（运动人体科学专业论文）运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏cd4cd25treg表达的影响.pdf

游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响中文摘要中文摘要研究目的：通过对实验前、后小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的表达水平及血清i l - 2 、i l - 1 0等免疫指标变化的分析，研究和探讨游泳运动及其联合冬虫夏草对机体免疫功能的影响。研究方法：采用动物实验法，将1 2 0 只受试小鼠随机分为对照组( 3 0 只) 、冬虫夏草组( 3 0只) 和运动组( 3 0 只) 、冬虫夏草+ 运动组( 3 0 只) 。在统一饲养条件下，对照组不运动；运动组进行为期4 周的负重( 5 体重) 游泳运动；冬虫夏草组运动期予以冬虫夏草配制溶液灌胃；冬虫夏草+ 运动组进行运动并同期予以冬虫夏草溶液灌胃。分别于运动干预前及第2 、4 周末次游泳后2 4 h ，摘取小鼠脾脏和胸腺，采集血样。实验结束后，统一计算脾指数和胸腺指数，流式细胞法检测脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g细胞的表达，e l i s a 法测定血清i l 2 和i l 1 0 水平。运用s p s s l l 5 软件处理测试所获数据。研究结果：1 运动组小鼠脾指数和胸腺指数4 周游泳运动后较对照组降低( p o 0 5 、p 0 0 1 ) ；冬虫夏草组小鼠脾指数增 j f l ( p o 0 5 ) ：冬虫夏草+ 运动组小鼠脾指数和胸腺指数无明显改变( p o 5 ) 。2 运动组小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的表达水平于运动2 周、4 周时较对照组上调( p 0 0 1 、p 0 0 5 ) ；冬虫夏草+ 运动组c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达水平于运动4 周时较对照组上调( p 0 0 5 ) ：且运动组水平高于冬虫夏草+ 运动组( p o 0 1 ) 。3 运动组小鼠血清i l 2 水平在运动2 周和4 周时较对照组升高( p 0 0 1 、p o 0 5 ) ；冬虫夏草+ 运动组i l 2 水平于运动2 周时较对照组升高( p 0 0 5 ) 。4 运动组和冬虫夏草+ 运动组小鼠血清i l 1 0 水平于运动4 周时较对照组升高( p 0 0 1 、p 0 0 5 ) ，且运动组高于冬虫夏草+ 运动组( p 0 0 1 ) 。中文摘要游泳运动及其联合冬虫夏草溶遮型尘垦壁壁! 旦! ：竺堕堕! 竺堕墅垒堕! 堕研究结论：1 4 周游泳运动可延缓小鼠脾脏生长，加快胸腺萎缩，从而影响免疫器官的发育和功能。2 4 周游泳运动可诱导t 细胞活化，使小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的表达水平和血浆i l 1 0 水平升高，诱导免疫偏移。3 冬虫夏草溶液可促进小鼠脾脏发育，减缓胸腺萎缩，对抗4 周游泳运动引起的小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达水平升高，维持体内免疫平衡。关键词：游泳运动c d 4 + c d 2 5 + t r e gi l 一2i l - 1 0 冬虫夏草作者：赵建萍指导老师：吴明方r e s e a r c ho nt h es w i m m i n ga n dc o r d y c e p s e f f e c to nt h ee x p r e s s i o no fs p l e n i cc d 4 + c d 2 5 + t r e go fm i c ep u r p o s e ：a b s t r a c tt or e s e a r c ha n de x p l o r et h ee f f e c to ft h es w i m m i n ga n dc o r d y c e p ss i n e n s i so ni m m u n ef u n c t i o nb ya n a l y z i n gt h ec h a n g eo fe x p r e s s i o no fs p l e n i cc d 4 + c d 2 5 + t r e ga n ds e r u mi l - 2 ，i l - 10b e f o r ea n da f t e rt h ee x p e r i m e n t s m e t h o d s ：t h ee x p e r i m e n t a lm e t h o di sa n i m a le x p e r i m e n t a t i o n i nt h ee x p e r i m e n t ，12 0 m i c ew e r er a n d o m l yd i v i d e di n t oc o n t r o lg r o u p ( 3 0 ) ，c o r d y c e p sg r o u p ( 3 0 ) a n de x e r c i s eg r o u p ( 30 ) ，a n dc o r d y c e p sp l u se x