（无机化学专业论文）氨基酸和二肽的非水毛细管电泳分离研究.pdf

摘要 毛细管电泳( c e ) 是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动 力的新型液相分离分析技术。它具有高效、快速、样品用量少等特点，被广 泛应用予生命科学、生物技术、医学药物、环境科学、法医科学等诸多领域。 毛细管电泳的一个分支非水毛细管电泳( n o n a q u e o u sc a p i l l a r y e l e e t r o p h o r e s i s ，n a c e ) ，不但具有毛细管电泳的优点，而且与水相毛细管电泳 相比它拥有自己独特的特点与优势。其研究范围也在不断扩大，其中包括无 机离子、中性物质、有机酸、多肽、聚糖、药物及其代谢物的分离等，涵盖 了基础研究和分析应用两个方面。但目前很多非水溶液的物理化学性质还不 是很清楚，而且有机试剂的种类繁多，这都给试剂的选择带来一定的困难。 对溶剂系统选择的规律和优化方法的研究应是今后一段时间研究的重点，可 为研究者提供不少课题。 氨基酸、二肽是生命有机体的重要组成部分，研究其非水毛细管电泳分 离对蛋白质多肽的研究、以及医药、食品、卫生等领域都具有重要意义。但 由于大多数的氨基酸和肽没有或只有很弱的紫外吸收，直接紫外检测满足不 了低含量组分测定的要求。衍生试剂的研究和应用不仅可以克服仪器分析方 法在某些方面的局限性，而且在化学方法的分离、富集和检测中起着重要的 作用。目前广为应用的衍生试剂主要有9 芴甲氧羰基氯( f m o c ) 、邻苯二甲 醛( o p a ) 和5 一二甲氨基萘一1 一磺酰氯( d n s - - c 1 ) 。但是这些衍生试剂本 身的一些特性决定了其应用的局限性。为此，本文采用新型衍生化试剂，改 变被测化合物的特性，进行了氨基酸和二肽的非水毛细管电泳的分离，结果 令人满意。 论文分三章： 第一章： 简单介绍了非水毛细管电泳的发展及其在药物分析、手性拆分、无机离 子分离等各方面的应用。并对非水毛细管电泳分离被分析物的策略及其相关 的基础知识进行了阐述。 第二章： 二肽衍生物的非水毛细管电泳分离研究，采用新型衍生试剂l ，2 - 苯并 3 ，4 二氢咔唑9 乙基氯甲酸酯( b c e o c ) 作为柱前衍生试剂，利用非水毛细 管电泳模式对二肽进行了分离，考察试剂用于二肽分离的几个关键条件，实 现了1 1 种氨基酸的快速基线分离。 第三章： 非水毛细管电泳对氨基酸衍生物的分离研究，包括两部分： 3 1 非水毛细管电泳对b c e o c 氨基酸衍生物的分离研究，以l 2 - 苯并。3 。4 二氢咔唑9 乙基氯甲酸酯( b c e o c ) 作柱前衍生试剂，考察了不同有 机溶剂及不同电解质对分离的影响，同时对分离过程中的相关参数进行 了优化，在不加任何添加剂的情况下，实现了1 4 种氨基酸的基线分离。 3 2 非水毛细管电泳对b c e c c i 氨基酸衍生物的分离研究，以2 - ( 1 i h - 苯 a 】 咔唑) 乙基氯甲酸酯( b c e c c 1 ) 作为柱前衍生试剂，采用醋酸铵醋酸为 电解质，甲醇乙腈混和液为有机溶剂对氨基酸衍生物进行了分离，实现 了1 1 种氨基酸的基线分离。 关键词：非水毛细管电泳，氨基酸，二肽 i i a bs t r a c t c a p i l l a r ye l e e t r o p h o r e s i s ( c e ) i sak i n do fn e wc h r o m a t o g r a p h ys e p a r a t i o n a n a l y s i st e c h n i q u e ，w h i c ha d o p t sc a p i l l a r ya ss e p a r a t i o np a s s a g ea n dh i g hv o l t a g e c o n s t a a tc u r r e n te l e c t r i c a lf i e l da sd r i v i n gf o r c e i th a sm a n y a d v a n t a g e si n c l u d i n g h i 曲p e r f o r m a n c e ，h i g hs p e e da n ds m a l ls a m p l ec o n s u m p t i o n , a n dh a sb e e n w i d e l yu s e di nt h ef i e l do fc h e m i s t r y , b i o c h e m i s t r y , l i f es c i e n c e ，m e d i c a ld r u g s ， e n v i r o n m e n t a ls c i