血管紧张素转化酶PPT课件.ppt

血管紧张素转化酶的测定及其临床意义检验科 2019 12 20 1 概述 血管紧张素转化酶 ACE 又称激肽酶 或肽基 羧基肽酶 系统命名为肽基 二肽水解酶 属血管内皮细胞膜结合酶 由肽的C端将氨基酸切为两段变换而来 可使肽链C端二肽残基水解 ACE可催化血管紧张素 十肽 水解成八肽的血管紧张素 使血管进一步收缩 血压升高 也可作用于肾上腺皮质 促进醛固酮的分泌 因此 ACE是肾素 血管紧张素 醛固酮的重要成分 2019 12 20 2 概述 ACE还催化具有降压作用的缓激肽水解而失去活性 ACE广泛分布于人体各组织 以附睾 睾丸及肺的含量较丰富 其中肺毛细血管内皮细胞ACE活性最高 肾 脑垂体等组织酶活性较低 ACE测定方法主要有比色法 酶偶联法等 血管紧张素转换酶的别名 血管紧张素转化酶 2019 12 20 3 转换酶的测定原理血管紧张素 1 三硝基苯磺酸钠 INBS 显色法 底物马尿酰 甘氨酰 甘氨酸 Hip Gly Gly 在ACE作用下 释放出甘氨酰 甘氨酸 Gly Gly 后者与三硝基苯磺酸 TNBS 作用 生成黄色的三硝基苯 甘氨酰 甘氨酸 TNP Gly Gly 其含量与ACE活性呈正相关 2 酶偶联法 ACE使底物马尿酸双甘肽 Hip Gly Gly 水解成马尿酸 Hip 和双甘肽 Gly Gly 后者与L 谷氨酰 3 羧基 4 硝基苯胺 GGCN 和 谷氨酰基转移酶 GGT 偶联 形成3 羧基 4 硝基苯胺 在340nm处测其吸光度 以反映ACE活性 2019 12 20 4 试剂 1 三硝基苯磺酸钠 INBS 显色法 底物液 用5mmol L的Tris溶液配制30mmol LHGG溶液 此液中含0 4mol LNa2SO4 0 3mol LNaCl 调pH7 3 0 1mol L硼酸盐缓冲液 pH9 0 100g L钨酸钠 含2个水 溶液 0 33mol LNaSO4 60mmol LTNBS溶液 2019 12 20 5 2 酶偶联法 50mmol LHEPES缓冲液 称羟 乙基哌嗪乙磺酸 HEPES 1 191g 加双蒸馏水100ml溶解 用于配制GGT CGCN和基质缓冲液 20kU LGGT贮存液 取HEPES缓冲液5ml 加入GGT100U 混匀后分装小瓶 20 保存 6 7kU LGGT应用液 将上述贮存液用二倍量的HEPES稀释配制 0 1mmol LGGCN溶液 称GGCN20mg 加入50mmol LHEPES60ml 溶解后4 保存 2019 12 20 6 基质缓冲液 称HEPES1 191g NaCl1 755g Na2SO45 68g 用双蒸馏水溶解后 用NaOH调pH至8 0 再补充双蒸馏水至100ml 4 保存 基质液 由Hip Gly Gly89 5mg加基质缓冲液10ml溶解混合而成 此液各试剂终浓度为 HEPES50mmol L NaCl30mmol L Na2SO4400mmol L Hip Gly Gly30mmol L 10mmol L双甘肽标准液 称Gly Gly52 9mg加双蒸馏水溶解 并稀释至100ml 此为贮存液 40mmol L 1份贮存液和3份双蒸馏水混合即为应用液 2019 12 20 7 正常值 1 三硝基苯磺酸钠 INBS 显色法 26 1 56 7kU L 2 酶偶联法 12 68U L 2019 12 20 8 化验结果临床意义 血清ACE测定主要同于肺部疾病的诊断 对其他系统疾病的诊疗也有一定价值 1 肺部疾病 绝大多数结节病患者血清ACE活力升高 其阳性率及幅度与病活动与否和病变累及的范围有关 肺结核也可升高 而哮喘发作 急性心原性肺水肿 慢性阻塞性肺疾患 自发性气胸 肺纤维化 成人呼吸窘迫综合征等血清ACE均有不同程度下降 2 肝脏疾病 多数肝脏病患者ACE活性升高 升高幅度依次为肝硬化 急性肝炎 慢性肝炎 脂肪肝则正常 2019 12 20 9 3 甲状腺疾病 甲亢患者ACE活性明显高于其他甲状腺疾病 且酶活力高低与T3 T4含量呈正相关 4 其他 糖尿病 虹膜炎 免疫母细胞肉瘤等 血清ACE升高 高血压 结肠炎等则降低 2019 12 20 10 附注 1 三硝基苯磺酸钠 INBS 显色法 标本在室温或冰箱存放1周 酶活力无明显变化 15 保存3周酶活性稳定 胆红素对ACE有明显抑制作用 故重度黄疸可使测定结果偏低 EDTA是ACE的强抑制剂 NaCl和Na2SO4对ACE有明显的活化作用 溶血 脂血对结果无影响 本法与紫外分光光度法酶活力单位一致 但其测得值为紫外法的9倍 2019 12 20 11 2 酶偶联法 当底物pH8 0 GGCN1 0mmol L GGT6 7ku L时 ACE活性与吸光度值有良好线性 线性范围大 即使ACE在1500U L 不用稀释也可获得理想结果 GGCN浓度选择 本反应体系中GGCN既是测定酶ACE的受体 又是指示酶GGT的供体 以1 0mmol L的GGCN最理想 在此浓度下GGCN与吸光度保持良好的线性 GGT对测定的影响 本反应利用GGT将双甘肽与GGCN偶联 生成黄色的3 羧基 4 硝基苯胺 其加入量可直接影响测定结果 GGT高浓度可使底物过度消耗 使吸光度偏离曲线 低浓度GGT又使吸光度偏低 灵敏度不高 每次加入0 335UGGT 可获得理想吸光度与线性 在此浓度下 酶基质液的