e r c i s eg r o u p ( 30 ) u n d e rt h es a m ef e e d i n gc o n d i t i o n s ，c o n t r o lg r o u pd i dn o tt a k ee x e r c i s e ；e x e r c i s eg r o u pd i da4 - w e e k sw e i g h t - b e a r i n g ( 5 o ft h eb o d yw e i g h t ) s w i m m i n g ；c o r d y c e p sg r o u pw a so n l yf e dw i t l lc o r d y c e p sp r e p a r a t i o n ；a n dc o r d y c e p sp l u se x e r c i s eg r o u pd i de x e r c i s ea n dw a sf e dw i t hl i q u i do fc o r d y c e p sa tt h es a m et i m e t h es p l e n i ca n dt h y m u sw a st a k e na n db l o o ds a m p l e sw a sc o l l e c t e ds e p a r a t e l yb e f o r ee x e r c i s ei n t e r v e n t i o na n di n2 4h o u r sa f t e rt h el a s ts w i m m i n go ft h e2 n oa n d4 mw e e k a f t e rt h ee x p e r i m e n t ，t h es p l e e ni n d e xa n dt h y m u si n d e xw a sa c c o u n t e da l lt o g e t h e r , a n dt o o kf l o wc y t o m e t r yf o rd e t e c t i n ge x p r e s s i o no fc d 4 十c d 2 5 + t r e g ，a n de l i s am e t h o df o rm e a s u r i n gs e r u n li l 2a n di l 10l e v e l s s p s s11 5s o f t w a r ew a su s e dt op r o c e s st h ed a t ao ft h ee x p e r i m e n t s r e s u l t s ：1 a f t e r4 - w e e k ss w i m m i n g ，t h es p l e e ni n d e xa n dt h y m u si n d e xo fe x e r c i s eg r o u pr e d u c e dc o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ，p o o1 ) t h es p l e e ni n d e xo fc o r d y c e p sg r o u pi n c r e a s e d ( p 0 0 5 ) a n dt h es p l e e ni n d e xa n dt h y m u si n d e xo fc o r d y c e p sp l u se x e r c i s eg r o u pd i dn o tc h a n g e ( p o 0 5 ) 2 a f t e r4 - w e e k ss w i m m i n g ，c o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ，t h ee x p r e s s i o nl e v e l so fs p l e n i cc d 4 + c d 2 5 + t r e go fe x e r c i s eg r o u pi n c r e a s e di nt h e2 n da n d4 t hw e e k ( p 0 0 1 ，p o 0 5 ) t h ee x p r e s s i o nl e v e l so fc o r d y c e p sp l u se x e r c i s eg r o u pa l s oi n c r e a s e di n t h e4 t hw e e k ( p 0 0 5 ) a n dt h ee x p r e s s i o nl e v e l so fe x e r c i s eg r o u pw a sh i g h e rt h a nc o r d y c e p sp l u se x e r c i s eg r o u p ( p 0 01 ) 3 a f t e r4 - w e e k ss w i m m i n g ，t h es e r u ml e v e l so fl l - 2o fe x e r c i s eg r o u pi nt h e2 n da n d4 t hw e e ki n c r e a s e dc o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ( p 