e n c ea n ds of o r t h a sab r a n c ho fc e ，n o n a q u e o u sc a p i l l a r ye l e c t t o p h o r e s i s ( n a c e ) n o tn o l y h a st h ea d v a n t a g eo fc e ，b ma l s oh a si t so w nu n i q u ec h a r a c t e r i s t i ca n dt h e s u p e r i o r i t yc o m p a r i n gw i t ht h ea q u e o u sp h a s ec a p i l l a r y t h er e s e a r c hs c o p ei s a l s oc o n t i n u o u s l ye x p a n d i n g , a n dh a sc o v e r e dt h eb a s i cr e s e a r c ha n dt h ea n a l y s i s a p p l i c a t i o n 舶烛r e l a t e dt ot h es e p a r a t i o no fi n o r g a n i ci o n , n e u t r a lm a t e r i a l t h e o r g a n i ca c i d ，t h ep o l y p e p t i d e ，t h ep o l y s a c c h a r i d , t h em e d i c i n ea n di t sm e t a b o l i t e a n ds oo i la tp r e s e n t , h o w e v e r , t h ep h y s i c o c h e m i c a lp r o p e r t i e so fv e r ym a n y n o n a q u e o u ss o l u t i o n sa r cn o tv e r yc l e a r m o r e o v e r , t h eo r g a n i cr e a g e n tt y p e sa r e v a r i o u s 。a l lo f t h e s ep r o b l e m sc a nb d n gc e r t a i nd i f f i c u l t yt ot h ec h o i c eo fr e a g e n t b i l lt h e yc a np r o v i d em a n ys u b j e c t sf o rt h er e s e a e h e rw i t hr e f e r e n c et ot h ec h o i c e r u l eo f t h es o l v e n ts y s t e ma n dt h eo p t i m i z e dm e t h o dr e s e a r c hi nf u t u r e a m i n oa c i d sa n dd i p e p t i d e sa r ei m p o r t a n tc o m p o n e n t so fl i f eo r g a n i s m s , s o t h er e s e a r c ho ft h e i rs e p a r a t i o nb yn a c ei so f g r e a ts i g n i f i c a n c eo nt h er e s e a r c h i np r o t e i n , p o l y p e p t i d e ，m e d i c i n e ，f o o d , h e a l t h , a n do t h e rf i e l d s h o w e v e ra m i n o a c i d sa n dd i p e p t i d e sh a v en oo rw e a ku l t r a v i o l e ta b s o r p t i o na n dt h el o wc o n t e n t s ， s ot h e yc a nn o tb ed e t e c t e dd i r e c t l yb yu vd e t e c t i o n a tp r e s e n t , t h ew i d e l yu s e d d e r i v a t i z a t i o n r e a g e n t s a r e o - p h t h a l a l d e h y d e ( o p a ) ，9 - f l u o