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温州医学院 硕士学位论文 回肠间置术对非肥胖糖尿病大鼠glp-1及其受体表达的影响 姓名：王小坤 申请学位级别：硕士 专业：外科学（普通外科） 指导教师：郑晓风；朱恒梁 2012-05-24 温州医学院硕士学位论文 回肠间置术对非肥胖糖尿病大鼠 l p - 1 及其受体表达的影响 中文摘要 背景：研究发现对合并有2 型糖尿病的肥胖症患者行减重手术后不仅体重有显著 下降，而且血糖也得到良好控制。后来许多国内外临床报道减重手术不仅对伴有 肥胖症的2 型糖尿病患者有效，对非肥胖的2 型糖尿病患者也有令人兴奋的效果。 目前外科手术已经成为治疗2 型糖尿病治疗方式之一，但对于其治疗机制仍然还 不明确。很多试验证明，糖尿病外科手术以后，解剖生理结构的改变导致了与代 谢有关胃肠道分泌的激素和神经肽类分子水平的明显变化，这些分子在功能上与 葡萄糖代谢、胰岛细胞功能、胰岛素敏感性相关，其中研究的较为深入的是胰高 血糖素样肽一1 ( g 1 u c a g o n l i k ep e p t i d e 一1g l p 一1 ) ，其在外科手术治疗糖尿病中 所起的重要作用已得到人们越来越多的认可。g l p 一1 必须与g l p 一1 受体( g l p 一1 r e c e p t o rg l p 一1 r ) 结合后才能发挥其生理作用，基于g l p l 与g l p 一1 r 重要的 生理功能及部分2 型糖尿病患者g l p 一1 分泌水平减少这一事实，g l p 一1 与g l p 一1 r 作为糖尿病药物治疗一个新的靶点已经得到人们越来越多的关注。许多研究报道 糖尿病外科手术后血g l p - 1 水平有明显升高，然而对分布于胰腺及肠道的g l p 一1 r 在糖尿病外科手术后变化的相关研究国内外尚无报道，本研究选择非肥胖的2 型糖尿病动物模型进行手术干预，研究回肠间置术对糖尿病大鼠g l p 一1 及其受体 表达的影响。 目的：研究回肠间置术对g k 大鼠胰高血糖素样肽一1 及其受体m r n a 和蛋白表达水 平的影响，从而探讨回肠间置术降血糖的可能机制。 方法：本实验选用s p f 级g k 大鼠2 0 只，雄性，9 周龄。s p f 级w i s t a r 大鼠1 0 只，雄性，9 周龄。所有动物无任何干预适应性饲养l 周后将g k 大鼠随机分为2 组：回肠问置手术组( g k - i i ，n - - l o ) ，假手术组( g k s h a m ，n = l o ) 。以w i s t a r 大鼠作为正常对照组( w i s t a r ，n = l o ) 。术后每周测量空腹血糖，术前1 周及术 后4 周、2 4 周行o g t t 测定，术前1 周及术后4 周、8 周、1 6 周、2 4 周时经内眦 静脉取血以检测各组血清g l p 一1 水平。术后2 4 周时处死大鼠，获取胰腺、原位 回肠、间置回肠分别采用r t - p c r 和w e s t e r n b l o t 方法进行g l p 一1 受体的m r n a 和蛋白表达量检测。 结果：( 1 ) 术前g k i t 组与g k s h a m 组的体重( 护o 4 5 9 ，m - o 6 5 2 ) ，空腹血糖 ( 产0 5 0 0 ，户0 6 2 3 ) ，葡萄糖耐量( 乒0 1 6 8 ，户0 8 6 8 ) ，血胰岛素( e = - 一0 4 0 8 ， 卢0 6 8 8 ) 均无统计学差异。 温州医学院硕士学位论文 ( 2 ) 与g k s h a m 组相比，g k - i i 组术后4 周、8 周、1 6 周、2 4 周血清g l p 一1 浓 度均有明显升高。( 分别为5 4 7 1 1 8 p m o l l 心2 6 9 8 3 p m o l l ，t = 6 0 9 5 ， 卢0 0 0 0 ：5 8 4 1 1 7 p m o l lv s2 5 9 6 6 p m o l l ，t ：- 7 6 4 9 ，p o 0 0 0 ；6 1 7 1 2 2 p m o l l 坶2 8 6 7 2 p m o l l ，萨7 1 0 6 ，卢0 0 0 0 ；6 3 1 1 0 ? p m o l l 心 2 6 3 + 6 7 p m o l l ，t = 9 2 2 8 ，p = o 0 0 0 ) 。 ( 3 ) w i s t a r 大鼠胰腺g l p - 1 rm r n a 相对表达水平高于g k s h a m 组及g k i i 组( 分 别为1 4 1 o 0 3v s0 8 2 o 0 1 ，护一3 8 7 3 8 ，卢o 0 0 0 ；1 4 l 0 0 3 v s1 0 4 0 0 3 ，r = - - 1 9 2 0 9 ，p = o 0 0 0 ) ，术后2 4 周g k 一工i 组胰腺g l p 一1 rm r n a 相对表达 水平高于g k - s h a m 组( t = 1 5 0 0 4 ，p = - o 0 0 0 ) 。