（农产品加工及贮藏工程专业论文）橙皮中多甲氧基黄酮含量分析和提取工艺研究.pdf

摘要 橙皮中多甲氧基黄酮含量分析和提取 工艺研究 农产品加工及贮藏工程专业硕士研究生黄明发 指导教师焦必宁研究员 付陈梅助理研究员 摘要 我国是世界柑桔第二大生产国，2 0 0 7 年产量达2 0 0 0 万吨。同时，我国每年因加工而产 生的柑桔皮渣约5 0 万吨，除少量用于提取精油、生产饲料外，多作为垃圾进行焚烧或舍弃， 既给环境造成污染，又是资源的极大浪费。研究表明，多甲氧基黄酮( p o l y m 砒似 删n a v e s ， p m f s ) 是一类仅存在于柑桔属水果中的黄酮化合物，在柑桔果皮部位含量丰富，它具有抗癌、 抑制肿瘤、抗炎症、抗突变、抗血小板凝集、降胆固醇水平及抗菌活性等生理功能，同时它 可作为柑桔品种来源、杂种初筛等园艺分类学上的标识物，也可用来评价橙汁是否存在掺假 情况。鉴于其重要功能，美国已将它成功应用于功能性食品的开发中，市场前景可观。因此， 分析研究柑桔皮渣中p m f s 的含量与分布，提取并纯化具有高附加值的p m f s ，具有十分重 要的社会效益和经济效益。 本研究以橙皮为原料，以高效液相色谱仪为检测手段，建立了橙皮n o b 、w n 、s 玳等 3 种p m f s 的检测方法，并对重庆三峡库区1 0 个区县6 7 个甜橙皮中p m f s 含量进行了分析； 通过响应曲面法优化了橙皮p m f s 的提取工艺，并采用阳离子交换树脂和大孔树脂等对橙皮 p m f s 粗提物进行初步纯化，其主要研究结果如下： l 、建立了橙皮中n o b 、 闲、s n 等3 种p m f s 的高效液相色谱法。橙皮经石油醚提 取，色谱条件为：岛津l c - 6 a d 高效液相色谱仪，y 、g ( 依利特) c 1 8 分析柱( 2 5 0 4 6 m m ，1 0 斗m ) ， 流动相为0 2 的醋酸水溶液和8 0 的乙腈水溶液，梯度洗脱，流速1 o m i i i l i n ，二极管阵列 检测器( 3 3 0 i 】m ) ，进样量为l o 止，柱温为3 0 。结果表明，n o b 、w n 、s n 等3 种p m f s 的保留时间在1 0 9 0 n l i l l 1 4 3 0 i i l i l l 之间，平均回收率在9 6 0 7 9 8 7 9 之间，相对标准偏 差为1 9 1 2 2 7 ，精密度为1 2 7 1 5 5 。可见，该方法操作简单，方便快速，具有较 高的灵敏度和精密度，可满足橙皮p m f s 的质量控制和品质快速检测的需要。 2 、重庆三峡库区橙皮中p m f s 的含量分析结果表明，甜橙果皮中的p m f s 主要以n o b 为主，平均含量为0 2 l m g g ，占总p m f s 含量的6 0 2 3 ，其次是s 和 n 。平均含量分 别为o 0 9 i t 眺和o 0 5 n 吡。 在2 3 个甜橙品种中，特罗维他甜橙果皮中p m f s 含量最高，为0 6 0 i i 眺，是含量最低的 卡拉卡拉脐橙的2 7 3 倍，其次是哈姆林甜橙和铜水7 2 1 锦橙，其含量均为0 4 4 n 砭泡；并且 西南大学硕十学位论文 特罗维他甜橙中的n o b 、s 矾和t a n 含量也是最高的，分别为o 3 8 m g 倌、0 1 2 m 眺、o 1 0 m g 儋， 分别占总p m f s 含量的6 3 3 3 、2 0 0 0 和1 6 6 7 ；n o b 和s 烈含量最低的是卡拉卡拉脐橙、 奉节脐橙和涪陵锦橙。 不同区县甜橙皮中p m f s 含量测定结果表明，n o b 和 蝌含量最高的是忠县的橙皮， 其含量分别为0 2 6 m g 值、o 0 7 m g 倌，s 酣含量最高的是万州区的橙皮，含量为0 1 1 毗，总 p m f s 含量最高的是忠县，其次是万州区，其含量分别为o 4 3m g 、0 4 1 m g g 。 不同区县同一品种p m f s 含量的测定结果表明，忠县的锦橙和朋娜脐橙、万州区的纽荷 尔脐橙所含p m f s 含量最高，分别是o 4 6i t 礓泡、o 4 0 毗和o 3 7 m g g 。 3 、以石油醚为提取溶剂，研究了料液比、提取温度、提取时间和提取次数等对提取率 的影响，通过响应曲面法分析，得出橙皮p m f s 的最佳提取工艺：料液比( w ) l ：1 3 3 5 、 提取温度5 7 、提取时间5 3 h ，提取3 次时所得理论最大值为1 0 5 ( 干重计) ；最佳工艺 参数下橙皮p m f s 粗提物( 浸膏) 的得率约为2 4 4 8 9 ，l 沁( 干重计) ，提取率为1 0 4 ，试验 值与理论值相差1 o o 。