r e n y l m e t h y l c h l o r o f o r m a t e ( f m o c ) ，d a n s y le h l o r i d e ( d n s ) ，b u tt h e s er e a g e n t sh a v ea l s ob e e n r e p o r t e ds o i d _ ev a r i o u ss h o r t c o m i n g si nt h e i ra p p l i c a t i o n , s u c ha ss h o r td e t e c t i o n w a v e l e n g t h s ，p o o rs t a b i l i t y o f r e a g e n t s a n ds e r i o u si n t e r f e r e n c ei nt h e d e t e r m i n a t i o no f b i o l o g i c a ls a m p l e s 1 l i i nt h i st h e s i s ，t w on e wl a b e l i n gr e a g e n t sh a v eb e e ns y n t h e s i z e da n da p p l i e d t ot h e s e p a r a t i o no fa l i 妇o a c i d sa n dd i p e p t i d e sb yn o n a q u c o u sc a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s t h et h e s i sc o n s i s t so f t h r e ec h a p t e r s c h a p t e r o n e ： t h ed e v e l o p m e n t so f n o n a q u e o n sc a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ( n a c e la n dt h e a p p l i c a t i o n si nm e d i c i n ea n a l y s i s ，c h i l a ls e p a r a t i o n , i n o r g a n i ci o ns e p a r a t i o na n d m a n yo t h e rf i e l d sh a v eb e e ns i m # yi n t r o d u c e d m o r e o v e r , t h es t r a t e g yo ft h e s u b s t a n c es e a r a t i o na n dt h ec o r r e l a t i o ne l e m e n t a r yk n o w l e d g eh a v eb e e ns i m p l y e l u c i d a t e d c h a p t e rt w o ： t h es e p a r a t i o n so fd e r i v a t i z e d d i p e p t i d e sb yn o t i a q u c o n sc a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i sw a si n v e s t i g a t e d an e wm e t h o df o rt h e s e p a r a t i o n o fd i p e p t i d e sb yn a c eu s i n g 1 , 2 - b e n z o 一3 ，4 - d i h y d r o e a r b a z o l e - 9 - e t h y l e h l o r o f o r m a t e ( b c e o c ) a s d e r i v a t i z a t i o nr e a g e n th a sb e e nd e v e l o p e d t h ee f f e c to fs e v e r a lk e yf a c t o r so n t h e s e p a r a t i o nw a ss t u d i e d u n d e rt h ep r o p o s e dc o n d i t i o n s ，ag o o db a s e l i n e r e s o l u t i o nf o r11d e f i v a t i z e dd i p e p t i d e sw a sa c h i e