（神经生物学专业论文）钠尿肽对视网膜双极细胞活动的调制.pdf

缩略语及符号 缩略语及符号 缩写英文名称 山 m i c r o l i t e v u m $ u n o l l 【c a 2 + 】i i n u a c e l l u l a rc a l c i u mc o n c e n t r a t i o n a n pa t r i a ln a l c i u r e t i cp e p t i d e b a p t a b i 咖a m i n o p h e n o x y ) - n , n , n 9 , n 9 - t e t r a a c e t i ca c i d b c b i p o l a rc e l l b i cb i c u c u l l i n e b n pb r a i nn a t r i u r e t i cp e p t i d e c a c ac i s - - 4 一a m i n o c r o t o n i ca c i d c a mc a l m o d u l i i l c g m p g u a n o s i n e - 3 , 5 - c y c l i cm o n o p h o s p h a t e c ：m z c a m i d a z o l i u m c n p c 啪e n a t r i u r e t i cp e p t i d e c n sc e n t r a li l e r v o u ss y s t e m d m s o d i m e t h y ls u l f o x i d e e c s 0 c o n c e n t r a t i o no f h a l f - m a x i m a lr e s p o n s e e g t a e t h y l e n eg l y c o l - b i s ( h - a m i n o e t h y l e t h e r ) - n , n , n v , n v - t e ! n 鼍a c e t i ca c i d g a b a 7 - a m i n o b u t y r i ca c i d g c l g a n g l i o nc e l ll a y e r g l y g l y c i n e g f l o i g a o h m h e p e s 三坶6 r o x y 劬y 1 】p i p e m 豳。n 【2 枷“酬触 a c i d i 1 4 a ai m i d a z o l e - 4 - a c e t i ca c i d i b m x 3 - i s o b u t y l 一1 - m e t h y l x a n t h i n e i n l i n n e rn u c l e a rl a y e r i p 3 i n o s i t o l1 , 4 ，5 - t r i s p h o s p h a t e i p l i n n e rp l e ) 【i 姗l a y e r 中文名称 微升 微摩尔每升 胞内钙浓度 心房钠尿肽 双极细胞 荷包牡丹碱 脑型钠尿肽 钙调蛋白 3 ，5 环鸟苷酸 c 型钠尿肽 中枢神经系统 二甲基亚砜 半反应浓度 卜氨基丁酸 神经节细胞层 甘氨酸 千兆欧姆 3 异丁基1 甲基黄嘌呤 内核层 三磷酸肌醇 内网层 1 缩略语及符号 m e t a b o t r o p i cg l 恤a t er e c e p t o r m e g a o h m h i l lc o e f f i c i e n t n u m b e ro f c e l l s n a t r i u r e t i cp e p t i d e n a 坼u r e t i cp e p t i d er e c e p t o r o u t e rn u c l e a rl a y e r o u t e rp l e x i f o r ml a y e r p h o s p h o d i e s t e r a s e p a r t i c l eg u a n y l y lc y c l a s e c g m p - d e p e n d e n tp r o t e i nl d n a s eg r u t h e n i u mr e d r y a n o d i n e r y a n o d i n er e c e p t o r s t a n d a r de r r o ro f m e a s u r e m e n t s t a n d a r dd e v i a t i o n s o l u b l eg u a n y l y lc y c l a s e x e s t o s p o n g i n s - c t i m ec o n s t a n t 代谢型谷氨酸受体 兆欧姆 h i l l 系数 细胞例数 钠尿肤 钠尿肽受体 外核层 外网层 磷酸二脂酶 结合性鸟苷酸环化酶 蛋白激酶g 钌红 r y a n o d i n e 受体 标准误 标准差 可溶性鸟苷酸环化酶 时间常数 2 一 。 。 柙 舣 帆 吼 吼 邸l 堇 呲 跏耋i 一 呱 赋 黼。 论文独创性声明 本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除 了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的 研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明 并表示了谢意。 