0 0 1 ，p 0 0 5 ) a n dt h es e r u ml e v e l so fi l 一2o fc o r d y c e p sp l u se x e r c i s eg r o u pi nt h e2 n dw e e ki n c r e a s e dc o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ( p 0 0 5 ) 4 a f t e r4 - w e e k ss w i m m i n g ，t h es e r u ml e v e l so fi l - 10o fe x e r c i s eg r o u pa n dc o r d y c e p sp l u se x e r c i s eg r o u pi nt h e4 t hw e e ki n c r e a s e dc o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p( p 0 0 1 ，p 0 0 5 ) ，a n dt h el e v e l so f e x e r c i s eg r o u pw a sh i g h e r ( p o 0 1 ) c o n c l u s i o n s ：1 4 - w e e k ss w i m m i n gc a l ld e l a yt h eg r o w t ho fs p l e e no fm i c ea n da c c e l e r a t ea t r o p h yo ft h e i rt h y m u s ，t h u sa f f e c t i n gd e v e l o p m e n ta n df u n c t i o no ft h ei m m u n eo r g a n 2 4 - w e e k ss w i m m i n gc a l li n d u c etc e l l sa c t i v a t i o na n dt h e ni n c r e a s et h ee x p r e s s i o nl e v e l so fs p l e n i cc d 4 + c d 2 5 + t r e ga n dt h es e r u ml e v e l so fl l - 10m i c e ，a n di n d u c ei m m u n ed e v i a t i o n 3 c o r d y c e p sc a l lp r o m o t et h ed e v e l o p m e n to fs p l e e na n ds l o wa t r o p h yo ft h y m u so fm i c e ，r e s i s tt h ei n c r e a s eo ft h ee x p r e s s i o nl e v e l so fs p l e n i cc d 4 + c d 2 5 十t r e ga f t e r4 - w e e k ss w i m m i n g ，a n dm a i n t a i nt h ei m m u n o l o g i cb a l a n c e k e yw o r d s ：s w i m m i n g ，c d 4 c d 2 5 一t r e g ，i l 一2 ，i l 一10 ，c o r d y c e p ss i n e n s i sl vw r i t t e nb y ：z h a oj i a n p i n gs u p e r v i s e db y ：w um i n g f a n g游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响l 前言1 前言1 1 选题依据免疫系统不仅是防御系统，而且是机体的“流动脑”，与神经系统、内分泌系统形成神经内分泌免疫( n e i ) 网络整合性地调节机体各种机能，维持机体稳态。而研究证实，中等强度运动能激活免疫系统并提高免疫功能；剧烈过量的运动则可能抑制免疫功能，诱发运动性免疫抑制。c d 4 + c d 2 5 + t r e g 是体内的一种对效应性t 细胞具有抑制作用的调节性t 细胞，以抑制性调节c d 4 + 和c d 8 + t 细胞的活化与增殖达到免疫负调节作用为其主要功能，对维持机体内环境稳定和自身免疫耐受、防止自身免疫性疾病的发生具有不可替代的作用。从c d 4 + c d 2 5 + t r e g 抑制性免疫调节入手，是研究运动性淋巴细胞亚群失衡导致机体免疫功能抑制的新途径。i l 2 是由活化t 细胞自分泌、并在t 细胞活化增殖中发挥重要作用的生长因子，也是维持胸腺及外周c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的发生和作用特性不可或缺的细胞因子。在机体免疫调节机制中，i l 2 主要介导反应性t 细胞和调节性t 细胞的回馈反应，即反应性t 细胞分泌的i l 2 维持并激活c d 4 + c d 2 5 + t r e g ，而c d 4 + c d 2 5 + t r e g又抑制了反应性t 细胞的i l 2 产生。因此，i l 2 对c d 4 + c d 2 5 + t r e g 在外周水平及其功能的维持起着非常重要的作用。