w i s t a r 大鼠胰腺g l p 一1 r 蛋白相对 表达水平高于g k - s h a m 组及g k - i i 组( 分别为1 4 l 0 1 0 坯0 6 3 o 0 4 ， t = - l o 9 2 9 ，户0 0 3 9 ；1 4 1 0 1 0 陋o 7 9 0 0 4 ，护一8 6 9 4 ，p 0 0 4 7 ) ，术后 2 4 周g k - i i 组胰腺g l p - 1 r 蛋白相对表达水平高于g k s h a m 组( t ：4 9 1 9 ，p 0 0 0 8 ) 。 ( 4 ) w i s t a r 大鼠原位回肠6 l p - 1 rm r n a 相对表达水平高于g k s h a m 组对应的原 位回肠( t = - - 7 2 6 7 ，卢o 0 0 1 ) ，术后2 4 周g k i i 组问置回肠g l p 一1 rm r n a 相对 表达水平高于g k - s h a m 组原位回肠g l p - 1 rm r n a 相对表达量( t ：- 6 7 9 0 ，户o 0 0 0 ) 。 w i s t a r 大鼠原位回肠g l p - 1 rm r n a 相对表达水平与术后2 4 周g k i i 组间置回肠 g l p l rm r n a 相对表达水平无明显差异( t = - - o 9 7 6 ，卢o 3 6 7 ) 。w i s t a r 大鼠原位 回肠g l p - 1 r 蛋白相对表达量高于g k s h a m 组原位回肠( 乒一5 4 3 0 ，户o 0 1 2 ) ， 术后2 4 周g k - i i 组间置回肠g l p - 1 r 蛋白相对表达量高于g k s h a m 组对应的原位 回肠的g l p - 1 r 蛋白相对表达量( t - = 4 0 7 2 ，卢o 0 3 1 ) 。w i s t a r 大鼠原位回肠g l p 一1 r 蛋白相对表达水平与术后2 4 周g k i i 组间置回肠无明显差异( 乒一1 5 7 6 ， 卢0 2 7 6 ) 。 结论：( 1 ) 行回肠间置术后，g k 大鼠血清g l p l 水平有明显升高。( 2 ) 回肠间置 术能明显提高g k 大鼠胰腺和间置回肠g l p 一1 受体m r n a 和蛋白表达水平，其中间 置段回肠g l p - 1 受体表达水平在术后2 4 周可达到正常大鼠水平。( 3 ) 回肠间置术 后g l p 一1 分泌水平的增加及胰腺和回肠g l p - 1 受体表达水平的升高是回肠间置术 治疗糖尿病的可能机制之。 关键词：2 型糖尿病；外科手术；回肠问置术；胰高血糖素样肽一l ( g l p 1 ) ；胰 高血糖素样肽一1 受体( g l p 一1 r ) 3 温州医学院硕士学位论文 t h ei m p a c to fi l e a li n t e r p o s i t i o no nt h eg l u c a g o n l i k e p e p t i d e - 1a n di t sr e c e p t o re x p r e s s i o ni nn o n o b e s e d i a b e t i cr a t s a b s t r a c t b a c k g r o u n d ：t h es t u d yh a sf o u n dt h a tt h ew e i g h to ft h eo b e s ep a t i e n t sw i t ht y p e2 d i a b e t e sn o to n l yh a sd e c r e a s e da f t e rb a r i a t r i cs u r g e r y ，b u ta l s ot h e i rb l o o dg l u c o s e h a sb e e nw e l l c o n t r o l l e d l a t e r ，m a n yc l i n i c a lr e p o r t sh a v es h o w nt h a tb a r i a t r i c s u r g e r yi sn o to n l y e f f e c t i v ef o rt h o s eo b e s ep a t i e n t sw i t ht y p e2d i a b e t e s ，b u t e 伍c a c i o u sf o rt h o s en o n o b e s ep a t i e n t sa sw e l l s of a r s u r g e r yh a sb e c o m eo n eo ft h e t r e a t m e n t so f t y p e2d i a b e t e s ，b u ti ti ss t i l lu n c l