作者签名：墼靠：堑型 论文使用授权声明 本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内 容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此 规定。 作者签名垒垒乇签缝嗍 中文捕要 一、中文摘要 钠尿肽对视网膜双极细胞活动的调制 钠尿肽( n a t r i u r e t i cp e p t i d e ，n p ) 属于神经肽家族，包括心房钠尿肽( a t r i a l n a t r i m e f i cp e p t i d e ，a n p ) 、脑型钠尿肽( b r a i nn a t r i u r e t i cp e p t i d e ，b n p ) 和c 型 钠尿肽( c - t y p e n a t r i a r e t i c p e p t i d e ，c n p ) 。它们起源于不同的基因，但都拥有一 个结构类似的1 7 个氨基酸的功能性内环。在中枢神经系统( c e n t r a ln t 豇 v o u s s y s t e m ，c n s ) ，n p 参与调控情绪变化、应激激素的释放、摄食、觉醒及自主神 经的节律等。然而，n p 在神经信号传递和调控等方面的作用却知之甚少。双极 细胞( b i p o l a rc e l l ，b c ) 是视网膜第二级神经元，它们将从光感受器获得的信号 传递至无长突细胞( a m a e r i n ec e l l ，a c ) 和神经节细胞( g a n g l i o nc e l l ，g c ) 。根 据对光反应的不同，双极细胞可分两类：o n 型和o f f 型。根据突触连接的类 型，双极细胞也可以分为视杆型( r o d b i p o l a r c e l l ，r b c ) 和视锥型( c o n e b i p o l a r c e l l ，c b c ) 。哺乳动物视网膜中所有的r b c 都是o n 型的。在本工作中，我们 的研究对象主要就是o n 型r b c ，简称r o d b c ，这种细胞表达y - 氨基丁酸 ( y a m i n o b u t y r i ca c i d ，g a b a ) 受体的两个亚型g a b a a 和g a b a c 受体，甘氨 酸( g l y c i n e ) 受体，以及代谢性谷氨酸受体( m e t a b o t r o p i cg l u t a m a t er e c e p t o r , m g l u r ) 。 在本论文中，我们应用免疫组织化学方法、全细胞膜片钳记录、钙成像技 术，首次系统报道了n p 对r o d b c 中主要的抑制性递质g a b a 受体的调制作 用。 首先，应用免疫组织化学技术和共聚焦显微镜技术，我们细致研究了n p 及其受体n p r 在大鼠视网膜中的表达情况。结果显示，很多细胞均表达n p ， 如内核层的细胞或部分神经节细胞，此外，在m f i l l e r 细胞和两个网状层也显示 很强的n p 免疫阳性。同时，n p r 的表达也相当广泛，值得注意的是，在p k c 标记的r o d - b c 上，n p r 显著地表达于其树突、胞体、轴突、轴突终末等部位。 有大量的工作显示，n p 在细胞中主要通过激活颗粒型鸟苷酸环化酶( p a r t i c l e g u a n y l y lc y c l a s e ，p g c ) 活性从而增加胞内3 ，5 - 环鸟苷酸( g u a n o s i n e - 3 ，5 - c y c l i c m o n o p h o s p h a t e ，c g m p ) 浓度实现进一步的胞内调控。电生理结果显示，在 r o d - b c 中可以诱导出c g m p 门控通道( c g m p g a t e dn o n s e l e c t e dc a t i o nc h a n n e l ， c g c ) 介导的电流，这些电流的性质与c g m p 和磷酸二酯酶( p h o s p h o d i e s t e r a s e ， p d e ) 抑制剂3 异丁基1 甲基黄嘌呤( 3 i s o b u t y l 1 - m e t h y l x a n t h i n e ，i b m x ) 诱 导电流相似。 3 中文摘要 n p r 在r o d - b c 上大量的功能性分布，意味着其在r o d - b c 信号通路中有 可能起着重要的调制作用。在研究调制作用之前，我们先用膜片钳技术分析了 r o d b c 上g a b a 受体介导电流( 尼a b a ) 的特性。5 0 洲的g a b a a 受体激动 剂m u s c i m o l 诱导一个瞬间失敏的内向电流站a b ( a ) ，其失敏的时间常数( f ) 为 1 2 4s 。2 0 0 “mg a b a c 受体激动剂c i “锄i n o c r o t o n i ca c i d ( c a c a ) 诱导一个 持续的几乎无失敏的内向电流尼a b f o 。g a b a b 受体激动剂b a c l o f e n 诱导不出 任何可见电流。j 如a ( a ) 和i q a b a ( c ) 的翻转电位分别为1 24 - 2 4m v 和1 44 - 3 2 m v 。分析q a b a ( 舢和昆 b a 褥对g a b a 的量效关系，其半反应浓度( c o n c e n t r a t i o n o f h a l f - m a x i m a lr e s p o n s e ，e c 5 0 ) 分别为5 1 34 - 6 2p m 和6 04 - 0 6 州。上述结 果显示，r o d - b c 上，具有g a b a a 和g a b a c 受体，而没有g a b a s 受体。进 一步的电生理实验结果显示，b n p 只压抑i g a b a ( a ) ，并不压抑i o o a ( c 3 。