v e d c h a p t e rt h r e e ： t h es 印a s a t i o mo fa m i n o i d sb yn a c ew e r ei n v e s t i g a t e d t h ep r i n c i p a l c o n t e n t so f t h i sc h a p t e rc o n s i s to f t w o p a r t s 3 1t h ea p p l i c a t i o n so f1 , 2 一b e n z o - 3 4 d i l l y d r o c a r b a z o l e - 9 一e t h y lc h l o r a f o r m a t e ( b c e o c ) f o rs e p a r a t i o no f a m i n oa c i d sb yn a c ea 聆i n v e s t i g a t e d as i m p l ea n dr a p i dm e t h o df o rt h es e p a r a t i o no fd e r i v a t i z e da m i n oa c i d s u s i n g1 2 - b e n z o 3 , 4 一d i h y d r o e a r b a z o l e - 9 - e t h y l c h i o r o f o r m g e ( b c e o c ) 躯 d e r i v a t i z a t i o nr e a g e n tb yn o n a q u e o n sc a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i sh a sb e e nf o rt h e f i r s tt i m ep r o p o s e d t h ee f f e c to ft h ed i f f e r e n to r g a n i cs o l v e n ta n dt h ed i f f e r e n t e l e c t r o l y t eo nt h es e p a r a t i o nw a so b s e r v e d i na d d i t i o n , t h eo t h e re f f e c to ft h e p r o p o r t i o no ft h em i x t u r eo r g a n i cs o l v e n t , t h ec o n c e n t r a t i o n so f t h ee l e c t r o l y t e ， s e p a r a t i o nv o l t a g e a n d t e m p e r a t u r e w a s a l s oe v a l u a t e di nt h i s i v e x p e r i m e n t a t i o n u n d e rt h eo p t i m a lc o n d i t i o n s 1 4d e r i v a t i z e da m i n oa c i d sw e 糟 r e s o l v e dw i t ha s a t i s f a c t o x yr e s u l t 3 2t h ea p p l i c a t i o n so f 2 - ( 1 1 h - b e n z o a l c a r b a z o ! 一11 - y 1 ) e t h y lc a r b o n o c h l o r i d a t e 0 3 c e c - c 0f o rt h es e p a r a t i o no f a m i n oa c i d sb yn a c e a r ei n v e s t i g a t e d a s i m p l ea n dr a p i dm e t h o df o rt h es e p a r a t i o no fd e r i v a t i z e da m i n oa c i d s u s i n gb c e c c la sd e r i v a t i z a t i o nr e a g e n tb yn a c eh a sb e e nd e v e l o p e d w i 吐lt h e m i x e dm e t h a n o la n da c e t o n i t r i l ea st h ee l u t i o ns o l v e n t , as a t i s f a c t o r ys e p a r a t i o n f o rt h