e a ra b o u tt h et h e r a p e u t i cm e c h a n i s m m a n ye x p e r i m e n t sh a sp r o v e dt h a tt h ea n a t o m i c a la n dp h y s i o l o g i c a ls t r u c t u r eh a s b e e n c h a n g e dw h i c hl e a d t o s i g n i f i c a n tc h a n g e sr e l a t e d t ot h es e c r e t i o no f g a s t r o i n t e s t i n a lh o r m o n e sa n dn e u r o p e p t i d e s t h e s em o l e c u l a ri nf u n c t i o n sa r er e l a t e d t ot h em e t a b o l i s mo f g l u c o s e f u n c t i o n so fi s l e tc e l l sa n ds e n s i t i v i t yo fi n s u l i n a m o n g t h e m ，p e o p l em a k ea ni n t e n s i v es t u d yo fg l u c a g o n l i k ep e p t i d e 1 ( g l p 1 ) w h i c h p l a y sa l li m p o r t a n tr o l ei nt h es u r g i c a lt r e a t m e n to fd i a b e t e sa n dn o wi th a sg o tm o r e a n dm o r er e c o g n i t i o n g l p 1m u s tb ec o m b i n e dw i t hg l p 1r e c e p t o rf g l p 1r 1t o p l a yi t sp h y s i o l o g i c a lr o l e t h ef o l l o w i n gf a c t sa r es h o w n ：g l p 一1a n dg l p 1r h a v e i m p o r t a n tp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n sa n dt h es e c r e t i o no fg l p 1w i t ht ! i ，p e2d i a b e t e s p a t i e n t s h a sr e d u c e d b a s e do nt h e s ef a c t s g l p 1a n dg l p 1ra sn o v e l p h a r m a c e u t i c a l s t ot r e a td i a b e t e sh a sg o to u ra t t e n t i o ng r e a t l y i ti sr e p o r t e di nm a n y s t u d i e st h a tb l o o dg l p 1l e v e lh a si n c r e a s e dg r e a t l ya f t e rm e t a b o l i cs u r g e r y b u ta s f o rt h ec h a n g eo fg l p 1ra r o u n dp a n c r e a sa n di n t e s t i n e sa f t e rs u r g e r y t h e r ei sn o s u c hr e p o r tb o t ha th o m ea n da b r o a d o u rr e s e a r c hc h o o s en o n o b e s et y p e2d i a b e t e s a n i m a lm o d e lf o rs u r g i c a li n t e r v e n t i o n s t oe x p l o r et h ee f f e c to fi l e a li n t e r p o s i t i o n s u r g e r yo ng l p 1a n di t sr e c e p t o re x p r e s s i o ni n d i a b e t i cr a t s o b j e c t i v e ：t h i sp a p e rs t u d i e st h ei m p a c t so fi l e u mi n t e r p o s