（环境科学专业论文）荧光共振能量转移光谱法用于食品监测的研究.pdf

素+ p d + 一酚藏花红能量转移体系测定杀虫单的新方法。实验表明：杀虫单 的含量在o 5 x 1 0 7 1 2 x 1 0 6 m o l l 范围内与体系的f d f a 呈良好的线性关系，方 法最低检出限为2 0 1 x 1 0 8 m o 1 l ，应用该法测定了大米和谷壳中的杀虫单的含 量，回收率达到8 7 5 1 1 0 o 。 本文研究发现在二氯荧光黄一罗丹明b 体系中加入砷后，二氯荧光黄的荧 光强度变化不大而罗丹明b 的荧光强度却大大降低，并且砷的加入量与体系的 f d f a 里良好的线性关系，据此提出了二氯荧光黄一罗丹明b 能量转移体系测 定砷的新方法。实验表明：a s ( v ) 的含量在0 0 5 1 嘞g m l 范围内与体系的f i ：, f a 呈良好的线性关系，方法最低检出限为1 2 5 n g m l ，应用该法测定了饲料中的无 机砷的含量，回收率为9 1 9 8 ，相对标准偏差为0 9 5 0 。 本文探索了荧光共振能量转移光谱法的理论体系，提出了将荧光共振能量 转移光谱法作为一种新型光谱法用于食品监测，本文研究建立的这些新方法灵 敏度高、操作简便，成本低廉，在食品监测方面具有实际应用价值。本文也对 新方法的作用机理进行了探讨。 关键词：荧光共振能量转移；食品监测：吖啶橙；番红花红t ：钙黄绿素 酚藏花红；二氯荧光黄；罗丹明b ；杀虫单；亚硝酸根，砷 s t u d yo nt h es p e c t r o m e t r yo ff l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g y t r a r t s f e ri nf o o dd e t e c t i o n m 两o r ：e n v i r o n m e n t a ls c i e n c e p o s t g r a d u a t e ：l ix i a o - y a n s u p e r v i s o r ：l is h u w e i t h es p e c t r o m e t r yo ff l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e ri sak i n do fm o l e c u l e e m i s s i o ns p e c t r u ma n a l y s i s e sw h i c hi ss e n s i t i v e ，w e l l s e l e c t i n ga n dc o n v e n i e n t i t h a sb e e nd e v e l o p e df a s t l yi nr e c e n ty e a r s i nt h i sp a p e r , n e wf l u o r e s c e n c ep r o b e s w e r ef o u n d e d ，w h i c hw e r ec o m p o s e db yf l u o r e s c e n c ed o n o ra n da c c e p t o r i tw a s a p p l i e di nt h ed e t e c t i o no ft h et o x i cm a t e r i a l si nt h ef o o d ，w h i c hm a d et h i sm e t h o d o fa n a l y s i st ou s ew i d e l ya n da l s om u c hc o n t r i b u t i o nt ot h ef o o da n a l y s i s t h er u l e o ft h ee f f e c to fa n i o n i cs u r f a c t a n ts o d i u md o d e c y l s u l f a t e ( s d s ) o nf l u o r e s c e n c e r e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e rw a ss t u d i e dt h e o r e t i c a l l y i nt h em e d i u mo fs d s ，t h er u l eo ft h ef u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e ro f f o u ri m p o r t a n ts y s t e m s r a c r i d i n eo r a n g e ( a o ) 一s a f r a n i n ex ( s d 、c a l c e i n - p h e n o s e f r a n i n e ( p f ) 、d i c h o l o f l u o r e c e i n ( d c f ) 