其他病原微生物分离及鉴定PPT课件.ppt

一、螺旋体,1,（Spirochaeta）,螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动的原核单细胞微生物。它的基本结构与细菌类似，有细胞壁、核质，以二分裂繁殖，广义上属于细菌。抵抗力极弱。对温度和干燥特别敏感。对常用化学消毒剂亦敏感，1%2%石炭酸内数分钟就死亡。对青霉素、四环素、红霉素或砷剂均敏感。,2,（一）主要生物学特性,1.形态：螺旋状，有些可通过细菌滤器或滤膜。2.结构：原生质柱、轴鞭毛、外鞘。3.运动性：运动活跃。4.繁殖方式：以二分裂法繁殖。5.核酸：核酸兼有RNA和DNA。6.染色：革兰氏阴性，但大多数不易着色。7.培养特性：多数需厌氧培养，营养要求较高，有些不能用人工培养基培养。,3,二、致病性与免疫性,二、致病性与免疫性,二、致病性与免疫性,致病物质-类似细菌内毒素与外毒素,1内毒素样物质(ELS)或称脂多糖样物质(LLS)2溶血素3细胞毒性因子(CTF)4.细胞致病作用(CPE)物质,4,所致疾病,钩端螺旋体病-一种人畜共患传染病传染源：鼠和猪传播途径：经粘膜或破损皮肤进入;经胎盘垂直传播临床表现：先形成钩体血症；进入损伤全身毛细血管内皮细胞，及肝、肾、肺心及中枢神经，可出现休克、DIC、黄疸、出血、心肾功能不全、脑膜炎等。疾病特点：起病急、高热、乏力、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大。,5,免疫性,疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力。,6,（二）、病料的采集与检查,1.材料准备发病早期已采取家畜的血液为宜，显微镜检查和分离培养时，则应加抗凝剂；做血清检查时则不加抗凝剂。发病后期肾脏中的病原体大量增加，宜采取尿液。2.暗视野显微镜检查3.标本染色镜检吉姆萨染色或方氏镀银法和钩端螺旋体媒染法较好。,7,（三）、分离培养,螺旋体能够在人工培养基上生长，但需用液体或半固体培养基。最常用的培养基有柯氏培养基和捷氏培养基。接种材料为血、尿及组织乳剂。一般培养时间10-30d,确认无钩端螺旋体生长者可弃去而判为阴性。,8,（四）、动物感染实验,采用幼龄豚鼠（体重150-200g）或仓鼠，腹腔注射被检样1-3mL。接种后每日测温观察两次。,9,（五）、血清学试验,一般采用已知抗原检查动物血清中的抗体。凝集溶解试验具有高度的型特异性，是诊断本病最常用的方法。,10,凝集反应（agglutinationtest）,一种血清学反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。直接凝集反应颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。间按凝集反应将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用。在有电介质存在的适宜条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应。,11,沉淀反应（precipitation）,一种血清学反应。可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电介质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等。沉淀反应的实验方法大体可分为环状法、絮状法、琼脂扩散法三种基本类型。,12,13,二、立克次氏体（Rickettsia）,立克次体是一类介于病毒与细菌之间的原核细胞型微生物，在形态结构和繁殖方式等特性上与细菌相似，而在生长要求上又酷似病毒。此类微生物引起人和动物立克次体病（如Q热、斑疹伤寒、恙虫病等）。为纪念HowardTaylorRicketts而命名。,14,（一）、生物学特性,1.多形性，主要是球杆状。2.大小介于细菌和病毒之间，多数不能通过细菌滤器。3.革兰氏阴性，有细胞壁4.专性细胞内寄生5.以二分裂方式繁殖6.对理化因素抵抗力不强，尤对热敏感7.主要寄生于节肢动物中，通过叮咬感染人和动物,15,（二）、病料的采集与检查,根据所怀疑的疾病或检疫要求，采取立克次氏体含量较多、无杂菌污染或污染较少的适宜材料，并按无菌方法采取。病料应置于-70保存及时检查。根据需要取不同形式材料。对原始材料进行涂片染色镜检。形态学检测。,16,（三）、分离培养,立克次氏体的分离方法有动物或鸡胚接种、细胞培养等。1.动物接种选用易感性较高的实验动物。一般采用腹腔接种。2.鸡胚接种只感染动物的立克次氏体，不能在鸡胚中培养。3.细胞培养多用单层细胞培养法。,17,（四）、立克次氏体的鉴定,1.形态学鉴定2.血清学鉴定免疫荧光染色法、补体结合试验以及微量凝集实验。,18,三、支原体,支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。,19,形态与结构,支原体的大小为0.20.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性。革兰氏染色不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。凡能作用于胆固醇的物质（如二性霉素B、皂素等）均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。支原体基因组为一环状以双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一），合成与代谢很有限。肺炎支原体的一端有一种特殊的末端结构（terminalstructure），能使支原体粘附于呼吸道粘膜上皮细胞表面，与致病性有关。,20,（一）、病料采集和保存,一般用灭菌棉花拭子涂抹动物的粘膜表面取样。,21,（二）培养特性,营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入1020%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适pH7.88.0之间，低于7.0则死亡，但解脲脲原体最适pH6.06.5。大多数兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育23天出现典型的“荷包蛋样”菌落：圆形（直径1016um），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，盖因缺乏细胞壁造成分裂时二个子细胞大小均所致。同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。,22,（三）、培养方法,1.培养基中培养好气性培养厌气性培养2.鸡胚接种3.动物接种,23,（四）、菌落形态和染色观察,菌落形态检查是分离检查支原体的第一步。然后用Dienes法染色。,24,（五）、生物化学鉴定方法,1.对毛地黄皂苷的敏感性试验2.发酵葡萄糖和水解精氨酸试验3.水解尿素试验4.四氮唑还原试验5.菌落吸附红细胞试验,25,（六）、血清学方法鉴定,生长抑制试验（GI）代谢抑制试验（MI）免疫荧光抗体（IF）直接凝集试验间接凝集试验补体结合试验（CF）双向免疫扩散试验（DID）,26,四、衣原体（Chlamydia）,衣原体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，介于立克次体和病毒之间，可引起人和家畜的衣原体病。,27,（一）、生物学特点,革兰氏阴性，圆形或椭圆形含DNA和RNA两种核酸有由粘肽组成的细胞壁细胞内寄生（鸡胚或细胞培养、动物接种）独特的发育周期，并以二分裂方式繁殖对某些抗生素敏感,28,（三）、接种培养方法,1.鸡胚卵黄囊接种未喂过抗生素的鸡群。2.小鼠接种腹腔接种：3-5周龄小鼠。鼻内接种3.细胞培养,29,（四）、衣原体的分类与鉴定,1.在细菌