e1 la m i n oa c i dd e r i v a t i v e sc o u l db eo b t a i n e dw h e na m m o n i u ma c e t a t ea n d a c e t i ca c i dw e r eu s e d 勰t h ed e c 缸j o l y t e 1 1 1 ee f f e c t so f s e v e r a k e yf a c t o r ss u c ha s t h e p r o p o r t i o nb c t w e , c nm e o ha n da c n t h ec o n c * n t r a f i o n so fa m m o n i u m a c e t a t ea n da c e t i ca c i do ns e p a r a t i o nw c l ea l s oe v a l u a t e di nt h i se x p e r i m e n t a t i o n k e yw o r d s ：n o n a q u e o u sc a p i l l a r ye l e e t r o p h o r e s i s , a m i n oa c i d , d i p e p t i d e v 曲阜师范大学硕士学位论文 第一章非水毛细管电泳综述 1 引言 毛细管电泳( c e ) 又称高效毛细管电泳( h p c e ) 或毛细管电分离法 ( c e s m ) ，是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液 相分离分析技术1 1 1 。它满足了仪器分析所要求的高效、快速、样品用量少等 最基本和最优异的特点，再加上仪器的自动化程度高、操作简单、试剂消耗 少、环境污染小等优点，使其在十几年的时间中，特别是在最近几年，受到 分离分析科学家的极大关注，成为生物化学和分析化学中最受瞩目，发展最 快的一种分离分析新技术。而作为毛细管电泳的一个分支非水毛细管电泳 ( n o n a q u e o u sc a p i l l a r ye l e e l r o p h o r e s i s ，n a c e ) ，不但具有毛细管电泳的优点， 且与水相毛细管电泳相比它拥有自己独特的特点与优势。随着毛细管电泳的 发展与完善非水毛细管电泳同样也经历了飞速地发展，研究的范围也在不断 地扩大，涵盖了基础研究和分析运用两个方面。非水毛细管电泳在理论、研 究方法、技术挑战都引起了人们的注意。在有关运用方面的文献中，非水毛 细管电泳法所做出的成绩更是不可磨灭。虽然非水毛细管电泳有很多显著的 优越性，但因它还是一个相对较新的领域，目前很多非水溶液的物理化学性 质还不是很清楚，而且有机试剂的种类繁多，这些都给试剂的选择带来一 定的困难口。对溶剂系统选择的规律和优化方法的研究应是今后一段时间研 究的重点，可为研究者提供不少课题。氨基酸、二肽是生命有机体的重要组 成部分，研究其非水毛细管分离对蛋白质多肽的研究、有机化学中的合成以 及医药、食品、卫生等领域都具有重要意义。 2 非水毛细管电泳的发展及应用 电泳作为一种分析工具出现，已有近百年的历史，但真正被视作一种在 生物和生物化学中有重要意义的技术，则是在1 9 3 7 年由瑞典科学家 a t i s e l i u s 首先提出来的，后来a t i s e l i u s 又和他的同事们一起第一次从人的 血清中分离出白蛋白、a 球蛋白，b 球蛋白和t 球蛋白，由于a t i s e l i u s 对电 泳技术发展和应用的杰出贡献，使他成为1 9 4 8 年诺贝尔化学奖的得主。从 曲阜师范大学硕士学位论文 那时至今已有5 0 多年的历史，而高效毛细管电泳却是近2 0 年内才迅速发展 起来的一种现代分离分析新技术。 1 9 8 1 年道格森( j o r g e n s o n ) 和卢卡斯( l u k a e s ) 的杰出的工作成为毛细 管电泳发展史上的里程碑。他们对丹酰化氨基酸( d a n s y l a t e da m i n oa c i d s ， d n s - a a s ) 进行了分离，采用荧光检测，结果得到了快速高效的分离，峰型 对称，理论塔板数超过4 0 0 0 0 0 m ，这样高的单位柱效是以前的分离方法从未 达到的。道格森( j o r g e n s o n ) 等人还利用色谱理论解释了毛细管区带电泳 ( c z e ) 中的谱带分散过程，还试用填充毛细管进行了毛细管电色谱( c e c ) 的分离，由于他们成功的实验和异常出色的理论工作，极大的推动了毛细管 电泳的发展，揭开毛细管迅速发展的序幕，展现出了高效毛细管电泳的美好 前景1 3 1 。 8 0 年代中后期毛细管电泳在世界范围内的研究全面展开。