i t i o no ng l u c a g o n l i k e p e p t i d e lo fg kr a t s ，i t sr e c e p t o rm r n aa n dp r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l t h e r e b y ，w e d i s c u s sp o s s i b l em e c h a n i s m so fl o w e f i n gb l o o dg l u c o s eb yi l e a li n t e r p o s i t i o ns u r g e r y m e t h o d ：i nt h i se x p e r i m e n t ，w ec h o o s es p f2 0g kr a t s ，m a l ea n d9w e e k so l d b e s i d e s ，w eh a v es p f10w i s t a rr a t s ，m a l ea n d9w e e k so l d a l lt h er a t sa r eu n d e r a d a p t i v ef e e d i n gw i t h o u ta n yi n t e r v e n t i o n o n e w e e kl a t e r ，t h eg kr a t sw e r e r a n d o m l yd i v i d e di n t o2g r o u p s ：i l e u mi n t e r p o s i t i o ng r o u p ( g k - 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0 0 4 7 ) w h i l eg k i ig r o u pi sh i g h e r t h a ng k s h a mg r o u pf t = 4 9 19 ，p = 0 0 0 8 ) ( 4 ) 2 4w e e k sp o s t o p e r a t i v e ，f o rt h er e l a t i v ee x p r e s s i o no fg l p 1rm r n ai n o r t h o t o p i ci l e u m ，w i s t a rr a t sa r eh i g h e rt h a ng k - s h a mg r o u p ( 产一7 2 6 7 ，p = 0 0 01 ) a n d t h ei n t e r p o s e di l e u mo fg k - i ig r o u pi sh i g h e rt h a ng k - s h a mg r o u pf t = 6 7 9 0 ， p = o 0 0 0 ) b u tf o rt h er e l a t i v ee x p r e s s i o no fg l p 1rm r n a t h e r ei sn oo b v i o u s d i f f e r e n c eb e t w e e ni o r t h o t o p i ci l e u mo fw i s t a rr a t sa n di n t e r p o s e di e l u mo fg k i i f f = 0 9 7 6 ，p = 0 3 6 7 ) f o rt h er e l a t i v ee x p r e s s i o no fp r o t e i no fg l p 1 ri nt h e o r t h o t o p i ci l e u m w i s m rr a t sa r eh i g h e rt h a ng k s h a mf t = 5 4 3 0 ，p = 0 0 1 2 ) f o rt h e r e l a t i v ee x p r e s s i o no fp r o t e i no fg l p lri nt h ei n t e r p o s e di l e u m g t i ii sh i g h e rt h a n g k s h a m ( 户4 0 7 2 ，p = 0 0 3 1 ) f o rt h er e l a t i v ee x p r e s s i o no f p r o t e i no f g l p 一1 r ，t h e r e i sn oo b v i o u sd i f f e r e n c eb e t w e e ni o r t h o t o p i ci l e u r no fw i s t a rr a t sa n di n t e r p o s e d i l e u mo fg k i tf f ：1 5 7 6 ，p = 0 2 7 6 ) c o n c l u s i o n ：( 1 ) i l e a li n t e r p o s i t i o ns u r g e r yc a ne l e v a t e so b v i o u s l yt h es e r u mg l p - l l e v e li ng kr a t s ( 2 ) a f t e rt h ei l e a li n t e r p o s i t i o n ，t h eg l p 1r e c e p t o rm r n aa n d p r o t e i ne x p r e s s i o nc a nb es i g n i f i c a n t l yi m p r o v e di nt h eg kr a t sp a n c r e a sa n dt h e i n t e r p o s e di l e u m t h ee x p r e s s i o no ft h eg l p 1r e c e p t o ri nt h ei n t e r p o s e di l e u mc a n r e a c ht h en o r m a lr a t si l e u m ( 3 ) a f t e rt h ei l e a li n t e r p o s i t i o n ，t h es e c r e t i o nl e v e lo f g l p 1c a nb ei n c r e a s e d b e s i d e s 、t h ee x p r e s s i o n1 e v e lo fg l p 1 r e c e p t o ri n t h e p a n c r e a sa n di l e u mc a nb ei m p r o v e da f t e ri l e a li n t e r p o s i t i o n t h i si so n eo ft h e p o s s i b l em e c h a n i s m si nt h et r e a t m e n to fd i a b e t e s k e y w o r d s ：t y p e 2d i a b e t e s m e l l i t u s ( t 2 d m ) ；s u r g e r y ；i l e a ii n t e r p o s i t i o n ( i i ) ； g l u c a g o n l i k ep e p t i d e i ( g l p 一1 ) ；g l u e a g o n l i k ep e p t i d e 一1r e c e p t o r ( g l p - 1r ) 5 温州医学院硕士学位论文 缩写 t 2 d m g l p 1 英文对照 缩略词 t y p e2d i a b e t e sm e l l i t u s g l u c a g o n l i k ep e p t i d e 一1 g l p - 1 r g l u c a g o n l i k ep e p t i d e 一1r e c e p t o r i i i t 中文对照 2 型糖尿病 胰高血糖素样肽一1 胰高血糖素样肽一1 受体 i l e a li n t e r p o s i t i o n t r a n s p o s i t i o n回肠间置术 r y g b r o u x e n yg a st ricb y p a ss b p d b i l i o p a n c r e a t i c d i v e r s i o n b m i b o d ym a s si n d e x i i d s g d j b d j e s g r o u x e n y 胃旁路术 胆胰转流术 体重指数 1 1 e a li n t e r p o s i t i o nv i aad i v e r t e d 回肠间置胃袖套状成型 s l e e v eg a s t r e c t o m y d u o d e n a l j e j u n a lb y p a s s e x c l u s i o n s l e e v eg a s t r e c t o m y g i p g l u c o s e d e p e n d e n t p e p t i d e d p p 4 d i p e p t i d y lp e p t i d a s e 4 转流术 十二指肠空肠旁路术 袖状胃切除术 i n s u li n o t r o p i c 葡萄糖依耐性胰岛素释 p d x 一1p a n c r e a t i ca n dd u o d e n a lh o m e o b o x l g k r a tg o to k a kiz a kir a t 1 放肽 二肽基肽酶一4 胰十二指肠同源因子盒 一l g k 大鼠 温州医学院硕士学位论文 - - j - 刖置 随着经济的高速发展及生活水平的提高，世界糖尿病的发病率呈逐年大幅度 上升趋势。