4 - 00 0 1 0 0 00 4 1 6 o0 0 1 0 ： 7 7 0 0 0 1 03 4 i 0 0 0 i 9 3 l0 2 5 1 81 4 0 5 0 03 0 4 00 0 i 2 69 607 5 02 6 3 0 0 0 】 3 67 7 0 2 2 8 00 0 14 51 1 0 0 2 5 04 0 7 0 0 0 222 6 0 4 0 5 _ 4 - 0 0 0 226 4 0 , 1 0 2 0 o ( ) 1： 3 7 04 0 f ) 0 0 0 l3 8 5 03 9 8 4 - 00 0 1 d 3 3 15 001 9 3 _ + 0 0 0 1 5 36 815 0 0 3 9 5 _ + 0 0 0 150 5 一一一 第一审用d p i ，1 1 浊 | j f 究甲一抗乳化剂的活件 00 0 02 5 05 0 07 5 10 0 12 5 0d 1 6 4 - 00 0 1 04 0 8 00 0 219 2 04 0 2 00 0 133 7 03 9 3 4 - 00 0 155 2 0 ，3 8 6 00 0 l7 2 1 03 7 6 00 0 1 9 6 2 00 0 i2 5 2 5 0 37 5 50 0 62 5 0 4 1 6 00 0 1 03 7 6 00 0 196 2 03 2 3 4 - 0 0 0 22 2 3 6 0 2 7 6 00 0 13 3 6 5 n ，2 3 4 0 0 0 】4 37 5 01 8 6 - t - 00 0 15 52 8 15 003 7 2 00 0 1 1 0 5 875 00 【1 6 0 0 0 26 d 9 0 _ h 一 表2 1 1 溶剂为5 0 e , 醇时植酸及柠檬酸对d p p l l 的清除作用 一一 横酸终浓度吸光值 清除率柠檬酸终浓度吸光值清除率 c u g m l a p c u g m l a p 00 001 1 6 _ 4 - 0 0 0 1 00 0 0 1 1 6 00 0 1 02 5 05 0 07 5 lo o 1 ，2 5 l5 0 04 1 3 _ 4 - 00 0 1 07 002 5 04 1i 00 0 1 12 005 0 04 1 0 _ 4 - 00 0 i 1 4 00 7 5 04 0 8 o0 0j 1 9 01 0 0 04 0 6 00 0 l 2 4 012 5 0 1 0 4 0 0 0 22 7 01 5 0 n3 9 8 00 0 14 d l 0 3 9 54 - 00 0 251 5 0 3 9 0 _ 4 - 00 0 i613 0 3 8 5 00 0 l73 5 0 3 8 1 00 0 183 0 03 7 9 00 0 18 8 2 与表2 2 至表2 7 相比，溶剂变为5 0 乙醇后，t g l l o 、什、v e 、v c 及楠酸的活忡均有所降低，1 3 1 i t 与柠檬酸的活 ：有所提高。抗钒化活性顺 序不变，仍为| 1 _ 1 1 0 什 v c v e i j i t 柠檬酸 柄酸。这说明即使在同 休系巾，溶齐, l j i l , j 改变电会对抗氧化活性数值的火小产生影响。 3 0 第二帝用d p p i i 法研究华一抗钒化剂的活性 2 3 小结 用d p i h 法研究了抗氧化剂b i i t 、t b i i o 、v c 、v e 、t p 、柠檬酸及植酸 清除自山基的能力，小结如下： ( 1 ) 在。一8 0 o o u g ；m 浓度范围内， b h t 、t b i i q 、v c 、v e 、t p 、朽：檬酸及 植酸刘d p p i i 均有一定的清除作用，清除家随着抗氧化剂浓度n c jj 韵大而升 商，目清除率与浓度问呈一定的量效关系。 ( 2 ) 在。一8 0 o o u g m 浓度范围内，抗氰化活性的大 j j p i 贝序为t b i i q t p v c v e b i i t 柠檬酸 植酸。活性大小可能与抗氰化剂分予巾有效酚羟 基的个数及新牛成自山基的稳定性成正相关。 ( 3 ) 酚型抗氧化剂的活性明显高于金属离予螫合剂，这主要与它们各自的 抗氰化机理有关。 ( d ) 改变体系的介质，抗氧化活性的顺序不变，但再自的清除牢数值的大 小有所改变。 第三章用t b a r s 法研究单抗氧化剂的活性 第三章用t b a r s 法研究单一抗氧化剂的活性 不饱和脂肪酸很容易发生脂质过氧化反应，对机体造成损伤。适当补充 外源性的抗氧化剂可以有效地改善这一状况。 检测脂质过氧化的方法很多，如碘量法、总羰基化合物生成法、氧气吸 收法及硫代巴比妥酸反应物( t b a r s ) 法等等。其中t b a r s 法由于简便可靠受 到人们的青睐，该法已有近6 0 年的历史，1 9 4 4 年k o h n 和l i v e r s e d g e 。”1 首先发现生物厌氧组织中加入硫代巴比妥酸( t b a ) 后呈红色。随后b e r n h e i m 与s 1 i n c h u b e r “证实了与t b a 反应的是脂质过氧化物的降解产物丙二醛 ( m d a ) ，故丙二醛被称为硫代巴比妥酸反应物( t b a r s ) 。二者在酸性及高温下 生成的红色络合产物在5 3 2 n m 波长处存在最大吸收，1 9 4 9 年w i1 1 b u r “：将 该吸收称为t b a 值，t b a 值与丙二醛的含量呈化学计量关系，在一定程度上 可以反映脂质过氧化的程度。在抗氧化研究领域人们往往利用抗氧化剂对 t b a r s 的抑制率评价其抗氧化活性的大小。 在用d p p h 法测定了b h t 、t b h q 、v c 、v e 、t p 、柠檬酸及植酸清除d p p h 哉 力的基础上，本文用t b a r s 法进一步研究了它们对亚油酸脂质过氧化的抑制 作用。 3 1 实验 3 i 1 试剂与仪器 v e 等七种抗氧化剂同2 i i 亚