其响应曲面拟合方程为： y ：o 0 9 7 6 8 2 0 0 0 3 0 1 3 x 1 + o 0 0 4 6 8 3 x 2 + 0 0 0 4 1 8 0 x 3 - 0 舢2 0 6 2 牛x 1 x 1 + o 0 0 1 3 9 8 x 2 x 1 0 0 0 6 7 7 0 x 2 掌x 2 0 0 0 2 2 5 7 x 3 x l + o 0 0 3 7 2 5 x ，x 2 旬0 0 2 9 4 5 幸x 3 事x 3 4 、树脂初步纯化橙皮p m f s 试验表明，d o w c x 阳离子交换树脂的效果最佳，吸附量为 0 3 3 l t l l 泡，解吸率高达9 2 1 l 。d o 、耽x 阳离子交换树脂纯化p m f s 的工艺路线中各因素为： 上样浓度为0 3 0 m 幽n l 、流速为2 o m i m i n ，8 0 的乙醇水溶液洗脱，用量为4 0 0 m i ，纯度 为9 2 。 i i 关键词：柑桔橙皮多甲氧基黄酮 检测提取分离纯化 a b s t t a c t ，、j1 j 1j jjj 乏蛀u d l e s0 nt n ec i e t e r m l n a n t l o na n c ie x t r a c t l o n o ft h ep o l y m e t h e x y l a t e dn a v o n e sf r o m 0 r a n g ep e e l s c a n d i d a t eo fa 伊。一f o o dp r o c e s s i n ga n dp r e s e r v a t i o ne n g i n e e r i n g ： h u a n gm i n g f a s u p e r v i s o r ： p r o f j i a ob i n i n g a p r o f uc h e n m e i a b s t r a c t a t2 0 0 5 ，：h i i l ah a db e c o n 硷t l l e c o i l db i g g c s tp r l u c e ro fc i 佃塔i i it h ew o r l d ，w h o a r m u a lo u t p u t 弧c e e d c d2 0 0 0n l i n i 衄塔i i i2 0 0 7 0 l i i 圮o m e rh 觚d ，e v e 巧y e 缸5 0 0 恤儿瑚n dt 0 璐c 蛔龉p e e li n i g h t b eb r o u g h t 胁p i d c e 鼹吨p m c e d u 懈i nc 峨o f w t l i c hl i n l e 锄玳m n tc o u l db e 腑dl 研e 豁锄a lo i l 锄d 庇e d s ，b u t 廿l em o s tm i g h tp o 玎疵豇心跚匝t 豁w 笛t ew i t l l o u tf l l l ll l t i l i z a _ t i o 也s m 豫s t t l d i e s l i l f m m a t ：t h ep o l y l m t l l o x y l 砷葩n 利伽燃( p m f s ) i sas o no fn a v o i d so i l l y 丘d mc m sg 即佻m a i l l l ye ) 【i s t i i l g i i lc i 仃吣p l ，w m c ho 、加sm a n yp _ h ) ，s i o l o 舀c a lf i i n c t i o 璐叭c h 舔枷c a n c e r t i 】m i i l ：h i b i t i o 玑枷 i n f l a i 衄尬矗o i i a n t i - p l a t e l e ta g g r e g 撕o i i 础e i i l gc h o l e s t e r o l ，锄t i b a c 耐a la c t i 访锣锄d o n 锄di sa b k t 0b er e 羽帕e d 笛m a r k 盯m a t e r i a lf 0 rv a r i e 哆i 枷f i c 撕o n 蜥dp r i m a 巧s c 陀即j n g 狃dc h e c l c i i l g a d u l t e 魁d o n a c c o r d 吨t 0n 圮i 硼砌咖tf l l i l c 6 0 璐d b o v e ，p m f sh 勰b c 饥d e v c l 叩e d 越缸曲i l a lf 0 0 di l l u s ，蛐a