检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质.ppt

实验 检测生物组织中的糖类 脂肪和蛋白质 实验原理 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应 化学试剂 有机化合物 特定的颜色 还原糖 斐林试剂砖红色沉淀 脂肪 苏丹 或苏丹 染液 橘黄色 或红色 蛋白质 双缩脲试剂 紫色 淀粉 碘 蓝色 水浴加热 一 可溶性还原糖的检测 1 试剂 斐林试剂 2 原理 还原糖 斐林试剂砖红色沉淀 水浴加热 振荡混匀 50 65 水浴加热2min 2mL组织样液 刚配制的斐林试剂2mL 呈现浅蓝色 变成砖红色 Cu2O 主要是葡萄糖 果糖和麦芽糖 当质量分数0 1g mL的NaOH 甲液 与质量浓度为0 05g mL的CuSO4 乙液 混合后 立即生成淡蓝色的Cu OH 2悬浊液 Cu OH 2与葡萄糖 果糖 麦芽糖等可溶性还原糖共热 能够生成砖红色的Cu2O沉淀 因此 利用该反应 可证明样液中含可溶性还原糖 R CHO 2Cu OH 2 R COOH Cu2O 2H2O 甲液乙液等量混合 现用现配 砖红色的糖 还原糖 非 斐林试剂 常好吃 3 方法步骤 制备组织样液 梨或苹果 研磨 取5g 放入研钵中 洗净 去皮 切块 过滤 滤液 用单层纱布 显色反应 向试管中加入2ml组织样液 向试管中加入2ml新配制的斐林试剂或班氏试剂 振荡混匀 50 65 水浴加热2min 观察现象 溶液颜色变化 浅蓝色 棕色 砖红色 结论 生成砖红色沉淀 说明梨或苹果中含有还原糖 选材 苹果 梨 白萝卜 含糖量较高 颜色为白色或近于白色的植物组织 还原糖的检测结果 斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下 生成砖红色的Cu2O沉淀 二 脂肪的检测 1 试剂 苏丹 苏丹 2 原理 3 方法 直接染色法 制片观察法 4 步骤 苏三 苏丹 送了我一个橘黄色的胭脂 脂肪 制片 选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央 制成临时装片 滴1 2滴蒸馏水 盖上盖玻片 染色 在薄片上滴加2 3滴苏丹 染液 染色2 3min 洗去浮色 用吸水纸吸去染液 滴加体积分数为50 的酒精1 2滴 观察 在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒 然后用高倍镜观察 取材 花生种子 浸泡 h 去皮 将子叶削成薄片 视野中有橘黄色颗粒 橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒 脂肪 苏丹 或苏丹 染液橘黄色 或红色 注意事项 1 若用花生种子作实验材料 必须提前浸泡3 4小时 浸泡时间短了 不容易切片 浸泡时间过长 则组织太软 切下的薄片不易成形 切片要尽可能的薄 2 染色后一定要用50 的酒精溶液洗去浮色 酒精能溶解苏丹 染色和洗浮色时间不宜过长 三 蛋白质的检测 1 试剂 双缩脲试剂 2 原理 蛋白质 双缩脲试剂紫色络合物 双 双缩脲 子 紫色 弹 蛋白质 3 实验步骤 解读 将尿素加热 两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲 反应式为 双缩脲 H2NOC NH CONH2 在碱性环境 NaOH 中能和Cu2 作用生成紫色的络化物 这个反应叫做双缩脲反应 蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩脲结构相似 因此 蛋白质也可与双缩脲试剂发生颜色反应 双缩脲 双缩脲试剂 无色 紫色 创造碱性条件 提供Cu2 双缩脲试剂B3 4滴 双缩脲试剂A2mL 2mL组织样液 在碱性条件 NaOH 下 蛋白质中的肽键 NH CO 与Cu2 作用生生紫色络合物 因此 操作时 应先加A再加B 且A多B少 如果B过量 Cu2 的蓝色就会遮盖生成的紫色 返回 选材与制备组织样液 黄豆组织样液 或鸡蛋清稀释液 黄豆 浸泡 研磨 过滤 滤液 去皮 切片 蛋清液 鸡蛋 鸡蛋清稀释液 稀释 显色反应 向试管中注入2ml组织样液 向试管中注入2ml双缩脲试剂A 加入3 4滴双缩脲试剂B 观察现象 观察颜色变化 无 紫色 结论 加入双缩脲试剂A后 颜色呈现为无色 加入B后 变为紫色 说明鸡蛋清中有蛋白质存在 蛋白质的检测结果 注意事项 1 如果用鸡蛋清作为材料 则必须进行充分稀释 否则反应后的产物会粘固在试管内壁上 使反应不彻底 且试管不易洗刷干净 2 双缩脲试剂 A液 0 1g mLNaOH B液 0 01g mLCuSO4 先加A液后加B液 且B不能过量 不需要加热 3 过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应 使溶液呈蓝色 而掩盖生成的紫色 4 先加入A液2ml 摇匀 再加入B液3 4滴 摇匀 四 淀粉的检测 1 试剂 碘液 2 原理 淀粉 碘蓝色 3 实验步骤 制备组织样液 马铃薯块茎 研磨 取5g 放入研钵中 洗净 去皮 切块 过滤 滤液 显色反应 向试管中注入2ml组织样液 加入5滴碘 碘化钾 观察现象 观察溶液颜色变化 无色 蓝色 结论 溶液变蓝 说明马铃薯组织中有淀粉存在 苹果 梨 白萝卜 斐林试剂 砖红色沉淀 花生种子 苏丹 染液 苏丹 染液 橘黄色 红色 豆浆 牛奶 鸡蛋清 双缩脲试剂 紫色 面粉 马铃薯匀浆液 碘液 蓝色 注 鉴定还原糖需加热 脂肪的鉴定不一定要用显微镜 要观察脂肪颗粒 则必须用显微镜 斐林试剂与双缩脲试剂的比较 斐林试剂用的是甲液和乙液 须现配现用 混合均匀 水浴加热 双缩脲试剂用的是A液和B液 先加A液 后滴B液 不用水浴加热 斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和CuSO4组成 但二者有如下三点不同 溶液浓度不同 斐林试剂中NaOH的浓度为0 1g mL CuSO4的浓度为0 05g mL 双缩脲试剂中NaOH的浓度0 1g mL CuSO4的浓度为0 01g mL 使用原理不同 斐林试剂实质是新配制的Cu OH 2溶液 Cu OH 2被还原糖中的醛基还原为砖红色Cu2O沉淀 双缩脲