i l 1 0 是以发挥抑制作用为主的一种独特的细胞因子，除其自身的免疫抑制功能以及在c d 4 + t 细胞活化过程中的协同作用外，l l 1 0 还可通过促进外周血c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的分化，扩大对c d 4 + t 细胞的调节作用，从而在维持免疫平衡中起重要作用。近期的研究发现，c d 4 + c d 2 5 + t r e g 亚型t r l 细胞可分泌i l 1 0 ，后者是c d 4 + c d 2 5 + t r e g 抑制免疫反应的主要途径之一。迄今，寻找有效方法预防运动性免疫功能下降始终是学者们所热衷的问题之一，应用营养补剂进行免疫调理普遍受到了学者们的重视。而中药在竞技体育中的研究和应用是我国的一大特色和优势。冬虫夏草以其调节阴阳、肺肾双补之特性以及补而不峻、温而不火之优势，受到运动医学领域的关注，被广泛应用于临床疾病的防治。鉴于此，本研究运用动物实验法，通过观察运动及其冬虫夏草溶液干预对小鼠t r e g 、i l 2 和i l 。1 0 的影响。探讨大强度运动对机体免疫系统功能的影响以及冬虫夏草溶液的有效干预作用。i 前言游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对4 , g 脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响1 2 文献综述1 2 1c d 4 + c d 2 5 十t r e g 细胞1 2 1 1 概述免疫调节性t 细胞( r e g u l a t o r ytc e l l s ，t r e g s ) 是一类对反应性t 细胞( r e s p o n s i v e t c e l l ，t r e s p ) 具有负向调节活性的细胞群，在胸腺中产生，以调节自身t 细胞反应为主要功能，对维持机体的内环境稳定和自身免疫耐受、防止自身免疫性疾病发生的过程中具有不可替代的重要作用【l 】。目前已经发现的t r e g s亚群有多种，而研究较多的是c d 4 + c d 2 5 + t r e g ，c d 4 + c d 2 5 + t r e g 特异性高表达属于f o x h e a d 家族分叉头翼状螺旋( f o r k h e a d w i n g e d h e l i ) 转录调节因子( f o r k h e a d w i n g e dh e l i xt r a n s c r i p t i o nf a c t o rp 3 ，f o x p 3 ) 。近年的研究结果表明，尚有一些不表达f o x p 3 却同样具有免疫调节功能的t 细胞，称之为f o x p 3 。t r e g 细胞，其中包括t h 3 细胞、t r l 细胞、c d 8 + t r e g 、c d 8 + c d l 2 2 + t r e g 、q a l 限制性c d 8 + t r e g 、c d 4 。c d 8 。t r e g 等。虽然各种不同来源的细胞可能在某些条件下具有一定的免疫抑制( 调节) 功能，但很多证据表明，c d 4 + c d 2 5 + t r e g 是以维持免疫耐受为“本职工作”的自然发生的( n a t u r a l l yo c c u r r i n g ) 专职的t r e g s 。1 2 1 2 来源与分化早在2 0 世纪7 0 年代，有学者发现某些c d 4 + t 细胞可以抑制免疫应答造成病理损伤。然而，由于受当时实验技术和条件的局限，不能将这群细胞加以分离以对其功能进行单独研究，致使这些早期研究结果在当时没能得到学术界的足够重视【2 1 。直至1 9 9 5 年，随着研究的深入，s a k a g u c h i 等发现，在正常人和小鼠的外周血及脾脏组织中的c d 4 + t 细胞中有一亚群细胞持续高表达c d 2 5 分子( i l 2受体n 链) ，这种c d 4 + c d 2 5 + t r e g 如果缺乏可引起自身免疫性疾病，而将c d 4 + c d 2 5 + t r e g 和c d 4 + 单阳性t 细胞共同过继转移，则能预防自身免疫病的发生。这一现象引起了人们对c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的广泛关注。c d 4 + c d 2 5 + t r e g 主要来源于c d 4 + c d 8 胸腺细胞，其在胸腺的发生依赖于胸腺内低密度、高亲和力的主要组织相容性复合体i i ( m a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t yc o m p l e xi i ，m h c i i ) 自身肽复合物的表达，或者依赖于外周自身抗原的胸腺内提呈，它的数量反映了胸腺内m h c i i 一自身肽复合物的复杂程度【3 】。在j 下常人和小鼠中的外周淋巴器官中有5 0 o - - 1 0 的c d 4 + t 细胞持续高表达c d 2 5 + 分子，说明c d 4 + c d 2 5 + t r e g 在币常人和小鼠中是以恒定比例存在的一种t 细胞亚群【4 j ；在游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响i 前言胸腺中有2 5 的c d 4 单阳性胸腺细胞持续高表达c d 2 5 分子。