g o o d 缸l 珊1 1 l e f e 触，s t i l d y o n c t 既t 勰d d i s t r i b 砸0 n o f p m f s i i l c i 仃璐p 1 s 姐d h o w t o 妇ee x t r a c t i a n dp 蛐c 撕0 nt e c l l i l o l o 日o fp m f s 盥yr e s u l ti ni i l l p 硎a n ts i a la n de c i d n 硎c e f r e c t s i l l 吐l i sq 慨她缸豳g 撇n l o d so fn o b ，t a n 粕ds 烈i l l 蚴n g ep e e lb yh p l cw 舔 e s t a b l i s h e d 觚t l y ；o n 圮b 勰i so ft e s t i i l gi n e 吐l o d s ，p m f sc o n t 印t so f6 7o m n g es 锄p l e sw e 心姐a l y z c d 丘d m1 0c o l m t r i e s 锄dd i s t r i c t si nt i l r 优：g o r g e s 托s e n r o i ra r e ao fc h o n 舀l i n g ；t 1 1 e m 硼i t c 蛳q i 圯o f p m f sw 弱0 p t i n l i z e db y 他s p o n s es 吲k e 锄a l y s i s a n dc 撕吼e x c h 粕g e 粕d 删啦o p o r 0 嵝潞i i lw e 愆 a p p l i e dt 0s t i l d y 埘m a r yp 面f i c 撕0 i lo fc n l d ee x 叫s t h e 衄i n 他s u l t sa 托l i s t e d 勰f o l l o 邺 1 协t i i l gm t l l o d so f n o b ，t a na n ds 烈b yh p l c f i 枷y s a 呷l e sw 哪e x 咄t e db yp e 缸o l e 啪 e 吐l e f ；吐圮c h r o m a l o g 髓mc d i t i o 璐i i l c l u d 骼h p l c ( s 硒m 孤l c 枷) ，c 1 8c o l 啪( y w g ，2 5 0 x 4 ，6 m m ， 10 i l m ) ，t l l e l u t i 彻o f0 2 a c e t i c i d 锄d8 0 e t 0 i l i t r i l e 弱m em o m l ep h a 船，目叫i e n te l u t i o n ( s p e e d ： 1 o 儿m i n ) ，d i o d e 锄yd e t e c t o r ( d a d ，3 3 0 姗) ，l0 此i i l j e c t i o nv o l u m e 锄d3 0 c o l 硼眦t e i 印蹦咖鹏 髓er e s u l t ss h o w e d 岫：础剃t i 眦o f n o b ，t a n 觚ds 玳啪g c d 丘咖1 0 9 嘶i nt o1 4 3 0 i l l i i l ，m e a v e r a g er e c o v 甜e sw e 他9 6 0 7 9 8 7 9 ，t l 圮r e l a t i v es t a i l d a r dd e 、，i a t i o 璐w e 1 9 1 2 2 7 锄dm e p 他c i s i 帆r e a c h e d1 2 7 1 5 5 h e n ，t h j ss i i 印l c 姐d 缸tm e t h o dc 锄s a t i s 匆吐圮豫q u i i e n 啪t so f t e s 恤gp m f sa n dq u a l 时c 伽觚1 1 h i 两南大学硕士学位论文 2 f r o mm er e s u l t so fp m f sc 叩t e n ta 脏l y s i so fn 鹏eg o r g e s 碍s e n ，o i ra 聆ao fc h o n g q i i 唱，n o b ( 0 2 l9 i i l 眈) 、糯m em i i lp a n 唧2 3 ) i i lp m f s ，雠c o n dw 弱s 玳( o 0 9 1 1 1 蝴柚d 恤a 咖吼to f t a n ( o 0 5 m dw 豳a 硷1 0 w e s t e f r e c t so fv 