一r h o d a m i n eb ( r h b ) a n dc a l c e i n - - s t , w e r e s t u d i e d t h er e s u l ts h o w e dt h a tt h ee f f e c t so ff l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e r o ft h ef o u rs y s t e m sw e r eu n a p p a r e n tw i t h o u tt h es d s w h e na d d i n gt h es d st ot h e c o l l o i dc o n c e n t r a t i o n ，t h ee f f i c i e n c yo f f l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e r r e a c h e dt h em a x i m u m a n dt h ew o r k i n gw a y so ft h ed i f f e r e n tq u a n t i t i v es d sw i t h t h ed y ew e r ec o n j e c t u r e d b a s e do nt h ep h e n o m e n o no fe n e r g yt r a n s f e ro ft h ea oa n dt h es t , w ef o u n dt h a t b o t ho ft h ea oa n ds t sf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t i e sa p p a r e n t l yf e l ld o w nw h e na d d i n g t h en i t r i t ei n t ot h ee n e r g yt r a n s f e rs y s t e m ，a n dt h en i t r i t eq u a n t i t ya d d e dh a sag o o d l i n e a rr e l a t i o nw i t ht h es y s t e m sf w h i c hc o u l db es e tu pan e ww a yt o d e t e r m i n et h en i t r i t e t h ee x p e r i m e n t ss h o w e dt h a tt h en i t r i t eh a st h eg o o dr e l a t i o n w i t ht h ef t g f ao ft h es y s t e mw h e nt h ec o n c e n t r a t i o no fn i t r i t ew a s0 0 kg m lt o 1 咂g m l ，a n dt h ed e t e c t i o nl i m i tw a s1 7 3n g m 1 t h i sc h e c k u pe x a m i n e dt h e d e t e r m i n a t i o no fn i t r i t ei nt h eh a ms a u s a g e ，w i t ha na v e r a g er e c o v e r yw i t h i nt h e r a n g eo f1 0 5 o 1 1 2 5 a n dar e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o no f1 0 5 - - 3 4 7 a n dt h er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e ro f c a l c e i n + p d “】a n dt h es th a sb e e ns t u d i e d a n dt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo f 【c a l c e i n + p d = + 】a p p a r e n t l ya d v a n c e d ，w h i l et h es t j a s ta d v a n c e dal i t t l ew h e na d d i n gt h es h a c h o n g d a n a n dt h es h a c h o n g d a nq u a n t i t y a d d e dh a sag o o dl i n e a rr e l a t i o nw i t ht h es y s t e m sf d f a ，w h i c hc o u l db cs e tu pa n e ww a yt od e t e r m i n