1 9 8 3 年耶滕 ( h j e r t e n ) 将传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术移植发展为毛细管凝胶电泳 ( c g e ) 。1 9 8 4 年特洛贝( t e r a b e ) 使用含有表面活性剂胶束的背景电解质， 实现了中性化合物的分离，开创了胶束电动毛细管色谱( m e c c ) ，1 9 8 5 年， 耶滕( h j e n e n ) 首次引入了毛细管等电聚焦( c i e f ) 。1 9 8 7 年卡戈尔( k a r g e r ) 改进了凝胶填充技术，提高了毛细管凝胶电泳( c g e ) 的分离效率。至此， 毛细管电泳的几种主要的分离模式已经形成 4 1 。 ( 1 ) 毛细管区带电泳( c a p i l l a r y z o n e e l e c t r o p h o r e s i s ，c z e ) 毛细管区带电泳是在毛细管内进行的自由溶液区带电泳。各组分在恒定 电场和电渗流的双重作用下以恒定但不同速度向毛细管的另一端迁移，经过 一段时间后，被分离成若干个谱带，从而实现各组分的分离。分离主要依赖 各组分之间的有效淌度的差异实现的。毛细管区带电泳适用范围很广，包括 氨基酸分析、多肽分析、离子分析、广泛的对映体分析和离子态物质的分析 瞄_ ，是毛细管电泳中最简单的一种方式，也是目前应用最广的一种方式， 其它的分离模式都是在区带电泳的基础上针对毛细管和缓冲溶液进行修饰 衍生而来的。 ( 2 ) 胶束电动毛细管色谱( m i c e l l a re l e c t r o k i n e t i cc a p i l l a r yc h r o m a t o g r a p h y m e c c 或m e k c ) 2 曲阜师范大学硕士学位论文 胶束电动色谱( m e c c ) 是以胶束为准固定相的一种电动色谱，是电泳 技术与色谱技术的结合。m e c c 是在电泳缓冲液中加入表面活性剂，当溶 液中表面活性剂浓度超过i 临界胶束浓度时，表面活性剂分子之间的疏水基团 聚集在一起形成胶柬( 准固定相) ，溶质不仅可以由于淌度差异而分离，同 时又可基于在水相和胶束相之间的分配系数不同而得到分离，这样在一般毛 细管中不能分离的化合物，在m e c c 中可以分离。 m e k c 是毛细管电泳中充满活力的一种分离方式。对于带电和不带电的 物质以及具有亲水性或疏水性的物质，都可以用它来进行分离。m b k c 的应 用范围包括氨基酸、核酸、维生素、广泛的药物等。 ( 3 ) 毛细管凝胶电泳( c a p i l l a r yg e l e l e c t r o p h o r e s i sc g e ) 毛细管凝胶电泳( c g e ) 综合了毛细管电泳和平板凝胶电泳的优点，成 为当今分离度极高的一种电泳分离技术。毛细管凝胶电泳主要用于生物大分 子的分离，如蛋白质和核酸等。它是基于分子尺寸的不同，让溶质在合适的 起分子筛作用的聚合物内进行电泳而分离。其分离机理与传统的板式或管式 凝胶电泳完全相同【8 】【9 】。 ( 4 ) 毛细管等电聚焦( c a p i l l a r y i s o e l e e t r i e f o c u s i n g c i e f ) 毛细管等电聚焦是一项依据等电点( p i ) 进行多肽或蛋白质分离的高分 辨电泳技术，它能分离相差仅0 0 0 5 甚至更低的p i 单位的蛋白质。它的分离 依据就是根据组分的等电点不同，在电场的作用下，向由两性电解质在电场 形成的不同p r l 值处移动，直到组分的p i 与电解质的p h 相等为止。 ( 5 ) 毛细管电色谱( c a p i l l a r ye l e c t r o c h r o m a t o g r a p h y c e c ) 毛细管电色谱是将液相中的固定相微粒填充到毛细管中，以样品与毛细 管固定相之间的相互作用为分离机理，以电渗流为流动相驱动力的色谱过 程，虽然柱效有所下降，但是增加了选择性。它也是毛细管区带电泳的一个 变种。 在填充柱电色谱柱中，柱的填充是一项关键的技术，迄今报道的填充方 法有3 种，控制法、压力法和电填充法。电填充法利用电泳力进行填充。效 果较好。气泡产生是导致c e c 分离失败的最常见原因，气泡一般出现在塞 子与填料交界处，由于两侧电渗淌度不同，易形成气泡，气泡的存在增大电 3 曲阜师范大学硕士学位论文 阻，使分离电流减少，最终中断分离。 总之，毛细管电泳的这几种分离模式在实际样品的分离中相互补充，能 够实现所需样品的满意分离分析。但是，各种分离模式具有不同的分离依据 和机理，因此，需要针对不同的分析对象采用不同的分离方式。 在c e 中，大多数分析物是在水相缓冲液中得以分离，为了提高其分离度， 人们把注意力集中在寻找缓冲体系的添加剂上而忽略了对水相体系本身的 考虑，直到1 9 8 4 年。