撕e d e so np m f sc o n t e n t ss h o w e d l a t ：m t as w e e to 砌g eh a dt l 圯l l i g h e s tp m f sl e v c l ( o 6 0 m g g ) ，w l l i c hw 醛2 7 3t i h 圮so ft 心l o w e s t ( c a 随c mn a v e lo 啪g e ) ，a n d 山e c o n d1 1 i g h e s tc t 饥t o fp m i se 】【i s t e di i lb o 廿lh 锄1 i i lo 砌g e 锄dt o n g s h u i 7 2 一lj i i l c h e n g ( cj 加p 埘括( l - 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l i q u i d 碰o ( ，v ) ，强吼t i t e i 印e 咖鸭 t i m ea n d 能q u c ) rw e 豫0 b t 乏曲e d ：l ：1 3 3 5 ，5 7 ，5 3 h 锄d3 心s l 婶c t i v e l y ，a n dt l l e 此。托t i c 麟吮t i i l g r a t ew 舔1 0 5 ( d 眦dp e e l ) ；o nt l l eo p t i i n 眦e x 缸t i o np r o c e s s e s ，t h ey i e l df a t eo f c n m ep m f se x 仃a c t e d 肋mp e e lw 笛2 4 4 8 9 l 【g ( 埘e dp e e l ) ，a i l d 圮f a 咖a le x 乜批t h l gr 咖w 舔1 0 4 ，w l l i c h 、躯j 鹏tl o w 盱 1 0 0 吐脚圮m e o r e t i cv a l u e 1 1 圮陀g s s i e 删i o nw 硒鹪f 0 u o w ： y = o 0 9 7 6 8 2 m 舯3 0 1 3 宰x l + o 0 0 4 6 8 3 x 2 + o 0 0 4 1 8 0 x 3 o 0 0 2 0 6 2 掌x l 宰x l + o 0 0 1 3 9 8 x 2 x l 一0 0 0 6 7 7 0 x 2 幸x 2 - o 0 0 2 2 5 7 x 3 x l + o 0 0 3 7 2 5 x 3 x 2 _ o 朋2 9 4 5 x 3 x 3 4 t h e 舯吼a r y 北s i i l 懿p e f i m ts h o w e dt i l a t ：d o w 甑c a t i e x c h a i l g er e s i nh a d 圮b e s t 麟u l t s ， w h o a d s o 印t i 跏u n t 锄dd e s o r p t i o nr a t e 陀h e d0 3 3 m g 佗a n d9 2 1 1 豫s 】p c c 石v e l y n l eo p t 池d c o n d i t i o l ：i s 舡l dp c 鼯sr m i i eo fp u 订f y i i l gp m f sb yd o w e xc a t i o ne x c k m g er 懿i i lw e 他l i s t e d 弱f 0 i l o w s ： 侧e c t i n gc c e n 位l t i 蛐锄dn o ws p 吧e dw e 陀t 镐o 3 0 m g 咖，2 i ) i i l u 咄r e s p e c 6 y e l y ；t h ec l u e n tw 笛 8 0 e 啪o l 锄d 恤锄饥m t 惦e dw 笛4 0 0 m l ，p u f i t ) ，w 勰9 2 1 蛔刖o r d s ：c i n l i s ，o m g ep e e l ，p o l y i 】舱t l l o x y i a t e dn a v o m s 口m f s ) ，d c t e l m i n 撕o i l 既的c t i ，i s o l a l i 吼 锄dp u f i f i c 撕 i v 中文英文 缩略词表 多甲氧基黄酮p 0 l y i l l 甜1 0 x y l a t e df l a v o n e s 川皮苷 桔黄酮 n o b i l e t i l l t h 目e r e t i n 上缸g e r e t m 甜橙黄酮 s i l l e i l s e t i l l 