水和饮料的细菌学检验PPT课件.ppt

实验十二水和饮料的细菌学检验,1,一.实验目的1.学习水和饮料中细菌总数及大肠菌群的测定原理、意义。2.掌握水和饮料中细菌总数及大肠菌群的检测方法。,2,二、实验原理水也是微生物存在的天然环境，水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。水中微生物种类及数量可说明水源被有机物污染的程度。一般地面水比地下水含菌数量多，并易被病原菌污染。水和饮料的微生物学检查，常测定其细菌总数和大肠杆菌菌群数，判断水和饮料被污染的程度。我国现行的生活饮用水的卫生标准为1m1水中细菌总数不超过100个；每1升水中大肠菌群数不超过3个，超过此数，表示水源可能受粪便等污染严重，水中可能有病原菌存在。通常采用肉膏蛋白胨琼脂培养基测得样品中细菌总数的近似值。,3,大肠菌群是指在3724h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称，主要由肠杆菌科中埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属四个属的细菌组成。主要来源于人畜粪便，可作粪便污染的指示菌。水和饮料的大肠菌群数以100ml样品内含有大肠菌群最可能数（MPN）表示。水样中大肠菌群的数量是直接反映水源被人畜排泄物污染程度的一项重要指标。大肠菌群已作粪便污染的指示菌以评价水和饮料的卫生质量。,4,三、主要器材1.培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培养基，伊红美兰琼脂培养基，乳糖发酵管。2.材料无菌三角瓶，无菌平皿，无菌吸管，无菌试管，无菌过滤器，无菌水等。,5,在乳糖蛋白胨培养基中乳糖起选择作用；溴甲酚紫起产酸指示，还有抑制其他细菌作用。,伊红美兰琼脂培养基,伊红、美兰作指示剂，在乳糖发酵产酸时两者结合成复合物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。,6,四、操作步骤（一）细菌总数的测定1.取水样：先将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌，再打开水龙头放水5min，用无菌三角瓶接取水样，将瓶塞盖好。池水、河水或湖水应取离岸边较远（5m）距水面10-15cm的深层水样。先将灭菌的带塞玻璃瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检测，否则需放入冰箱中保存。,7,2.以无菌操作将池水、河水、湖水、饮料逐级稀释成10-2稀释液。3.用无菌吸管分别吸取水样及饮料的原样、稀释液各1ml于无菌平皿中。4.分别倒约15ml融化并冷至45左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即旋转混匀。5.凝固后倒置于37培养箱中培养24h后计数菌落。,8,（二）大肠菌群检测（滤膜法）1.滤膜清洗：将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，煮沸三次，每次15min，洗去残留溶剂。2.滤器灭菌：滤膜、滤器经0.1a，灭菌20min。3.过滤水样：将清洁水样各取333ml注入滤器中，加盖，抽滤。滤完后再加等量的无菌水抽滤，以冲洗滤器壁。4.培养：取下滤膜，将无菌的一面贴在伊红美蓝平板培养基上，37倒置培养24h。5.镜检：挑取紫黑色或紫红色、有金属光泽的菌落进行涂片、革兰氏染色、镜检。6.乳糖发酵：凡镜检为革兰氏染色阴性、无芽孢的杆菌，每个菌落接种一支乳糖发酵管，37培养24h，产酸、产气者为大肠菌群阳性。未产酸、产气者继续培养至48h，仍未产酸、产气者为大肠菌群阴性。,9,滤膜法测定示意图,10,五、实验结果（一）实验结果1.报告水样、饮料细菌总数测定结果。2.根据有大肠菌群的阳性管数查表计算。（二）思考题1.国家对自来水的细菌总数有一标准，各地能否自行设计其测定条件（如培养温度、时间等）来测定水样中细菌总数？为什么？2.伊红美兰培养基含有那几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？3.所测水样、饮料是否合乎饮用标准？,11,六注意事项