新生3 天的小鼠在进行胸腺切除术后发生了自身免疫病，而在回输了外周c d 4 + t 细胞后，自身免疫病就能被预防【5 】；人和啮齿类动物c d 4 + c d 8 + 的胸腺细胞中存在着c d 2 5 的阳性表达，这些c d 2 5 的细胞能抑制t 细胞的增生及小鼠炎性肠病和糖尿病的发展，c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的抑制功能在过继转输模型和体外抑制实验中也得到证实。有研究发现，外周初始t 细胞在一定条件下也可以向t r e g s 转化，如抗原可以通过与t 细胞受体( tc e l lr e c e p t o r ，t c r ) 的相互作用，诱导f o x p 3 表达，使其向c d 4 + c d 2 5 + t r e g 分化，这种转化可能是转化生长因子1 3 ( t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o rb e t a ，t g f d ) 依赖的；c d 4 + c d 2 5 + t r e g 还可以在未成熟树突状细胞( d e n d r i t i cc e l l ，d c ) 、白细胞介素( i n t e r l e u k i n e 1 0 ，i l 1 0 ) 、i x - 干扰素( i n t e r f e r o n g a m aa ，i f n q ) 、t g f d 诱导下由外周c d 4 + c d 2 5 t 转化而来。v u k m a n o v i c 等【6 】利用氘标志体内细胞发现，c d 4 + c d 4 5 r o + f o x p 3 + c d 2 5 m 曲细胞增生明显，8 天的增生数量相当于c d 4 十c d 4 5 r o + f o x p 3 c d 2 5 细胞2 4 天和c d 4 + c d 4 5 r a + f o x p 3 一c d 2 5 。细胞19 9 天增生数量的2 倍，而增生的细胞并不来源于胸腺而是记忆t 细胞池( m e m o r ytc e l lp 0 0 1 ) 。他们还同时比较了老年人和年轻人外周的c d 4 + c d 2 5 + t r e g 数量，发现年龄的增长和胸腺功能减退并不影响细胞数量。这与外周抗原刺激t 细胞转化为c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的结论是一致的，说明c d 4 + c d 2 5 + t r e g 数量在外周的维持主要来自外周记忆t 细胞池的转化。根据发育和分化途径的差异，可以将t r e g s 分为天然t r e g ( n a t u r a lt r e g ，n t r e g )和诱导t r e g ( i n d u c e dt r e g ，i t r e g ) 两类。n t r e g 在胸腺中发育成熟，当未成熟t细胞进行阴性选择和阳性选择时，有一部分c d 4 + t 细胞通过t c r m h ci i 与自身抗原肽高亲和力结合而被部分活化，表达c d 2 5 并获得其他一些特质发育成c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + n t r e g 。而在某些特定条件下，c d 2 5 的“普通”c d 4 + t 细胞还可以在外周被诱导表达f o x p 3 ，进而获得免疫抑制功能，成为i t r e g 。已有的研究表明，n t r e g 在胸腺有严格的发育条件，而i t r e g 则可以在不同的外周组织由不同因素诱导产生，如i t r e g 可以存在于诱导口服耐受机体的肠系膜淋巴结、肿瘤组织、慢性炎症组织及移植物组织中【_ 7 1 。n t r e g 因其表面分子清楚且易于分离纯化，备受研究者的关注。尽管目前的研究还不能完全阐明诱导i t r e g 的具体微环境，但无论是体内还是体外进行的i t r e g 诱导，至少有以下因素是不可缺少的：q ) t c r 信号通路的参与：( 国t g f d 及l l 2 等细胞因子的参与。f u r t a d o 等人的研究指出，l 前言游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 * t r e g 表达的影响来自i l 2 缺陷小鼠的c d 2 5 t 细胞，当受到t r e s p 分泌的i l 2 作用后，可以转变为c d 2 5 + t 细胞，并进而获得t r e g s 的相应功能f 8 】。这一结果提示，对t r e g s 来说，c d 2 5 分子本身在其执行功能过程中的作用可能有限。从目前已经发表的研究结果来看，n t r e g 与i t r e g 在发生和作用特异性上主要有以下一些不同之处【3 0 】：发育成熟的组织不同，n t r e g 主要在胸腺，而i t r e g 则在肠道、脾、淋巴结及炎症组织等不同的生理场所；发生所需要的细胞因子不同，n t r e g 需要i l 2 或i l 1 5 ，t g f - i b 对其作用不明确，而i t r e g 则明确i l - 2 和t g f - b 对其的作用；作用发挥所需要的共刺激信号不同，n t r e g 需要其c d 2 8与d c 的c d 8 0 c d 8 6 结合激活相应的共刺激信号，而i t r e g 则是依赖其表达的细胞毒性t 淋巴细胞相关抗原- 4 ( c y t o t o x i ctl y m p h o c y t ea s s o c i a t e da n t i g e n 一4 ，c t l a 4 ) 发挥作用；( 至) n t r e g 的自身抗原特异性尚不明确，而i t r e g 主要针对一些过敏原、共生微生物、癌胚抗原、同种异性抗原及炎症反应造成的自身抗原。