w a l b r o e h l 等1 1 0 】在毛细管区带电泳中首次用纯有机溶剂乙 腈代替水介质，以高氯酸化四甲基胺等为电解质分离了喹啉衍生物，并取得 了较好的结果。非水毛细管电泳( n a c e ) 应用于分离的研究才引起了人们的 兴趣。但是可能是由于同时出现的胶柬电动色谱( m e k c ) 也可以对中性和疏 水性化合物进行极好选择性分离，或者当时人们对有机溶剂中的质子迁移、 不同分子间的相互作用和溶剂化行为等不甚了解。以及可能是作为背景电解 质( b g e ) 溶液，水介质有许多优点，如溶解电解质的能力强、廉价、不挥发与 检测器的兼容性好等，直至到了九十年代初，人们才发现非水毛细管电泳，在 对许多化合物的分析方面能提供比水介质毛细管电泳更多的优点。从那时起。 毛细管电泳的又一分支一非水毛细管电泳( n a c e ) 弓l 起了人们越来越多的 关注，对它的理论研究和实际应用相应的增加。1 9 9 4 年y e 和k h a l e d i 等首 次报道了纯溶剂中对映体的分离之后，有关采用非水介质分离对映体的文献 屡有发表，非水毛细管电泳( n a c e ) 应用于对映体分离的研究也开始引起了 人们的兴趣。近来，非水毛细管电泳的文章急剧增多，有关溶剂体系、电鳃质 的选择及优化方法等诸多方面得到了广泛的研究，分析物范围也在不断拓 宽。 非水介质可以增加疏水物质的溶解度、减少疏水分析物对毛细管壁吸附 以及降低毛细管中的焦耳热等：加之分析时间短、分离效率高、检测手段多 等特性使得n a c e 在药物特别是难用于水的药物及其代谢产物分析中的应用 日趋广泛。手性物质的分离是分析化学及药物化学领域研究较多的一个热点 问题。以往对手性化合物的分离大多都是在水相体系中完成的，由于受溶解 度和分离选择性的限制，人们对于一些疏水性化合物的分离显得束手无策。 近年来，随着非水毛细管电泳( n a c e ) 应用范围的不断拓宽，并因其具有许 4 曲阜师范大学硕士学位论文 多优于水相体系的特点，因此在手性化合物分离的领域中逐渐受到分析工作 者的青睐；特别是1 9 9 4 年y e 和k h a l e d i 首次用n a c e 分离对映体以来，关于 n a c e 的手性分离的报道就越来越多。n a c e 除了在药物分析和手性分离方 面有着广泛的用途外，在其它方面的应用也日趋广泛。其中包括无机离子、 中性物质、有机酸、多肽和聚糖以及体液和环境分析等。2 0 0 0 年以来，有关 非水毛细管的应用最多的是对药物及其代谢物的分析，手性化合物的分离， 还包括无机离子、中性物质、有机酸、多肽和聚糖等。韩素芹对此做了总结， 其应用事例见列表l 【1 1 1 。目前，应用的研究热点主要集中在有机溶剂、电解质、 检测器的选择以及方法的优化等方面。 表l 药静分析，湎的应用( i ) ! 塾! 垡竺苎竺塑! 盟堕! 塑型! ! ! 分新对象涪剂电解蘑控穗方莹文献 c l 弦缸钮射b g 1 m l s h l n o l l el m e l u m l t l a a l n o l a e 照 t 藏胰赣一 m e t m w l - 孵a 殖峨 u a m l u a e 弹m 乞 溆 m e e t k l i t e l 瑚l 出翻田瑚脚僻t t + 姗w e t a l m i l e + lw2 i 呶a c e t i ca c i d 弱谢伽1 5 烈c i t蛐岫嚣 型，妇+ 舰w n t 厦 m e l a m l a e e m i a f l e 擘急= ：i “m 鼬。d i x i e 呵 m 警m d 施f m g e h m o l 蚰e , 播蚺畦电t b 码由警廿m e t a m l m a t i n g l l l f o a l k a b f l t a m a i a i l e - m e d m n l 唑一紫mk 时a 咖触m 圳 b le 砷曲l 一一 事h 盎 7 0 , m e b a o i 日d b 孵血、 轴m n i t e m e l a n o l 曼艘西f 2 ，l - l 岫触 目m b 。 o n l e s a m lm e i h a m l 王：“峥妇瞳畸硷m _ 妇m 懈l m e e m , p a e m m e 嘲钿la t e l m i t n k m e t h a m l 爿眦m m + lo a c e t i c “+ 嘟岫出 u v l 瓢随鲑+ 删 e $ 1 m s q 嘲ma c e 协r 知 u v c m i ca e i l + t m o 叫岣 鬯卫“竺。“细p 虹 + 2 口m t c e t g “ 。 