七甲氧基黄酮 六甲氧基黄酮h 麟锄e t l l o x y n a v o n e 黄芩配基 5 ，6 ，7 ，4 t e 劬m e 廿1 y l s c u t e l l 袱妇 缩写 p m 匣s n o b s 矾 髓p h e x s c u 高效液相色谱法h i g l l - p e 墒m 趾c el i q u i dc h r o m a t 0 孕a p h ym l c 紫外 u l t r a v i o l e t 独创性声明 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加 了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同 仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者：秀讲1 i 签字日期：矽善年厂月j 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口 保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名亥仍9 瓠 导师签名：垒参绎j 签字日期：叫鸭 年月岁日 签字日期：一孑年b 月弓日 论文成果使用承诺 本人声明所撰写的学位论文是筮坐宝位陵搀导师指导下完成的研究 工作及取得的研究成果。本人承诺，在没有经过论文第一指导教师书面允许的情 况下，不使用本论文中的有关数据用于发表论文或会议交流等。同时同意导师可 以在合适的情况下同时以导师和论文作者的名义使用论文中的有关数据。 学位论文作者：兹盯 曩 签字日期：矽g 年月多日 注：本论文为科技部科研院所社会公益基金项目“柑桔产品质量检测关键技术 及标准研究”( 2 0 0 4 d m 4 j l4 7 ) 和国家“十一五”科技支撑计划项目( 2 0 0 7 b a d 4 7 8 0 7 ) 的部份研究内容。 第1 章文献综述 第l 章文献综述 我国柑桔资源极其丰富，2 0 0 7 年产量达2 0 0 0 万吨，居世界第二位。与国外相比，我国柑桔 加工率偏少，且加工过程中会产生约5 0 的皮渣，因此我国每年将排放约5 0 万吨皮渣，只有少量 用于提取精油或生产饲料等，大多作为垃圾进行焚烧或舍弃，既给环境造成极大污染，又是资源 的极大浪费。据研究，柑桔皮渣中富含生物活性成分，如类黄酮类、类萜、胡萝卜素类、香豆素 类、丙烯酮类以及甘油糖脂质等，它们具有众多生理功能，已成为目前的研究热点和重点之一。 多甲氧基黄酮( p o l y r m m o x y l a t e dn a v o 鹏s ，p m f s ) 是一类其它蔬菜水果中至今尚未发现 而只有柑桔类才具有的柑桔黄酮化合物，作为一种特征成分，它在柑桔果皮部位含量丰富， 并且具有很强的抗氧化活性和消除自由基能力，尤其在抗癌、抑制肿瘤、抗炎症、抗突变、 抗血小板凝集、降胆固醇水平及抗菌活性等方面效果突出【1 叫；同时它可作为柑桔品种来源、 杂种初筛等园艺分类学上的标识物。也可用来评价橙汁是否存在掺假情况【7 1 。由于p m f s 的 重要生理功能，美国芝加哥s o 峨0 恤公司已商品化生产一种基于柑桔p m f s 和棕榈果萃取 物的保健品，产品名为“s y 血o r ，经临床试验表明，该产品可同时降低总胆固醇( t c ) 、低 密度脂蛋白胆固醇( u ) l c ) 和甘油三脂( 1 g ) ，并可增加高密度脂蛋白( h d l ) ，是一强抗 氧化剂并兼有抗炎症效果，且无药物交互作用，对心脑血管疾病具有很好疗效【8 】。该产品在 全球各大药店均有销售，前景相当可观! 我国柑桔p m f s 的研究报道较少，特别在含量分析、分离纯化等方面报道更少。缺乏系统 性。因此，本综述主要针对近年来国外柑桔p m f s 在含量分布、检测、分离纯化技术及其功能 作用等方面的研究最新状况进行综述，为今后国内进一步的研究开发提供参考。 1 1 柑桔p m f s 的含量及分布 1 1 1 性质与结构 柑桔富含类黄酮，主要包括黄烷酮、黄酮、黄酮醇及花色苷，其中以黄烷酮苷为主，而 p m f s 属柑桔属水果中特有的一类黄酮化合物，以自由糖苷配基形式存在，呈平面结构、弱极 性和脂溶性1 埘，难溶于水，易溶于热乙醇、苯、乙酸乙酯、石油醚、己烷等有机溶剂。图1 1 是柑桔黄酮的化学结构式，其官能团3 、5 、6 、7 、8 、2 、3 、4 和5 等位置发生4 个及以上甲氧 基团取代基则为p m f s ( 表l 1 ) 。 