b n p 对 ，o a b ( a ) 的压抑作用可被a n a n t i n 阻断，胞外给予p g c 的特异性抑制剂h s 1 4 2 1 可以显著地压抑b n p 的作用，此外，n p r - c 受体特异性激动剂c a n f 4 2 3 不能 模拟b n p 的作用。这些结果表明，b n p 的抑制作用是通过n p r - a 起作用的， 而n p r - c 不参与此作用。应用局部加药的方式分别在r o d - b c 的树突，胞体和轴 突终末部位诱导，0 a b a ，而轴突终末的尼 b 较大( 2 1 4 34 - 2 0 5v s1 0 8 94 - 2 5 5 ) ， 且b n p 只对轴突终末的1 g a b a 有压抑作用。 我们进一步研究了b n p 对轴突终末部位乜b ( a ) 的压抑作用的胞内机制。 胞外给予8 b r - c g m p ，可以模拟b n p 的作用，即压抑i g a b a ( a ) 而对岛 b a ( o 没有 作用。电极内液中给予c g m p 依赖蛋白激酶g ( c g m p - d e p e n d e n t p r o t e i n k i n a g ， p k g ) 的特异性拮抗剂k t 5 8 2 3 ，显著地削弱b n p 压抑，o b a 的作用。这表明， c g m p p k g 通路参与b n p 对昆a b a 的压抑。钙成像实验进一步表明，b n p 显著 地增加r o d - b c 轴突终末部位的胞内钙浓度( i n u - a e e l l u l a rc a l c i u mc o n c e n t r a t i o n , c a 2 + 0 ，而对树突胞体部位的 ca _ 1 i 没有影响，距离轴突终末越远，b n p 可诱 导的【c a l i 变化越小。此外，胞外无钙液( c a 2 + - f i - e e ，含1 0m me g t a ) 灌流并 不影响b n p 对昆a b a 的压抑作用；反之，在胞内无钙液( c a 2 + - f i - e e ，含1 0m m b a p t a ) 的条件下，b n p 压抑昆a b a 的作用几乎消失。这些结果表明，在我们 的实验条件下b n p 抑制七柚a 的作用与胞外来源的钙离子无关，而很可能是通 过胞内钙库的钙释放至胞浆所致。因此，我们分别研究了下列两种胞内钙库在 此过程中的作用：三磷酸肌醇( i n o s i t o l1 , 4 ，5 - t r i s p h o s p h a t e ，3 ) 受体( i p 3 r ) 介导的钙库和r y a n o d i n e 受体( r y a r ) 介导的钙库。在3 受体的拮抗剂肝素 ( h e p m - i n ) 和x e s t o s p o n g i n s c ( x e - c ) 阻断胞内 3 受体介导的钙库释放的条 件下，b n p 仍可以显著地抑制昆a b 。然而，应用r y a r 的调制剂咖啡因( e a f f e i n ) ， r y a n o d i n e ( r y a ) 、钌红( r u t h e n i u mr e d ) 来阻断r y a _ r 介导的钙库释放途径，可 4 中文描要 以明显地抑制b n p 对岛a b a 的作用。这说明，b n p 对尼a b a 的作用是由r y a r 介导的。实际上，用钙成像的方法显示，咖啡因的确可在r o d - b c 的轴突终末 观察到胞内钙的升高，这说明r o d b c 的轴突终末部位很有可能存在r y a r 。进 一步研究表明，b n p 压抑昆a b a 的作用可以显著地被钙调蛋i 刍( c a l m o d u l i n , c a m ) 抑制剂w 二7 和e a l m i d a z o l i u m ( c m z ) 所阻断。以上的结果可以总结为：b n p 与n p r - a 相结合，通过激活n p r a 的g c 活性部位使胞内e g m p 浓度增加， 继而通过c g m p p k g 通路调动r y a r 介导的胞内钙库，释放的钙离子与c a m 相 结合形成c a 2 + c a m 复合物，从而发挥b n p 对g a b a 受体的调制作用，如下图 所示： 此外，我们还研究了b n p 对另一种抑制性递质受体甘氨酸受体的作 用。在r o d b c 上可以鉴定士的宁( s t r y c h n i n e ) 敏感的尼l v ，该电流的e c s o 为4 0 54 - 5 2 州。甘氨酸受体在r o d b c 中的分布是不均衡的，g l y 仅在树突 轴突上才能被诱导，而轴突上则阙如。b n p 对硒，没有作用，虽然尼l y 可被胞 内钙调制。b n p 对昆i v 没有作用的原因很可能是b n p 只能导致轴突部位的钙 升高，而对树突胞体部位没有影响。 关键词：脑型钠尿肽，g a b a 受体，神经调质，胞内钙，视网膜，双极细胞 中图分类号：q 4 2 5 英文摘要 二、英文摘要 m o d u l a t i o no fa c t i v i t yo fr e t i n a lb i p o l a rc e l lb yb r a i n n a t r i u r e t i cp e p t i d e n a t r i n r e t i cp e p t i d e s 州p s ；a n p , b n pa n d c n p ) c o m p r i s eaf a m i l yo f s t r u c t u r a l l yr e l a t e dp e p t i d e s ，w h i c ha l ed e r i v e df r o mt h r e ed i f f e r e n tg e n e sa n ds h a l e a1 7 - a m i n