et h e s h a c h o n g d a n t h ee x p e r i m e n t ss h o w e d t h a tt h e s h a c h o n g d a nh a st h eg o o dr e l a t i o nw i t ht h ef d f ao ft h es y s t e mw h e nt h e c o n c e n t r a t i o no fn i t r i t ew a s0 5 1 0 7t o1 2 x l o 一6 m o l l , a n dt h ed e t e c t i o nl i m i tw a s 2 0 1 x 1 0 8 m o l l t h i sc h e c k u pe x a m i n e dt h ed e t e r m i n a t i o no fs h a c h o n g d a i li nt h e r i c ea n dc h a f f , w i t ha na v e r a g er e c o v e r yw i t h i nt h er a n g eo f8 7 5 1 1 0 o t h er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e ro fd c fa n dr h bh a sb e e ns t u d i e d a n dt h e f l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fr h ba p p a r e n t l yd e c r e a s e d ，w h i l et h ed c f j u s td e c r e a s e da l i t t l ew h e na d d i n gt h ea sa n dt h ea s q u a n t i t ya d d e dh a sag o o dl i n e a rr e l a t i o nw i t h t h es y s t e m sf d f a ，w h i c hc o u l db es e tu pan e ww a yt od e t e r m i n et h ea s t h e e x p e r i m e n t ss h o w e dt h a tt h ea sh a st h eg o o dr e l a t i o nw i t ht h ef d 门f ao ft h es y s t e m w h e nt h ec o n c e n t r a t i o no fn i t r i t ew a so 0 5t ol 叫e d m la n dt h ed e t e c t i o nl i m i tw a s 1 2 5 n m 1 t h i sc h e c k u pe x a m i n e dt h ed e t e r m i n a t i o no fa si nf e e d i n g s t u f fw i t ha n a v e r a g er e c o v e r yw i t h i nt h er a n g eo f9 1 t o9 8 a n dar e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n o f 0 9 5 0 t h et h e o r e t i cs y s t e mo ft h ef r e tw a ss t u d i e di nt h i sp a p e r a n dt h ea p p l i c a t i o n o ft h ef l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e ri nt h ed e t e c t i o no ff o o da san e w a n a l y s i so fs p e c t r u mw a sb r o u g h tf o r w a r d t h e s ea n a l y t i cm e t h o d sb u i l ti nt h i sp a p e r w e r es e n s i t i v e ，c o n v e n i e n t ，c h e a pa n dp r a c t i c a l t h em e c h a n i s mo ft h en e wm e t h o d w a sa l s od i s c u s s e di nt h i sp a p e r k e yw o r d s ：f l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e r ( f r e t ) ； f o o d d e t e c t i o n ； a c r i d i n c o r a n g c ( a