i o 竺磐肭t + u v 鬻n e c 撼 箍麓燃+ 一 2 缸鹾_ m ，m 一一 嚣谳竺篮氅：fuolltltam：蛐日o m 茸e t t m 嚣祷 剪 n 豫 堕皇堑蔓盔兰堡圭兰堡丝苎 c 面蛔i 缸 i m q u m l u e 知且出 m e t 目m o l e 勘q m ：h e m i m l d 哪睫柚t 0 喇磐蚺t + d 础唧 m 6 c k t h 驴m 垴圾，西埔 m 砘酬蹦姘翟盛嚣盅i ：尝d 睡a m y 3 ，4 - m 妯_ d 如， m e t 姗峄蛔_ m f o m a n i d e m e t u o l - e 血m o l 点俚蜘缸玉m e b u 0 1 2 嘶m a m m o n i u m 晴量k 审撙y 鞋s 畦啦m u d e p m m 盥 a c e m 蚓e 蛔妇l - l 曲j hm e l l m m l 譬e 妇商虹盎 蝴豳麓苗“岫卜 钿警甄e k l 聃# 咖 缸1 m 岫岫 p 捌l u c t 噼畔妇柚d 蛔1 嘲蚰 m p u n 地g 玛k 血哆 a 咖蛐e - m h h o | ! 斑i 一t 洫m 啦i 吐m e t h a m o | 吣 妻竺血酬细订i i l 辩嘲咄 a # s 氆m ! ? m 嫩k i d 二签w 删2 n 圩瓤船陇 弩盛嚣妇a c i d u v+ 艇峨 。 2 0 r a ma m m o n i u m e l s m ：篙掣蹦硼 2 2 5 蹩。”粤衄地u v ，鹤1 m s + 姒b m r d 一 n 鲑d j 衄_ 鲁+ l 晡e 强 知t 越 2 0 唑岫蚰鼍u v + l m 啦a c , d 一 ，群。l u d i n m 眇+ u v q j m 矗m 茸c d 1 m 辩出e t 1 血瓤e k 佃由睡蹦 r a d i u m 越e _ 静妇由 勘k 出* s 口k s m m em e r w o ! b 目b 豳 b m m h i m e l m m o l m e l u m o ! n 佃e 2 4 h 血抽馨 t 嘶k f o m i m i d e 6 捌0 l 鹾m 雠a c i d 4 - 1 0 a m “i 妞b 由函电 7 ，皿m 抽糕- f m 眦m d 萼盛= 船一w+ l 鞋船缸d - 。 q5 睫矗c c 越+ 1 0 硅瑾+ 删岫mu v 1 ) 4 嚣e 址a c i d + l 曲州i pe h 细泌t | i d i u m 科出奄c a 瞳 n 群强+ 0l 赋洳u v 越n 努 冀 弘 弘 撕 竹 赞 剪 柏 n 酊 撕 玎 船 将 努 孔 些皇塑堇盔兰堡主兰竺堡塞 坌堑壁篓! ! 型皇竺堕 堡矍查鲞苎竺 j m 毋瑚n 趟u v 罐擎峨- 触銎黜w c 自删l - d 斑1 4 b t 呻胁 _ - h h 斜- c ，c 阻 h l 面孽 诹q 1 嫣傩 - o 目醯 n _ 姆强幽 m e m l c - l m 蛐 n m “油m 日d e a o e m i 帕k 庙捌h 瓣i “ 繁= 留i d 踟。u v+ 1 睫扯耻 罂烨鼬w + 毗m e l l m d l 鳃缸m t g “函嘲u v l e 2 1 1 1 1 嘲m l e 誓鬯m 。p “”+ u v 衄m 罅“ 。 o 甜m 删n 钾 箕i i f 姗t m 耻量u v z 破藩棚叫衄善鲁 黜。吣嚣啤。1 i 掣盅溢wh 山口d 由i l m fl l a b 蛙m e 缸凼p 譬h 型熊堂婚协娅酬 m e i 廓黄黛乙辩 朴热患痛、盐藏伪麻黄 黩、鬣谈蕺右荑抄芬，扑甲醌段 冉：麓 筵朝棠乙鬃 六种抗榜神婀药糟 廨黄中生物碱娄 耪防己生格麓 甲群 甲薯z 一 甲并 甲 镏罂警蛐。w+ 链m k 证 _ 曲i 皿曲鲁+ 斑 譬d 忉：j 吐l 曩哪卜1 i v , m s * to d 国 三? 嘲羹蠢废+ 3 0 吐i u v 。 曲蛳1 绉+ 2 知m 写9 吼电化擘拴锶 臼 ，阻m 蠢敷钠+ j 蠢曩黩唧 盥学羹+ 伪乙w 壤钠 一 讨鬓最蟹w 删峨桉+ 捌瞧罄1 郴 裴瞥黥勰硼磷 l 删伽+ 如甜岛鲍电导硼 已，i 雌鼙。擀 盐竣洛贝林 ! 掣柠檬赣+ 7 蜊u v l 琳 7 竹 鬻 势 曲 n 配 醒 国 葡 n 花 嚣 秘 曲阜师范大学硕士学位论文 襄2 手性化合物夏无机 早韵分析度用 ! 塾! 堡型竺坚! ! 坚竺! 竺塑竺苎! 翌堡堕竺 分析对象格荆电解质控嚣方法文鼙 8 曲阜师范大学硕士学位论文 衰3 箕健方厦的分析应用 t j31 h e 商目唧酗妇 身新对象器嗣电解质 柱藩方密文越 l m a c e t i c 竺+ 2 0 耐 h s i 皿( t o n l u a 2 搬t 1 2 m me i s m o l m m e , + 捌t r i n e z 1 3 d 矗- s h a y d 目h ：咖 i a ， ! 二融，妇i f - 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