oa c i di n t e r n a lr i n g i na d d i t i o nt ot 1 1 e i rp e r i p h e r a li n v o l v e m e n ti nd i u r e s i s a n db l o o dp r e s s u r er e g u l a t i o n ，n p sa n dt h e i rc o r r e s p o n d i n gr e c e p t o r s ( n p r - a , n p r - ba n dn p r - c ) a r ef o u n dt h r o u g h o u tt h ec e n t r a ln e r v o u ss y s t e m ( c n s ) a n d m a yr e p r e s e n ta l li m p o r t a n tn e u r o m o d u l a t o r ys y s t e mi nt h ec n s w h i l en ps y s t e m i sk n o w nt ob ei n v o l v e di nm o d i f i c a t i o no fe m o t i o n a lb e h a v i o u r s ，t h es e q u e l a eo f s t r e s sh o r m o n er e l e a s e ，f o o d t a k e ，a r o u s a la n da u t o n o m i cn c l v o u ss y s t e ma c t i v a t i o n , l i t t l ei sk n o w na b o u tt h er e g u l a t i o nb yn p so fn e u r o t r a n s m i t t e rr e c e p t o r s b i p o l a r c e l l s ( b c s ) a r es e c o n d - o r d e rn e u r o n s , w h i c hc o n v e ys i g n a lf r o mp h o t o r e c e p t o r st o a m a c r i n ec e l l sa n dg a n g l i o nc e l l si nt h er e t i n a t w ot y p e so fb c s ，o n t y p eb c sa n d o f ft y p eb c s g e n e r a t eo na n do f fs i g n a l st h r o u g ha c t i v a t i o no fd i s t i n c t 西u t 舡m 舱r e c e p t o r s i nt h em a m m a l i a nr e t i n ab c sa r ee x c l u s i v e l yd r i v e nb ye i t h e r r o d so rc o b e s a l lr o db c ss e e mt ob eo fo nt y p ew h e r e a sg o n eb c sa r co fe i t h e r o nt y p eo ro f ft y p e h c r ci nt h i sw o r k , w ef o c u so nr o d - b c s g a b a aa n d g a b a c r e c e p t o r s ，g l y e i n er e c e p t o ra n dm e t a b o t r o p i cg l u t a m a t er e c e p t o r ( m g l u r ) a r el o c a l i z e do nr o d - b c s i nt h i s w o r k , u s i n gt h ei m m u n o h i s t o c h e m i s t r y , w h o l e c e l lp a t c hc l a m p r e c o r d i n ga n dc a l c i u mi m a g i n gt e c h n i q u e s , w er e p o r t , f o rt h ef l r s tt i m e , m o d u l a t i o n o f g a b a r e c e p t o r m e d i a t e dc u r r e n t s b y b n p o l l r o d - b c s f i r s t l y , u s i n gi m m u n o h i s t o c h e n f i s t ya n dc o n f o c a lm i c r o s c o p et e c h n i q u e s , w e s h o wt h ee x t e n s i v ee x p r e s s i o no f n p sa n dt h e i rr e c e p t o r si nr a tr e t i n a ln e u r o n a la n d g l i a le l e m e n t s i tw a sr e v e a l e dt h a ta n p - ，b n p - a n dc n p - i m m u n o r e a c t i v i t y w c t es e e ni nt h eo p l , i p la n di n l m o r e o v e r , t h ee x p r e s s i o np r o f i l e sf