o ) ； s a f f r o n t ( s 1 3 ；p h e n o s ef r a n i n e ( p f ) ； c a l c c i n ； d i c h o l o f l u o r c c e i n ( d c f ) ；r h o d a m i n cb ( r h b ) ；s h a c h o n g d a n ；n i t r i t e ；a r s e n i c 荧光菸振能益转移光漕法用十食品监测的研， 1 前言 在第十届全国人民代表大会常务委员会第十六次会议上，国务院副总理吴 仪作了关于食品药品安全形势与监管工作的报告，报告指出，当前我国食品 药品安全形势仍然严峻，监管工作面临诸多顽症，解决这一问题的关键在于动 员全社会的力量，加强科技开发，进行技术创新。“民以食为天，食以净为本”， 食品安全问题一直是人们所关注的重点【”，是关系到国计民生的大事。近来， 国内各大媒体先后曝光了一系列有关食品安全的事件。例如劣质奶粉“喂肥” 大头儿、亚硝酸盐严重超标中毒、广州假酒导致多人中毒死亡等事件。国外也 有类似的问题，美国联邦安全署( f s a ) 在2 0 0 1 年的一次关于食品安全的全国 性调查结果显示，五分之三以上的人都非常关注食物中毒( f o o d p o i s o n i n g ) 和 疯牛病( b s e ) ，农药( p e s t i c i d e ) 、食品添加剂o da d d i c t i v e ) 的使用以及目前 较受争议的转基因食品也都引起了相当一部分人群的恐慌 2 3 0 不安全的食品产生的危害主要集中在5 个方面：微生物危害，农药和杀虫 剂残留，滥用食品添加剂，化学危害( 包括生物毒素) ，假冒食品。滥用食品添 加剂是当今食品加工过程中非常令人关注的问题，食品制作中对食品添加剂的 使用量有严格要求，如果添加剂过量将使人出现疾病甚至死亡。例如亚硝酸钠 是一种在腌制肉品广泛使用的食品添加剂，如果腌制食品中使用超标，也有可 能造成人的中毒甚至死亡。各种食品添加剂能否使用、使用范嗣痕最大使用量， 各国都有严格规定并受法律售4 钧。随着人们对徽痕量化学物质的生物功能认识 水平的深入，世界各国对食品添加荆的使用限制越来越严格。 滥用饲料添加剂引起的动物性食品的危害也不容忽视。近年来的科学研究 发现，在饲料中过量添加某种或某几种元素，会促进动物的生长，预防某些疾 病的发生。目前最常见的是在饲料中添加过量的铜( 常常达到2 5 0 m g k g ) 、锌 ( 达3 0 0 0 m g k g ) 和砷制剂( 如m 散酸) 。然而，动物吃了这种大量添加各种化 学物质的饲料后，过量的微量元素将被吸收并在动物的肌肉、组织中积累，从 而引起养哺生物中毒。例如砷化物在肠道中具有抗生素作用，能增重和改进饲 料利用率，因此饲料生产厂家使剧砷制剂作为饲料添加刹。进入动物体内的砷 一部分被动物吸收，引起动物食品的污染，还有一部分通过粪尿排出，并在处 于生态系统底层的植物和动物( 位类、贝介类) 中富集最后转移到处于生态 荧光共振能量转移光潜法用于食品监测的研究 食物链顶端的人体中，危害人类健康。砷制剂引起的深层次污染影响己发展到 分子生态污染，引起蛋白质、d n a 、酶等生物大分子的生态紊乱，进而使动物 和人类发生三致。由于滥用饲料添加荆的问题相当严重，我国农业部于1 9 9 7 年9 月发布了允许作饲料药物添加剂的兽药品种及使用规定，规定了3 0 种 饲料药物添加剂的适用动物、最低用量、最高用量、停药期、注意事项等。但 有些不法分子在利益的驱使下，置国家的法律不顾，在饲料中违规添加各种饲 料添加剂导致食品污染。有关调查人员曾对南充、成都、雅安三个不同生态地 区的市售新鲜猪肉和成都地区市场的新鲜猪肝中的砷残留量进行了抽样检测， 结果发现，所有样品中砷残留量超标都在1 0 0 以上。 农药残留是食品安全的另一大危害。我国是农药生产和使用大国，农药使 用量居世界首位，每年达8 0 1 0 0 万吨，居世界第二位i4 1 。农药的发明和使用 无疑大大地提高了农作物的产量，但食品中的农药残留对人类健康造成的负面 影响也日益显露出来。人类食入被农药污染的食品、粮食、水果及蔬菜后，残 留在其中的农药会储存在体内，而且代谢缓慢，最后造成人类急性或慢性中毒， 导致严重的危害。卫生部统计资料表明1 5 1 ，1 9 9 9 年我国由于农药残留引起的食 菜性食物中毒事件共有3 7 起。2 0 0 0 年5 月，农业部农药检定所组织北京、上 海、重庆、山东和浙江5 省市的农药检定所，对5 0 个蔬菜品种、1 2 9 3 个样品 的农药残留进行抽样检测，农药残留量超标率达3 0 ，残留浓度高者为允许残 留量的几十倍。有关部门的科学试验还证实，清水冲、开水烫或者用洗洁精清 洗都难以根除残留在蔬菜中的超标农药，因此我； 】必须加强对食品中的农药残 留监测，以确保食品安全。 荧光共振能量转移光谱法( f r e t ) 是一种新兴的分子光谱分析方法，它的 出现曾解决了生物学中很多难以解决的问题，作为分子发射光谱分析的一个重 要分支，荧光共振能量转移光谱法比原有的分子荧光分析给出了更为# 富的光 谱信息，提高了分析的灵敏度和选择性。