掣 图1 1 黄酮化学结构式 f i g 1 1s l n k 由l r e so fn a l 旧n e s 西南大学硕十学位论文 表1 1 已鉴别的部分p m f s i a b l e l - li d e n t i f i e dc o n 】p o u n ( 1 so f c i t 九l sp m f s 序号 取代基ocm p m f s 名称( 缩略词) 3567 8 2 3 4 ， 5 ，数目 lho c h 3ho c h 3o c h 3hho c m h 20 c h 3hh0 c h 3hho c h 3o c h 3 h 3ho c h 3o c h 3 o c h 3hhho c h 3h 4 5 6 7 h 0 c h 3ho c h 3 h 0 c h 3hh h ho c h 3h ho c h 3h h ho c h 3ho c h 3h h 8hh o c h 3hh ho c mo c h 3o c h 3 h 0 c h 3 0 c h 3 o c h 3 9hhh0 c h 3hh o c h 3o c mo c h 3 l oo c h 3 o c h 3ho c h 3h0 c h 3h o c h 3h l lo c h 3 o c h 3ho c h 3hho c h 3o c h 3h 1 2ho c h 3o c h 3o c h 3o c h 3hho c h 3h 1 3h0 c h 3 o c h 3 o c h 3hho c h 3 o c h 3h 1 4hh0 c h 3 o c h 3o c h 3ho c h 3o c h 3h 1 5ho c h 3ho c h 3o c h 3ho c h 30 c h 3h 1 6ho c h 3h0 c h 3ho c h 3o c h 3o c h 3h 1 7o c h 3o c h 3o c h 3 0 hhho c h 3o c h 3h 1 8ho h0 c h 3 o c h 3o c h 3h 0 c h 30 c h 3h 1 9o c h 3 o c h 3ho c h 3o c h 3h o c h 3o c h 3h 2 0ho c h 3o c h 3c i c h 3o c h 3ho c h 3o c h 3 h 5 ，7 ，8 ，4 ，四甲氧基黄酮 3 ，7 ，3 ，4 ，四甲氧基黄酮 黄芩配基( s c u ) 5 ，7 ，2 ，4 r 四甲氧基黄酮 5 ，2 ，3 ，4 ，四甲氧基黄酮 6 ，2 ，3 ：4 r - 四甲氧基黄酮 5 ，2 ，4 ，5 四甲氧基黄酮 6 ，2 ，4 ：5 ，- 四甲氧基黄酮 7 ，2 ，4 ：5 ，四甲氧基黄酮 3 ，5 ，7 ，2 ，4 l 五甲氧基黄酮 3 ，5 ，7 3 ，4 ，- 五甲氧基黄酮 桔黄酮( t a n ) 甜橙黄酮( s i n ) 5 脱甲氧基川皮苷 6 脱甲氧基川皮苷 5 ，7 2 ，3 ：4 ，- 五甲氧基黄酮 7 - c 哪- 3 ，5 ，6 ，3 ，4 - 五甲氧基黄酮 5 a i h 石，7 8 ，3 ，4 五甲氧基黄酮 3 ，5 ，7 ，8 ，3 ，4 ，六甲氧基黄酮 川皮苷、川陈皮素、蜜桔黄酮 ( n o b ) 2 l0 c h 3o c h 3o c h 3o c h 3hho c h 3o c h 3h 3 ，5 ，6 ，7 ，3 ， 4 ，六甲氧基黄酮( h e x ) 6 2 2 o h 0 c h 3o c h 3 0 c h 3 o c h 3ho c h 3 o c h 3hn a t 吼l d a i d a i6 2 3o c h 3o c h 3 o c h 30 h o c h 3ho c h 3 o c h 3h 7 司i h - 3 ，5 ，6 ，8 ，3 ，4 ，六甲氧基黄酮 6 2 4o c h 3 o c h 30 c h 3o c h 3o c h 3 ho c h 3o c h 3h 3 ，5 ，6 ，7 ，8 ，3 ，4 ，七甲氧基黄酮( h e p ) 7 1 1 2 含量与分布 柑桔p m f s 在果皮中含量居多( 一般为干重的0 0 5 0 5 0 ) ，尤其是果皮的油胞层，而 果汁、籽粒及叶片中含量甚少。迄今为止，从柑桔中分离并鉴别出2 0 多种p m f s ( 表1 ) 【9 ，1 0 - 1 1 】， n o b 、1 = a n 、s 玳、h e p 、h e x 和s c u 是目前研究的6 种主要p m f s ，以香精油中含量最丰富， 其次是糖蜜、干果皮和果汁，且以n o b 、t f 悄和h e p 含量居多( 表1 2 ) ，研究结果的差异可能 受品种、部位、产地、提取方法及生长期等因素影响。