局部刺激实验PPT课件.pptVIP

急性毒性试验综合分析与评价,第四实验室第三小组,人员名单：唐剑波陈杰杨文超唐凯张业芳熊兴菊,第三部分,1,局部刺激实验目的,了解40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂对哺乳动物皮肤、眼睛的局部刺激性和腐蚀性，估计人体接触该农药时可能出现的类似危害，为农药生产和使用中的安全防护提供依据。,2,3,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的眼刺激试验,了解试验40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂对眼睛的刺激作用和程度，为农药生产和使用中的安全防护提供依据。,一、实验目的,二、实验原理,选择健康的成年白色家兔，受试物以一次剂量滴入每只实验动物的眼睛结膜囊内，以未做处理的另一侧眼睛作为自身对照。在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试物对眼睛的刺激作用。观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性。,4,三、实验动物及饲养环境,首选健康成年白色家兔，至少4只，雌雄各半，体重2-3Kg，试验前家兔要在实验动物房至少适应3d时间，在开始前的24h内对动物的两只眼睛进行检查，有眼睛刺激症状，角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于实验。实验动物及实验动物房应符合国家相关规定。选用常规饲料，饮水不限制。,四、实验步骤,1、轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑，将受试物0.1ml滴入结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1min，以防止受试物丢失。另一侧眼睛不处理作自身对照。滴入受试物后24h不冲洗眼睛。,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的眼刺激试验,5,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的眼刺激试验,2、记录给药后1、24、48、72小时角膜、虹膜、结膜以及其它所观察到的损伤情况，以Draize眼部刺激试验评分表示。观察时应用荧光素钠检查角膜损害，用裂隙灯检查角膜透明度和虹膜纹理改变。若在72小时内未见任何刺激症状，该试验即可结束。,3、若在72小时内出现刺激症状，应进行眼部清洗试验：试验设3组，每组3只动物，受试药物的给药方法同上。第1组不予清洗，第2组在眼部给受试药4秒钟后用20ml温水或生理盐水清洗受试眼，第3组在给受试药30秒钟后用20ml温水或生理盐水清洗受试眼。观察滴眼后24、48、72小时，4天，7天的眼部反应情况，直至眼部恢复正常。（该试验的意义在于评价温水或生理盐水清洗可否改善药物所致的眼部刺激，亦即反映该受试药物的眼部刺激性是否可逆。）,6,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的眼刺激试验,五、结果判断及评价,按表1将每只动物的角膜、虹膜和结膜的刺激反应的分值相加，即是一只动物眼刺激反应的总积分。每个动物的刺激反应积分的总和除以动物数，就是该试验农药对眼刺激性的最后分值。再按表2评定眼刺激程度。按上述分级评价标准评定，如一次或多次接触受试物，不引起角膜、虹膜和结膜的炎症变化，或虽引起轻度反应，但这种改变是可逆的，则认为该受试物可以安全使用。在许多情况下，哺乳动物眼的反应较人敏感，从动物试验结果外推到人可提供较有价值的依据。,7,表1Draize眼刺激试验中眼损伤严重程度的评分标准,8,续表Draize眼刺激试验中眼损伤严重程度的评分标准,9,表2眼刺激强度评价标准,10,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验,一、实验目的,测定40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂对哺乳动物皮肤是否有刺激或腐蚀作用，估计人体接触该农药时可能出现的类似危害。,二、实验原理,将受试样品一次（或多次）涂（敷）于健康无破损的一侧皮肤，并以对侧皮肤作自身对照，在规定时限内观察和评价刺激反应的程度，并作详细的记录。观察时间应足以进行可逆或不可逆效应的观察，以便进行完整的评价，但一般不超过14d。,11,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验,三、实验材料,1、实验动物首选健康成年白色家兔，至少4只，体重2kg左右，雌雄兼可，实验动物应单笼饲养，试验前家兔要在实验动物房至少适应3d时间。实验动物及实验动物房应符合国家相关规定。选用常规饲料，饮水不限制。2、受试物40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂,四、实验步骤,1、试验前24小时将动物背部脊柱两侧毛脱掉，不可损伤毛皮，脱毛面积左右各4cmX4cm。