近年柬荧光共振能量转移已经应用到 月：境分析和药物分析等领域，解决了一些重要的分析中问题，展现了良好的发 展前景。 本课题将荧光共振能量转移光谱法用于食品监测的研究就是在这洋的背景 f 提出来的。荧光共振能量转移现象是p e r r i n 庄2 0 吐纪初首次发现1 m1 9 4 8 由f 6 r s t e r 创立了系统的偶极一偶板相互作用发7 e 能量转移的理论。荧光共振能 荧光共振能量转移光谱法甩于食品监测的研究 量转移是指荧光能量给体与受体之间通过偶极一偶极的耦合作用以非辐射方式 转移能量的过程，荧光共振能量转移又称为长距离能量转移，具体表现为：一 对合适的荧光物质可以构成一个能量给体和能量受体对，它们之间由于偶极一 偶极的相互作用，激发给体分子的能量h 可能被传递给受体分子，而后受体分 子通过发射光子h u ( h u h u ) 而松弛，同时伴随它们荧光寿命的相应缩短和拉 长。这种能量转移的效率和给体的发射光谱与受体的吸收光谱的重叠程度、给 体与受体的跃迁偶极的相对取向以及给体与受体之间的距离有关。并且在其他 条件一定的前提下，能量转移的效率与距离的六次方成反比，在l l o n m 范围 内的距离的细微变化都能反映在能量转移的效率上。因此，荧光共振能量转移 是高度特异的“分子尺”。1 9 6 7 年，s t r y e r & h a u g l a n d 提出将能量转移作为光学 尺，用来测量1 o 6 0n m 之间的距离。荧光共振能量转移技术为大分子内部 结构的测定及动态监视提供了一条快速、简捷、灵敏的途径，并且作为一种极 为有效的光学分子尺在生命科学中发挥了巨大的作用。光学分子尺在生命科学 中的引入大大推动了生物检测的发展。近年来荧光共振能量转移技术主要用于 体外监测方面，包括核酸检测、蛋白质结构、功能分析、免疫分析。机理研究 的领域涉及到生物大分子之间的相互作用、反应机理、细胞器的研究等等。除 此之外，许多研究工作者也进一步将荧光共振能量转移光谱法用于环境分析、 药物监测等领域。1 9 8 9 年，w a n gb a im a 等人首次将荧光共振能量转移光谱法 用于m g “的测定，测定结果比相应的光度法灵敏度提高十倍以上。在此以后， 国内学者相继利用荧光共振能量转移光谱法分别测定了f e ( i i ) 、土壤总磷、 c u ( i i ) 、维生素b 。等，这些新方法的建立都比相应的光度法的灵敏度要高，由 此荧光共振能量转移光谱法在环境中的应用有了长足的发展。 本文利用荧光共振能量转移光谱法的这些优点，创新性地将其应用到食品 监测中来，试图为食品监测寻找一种简便、快速、灵敏的途径。本文的研究目 的有三个：第一，筛选并建立新的由荧光给体和荧光受体组成的荧光探针对， 在现有的染料试剂中寻找新的荧光共振能量转移探针，为荧光共振能量转移光 谱法理沦体系做出些贡献；第二，扩大荧光芡振能量转移光谱法的应用领域， 用该技术建立一些可行的新方法i ：将新方法用于实际食品分析中来；第三，继 续前人的j f ：作，设计表面活性剂对不同体系的荧光共振能量转移对的转移效率 的实验，对表面活性剂影响这一重要影响因素进行深入研究，对荧光共振能量 。旋光共振能量转移光潜法用于食品监测的研究 转移的理论做出有意义的探索。 本文以荧光共振能量转移光谱法为研究手段，根据待测物的浓度与荧光共 振能量转移体系的f d 门f a 成线性关系特点，建立了应用荧光共振能量转移光谱 法测定食品添加剂亚硝酸根、农药杀虫单以及饲料中无机砷的方法。本文的研 究工作扩大了荧光共振能量转移的应用领域，为食品监测提供了一种灵敏度高、 操作简便的新方法，从而为进一步完善测定此类物质的国家标准提供了一定的 实验依据。 4 荧光共振能量转侈光谱法用于食品监测的研究 2 概述 2 1 食品监测分析方面的研究概述 2 1 1 食品中亚硝酸极的分析方法概述 食品中添加过量的食品添加荆，会导致人发生疾病，严重的还会导致死亡。 其中，亚硝酸盐是食品中常见的食品添加剂，亚硝酸根是致癌物质n 亚硝胺的 重要前体，因此在食品添加剂的检测中的亚硝酸根的检测就具有重要的意义。 目前测定亚硝酸根的方法较多，有重氮偶合比色法、极谱法，色谱法，催化光 度法，荧光光度法，化学发光法等检测方法。其中国内外测定亚硝酸根的标准 方法仍然是重氮偶合比色法硒1 ，该法基于在p h 2 o 3 5 缓冲溶液中，副品红与 n 0 2 作用而明显褪色，据此测定亚硝酸根。副品红在p h l 6 范围内水溶液为 深红色，实验测得其吸收峰为5 4 0 n m ，副品红与亚硝酸根的作用产物为无色物 质，并不影响副品红的吸收峰位景。该法选用5 4 0 n m 为测量波长，在选定的 实验条件下，n 0 2 浓度在0 3 pg l 范围内与a a 呈线性关系，回归方程为 a = 0 0 0 2 + o 0 6 0 c ( 2 5 m l 中n 0 2 。pg 数) ，相关系数为r = 0 9 9 7 方法检测限 为6 4 ug l 。该法较g r i e s s 法简便，准确、无毒：较甲基紫褪色光度法灵敏度 高，检测限更低，相对偏差为2 8 ( n = 6 ) ，平均相对误差为一2 4 ，标准加 入回收率为9 9 1 1 0 3 。