总体来说，在功能方面，n t r e g 的作用主要在于抑制自身免疫病的发生并提高机体免疫应答的活化阈值，而i t r e g 则倾向于维持组织的非炎症状态，抑制针对环境和食物中过敏原的免疫应答，削弱急慢性炎症反应。n t r e g 和i t r e g 共同协作发挥维持机体免疫稳态的作用。近年的研究结果还指出，人c d 4 + c d 2 5 + t r e g 可以诱导c d 4 + c d 2 5 t 转变成t r e g s ，通过分泌i l 1 0 和t g f - b 发挥抑制初始c d 4 + t 细胞的功能1 1 0 1 。对小鼠进行类似的研究同样显示，将f o x p 3 + t r e g 与f o x p 3 t r e g t r e s p 共培养，可诱导产对t c r 和i l 2 的低反应状态，这些效应细胞依旧不表达f o x p 3 ，却表现出细胞接触依赖的抑制作用，且这种抑制作用可以被抗t g f - b 抗体部分逆转j 。1 2 1 3c d 4 + c d 2 5 十t r e g 的分类一般来讲，诱导产生的t r e g s 根据其分泌细胞因子的不同又可分为t r l 和t h 3两种细胞。t r l 主要分泌大量的i l 1 0 ，t h 3 主要分泌大量的t g f 邛。( 1 ) t r l 细胞t r l 细胞是另一类亚型的c d 4 + t r e g 细胞( 简称t r l ) 。在i l 1 0 存在的情况下，可通过异源抗原活化的人类t 细胞经克隆产生【i2 1 ，i f n 吖可增强i l - 1 0 诱导产生t r l 的能力【1 3 】。另外，抗原与c d 2 共刺激可通过i l 1 0 诱导产生抗原特异性t r l ，再合成分泌大量i l 1 0 ，并具有免疫调节功能【l4 1 。t r l 与t h l 和t h 2 之间的区别在于t r l 可产生高水平的i l 1 0 、中等量的t g f - i b 、i f n - y 和i l 5 及少量的i l 2 ，4游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响1 前言不产生i l 4 。t r l 抑制免疫反应的主要机制依赖于产生具有免疫调节功能的细胞因子i l - 1 0 和t g f - d j 。目前还不是十分清楚c d 4 + c d 2 5 + t r e g 与t r l 细胞之间的关系，有人认为它们可能是处于不同分化阶段的同一t r e g s 亚型，即来源于胸腺部分分化的c d 4 + c d 2 5 + t r e g ，在外周遇到抗原时最终分化为产生i l 1 0 和t g f - 1 3 的t r le 1 6 l 。但较多倾向认为，c d 4 + c d 2 5 + t r e g 与t r l 细胞是两种不同的细胞亚型，有研究观察到小鼠c d 4 + c d 2 5 + t r e g 属于c d 4 5 r b l o w 群体，t r l 则是在体外由c d 4 5 r a + 初始细胞分化而来，它并非通过与靶细胞直接接触而是通过所分泌的细胞因子发挥免疫调节作用【1 7 】，更像是n 细胞的功能亚群。( 2 ) 1 1 1 3 细胞t h 3 型c d 4 + t r e g 细胞是在研究口服耐受机制的过程中发现的【1 8 j ，t h 3 主要分泌t g f - p ，对t h l 和t h 2 都具有抑制作用。长期服用低剂量的抗原，可以诱导t r e g 的产生。在i l 1 0 和或t g f - 1 3 的存在下，未成熟d c 提呈抗原可促使c d 4 +细胞向获得性t r e g 分化【1 9 】。由于不成熟d c 在体外诱导产生的c d 4 + t r e g 细胞和体内诱导产生的c d 8 + t r e g 细胞【2 0 】与t r l 均具有相同的特性，即产生高水平的i l 1 0 ，不产生i l 4 或i l 2 。然而，与t r l 比较，未成熟d c 诱导产生的c d 4 + t r e g细胞在体外的抑制活性不依赖于i l 1 0 。并且，由未成熟d c 在体外诱导产生的c d 4 + t r e g 细胞通过抗原非依赖机制直接抑制成熟t h l 的增殖反应，该过程需要细胞与细胞之间的接触，并可被外源性的i l 2 所抑制 2 l 】。因此，从功能上讲，这些t r 细胞更类似于上述的c d 4 + c d 2 5 + t r e g 。1 2 1 4c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的生物学特性及其功能胸腺选择使c d 4 + c d 2 5 + t r e g 具有低反应性和免疫抑制性两大功能特征。其免疫无能性表现为对i l - 2 特异性抗原及抗原提呈细胞( a n t i g e n p r e s e n t i n gc e l l s ，a p c )的刺激呈低反应状态，但是在高浓度i l 2 存在下通过t c r 刺激，可使c d 4 + c d 2 5 + t r e g 活化并增殖( 但反应强度远不及c d 4 + c d 2 5 - t 细胞) 。