根据国际糖尿病联盟( i n t e r n a t i o n a ld i a b e t e sf e d e r a t i o n ，i d f ) 统计，在2 0 0 0 年全球约有糖尿病患者1 5 l 亿，而目前糖尿病患者已经达2 8 5 亿，按目前的增长速度，预计到2 0 3 0 年全球将有近5 亿人患糖尿病。由于中国 是世界上人口最多的国家，庞大的人口基数使中国背负着极大的糖尿病负担，糖 尿病患者人数约占全球糖尿病患者总数的1 3 。糖尿病的并发症对患者的生命和 生活质量威胁极大，给患者个人以及家庭带来了沉重的经济负担。2 0 1 0 年全世 界1 1 6 的医疗卫生费用花费在防治糖尿病上，据世界卫生组织估计2 0 0 5 年至 2 0 1 5 年中国由于糖尿病及相关心血管疾病导致的经济损失达5 5 7 7 亿美元n 1 。 糖尿病患者致残和早亡的重要原因为其血糖控制不佳所致的心血管、脑、肾 等重要脏器的并发症，而目前用于控制血糖的主要措施包括控制饮食、加强运动、 口服降糖药和使用胰岛素等，但由于他们自身的缺陷，费用昂贵，不良反应，需 要终生治疗等原因，患者生活质量降低，以致患者依从性差，同时在现实中，不 规范的药物使用导致很大一部分患者很难将血糖控制在理想水平并获得长期疗 效乜 3 | ，因而最终不能避免糖尿病各种并发症的出现及进一步加重。胰腺移植和 胰岛细胞移植的方法因胰岛分离结果的不稳定、移植排异、免疫抑制剂的副作用 及手术难度大、并发症多、供体来源有限等诸多因素制约了其在临床的应用。而 胚胎干细胞和胰腺干细胞移植分别受到伦理学争论及取材不便的影响h 1 。因此， 寻找长效、稳定、安全、依从性高的新的糖尿病治疗方法并验证其临床可行性， 是目前值得深入探讨的问题。 在肥胖症患者行减重手术( b a r i a t r i cs u r g e r y ) 术后随访中人们发现胃旁 路术( g a s t r i cb y p a s sg b p ) 、胆胰转流术( b i l i o p a n c r e a t i c d i v e r s i o nb p d ) 治疗伴有2 型糖尿病的肥胖症患者术后，不仅体重有显著下降，而且血糖也得到 良好控制晒1 。m a c d o n a l d 等肺3 通过对人群平均9 年的随访发现，和传统的抗糖尿 病药物相比，手术治疗2 型糖尿病似乎更有效益。因此有充分证据证明，减重手 术对2 型糖尿病是有效的治疗方式。p o r i e s 等口 鲫也发现合并有2 型糖尿病的病 态肥胖患者接受减重手术后，不仅体重有显著下降，糖尿病也得到完全缓解或改 善，血浆胰岛素、糖化血红蛋白及胰岛素敏感性恢复正常，甚至可以完全脱离糖 尿病药物，降低了2 型糖尿病患者并发症发生率和死亡率。并且，血糖的改善发 生在术后早期( 1 0 天) ，远远早于体重明显下降的时间呻，1 0 1 ，这表明存在与手术 本身相关的更重要的作用机制，外科手术控制血糖的作用似乎是直接、独立的， 并非完全是减重的伴随作用。由此引发了国内外学者对手术治疗糖尿病的临床和 6 温州医学院硕士学位论文 实验研究，主要研究术式有：胃旁路术( r o u x e n yg a s t r i cb y p a s sr y g b ) ，胆 胰转流术等。这些外科手术对糖尿病有着良好的治疗效果，2 型糖尿病患者能得 到完全缓解或改善，并且治疗效果持久稳定u 1 1 2 。 但亚太人群中有更多的2 型糖尿病患者是非肥胖的，减重手术对此类患者效 果如何呢? 近来，代谢外科医生对伴有2 型糖尿病的轻度肥胖患者或体重正常的 非肥胖2 型糖尿病患者实施胃肠道旁路手术治疗糖尿病的可行性进行了进一步 探索，也取得了令人惊讶的效果。d e p a u l a 等口3 1 对3 9 例b m i 3 5 k g m 2 ( 平均约3 0 1 ) 的2 型糖尿病患者实施了腹腔镜袖状胃切除联合回肠间置手术，平均随访时间7 个月，结果8 6 9 的患者获得了满意的血糖控制，1 3 1 有明显改善，所有患者 术后都不再需要胰岛素治疗。有临床研究报道u 刮对6 9 例b m i 在2 1 2 9 k g m 2 即体 重正常甚至偏瘦的2 型糖尿病患者实施腹腔镜下回肠间置联合袖状胃切除手术 ( i 工一d s g ) ，平均随访2 1 7 个月，结果显示9 5 7 患者获得了满意的血糖控制。 说明胃肠道旁路手术治疗糖尿病不仅对肥胖的2 型糖尿病患者有效，对非肥胖的 2 型糖尿病患者也有令人兴奋的效果。目前用于治疗非肥胖2 型糖尿病的外科手 术主要有十二指肠空肠旁路术、袖状胃切除术、十二指肠空肠旁路联合袖状胃切 除术、回肠问置术、回肠问置联合袖状胃切除术。 目前国内外学者对外科手术治疗糖尿病的机理提出了多种假说，包括“前肠 假说”和“后肠假说”。