细胞因子检测技术及其应用ppt课件.pptx

细胞因子检测技术及其应用,1,细胞因子检测的意义,细胞因子具有极强的生物学活性,可作为药物用于临床许多疾病的治疗中。细胞因子发挥治疗作用的浓度非常低,治疗指数也比较低,剂量的增加一般都伴随明显的毒副作用。另一方面,细胞因子在体内具有重要的病理作用。在感染、炎症、自身免疫病、AIDS等疾病状态下，有些细胞因子明显增高。通过检测血清或组织液中的细胞因子含量,可以对诊断和治疗作出评价,具有重要的临床意义。根据检测原理和手段的不同,细胞因子的检测技术大致分为三类:免疫学方法、生物学方法和分子生物学方法。,2,一、细胞因子检测概述,一、细胞因子的类型与作用特点二、细胞因子检测的特点与方法,3,由非神经内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。,细胞因子,4,细胞因子的类型与作用特点,1、细胞因子的分类2、细胞因子的作用特点,5,以生物学作用进行划分的分类,白细胞介素（Interleukin）IL-1、IL-2、IL-18干扰素（Interferon）IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor）TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforminggrowthfactor）TGF-趋化因子（Chemokine）IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Growthfactor）EGF、FGF、IGF、PDGF,6,TNFs,ILs,IFNs,TGFs,Chemokines,CSFs,各类细胞因子间关系,7,1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性2、多源与同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、丰余性（redundancy）6、协同性7、拮抗性8、网络性,8,细胞因子,细胞因子,细胞因子受体,细胞因子受体,细胞因子的自分泌与旁分泌性,9,IL-2IFN-TNF-,细胞因子的同源性与多源性,IFN-,T细胞,T细胞,NK细胞,10,IL-4,肥大细胞,Th细胞,细胞因子的多效性,11,细胞因子的丰余性,IL-2IL-4IL-5,12,细胞因子的协同性,IL-4IL-5,13,细胞因子的拮抗性,IL-4,IFN-,14,细胞因子的网络性,IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、GM-CSF,TNFTGFIL-1IFN,IL-1IFN,TNFIL-1TGF,IFNIL2IL-4,IFNIL2IL-4IL-5IL-6,TNFIFNIL-1TGF,TNFIL-1IFNIL-5GM-CSFG-CSFM-GSF,TNF,TNFIL-1TGF,IL-1IL-6GM-CSFG-CSFM-GSF,IL-1IL-6,IL-1IL-6GM-CSFG-CSFM-GSFIFN,内皮细胞,成纤维细胞,T,B,15,细胞因子检测的特点与方法,1、检测的特点2、检测的方法,16,细胞因子检测的特点,免疫原性较弱样品含量低样品具有时效性生物效应特异性差,17,细胞因子检测的方法,免疫学检测方法抗原性检测细胞生物学检测方法生物活性检测分子生物学检测方法基因表达检测,18,二、细胞因子检测的方法与原理,一、细胞因子的细胞生物学检测二、细胞因子的免疫学检测三、细胞因子的分子生物学检测,19,细胞因子的细胞生物学检测,1、检测方法与原理2、检测中的操作注意要点,20,检测方法与原理,细胞增殖或增殖抑制试验细胞病变抑制试验细胞毒试验细胞趋化试验,21,滤膜：计数受趋化细胞,趋化因子,细胞,趋化试验原理示意,22,检测中的操作注意要点,靶细胞的选择与培养检测标本的制备显示检测结果,23,靶细胞的选择与培养,1、对所测的细胞因子有特异的敏感性2、易培养、保存、生物学特性稳定3、有良好的生长状态4、种属适配,24,各类细胞因子检测的常用靶细胞,细胞因子实验系统干扰因素IL-1D10（M）增殖法IL-2、IL-4EL-4（M）增殖法IL-4A352（H）增殖抑制法IL-2CTLL（M）增殖法IL-4IL-3KG-1（H）增殖法TF-1（H）增殖法GN-CSF、IL-5IL-6、EPOIL-4CTLL（M）增殖法IL-2IL-5BCL-1（M）增殖法IL-4,25,各类细胞因子检测的常用靶细胞,细胞因子实验系统干扰因素IL-6B9（M）增殖法IL-4、IL-11BM60（H）增殖法IL-7Clone-IXN/2b（M）增殖法IL-8中性粒细胞（M、H）趋化法GM-CSFTF-1（H）增殖法IL-3、IL-5IL-6、IL-5TNF/L929（M、H）细胞毒法IFNwish（H）病变保护法IFN-、IFN-L929（M）病变保护法IFN-、IFN-,26,检测标本的准备,1、分离特定的产生细胞2、对产生细胞进行诱导、激活3、选择适当的收集时间,27,显示检测结果,1、细胞增殖状态的显示：放射性核素掺入法、胞内酶活性显示法活细胞染色法细胞荧光测定法2、细胞毒或细胞病变状态的显示活细胞染色法胞内酶活性显示法DNA断片测定法,28,细胞因子的免疫学检测,分泌型细胞因子的检测细胞内细胞因子的检测,29,ELISPOT,30,细胞内细胞因子检测技术,激活,膜抗原标记,细胞内细胞因子标记,31,细胞因子的分子生物学检测,原位杂交技术Rt-PCR技术,32,三、常用细胞因子的检测方法,一、IL-2的检测二、IFN-的检测三、TNF的检测,33,待检样品（细胞上清）指示细胞（CTLL-2）,按不同稀释度加入,37C，16-20小时,加入3HTdR（1-5Ci）,37C，4-6小时,收集细胞,测定,白细胞介素-2的测定示意图,34,待检样品（细胞上清）指示细胞（L929）,按不同稀释度加入,37C，4小时,37C，24-48小时,弃取上清，加入VSV,观察细胞病变（镜检或比色）,干扰素的测定示意图,35,肿瘤坏死因子的测定示意图,待检样品（细胞上清）指示细胞（L929）,按不同稀释度加入,37C，24小时,弃取上清，洗涤,加入结晶紫染液，洗涤,加入细胞裂解液，比色,36,四、细胞因子受体的检测,一、细胞因子受体的类型二、细胞因子受体的检测,37,细胞因子受体的类型,膜型细胞因子受体分泌型细胞因子受体,38,细胞因子受体的检测方法,膜型细胞因子受体的检测配体检测法抗体检测法分泌型细胞因子受体的检测标记抗体检测法,39,小结,细胞因子的检测技术发展较快,不断有新方法出现,但是基本上都是利用其生物活性或免疫原性。一方面由于待测生物样本中可能会存在