这种独特的无反应特性将它和那些通过缺乏受刺激的抗原性刺激获得抑制活性无反应性或t r e g 细胞加以区分。后者一旦无能状态被消除后永远无法自发恢复无反应状态。c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的免疫抑制性表现在经t c r 介导的信号刺激活化后，能够抑制c d 4 + c d s + t 的活化和增殖，并且这种抑制作用是非抗原特异性的，也就是说，它不仅抑制相同抗原特异性t 细胞的增殖，也抑制那些由同一a p c 提呈的无关抗l 前言游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响原特异性t 细胞。t r e g s 的活化及其免疫抑制作用的发挥需要t c r 介导的信号转导，而其一旦活化，不需要对t c r 重复刺激；活化的t r e g s 发挥抑制作用不区分c d 4 + 和c d 8 + t 细胞；t r e g s 几乎不分泌i l 2 、i l - 4 及i f n 吖等效应性细胞因子【l 】。c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的生物学特性及其功能与其表面标志物有关瞄j 。1 2 1 4 1c d 4 + c d 2 5 + t r e g 与f o x p 3f o x p 3 是目前已公认的c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的特异性标志，在c d 4 + c d 2 5 + t r e g介导的免疫抑制效应中发挥关键作用。f o x p 3 在淋巴组织中主要表达于c d 4 + t 细胞，而在c d 8 + t 细胞或b 细胞几乎检测不到。f o n t e n o t 等【2 3 】检测到c d 4 + c d 2 5 + t r e g中f o x p 3 m r n a 的表达量是c d 4 + c d 2 5 t 的4 0 倍。在对小鼠的研究结果显示，f o x p 3 m r n a 和蛋白质都仅见于c d 4 + c d 2 5 + t r e g 亚群。将f o x p 3 m r n a 转导入小鼠外周c d 4 + c d 2 5 未致敏t 细胞，可使其分化为具有与n t r e g 相似的表型和功能。在人类胸腺和成人外周血及脐带血均已鉴定出c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + t 细胞。f o x p 3对c d 4 + c d 2 5 + t r e g 发挥功能是必需的，是t r e g s 发育的一个重要开关。将f o x p 3基因转入c d 4 + n a i v e t 细胞后，细胞可以获得t r e g s 的表型，如c d 2 5 、c t l a - 4等，并通过细胞间接接触依赖的方式抑制t r e s p 增殖。但是，f o x p 3 究竟调节何种信号传导途径还不清楚。研究发现s c u r f y 小鼠( s f小鼠) 的f o x p 3 基因在d n a 结合区有两个碱基插入，若发生移码突变，可致使f o x h e a d 结构域缺失，不能与d n a 结合。这种小鼠可发生致死性的淋巴细胞增殖性疾病并伴有多器官浸润，其病理学特点与c t l a 4 或t g f b 缺陷小鼠的表现有诸多相似之处【2 4 l 。最近有研究提示，f o x p 3 的异位表达可以作为一种新的治疗途径：b d c 2 5 t c r 转基因t 细胞转移给表达f o x p 3 逆转录病毒，然后将此基因转移给非肥胖糖尿病患者，在疾病初期能改善机体症状【2 5 】。f o n t e n o t 等【2 6 】在骨髓嵌合体试验中向其体内转入f o x p 3 - f o x p 3 + 的骨髓细胞，用致死量照射小鼠后不出现自身免疫性疾病。还有研究发现，f o x p 3 免疫抑制功能的发挥与活化t 细胞核因子( n u c l e a rf a c t o ro fa c t i v a t e dtc e l l ，n 汀) 和核因子k b ( n u c l e a rf a c t o rk b ，n f - k b )关系密切，在f o x p 3 缺陷的t 细胞中转染f o x p 3 ，可以降低n f k b 和n f a t 转录活性，进而抑制其他t 细胞的增殖和活化1 2 。1 2 1 4 2c d 4 + c d 2 5 + t r e g 与c d12 7c d l 2 7 是i l 7 受体g t 链( i l 7 r a ) 。主要表达于b 细胞前体和成熟的t 细胞。淋巴细胞对l l 7 的特异性应答主要由c d l 2 7 的表达进行调控。大多数人类c d 4 + t6游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏0 3 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响l 前言细胞表达c d l 2 7 。t 淋巴细胞的整个生命周期均有c d l 2 7 的表达调控。c d l 2 7的表达对t 淋巴细胞的成熟、维持及免疫应答发挥着重要作用。