o m m o 等研究了不同生长期诺瓦桔( 桔 和葡萄柚杂交) 中p m f s 的含量水平，结果发现未成熟水果中n o b 、s 矾和”n 的含量最高， 2 4 4 4 4 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 5 6 6 第1 章文献综述 而h e x 和h e p 在生长直线的末期含量最高经进一步分析，发现它们仅存在果皮中【1 2 】。钱士 辉等研究了柑桔不同入药部位( 陈皮、青皮、桔核和桔络) 7 种p m f s 的含量及分布，结果显示 桔核与桔络中不含p m f s ，陈皮( o 1 2 4 ) 与青皮( 0 0 3 8 ) 中成分虽相似，但含量差异较大， 其中以陈皮药材中含量较高【l3 1 。， 表l - 2 柑桔果实、产品及副产物中p m f s 的含量( 单位：n 哕1 0 0 9 ) 1 a b l el 2c o l l t e t l to f p m f si i lc i 劬sh i t s ，p 刚u c t s ，b y p r o d u c t s ( u 1 1 i t ：i n 1 0 0 曲 注鬈均为干重且果肉未检出；b ：包括l o 种纯的鲜果汁、3 0 种巴氏灭菌汁和2 0 种浓缩汁，单位为m g ，l i i c ：单位为百分比；。， 表示未报道 1 2 柑桔p m f s 的检测方法 1 2 1 高效液相色谱法 高效液相色谱法( h i g l l - p e r 硒咖锄c el i q u i dc h r o n l a t o 孕印h y h p l c ) 是目前柑桔p m f s 的 主要分析方法，它通常以c 1 8 为固定相，乙腈( 或甲醇) 水为流动相，同时添加一定量醋酸 或磷酸防止峰形拖尾，检测器为紫外( u v ) 或二极管阵列检测器( d a d ) ，该方法具有样品 预处理简单、分辨率高、速度快、重复性好、精密度高等优点。 早在1 9 7 9 年，r o u s e 行等就采用紫外荧光双检测器，建立了一种能同时定量检测5 种 柑桔p m f s 的h p 【c 法1 2 叼；p i e t t a 等利用h p 【c - d a d 法快速地从橙皮中检测出 州、s c u 和3 习圣基4 ，5 ，6 ，7 四甲氧基黄酮【2 l 】：胡燕飞等基于微波辅助提取法，建立了陈皮中h e p 的 h p l c 法，结果表明，在0 0 2 5 0 4m 咖l 浓度范围内呈良好线性关系，相关系数r = o 9 9 9 8 ， 平均加样回收率达9 8 7 4 ，i 峪d 为0 9 3 【2 2 1 。 由于p m f s 成分复杂，反相梯度洗脱具有更强洗脱能力，是目前p m f s 的常用洗脱程序。 m o u l y 等【2 3 】建立了一种同时检测橙汁中黄酮类物质的h p l c - d a d 法，实验以乙腈水醋酸为 流动相，反相梯度洗脱，分别在2 8 0n m 和3 3 0n m 处同时检测出6 种黄烷酮糖苷( 脑) 和6 3 西南大学硕+ 学位论文 种p m f s ，用时6 0i i l i i l ；c h 锄等【2 4 】采用r p h p l c 法对牙买加和墨西哥2 0 种柑桔植物中6 种主要p m f s 进行了定量分析，试验以c 1 8 为固定相，水2 甲酸乙腈为流动相，紫外检测 器( 3 3 0 姗) ，梯度洗脱程序如下： 时间( m i l l )o1 03 0 ； 4 0 4 5 流动相( v v ) 8 5 ：5 ：1 06 5 ：5 ：3 54 5 ：5 ：5 08 5 ：5 ：1 08 5 ：5 ：1 0 结果表明，在所检测的2 0 种柑桔植物中，每种柑桔至少含有以上6 种p m f s 中的3 种， 其中o r t a i l i q u e ( 柑和橘的杂交种) 皮中p m f s 含量最高，其次是t 觚g e 咖e 和墨西哥甜橙，6 种p m f s 的保留时间均在3 1 3 8 m i i l 之间，虽分离度好。但分析时间较长。 我们知道，h p l c 的分析时间受保留因子、流速及柱长等因素影响，如果采用填料颗粒 小的短柱，可在短时间内实现快速、高效分离。b a c c o r s i 等【2 5 】建立了一种分析甜橙香精油 中6 种p m f s 的快速i 心h p l c 法。他们所用反相液谱柱与传统测定所用色谱柱相比，内径 ( 4 6 衄) 相同，粒度( 由5 邮l 降为3 凹1 ) 变小，柱长仅为3 0 i t 如，较传统液谱柱( 2 5 0 删n ) 大大缩短。研究结果发现，分析同一样品，快速l 心h p l c 的保留时间( 1 3 n l i l l ) 远远少于 传统液谱的保留时间( 一般为1 6 n l i l l ) 。