但是该法的显色反应稳定性较差，正因为如此，分 析工作者对此法进行许多改进并建立了许多新的方法体系，由于光度法具有仪 器简单易得，灵敏度高，检测限低等优点，因此催化光度法、化学发光法、分 子荧光光谱法、流动注射分光光度法等被广泛应用。1 9 7 8 年m o n t e sr 等使 用溴酸钾作为氧化剂测定n 0 2 一以来，从根本上改变了经典方法的模式，为n 0 2 的无毒试剂测定开辟了新的道路。但是催化光度法虽灵敏，但其条件不易准确 控制，稳定性较差，选择性也不是很好，且b r ，i 。，s c n 一，v ( v ) 等仍有干扰。 此外，唐宏武喁：等研究了在盐酸介质中，亚硝酸根与亚铁氰化钾反应，芏成铁氰 化钾：f e ( c n ) 6 4 - + n o ：+ 2 h + = f e ( c n ) 6 。+ n o + h 1 0 ，将该反应与鲁米诺k 3 f e ( c n ) 6 化学发光反直帽偶合，间接测定n o ：的含量。芷最佳实验条件下， 荧光共振能量转移光谱法用于食品监测的研究 n 0 2 在1 1 0 8 9 m 卜一6 1 0 1 9 m 1 范围内与发光强度呈良好的线形关系。检测 限为3 6 1 0 1 9 m 1 。该法的选择性较好：除等量f c “，n i 2 + 产生正干扰，等量 c u 2 + 产生负干扰，一般常见离子的共存允许量都很大，用于天然水，正常人唾 液和食品中亚硝酸根的测定，开辟了一种新的测定方法。窦宪民吟1 等研究了将 亚硝酸盐在酸性条件下氧化亚铁氰化钾的反应和尿素铁氰化钾鲁米诺化学发 光反应偶合一起，建立了一种测定亚硝酸根的新方法，检出限为5 0 x1 0 - “g m 1 。 化学发光分析方法具有灵敏度高，操作简便，选择性好，仪器简单，很有希望 发展成一种在线监测方法或现场监测手段。但发光体系单一，对操作人员技术 要求较高。冯素玲。1 等在硫酸介质中，亚磷酸根还原吡咯红y ，使其荧光淬灭， 据此提出了一个测定痕量亚硝酸根的新的荧光分折方法。该法的检出限为 2 7 n g m l ，线形范围为6 0 8 8 n g m l 。可直接用予电厂凌水，自来水，井水中亚 硝酸根的测定。朱展才n 等建立了碘化钾与亚稍酸根氧化还原生成游离碘， 使异硫氰酸荧光素荧光淬灭测定亚硝酸根。该法的线性范围为2 5 1 0 0 u g l ，回 归方程f = 7 9 8 c 1 0 5 ，r = 0 9 9 9 0 ，方法的检出限为1 2 u g l 。张爱梅n 2 3 等建立了 磷酸介质中，溴酸钾氧化吡咯红8 使荧光淬灭测定亚硝酸根。该方法线性范嗣 为5 6 0 g l ，检出限为2 u g l 。另外郑肇生，吴和舟n 引等基于稀硫酸介质中， 亚硝酸根催化溴酸钾氧化荧光素，建立了动力学荧光法测定的新方法。该方法 的线性范围为2 - 8 0 n g m l ，王克太h 钔等建立了催化动力学流动注射荧光法测定 微量亚硝酸根的新方法。方法的检测限为3 5ug f l ，线形范围为8 0 1 0 0 0pg l ， 进样频率为6 5 次m 。由于荧光光度法是新发展起来的测定方法，该系列方法具 有快速，灵敏，操作简便，干扰少，试剂易得。但其条件不易准确控制，稳定 性有待进一步提高。1 9 9 4 年c h a u r a s i aa “卯等将天然水样注入0 ：3 6 m m 0 1 l h c i 的载流液中，与1 0 - 7 0 m g l 硝基苯胺流混合，于3 6 0 n m 处光度测定重氮化阳离 子，从而建立了测定亚硝酸根流动注射分光光度法。 表2 1 催化光度法测定亚硝酸根的摘录 介质 h ：s 0 4 h 2 s 0 4 溶解氧 k b r 0 3 s c n 。 健那绿 线性范嗣及检出限 墨譬碧，蠢 0 0 2 0 0 5ug m l2 51 6 0 1 0 8ug m l5 01 7 垄垄茎堑堂堂堑竺垄鐾鲨星兰童曼些望塑里! i n z s o 。 k b r 0 3 酸性品红0 0 6 - 0 4 2 u g m l 4 51 8 m s 钆溶解氧溴邻苯三酚红0 0 0 5 1 0 u g m l 7 01 9 h ，s 0 4k b r 0 3 吖啶橙 m 1 1 2 i 0 4 m o l l 2 5 2 0 h ，s 0 4k b r 0 3 酸性铬深蓝o 1 0 5 0 m g n l l 8 02 1 h 2 s 0 4 k b r 0 3乙基橙 5 1 0 01 1g m l 7 02 2 h 2 s 0 4k b r 0 3 曙红0 0 1 0 2 m g l 3 02 3 m p 0 4k b r 0 3棉红0 4 0 2 0 u g l 1 0 02 4 h 3 p o 。 