h a r t i g a no o c o n n o r 等1 2 酗研究了人外周血、脾脏及淋巴结中的c d 4 + c d 2 5 + t r e g ，发现在c d 4 + c d 2 5 + 纯化的细胞中f o x p 3 的表达与c d l 2 7 低表达相关，通过c d 4 + c d l 2 7 1 0 w 纯化出的c d 4 + c d 2 5 + t r e g 与f o x p 3 纯化的c d 4 + c d 2 5 + t 细胞数量相似，并且这部分细胞展现了c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的典型特征：即表达f o x p 3 及c t l a 4 ；可以抑制其他t 细胞的增殖；并且在c d 3 抗体的刺激下增殖。在小鼠和猕猴中亦同样发现c d 4 + c d 2 5 + c d l 2 7 脚对于c d 4 + c d 2 5 + t r e g 是特征性的，而且这个表面分子标记可以定量检测【2 9 1 。因此，目前认为c d 4 + c d 2 5 + c d l 2 7 1 0 w 是较c d 4 + c d 2 5 + f o x p 3 + 更有价值的特异性检测t r e g s 的分子表面标记【3 0 1 。通过c d l 2 7的表达可以有效地区分t r e s p 和t r e g s 。1 2 1 4 3c d 4 + c d 2 5 + t r e g 与i l 2i l 2 是维持胸腺及外周的c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的活性的重要细胞因子。目前，有大量证据显示c d 2 5 不仅是t r e g s 慢性活动状态的标记，而且对它们的产生、生存和功能起着关键作用，若i l 2 、i l 2 r a ( c d 2 5 ) 或i l 2 r p ( c d l 2 2 ) 缺乏会导致致命性的淋巴组织增生性疾病伴自身免疫疾病( 如肠炎、淋巴组织增生和多器官的淋巴组织浸润) ，一般将此称为i l 2 缺陷综合征【3 1 】。当i l 2 - 小鼠中胸腺和外周的c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的数量明显降低时，总细胞数( c d 3 + t ) 及c d 4 + t 细胞和c d 8 + t细胞没有明显的变化；将i l 2 - 小鼠的骨髓细胞转移给重组激活基因缺陷的小鼠能够产生多器官炎症；而将正常的小鼠骨髓细胞同上述细胞共转移则提高c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的比例，从而抑制炎症反应【3 2 j 。i l 一2 激活并维持体内外t r e g s 的c d 2 5 的表达【3 3 】。在生理状态下，i l 2 介导了t r e s p 和t r e g s 的回馈反应，即t r e s p 分泌的i l 2 维持并激活t r e g s ，而t r e g s又抑制t r e s p 的i l 2 产生。因此，i l 2 对c d 4 + c d 2 5 + t r e g 在外周的维持起着非常重要的作用1 3 4 1 。有研究发现，i l 2 r 信号对t r e g s 的作用是维持活性而非扩增数量。将i l 一2 - - 小鼠的c d 4 + t 细胞转移到实验型自身免疫性脑脊髓炎疾病模型的小鼠中可以阻止自身免疫性疾病的发生，但是来自c d 2 5 - - 小鼠的c d 4 + t 细胞没有这种功能。这是因为，i l 2 叫、鼠中的c d 4 + t 细胞的循环中存在着一定数量的t r e g的前体或胸腺来源细胞，而c d 2 5 小鼠却没有。i l 2 对胸腺t r e g s 的发育是非必需的，f o n t e n o t 等【2 6 】在用l l 2 信号缺失的转7l 前言游泳运动及其联合冬虫夏草溶液对小鼠脾脏c d 4 + c d 2 5 + t r e g 表达的影响基因小鼠表达f o x p 3 g f p 蛋白跟踪f o x p 3 + c d 4 + t r e g 的研究中发现，这种小鼠虽然缺少i l 2 信号，但胸腺内产生的c d 4 + f o x p 3 + t 细胞没有受到很大影响。c d l 3 2 ( 2 ,链) 是不同细胞因子受体共用的一条相同的与信号转导有关的肽链，如为i l 2 、i l 4 、i l 7 、i l 9 、i l 1 5 的受体共有。在c d l 3 2 缺失的小鼠的胸腺和外周中都检测不到c d 4 + f o x p 3 + t r e g 的表达，表明普通的丫链信号在t 发育过程中是非常重要的，其他普通的伽马链家族的细胞因子同缺失的i l 2 竞争来发挥作用。1 2 1 4 4c d 4 + c d 2 5 + t r e g 与c t l a 一4c t l a 4 是表达于t r e g s 表面的一种重要的膜分子蛋白，携带有免疫受体酪氨酸抑制基序。c t l a 4 可以与t r e s p 细胞膜表面的c t l a 4 配体( c d 8 0 c d 8 6 ) 结合并抑制t 细胞活性。有研究表明，抗c t l a 4 单抗可以抑制小鼠t r e g s 的免疫抑制活性，并引起小鼠的自身免疫性疾病。而幼稚t 细胞只能在t 细胞活化后表达该分子【1 2 】。单克隆抗体在有限的时间内对正常幼稚小鼠的c t l a 4 作用会引起自身免疫性疾病，类似于c d 4 + c d 2 5 + t r e g 的功能衰竭而不伴细胞数目减少而引起的疾病【”】。此外，c t l a 4 信号可以通过增强抑制细胞靶细胞交互作用点上的t g f b 信号来促进c d 4