可见，快速h p l c 分析柑桔p m f s 具有快速、低回压、 高流速和高分离效率等优点。而近年来才发展起来的超高效液相色谱( u 胁p c r f 0 】肋a n c e l i q u i dc h r 0 i m t o 孕a p h y u p l c ) 在原有h p l c 的基础上，开发了小颗粒填料、非常低系统体 积及快速检测手段等新技术，显著提高了分析通量、灵敏度及色谱峰容量，可满足p m f s 快 速检测的需要。 可见，h p l c 法分析柑桔p m f s 是一种简单、快速的方法，而对于较复杂的代谢物，研究发 现它同样适用。w h g 等【2 6 1 通过比较反相液谱( i 冲l c ) 和正相液谱( i p l c ) 在分析p m f s 代 谢物时的差异，建立了鼠尿液中n o b 两种代谢物( 3 去甲基n o b 和47 去甲基n o b ) 的n p l c 法。实验发现i 心l c 法不适用代谢物的检测：而以o j 为手性柱的n p 姐法则能达到很好分离， 且用时不到1 0 i t l i i l 。有关柑桔p m f sh p l c 分析方法的报道较多，表1 3 总结了近1 0 年来的部分 研究实例。 表1 3 近1 0 年来h p l c 法分析检测柑桔p m f s 的部分实例 t l b l el 3s o m e e x a l l l p l e so f p m f sb yh p l c i 1 1t 1 1 ep 弱tl oy e 躺 样品待分析物 样品前处理分析柱溶剂洗脱检测保留时间文献 甜橙皮n o b ，s i n ，m 二甲基亚砜浸提，过h e w l e n - p a c l 【a r dc i i1 2 四氢呋喃乙腈一永d a d 1 2 2 6m i i i 【6 】 t a n o 4 5 p m 滤膜( 2 5 0 4 咖，5 岬) 梯度洗脱3 4 0 i l m 桔皮s i n ，t a n ，n o b ，二甲基亚砜振荡浸提2 4 h ，s p h 甜鲫bo d sc l 。1 2 四氢呋喃乙腈一水d a d1 2 2 6r n i n 【1 2 】 h e p h 过o 4 5 p m 滤膜( 2 5 0 4 姗【i l 5 岬)梯度洗脱 3 4 0 1 1 m 2 0 0 b 血s i n ，既) ( ，n o b ，超滤，过滤，装柱，依次氢l t ha l l “mc l l o m m 磷酸乙腈d a d 加5 0m i l l 【1 9 】 糖蜜h e e s c u ，t a n ，氧化钠、醋酸和去离子水( 1 0 0 4 6 舢n ，5 阳1 ) 线性洗脱3 3 0 i l m x 。洗提 橙汁 s i n ，h e x ，n o b ，橙汁离心，浓缩，过滤 n u c l e o s i lc l 。水一乙腈四氢呋喃l m 岍s 3 5m i l l 【2 7 】 s c u h e p 砑n ( 2 5 0 x 4 6 m m ，5 岬)( 5 3 ：4 3 ：4 ) 3 4 0 i l m ( 保护柱：7 5 x 4 6 m m )线性洗脱 4 续表 第1 章文献综述 注：x ：异甜橙黄酮。5 - 去甲基- 川皮苷；y ”：5 7 羟基3 ，7 8 t 3 五甲氧基黄酮 由表1 3 可知，目前p m f s 的h p l c 分析大多采用c 1 8 柱和d a d 检测器，由于p m f s 是一类较 复杂的化合物，所以尽可能选择小颗粒填料和长柱来提高柱效进而提高分离度，但柱子太长 的话，其保留时间延长，所需流动相亦多，既费时又费钱。目前一些短柱和小颗粒填料的c 1 8 的成功应用，极大地加速了检测的速度和效率，满足快速检测的需要【3 1 1 。 1 2 2 液质联用 液质联用( l i q u i dc h 内m a t o 印巾h y - 埘ss p e c 眦时；l c m s ) 是指h p l c 与m s 串联的技术， 它集合了h p l c 的高分离效能与m s 的强结构鉴定能力，具有灵敏度高、选择性好、分析快速、 方便等优点，常用电离技术为大气压电离源( a p i ) ，包括电喷雾电离( e s i ) 和大气压化学电 离( a p c i ) ，前者适用于分子量为1 0 0 至1 5 00 0 0 d a 的极性分子和离子态溶质，后者适用于分子 量为1 0 0 至2 0 0 0 d a 的非极性和中等极性分子。由于柑桔p m f s 比香豆素和补骨脂素极性强，因 此其电离方式可用e s i + 和a p c i + 形式表达【3 2 1 。 e s i 是一种软电离技术