k a r 0 3 中性红 2 0 - 1 6 0pr l 5 02 5 h 3 p 0 4 k a r 0 3 罗丹明b0 5 - 4 0 n g m l 5 0 2 6 h 3 p 0 4 k b t 0 3茜素绿0 0 t - o 1 2 u9 7 i n l 6 02 7 h 3 p 0 4 k b r 0 3孔雀石绿0 3 1 3 ug m l 2 52 8 h 1 p 0 4 k b r 0 3 亮绿s f0 0 5 - 2 0 a g m l 5 02 9 h 1 p 0 4k b k ) 3 甲基紫0 2 5 1 2 u g 5 0 m l 2 53 0 h 3 p 0 4 k b r 0 3溴甲酚紫0 0 1 0 4 m g l 2 5 3 1 h ，p 0 4k b r 0 3 吡咯红b o ，0 ( 3 5 一o 1 5 m g l 5 53 2 h 3 p 0 4 k b r 0 3中性红0 ，0 0 0 2 0 0 0 8 u g m l 2 5 3 3 h ，p 0 4k b r 0 3 吖啶红 1 0 - 9 0 u g l 5 0 3 4 h 3 p 0 4 k b r 0 3靛红0 3 - 2 pg 2 5 m l 8 53 5 h ，p 0 4k b r 0 3结晶紫0 6 - 1 2 0 m g 2 5 l 室温 3 6 h 口0 4 k b i 3 3中性红0 0 5 0 4 0 ug 2 5 m i 5 03 7 h 、p 0 4k b r 0 3 维多利亚蓝b2 , 5 ) ( 1 0 - 9 9 m l 一 3 8 h 、p 0 4k b r 0 3绿酚红0 0 4 1 4 m g l 6 03 9 n 3 p 0 4 k b r 0 3 中性红2 - 1 0 u g l 6 04 0 h 3 p 0 4k b r 0 3 考马斯亮蓝g0 0 8 - 0 4 8 u g l 6 0 4 1 h a c - n 4 a c k b f 0 3 喹哪啶红0 0 0 4 - o 1 5 m g l 8 5 4 2 p h - - 4 0 h ，p 0 4k b r 0 3 酸性铬蓝k0 - t o u g 2 5 l l l l 8 0 4 3 h c o o h k b r 0 3甲基橙0 - o 2 0 u g m l 1 0 ( 3 4 4 一一 k b r 0 3 甲基橙o - 1 4 u g 1 0 m l 7 4 4 5 翌! ! 旦!垄塑墼塑 至垫垒! ：! ! ：堑竖! !，堑! 生 表2 2 荧光法测定亚硝酸根的摘录： 介质体系 线性范同 检山限 壅l 壁 h 2 s 0 4 焦r g h ：s 0 4 罗丹明6 g h c i中性红 o - 0 1 4 u g m l 0 0 2 u g m l o 0 1 o 1 6u g m l o 0 1 u m l 4 0 2 4 0 x 1 ( 3 9 9 m l 0 2 卸l 4 7 4 8 4 9 7 鍪娄苎篓壁量堡整垄堕兰星! 堡墨些塑竺型塑 h c i罗丹明3 g o - 2 2 0 x i 0 9 9 m ll x l 0 9 9 m l 5 0 h c i 藏红t4 2 0 0 x l f f 9g m l 4 x 1 0 9 9 m l 5 1 n a o h 酪氨酸 1 0 - 2 0 0 x 1 0 9 9 m l0 2 4 j f g m l 5 2 h 2 s 0 4吖啶红0 0 1 0 7 u g m l o 0 1 u g m l 5 3 h c i 吖啶红3 b 4 3 2 0 x 1 0 g g m l0 9 8 x l o g g m l 5 4 h c i 维多利亚蓝b o 0 1 5 0 5 u g m l0 0 0 5 9 9 m l 5 5 h c i k i 、异硫氰酸荧光素 2 5 1 0 0 u g m l1 2 社g l 5 6 h c i k i 、罗丹明b 1 0 1 2 0 # g m l3 6 i c g l 5 7 坚望型：里坚! 竺! 銎堂些! ：墅眭塑 墨! 二! ：些兰垄查鎏型塞垩塑墼堡竺塑墨： 介质体系线性范围 检出限文 献 8 荧光共振能量转移光谱法用于食品监测的研究 2 1 2 饲料中砷的分析方法概述 随着畜牧业的发展，人们对畜产品的消费需求已由过去的数量型转变为质 量型，追求无污染、无残留和无公害的安全食品已逐渐成为人们的消费时尚， 饲料行业也由关注产品产量的增加，转变为关注饲料产品质量的提高和对畜禽 乃至对人类安全性的影响。而现在规模化畜禽养殖生产中，人们普遍在畜禽饲 料中添加抗生素，激素和化学合成药物等 6 5 3 但这些物质的长期使用，引起病 原微生物产生抗药性以及畜产品药物残留和环境等问题，严重威胁人类健康。 例如家畜若摄入过量含砷饮水和含砷饲料，可引起中毒，慢性中毒的症状为消 瘦，背毛粗乱，有些掉毛、湿疹，偶尔有肌肉麻痹，急性中毒的表现为急性肠 胃炎伴有食道炎，鼻炎和眼结膜炎，步行踉跄、口渴、消瘦、流诞、虚脱等， 尸检有严重胃肠炎。人吃了这种畜禽后，这些微量元素同样会在生物体内积累， 造成人体内这些微量元素过量，从而引起人的中毒。由此可见在饲料中添加的 这些微量元素一旦超过国家标准，会给人类带来极大的危害。所以饲料中砷的 测定也就成为了当前饲料添加剂分析中的一个重要指标之一。目前饲料中砷常 用的测定方法有分光光度法，原子吸收法，原子荧光法，色谱法，极谱分析法阳6 一”3 。近年对猪肉产品中砷有害物质的检测方法多用氢化原子荧光光谱法。 但在实际检测中，该方法因仪器价格昂贵，终端处理要求高，操作过程复杂， 不能广泛应用。 