o rn p r - a a n dn p r - ba r er a t h e rs i m i l a ri nt h a tt h ed i s t r i b u t i o no ft h e s et w or e c e p t o r sw a s o b s e r v e di no p l ，i n la n di n l i n t e r e s t i n g l y , l a b e l i n gf o rn p r - aa n dn p r - bw a s o b s e r v e di na l lp a r t so fb o t hp k c - p o s i t i v eb c s ，m o s to fw h i c hm a yb eo ft h e r o d - b c ，i n c l u d i n g t h e d e n d r i t e s ，s o m a t a , a x o n sa n d a x o nt a m i n a l s , a n d 6 英文摘要 p k c - n e g a t i v eb c s , w h i c hm a yb eo ft h eo f ft y p e i ti sk n o w nt h a tn p sc a n i n c r e a s ei n t r a c e l l u l a rg u a n o s i n e - 3 , 5 - c y c l i cm o n o p h o s p h a t e ( c g m p ) c o n c e n t r a c f i o n v i aa c t i v a t i o no fp a r t i c l eg u a n y l y lc y c l a s e ( p g c ) u s i n gp a t c hc l a m pr e c o r d i n g , i t w a ss h o w nt h a tb n pi n d u c e dc g m p g a t e dn o n s o l e c t e dc a t i o nc h a n n e l ( c n c ) m e d i a t e dc u r r e n t sf r o mr o d b c s ，a sd i db yc g m pa n d3 - i s o b u t y l - 1 - m e t h y l x a n t h i n e 0 b m x ) t h ef a c tt h a tn p r sa r el o c a l i z e di nt h er o d - b cs u g g e s t st h a tn p n p rs y s t e m m a yb ei n v o l v e di ni n f o r m a t i o np r o c e s s i n go ft h er o d - b c s w ef i r s tc h a r a c t e r i z e d g a b a i n d u c e dc u l t e n t sc ，o b a ) i nr o d - b c s t h ec u r r e n tr e s p o n s et o5 0p m m u s e i m o l ，ag a b a ar e c e p t o ra g o n i s t , s h o w e da ni n i t i a lt r a n s i e n tc o m p o n e n t a ( a ) ) ，w h i c hd e s e n s i t i z e dt oas t e a d yl e v e lw i t hat i m ec o n s t a n to f1 2 4s i n c o n t r a s t , t h ec u r r e n ti n d u c e db y2 0 0 肛mc a c a ( i o a b a ( o ) ，ag a b a cr e c e p t o r a g o n i s t , w a sr a t h e rs u s t a i n e da n dd i dn o ts h o ws i g n i f i c a n td e s e n s i t i z a t i o n b a c l o f e n , ag a b a b r e c e p t o ra g o n i s t , c o u l dn o ti n d u c ea n yd i s c e m a b l ec u r r e n tf r o mr o d - b c s t h ea v e r a g er e v e r s a lp o t e n t i a lw a s1 24 - 2 4m va n d 1 44 - 3 2m vf o r1 4 腆a n d b i c s e n s i t i v ec u r r e n t s ，r e s p e c t i v e l y t h ed o s e - r e s p o n s er e l a t i o n s h i p so fg a b a aa n d o a b a cc u r r e n t sy i e l d e da ne c s oo f5 1 34 - 6 2p ma n d6 0 士0 6p m r e s p e c t i v e l y t h e d a t ai n d i c a t e dt h a tg a b a a a n dg a b a c - b u tn o tg a b a b - r e c e p t o ra r e e x p r e s s e do nr o d - b c f u r