,12,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验,2、取受试样品0.5ml直接涂布在皮肤上，用4层纱布（3cmX3cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激胶布和绷带加以固定。对侧皮肤作为对照。采用封闭实验，敷用时间为4h。试验结束后，用温水或无刺激性溶剂清除残留受试样品。3、如怀疑受试样品可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采用分段实验，将三个涂布受试样品的纱布快同时或先后敷贴于一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min，60min和4h取下一块纱布，皮肤部位在任一时间点积分等于8分，即可停止试验。4、观察时间的确定应足以观察到可逆和不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。,13,于清除受试样品后的1h、24h、48h和72h各观察受试部位的皮肤反应，按表3进行皮肤反应评分，以受试物积分的平均值进行综合评价，根据24h、48h和72h各观察时点最高积分均值，按表4判定皮肤刺激强度。皮肤刺激评价除根据表4的评分外，还应结合刺激作用的性质、恢复程度等进行化学品刺激作用的综合评价。单独的积分值不能作为受试样品的刺激性质的最后评判，可以作为参考值。急性皮肤刺激试验结果从动物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多数情况下对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏感。若用其他品系动物进行试验时也得到类似结果，则会增加从动物外推到人的可靠性。,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤刺激试验,五、结果判断及评价,14,表3皮肤刺激反应评分,15,表4皮肤刺激强度评价,16,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验,一、实验目的,测试动物在反复接触40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂后，机体产生免疫传递的皮肤反应的可能性，从而确定该农药的变态反应性（致敏）。,二、实验原理,具有致敏作用的化学物经一定途径进入机体，与组织蛋白结合形成完全抗原，刺激免疫活性细胞产生致敏淋巴细胞或体液抗体；经1-2周致敏期，使体内免疫反应得到充分发展，形成一定数量的致敏淋巴细胞或特异抗体。当再次接触（激发）时使机体对该化合物产生感受性增高的状态，以一定的异常形式表现出来。,17,三、实验材料,1、实验动物成年白色豚鼠，体重200-300g，雌雄均可，雌性动物不能发生过性行为。在同一次试验中，应使用同一性别动物。如果使用两种性别动物，则应雌、雄各半。试验前动物应在实验动物室至少喂养3d，以适应环境和淘汰不合格动物。2、受试物40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂。3、阳性致敏物2,4一二硝基氯代苯制成1的致敏浓度和0.1的激发浓度。4、赋形剂水或无刺激性表面活性剂,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验,18,四、实验步骤,1、用23只动物进行预试验，寻找能引起皮肤轻度刺激反应的最高浓度（剂量）。激发浓度一般低于致敏浓度，不得引起原发刺激性炎症反应。2、实验分组：将豚鼠按体重性别随机分成三组，第一组20只（雌雄各半），二、三组各10只（雌雄各半）。第一组给农药，第二组空白对照（给赋形剂），第三组阳性对照（给阳性致敏物）。3、致敏接触：实验前24h将动物背部左侧去毛3cm3cm。试验组：将试验农药0.10.2ml涂在2cm2cm滤纸上，并将其敷贴在去毛区，以1层油纸或玻璃纸和2层大于备皮面积的纱布覆盖，再以无刺激胶布封闭固定，持续6h。用清水或无刺激性溶剂洗去残留的受试物。第7d和第14d以同样方法重复一次。空白对照组与阳性对照组方法同上。,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验,19,4、激发接触：实验前24h将动物背部右侧去毛3cm3cm。试验组和对照组：末次致敏后第14天，将0.10.2mL或低于诱导浓度的试验农药斑贴于右侧去毛区，覆盖方法同2的步骤，持续6h，去掉去掉斑贴及试验农药后，每日观察皮肤过敏反应情况至第12d，主要观察有无红斑、水肿。如无致变，可再次激发以确定试验农药能否引起过敏反应。阳性对照组给阳性致敏物，方法同上。,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验,20,五、结果判断及评价,40.6%阿维菌素炔螨特微乳剂的皮肤致敏试验,在24h、48h后分别观察局部皮肤反应。用盲法观察对照组和试验组。按表5对局部皮肤反应评分。当受试样品组出现皮肤反应积分不小于2时，判为该动物出现皮肤致敏反应阳性，并计算致敏率，按表6判定受试样品的致敏强度。,21,表5皮肤致敏反应试验评分标准,22,表6致敏