M蛋白的检测与鉴定.doc

.M蛋白的检测与鉴定一、M蛋白的基础知识M蛋白是浆细胞或B 淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白，其氨基酸组成及排列顺序十分均一，空间构象、电泳特征也完全相同，本质为免疫球蛋白或其片段（轻链、重链等）。由于它产生于单一克隆（monoclone），又常出现于多发性骨髓瘤（multiple myeloma）、巨球蛋白血症（macroglobulinemia）、恶性淋巴瘤（malignantlym phoma） 病人的血或尿中，故称M 蛋白。这些M 蛋白大多无抗体活性，所以又称为副蛋白（paraprotein）。M 蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。恶性M 蛋白血症多见于多发性骨髓瘤（包括轻链病）、巨球蛋白血症、重链病、7SIg M 病（Solomen Konkel 病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病（C 端基因缺陷） 等。意义不明的M 蛋白血症（monoclonal gammopathyof undetermined significance ，M G US） 又分为两种，一种是与其他恶性肿瘤（如恶性淋巴瘤） 伴发者，另一种即所谓良性M 蛋白血症。M 蛋白的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。二、M蛋白的鉴定1多发性骨髓瘤与巨球蛋白血症时的M 蛋白检测和鉴定（1）血清总蛋白定量。90 的患者血清总蛋白含量升高（70 的患者100gL），约10的患者正常或甚至偏低（如轻链病时）。（2）血清蛋白醋纤膜或琼脂糖电泳。M 蛋白在电泳时出现典型的单株峰（亦称M区带），特点是区带窄而浓，扫描时呈现尖高峰，在区高比宽2，在区1。此M区带可因Ig的不同而出现在在2的任何区域。M蛋白增殖的另一特点是其他各区带明显减少，显示图像较简单。有时有的患者血中M蛋白并不高，这是由突变细胞的Ig分泌能力决定的。这种病人的血清在电泳时M峰可不明显，易被其他蛋白掩盖，需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳来检测。（3）血清Ig定量。一般M蛋白所属Ig含量均显著增高，其他类Ig则正常或显著减低。（4）免疫电泳。 正常人血清免疫电泳结果：可分辨出20 多种蛋白成分。在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。通常Ig组分靠阴极端，最靠近加样孔者为Ig M，依次为IgA、IgG，三者成平滑的连续沉淀线。 多发骨髓瘤：多发性骨髓瘤分IgG、IgA、Ig M、IgI）和IgE5 种，IgG 和IgA 又分亚类，所有Ig的轻链又分两个型。因此，免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异，从慢2区皆可出现。IgG 1 多出现在慢区，IgG 4 在2区。M 蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧。由于此种病人血清中Ig 含量甚高，免疫扩散时可出现抗原绝对过剩而不出现沉淀线，此时需稀释血清重做，往往可获得满意结果。 巨球蛋白血症：由于IgM 分子大量增殖所致。在免疫电泳时，常常出现以下特征：一是沉淀线明显变形。正常情况下，IgM形成短小沉淀线，不易看到变形。当IgM大量出现时，则会使整个IgM沉淀线变形。二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。三是电泳时IgM组分无迁移，这多是Ig M分子聚合，电泳不移动所致。（5）尿本周蛋白检测。 定性检测： 用热沉淀法和磺基水杨酸法。 免疫电泳法：用待检尿浓缩后进行免疫电泳，大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者，仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。本法6080的骨髓瘤病人和几乎全部轻链病病人可检出尿本周蛋白。 轻链白蛋白戊二醛交联免疫电泳法：多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性，正常人阴性。本法尿本周蛋白检出率为100，假阳性4，尿中含有200gml 时即可出现阳性结果。2重链病时M 蛋白检测与鉴定与多发性骨髓瘤相同，免疫电泳时由于重链分子较Ig 分子小，故迁移率快，电泳位置较靠阳极侧（）。但重链病一般需选择免疫电泳证实。37SIg M 病时M 蛋白的检测与鉴定一般Ig M 为五聚体，沉降系数为19S ，而7S IgM患者的IgM为单体，沉降系数为7S 。证明7S IgM 有两种方法：一种是在测定Ig M 总量后，将被测血清12 ml 过Sepharose 6B柱，再根据洗脱峰图用面积仪测出7S Ig M占总IgM的百分比，与Ig M总量换算即得7S IgM的绝对值。另一方法即为植物血凝素（PHA）选择电泳。此法原理是五聚体Ig M可与PHA 结合形成沉淀，而单体IgM不与PHA结合。在琼脂胶中加入PHA，后进行电泳，五聚体IgM 被P H A 所阻留，而7S Ig M 继续向阳极泳动，并可与随后加至抗体槽中的Ig M 抗血清反应，形成单一沉淀弧。4半分子病时M 蛋白检测与鉴定所谓半分子病（halfmolecule）是指此种M 蛋白由一条重键和一条轻链组成，分子量是正常Ig 分子的12 或12（因半分子病肽链往往有部分缺失）。至今报告过IgG 和IgA 的半分子病。除上述检测方法外，尚须对“半分子”进行特殊鉴定。方法有： 免疫电泳法鉴定半分子M 蛋白的迁移率。电泳时发现具有IgG 或IgA 的电泳特征而迁移率明显快于二者时（泳向正极可达2 区），应注意有无本病的可能。 十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳，推算M 蛋白的分子量。 超速离心分析， 测定M 蛋白的沉淀系数。 Fc抗原决定簇的确定。用相应抗重链血清对比患者与正常人相应Ig 的区别。5测定免疫球蛋白轻链型筛选M 蛋白正常人有五类免疫球蛋白，其轻链有两种型，即型或型。对于每个Ig分子而言，其轻链只有一种，不是就是。但对一个体的Ig 分子而言，则有和两种链型，且其比例基本上是固定的，即约为21 。任何原因引起的Ig 分子多克隆增殖，如慢性肝病，系统性红斑狼疮、某些恶性肿瘤时，其值不变。而M 蛋白发生时，是单克隆细胞的恶性增殖，所以在Ig 量明显增高的同时，其比值必然发生改变， 即一种轻链型的Ig 分子增多。利用适当的方法，分别定量测定血清中、型Ig 分子的量，即可特异而简便地诊断M 蛋白病。测定方法有两种，一是用浊度测定技术分别测定含或的Ig 的量，一种是用单相免疫扩散法测定型、型Ig 的含量及比值。单扩法是在琼脂凝胶板上打孔，排列呈梅花型，中心孔注入抗、抗混合抗体，周围孔放正常人及患者待测血清，然后进行扩散。正常血清与抗血清之间可见对称双线。若患者的轻链Ig 升高，其沉淀线向内移，而线有不同程度向外移，双环间距增宽。若轻链Ig 含量增高，则表现为环距减小、融合或跨环现象。此外，该法对IgG、IgA、IgD 类型的轻链诊断准确率较高，而对Ig M型诊断不够理想，其原因是Ig M分子大，扩散迁移率小，同时五聚体立体结构也影