t h e re x p e r i m e n t sr e v e a l e dt h a tb n pg r e a t l ys u p p r e s s e d g a b a c u r r e n t s ，b u tn o tg a b a cc u r r e n t s ，w h i c hw a sm e d i a t e db yn p r - a s i n c et h e e f f e c tc o u l db eb l o c k e db ya n a n t i n , as p e c i f i ca n t a g o n i s to f n p r a ，a n dh s - 1 4 2 l ，a s p e c i f i ca n t a g o n i s tf o rp g c m o r e o v e r , c a n f , a na g o n i s to f n p r - c ，d i dn o tm i m i c t h eb n p e f f e c t , s u g g e s t i n gn oi n v o l v e m e n to fn p r - c f o c a la p p l i c a t i o no fl m m g a b at ot h ed e n d r i t e s o m ao ra x o nt e r m i n a lc o u l di n d u c e 昆 b ao fd i f f e r e n t a m p l i t u d e s 、】i ，i t ho n ei n d u c e da tt h ea x o nt e r m i n a lb e i n gl a r g e r ( 2 1 4 34 - 2 0 5v s 1 0 8 94 - 2 5 5 ) i n t e r e s t i n g l y , b n ps u p p r e s s e dt h e 如a b ai n d u c e da tt h et e r m i n a l ，b u t w i t h o u te f f e c t so nt h ei q 地k a tt h ed e n d r i t e s u m i n t r a e e l l u l a rm e c h a n i s m su n d e r l y i n gt h es u p p r e s s i o no f 尼 b ab yb n pw c t e f u r t h e rs t u d i e d 8 b r - c g m p , l i k eb n p , s u p p r e s s e dg a b a a b u tn o tg a b a c c u r r e n t s ， a n ds e l e c t i v ep k gi n h i b i t o rk t 5 8 2 3g r e a t l yr e d u c e dt h es u p p r e s s i o ne f f e c to fb n p o ni o 啦bs u g g e s t i n gt h ei n v o l v e m e n to f t h ec g m p p k gp a t h w a y o nt h eo t h e rh a n d , c a l c i u mi m a g i n gs h o w e dt h a tn p ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d c a 2 + ia tt h ea x o nt e r m i n a l o fr o d - b c ，b u tt h ec h a n g ei n 【c a 2 + iw a sm u c hs m a l l e ra tt h es o m a d e n d r i t e n o s i g n i f i c a n tc h a n g ei ng a b ar e s p o n s e sw a sd e t e c t e dw h e ne x t r a c e l l u l a rc d + - f r e e 7 英文摘要 s o l u t i o nw a sd e l i v e r e da l o n gw i m1 0r a me g t a ac a l c i u mc h e l a t o r , a n da p p l i c a t i o n o f5 0n mb n pp e r s i s t e dt or e d u c et h eg a b ac u r r e n t ss i g n i f i c a n t l y i nc o n t r a s t , i n t r a c e l l u l a rc a 2 + - f r e es o l u t i o n , b u f f e r e dw i t h1 0m mb a p t a , s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e dt h eg a b ac u r r e n t d u r i n gi n t r a c e l l u l a ri n f u s i o no fc 秽f l e es o l u t i o n , a p p l i c a t i o no f5 0n mb n pf a i l e dt os u p p r e s st h eg a b ac u r r e n t s t h e s er e s u l t s s t r o n g l ys u g g e s tt h a ts u p p r e s