前肠假说是指营养物质避开对胃十二指肠的刺激，减少 或抑制了能对抗肠促胰岛素作用的激素的分泌，从而改善血糖情况；后肠假说是 指营养物质更快的进入远端小肠，从而刺激胰高血糖素样肽一1 ( g l u c a g o n l i k e p e p t i d e 一1g l p 1 ) 等后肠激素的分泌量或其活性增加，进而使胰岛素分泌或敏 感性增加，降低血糖。而很多的试验证明，行胃肠道旁路手术以后，由于解剖生 理结构的改变，导致了与代谢有关胃肠道分泌的激素和神经肽类分子水平的明显 变化，如g l p 一1 、g i p ( g l u c o s e d e p e n d e n ti n s u l i n o t r o p i cp e p t i d e ) 、g h r e l i n 、 n p y ( n e u r o p e p t i d ey ) 、p y y ( p e p t i d e y y ) 等n5 l ，这些物质在功能上与葡萄 糖代谢、胰岛细胞功能、胰岛素敏感性相关，其中研究的较为深入的是g l p 一1 ， 其在外科手术治疗糖尿病中所起的重要作用已得到人们越来越多的认可。g l p l 必须与g l p 一1 受体( g l p 一1r e c e p t o rg l p i r ) 结合后才能发挥其生理作用，基 于g l p 一1 与g l p i r 重要的生理功能及2 型糖尿病患者g l p 一1 分泌的减少这一事 实n6 。，g l p 一1 与g l p 一1 r 作为糖尿病药物治疗一个新的靶点已经得到人们越来越 多的关注。目前国内已上市的g l p 一1 类似物或g l p 一1 受体激动剂为艾塞那肽和利 拉鲁肽，这两种药物在糖尿病的治疗上也已经取得了良好的临床疗效u 7 1 。许多研 究报道代谢病外科手术后血g l p 一1 水平有明显升高u 6 1 引，然而对分布于胰腺及肠 道的g l p i r 在行代谢病外科手术后变化的相关研究国内外尚无报道。 温州医学院硕士学位论文 为了研究糖尿病外科手术对非肥胖2 型糖尿病大鼠血清g l p 一1 与其胰腺及肠 道的g l p 一1 受体表达水平的影响，本研究选择非肥胖的2 型糖尿病动物模型行回 肠间置术干预，术后检测大鼠血清g l p 一1 、胰腺及回肠段的g l p - 1 r 的表达水平， 从而探讨回肠问置术对糖尿病大鼠g l p 一1 及其受体表达水平的影响。 温卅i 医学院硕士学位论文 材料和方法 ( 一) 实验动物 雄性9 周龄g k 大鼠购自中科院上海斯莱克动物中心( 上海斯莱克实验动物有 限责任公司) ，合格证号：s c x k ( 沪) 2 0 0 8 0 0 0 3 。实验动物饲养于温州医学院动物实 验中心s p f ( 无特定病原体) 级动物实验室。饲养环境：空气过滤及梯度压力隔 离系统，室温2 0 一2 4 。c ，相对湿度5 0 - 7 0 ，1 2 小时的光暗周期( 1 2 h 1 2 h ，4 0 w 日光灯自动照明) ，动物通过检疫均合格。实验动物的饲养与手术均遵照实验动 物饲养条例( 全国卫生研究所出版，卷2 5 ，第2 8 号，1 9 9 6 年修订) 。 ( 二) 实验分组 1 分组前准备 实验开始前，所有实验大鼠首次称重后不分组、无任何干预饲养1 周以适应 所处饲养环境，单只单笼喂养。全部动物不限饮水，自由进食常规饲料( 温州医 学院实验动物中心提供) 。 2 实验动物编号、随机化分组及实验组命名 将2 0 只g k 大鼠随机分为2 组，每组1 0 只。分别命名如下。g k i i 组即回 肠间置术( i l e a li n t e r p o s i t i o n ) 组，g k s h a m 组即假手术组( s h a mo p e r a t i o n ) 。 1 0 只w i s t a r 大鼠未行任何处理作为对照组( w i s t a r 组) 。 ( 三) 实验药品 1 标记用药品：碱性品红溶液。 2 术前及麻醉用药：1 戊巴比妥钠溶液，0 5 碘伏，7 5 酒精。 3 术中及术后用药：生理盐水、5 葡萄糖氯化钠液( 浙江国镜药业) 。 4 糖耐量实验用药：1 0 葡萄糖溶液( 浙江国镜药业) 。 ( 四) 主要实验仪器及实验器材 1 血糖仪：罗氏优越性血糖诊断仪及试纸( 德国罗氏公司) 。 2 低温高速离心机m i c r o 1 7 ( 美国t h e r m of o r m a 公司) 。 3 电子天平y p 2 0 k n ( 上海精密科学仪器有限公司) 。 4 一8 0 低温冰箱t h e r m os c i e n t i f i cf o r m a7 0 2 ( 美国t h e r m of o r m a 公司) 。 5 分光光度计( 上海棱光技术有限公司) 。 6 大鼠胰高血糖素样肽- 1 ( g l p 一1 ) e l i s a 试剂盒( r & d 南京建成科技有限 公司) 。