比色法是测定砷的经典方法，目前使用仍很广泛，美国和日本水质控制分 析标准也用n - - 乙基二硫代氨基甲酸银( a g d d c ) 法。h o w a r d 。等用a g d d c 法，在控制硼氢化钠还原时的p h 值的情况下，在同一样品中进行三价砷和王l 价砷的分别测定，检出限为0 1 n g m l 。李万春盯23 在不同d h 介质中，用硼氢 化钠作还原剂，结合新银盐光度法，提出了天然水中痕量三价砷和五价砷重量 的测定方法，该法灵敏度大大高于a g d d c 法，三价砷及五价砷的检出限为 0 1 6 p p b 和o 3 6 p p b 。 随着原子吸收光谱仪的改进和分析技术的进步，原子吸收光谱法测定砷得 到了广泛应用。a g g e r r ”1 等分别1 笙不同的p h 值下用硼氧化钠将砷还原为a s h j ， 然后用氩一氢火焰原于吸收光谱法测定三价和五价砷。h o w a r d 和z a v a r “。刚 荧光拭擞能量转移光潜法用f 食品监测的研究 硼氢化钠还原各种形态的砷的化合物成相应的氢化物后，经冷冻收集，分布挥 发，用石墨炉原子吸收光谱法进行a s ( ) ，a s ( v ) ，m m a ，d m a 的分别测定。 o u l a v o 。7 5 3 等以硼氢化铺作还原剂，氢一空气火焰作为原子化器，用原子 荧光光谱仪测定了砷，方法的检出限为0 0 4 g t , ；t a om 3 等在控制水样p h 的 条件下，用液氮冷冻收集形成的氢化物，然后再用原子荧光法测定了a s 佃田， a i s ( v ) ：l e y d e n 等将样品的a s ( m ) 用二苄基二硫代氨基甲酸盐沉淀，滤液中的 a s ( v ) 用亲氧化铁使之共沉淀，分别用x 一射线荧光光度法测定触( ) 和 a s ( v ) 。 分光光度法测定砷的应用也较为广泛，现将分光光度法测定砷的文献摘录 如下： 。；塞! 二! ! 坌堂堂堡鲨型塞壁塑查鎏 显色体系测定酸度m o l 几 e ( l m o r k c m 1 ) 检出限及范围 文献 丁基罗丹明b 一砷钼杂 多酸一p v a 1 2 4 砷铝杂多酸一c v p v a 砷钼杂多酸一乙基紫 一o p 砷钼杂多酸一孔雀石绿 一p v a 砷铝杂多酸一孔雀石 绿一吐温3 0 5 砷钼杂多酸一罗丹明 6 g 砷铝杂多酸一罗丹明 6 g p v a 砷钼杂多酸一c v p v a 0 0 7m o l l 8 2 s 0 42 a 4 1 0 s 0 0 7m o l l h 2 s 0 4 1 9 3 x 1 0 s 0 1 7 0 2 5 2 6 x1 0 s m o l l h 2 s 0 4 0 2 5m o l l h 二s 0 41 1 3 x 1 0 s o 3 5m o l l h 2 s o 2 2 1 x 1 0 s o 2 0m o l l h 2 s 0 42 1 4 x1 0 - 0 1 8 0 2 m o l l h ：s 0 4 7 7 o o 0 2 # g m l 7 8 0 o 2 舢g m l 7 9 o o 5 , u g m l 8 0 0 o 2 8 z g m l 8 1 0 0 2 抖g m l 8 2 0 0 5 2 9 m l 8 3 5 1 0 0 n g g 8 4 荧光共振托蛩转移光谱法用f 食品监测的 ，肝究 2 1 3 农药杀虫单的分析方法概述 食品中的农药残留给人类健康造成的负面影响越来越受到普遍关注，高残 留、高毒性农药的环境污染和残留问题，引起世界各国的重视。人类食入被农 药污染的蔬菜食品后，残留在其中的农药会在人体内累积或富集，当富集到一定 浓度时，将造成人体急性或慢性中毒。因此，发展快速、可靠、灵敏的食品蔬菜 农药残留分析方法迫在眉睫。农药按防治对象可以分为：杀虫剂、杀菌剂、除 草剂、杀螨剂和杀鼠剂等。杀虫单是2 0 世纪7 0 年代我国自行开发的农药新品 种。化学名称为2 一二甲胺基l 一硫代磺酸钠基3 一硫代磺酸基丙烷，属广谱型 沙蚕毒类农药，对水稻上的二化螟，三化螟和纵卷叶螟有良好的防治作用。由 于它杀虫范围广，效果好，毒性中等，运输储存稳定性好等优点，在水稻上得 到广泛的推广和使用啪 8 帅。国家标准对杀虫单农药韵l 磐婺别方法有；h p l c ( 高 效液相色谱法) ：t l c ( 薄层色谱法) ；珉( 红外光谱法沛1 非水流定法”卜。1 9 9 6 年，牟兰等应用薄层色谱分离库仑滴定法测定了2 杀虫单的含量，随后，牟兰采 用荧光光度测定了米粉中的杀虫单含量，该法基于在p h 6 7 的磷酸盐缓冲溶 液中，钙黄绿素有荧光，p d 2 + 与其反应使其荧光消失。由于杀虫单与p d n 形成 的配合物比钙黄绿素一钯配合物更稳定，杀虫单与钙黄绿素钯反应使钙黄绿素 游离重显荧光，以4 9 4 和5 1 4 n m 为激发波长和发射波长，其线性范围为2 1 0 4 3 x 1 0 m o l l ，检出极限为6 1 0 一m o l l 。非水滴定法是用石油醚萃取除去样品 中原有的沙蚕毒，游离胺，氯化物等杂质，在盐酸介质中加热水解，杀虫单生 成二氢沙蚕毒，加碱中和至碱性，二氢