s i o no f 如a 8 ab yb n pw a sn o td u et ot h ei n f l u xo f e x t r a c e l l u l a rc a l c i u m d u r i n gi n t e r n a la p p l i c a t i o no f t h ei n o s i t o l1 , 4 ，5 - t r i s p h o s p h a t e r e c e p t o r ( i p s r ) a n t a g o n i s t s ，h e p a f i na n dx e s t o s p o n g i n s - co c e c ) ，b n pp e r s i s t e dt o s u p p r e s si o a o a i nc o n t r a s t , f o l l o w i n gt h ea p p l i c a t i o no fr y a n o d i n er e c e p t o r ( r y a r ) m o d u l a t o r sc a f f e i n e ，r y a n o d i n eo rr u t h e n i u mr e d ，昆a b aw a sr e d u c e d , a n dt h eb n p c a u s e ds u p p r e s s i o nw a sn ol o n g e ro b s e r v e d f u r t h e r m o r e t h eb n pe f f e c tw a sg r e a t l y r e d u c e db yt h ec a l m o d u l i n ( c a m ) i n h i b i t o r sw 二7a n dc a l m i d a z o l i u m ( c m z ) i ns t n n ， b n pi n c r e a s e dc g m pl e v e l sv i an p r - a t h e r e b yp r o m o t et h er e l e a s eo f c a l c i u mf r o m r y a n o d i n es e n s i t i v es t o r e st h r o u g h 也ep k gp a t h w a y t h ei n c r e a s e d c a 2 + il e v e l s l e a d st oa c t i v a t i o no f c a m , r e s u l t i n gi nt h es u p p r e s s i o no f g a b a a r e c e p t o r s w ea l s oi n v e s t i g a t e dm o d u l a t o r ye f f e c t so fb n po ng l y c i n er e c e p t o r so n r o d - b c s 如i yi n d u c e df r o mr o d - b c sw a ss t r y c h n i n e - s e n s i t i v e ，w i t ha l le c s oo f 4 0 54 - 5 2 州b n ph a dn oe f f e c to n ，0 l y i tw a sf n r t h c tf o u n dt h a t 硒c o u l do n l yb e i n d u c e df r o mt h ed e n d r i t e s o m a s i n c eb n pc o u l dn o ti n c r e a s ef c 一十1 ia tt h e d e n d r i t e s o m a , i tw a su n d e r s t a n d a b l ew h yb n pd i dn o tc h a n g e k e y w o r d s ：b r a i n n a t r i u r e t i ep e p t i d e , g a b a r e c e p t o r , n e u r o t r a n s m i t t e r , i n t r a c e l i n l a rc a l c i u m ，r e t i n a , b i p o l a rc e l l 8 引言 三、正文 ( 一) 、引言 钠尿肽( n a t r i u r e t i cp e p t i d e ，n p ) 属于神经肽家族，主要包括心房钠尿肽 ( a t r i a ln a t r i u r e t i ep e p t i d e ，a n p ) ，脑型钠尿肽( b r a i nn a t r i u r e t i cp e p t i d e ，b n p ) 和c 型钠尿肽( c - t y p en a t r i u r e t i cp e p t i d e ，c n p ) 。2 6 年前，d eb o l d 等( d eb o l d e t a l ，1 9 8 1 ) 首次在大鼠心脏中发现了a n p ，此后其他类型的n p 也依次被发现： b n p 和c n p 由m a t r u o 和s u d o h 等最早在猪脑中被发现并被克隆( s u d o he ta 1 ， 1 9 8 8 ；k o j i m ae ta 1 ，1 9 9 0 ；s u d o he ta 1 ，1 9 9 0 ) 。a n p 、b n p 和c n p 基因来源完全 不同，但是结构非常相似，发挥的生物功能也有很多相似之处( r o s e n z w e i ga n d s e i d m a