自身免疫性疾病的免疫学检验ppt课件.pptx

自身免疫性疾病的免疫学检验 1 返回总目录 目录 2 自身耐受 self tolerance 正常情况下 免疫系统对宿主自身的组织和细胞不产生免疫应答 自身免疫 autoimmunity 当某种原因使自身耐受性破坏时 免疫系统就会对自身组织成分 细胞成分及其产物发生免疫应答 第一节概述 3 自身免疫病 autoimmunedisease AID 是自身免疫应答过强或持续时间过久 表现为质和量的异常 所产生的自身抗体和 或 自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细胞和组织发动攻击 导致损伤或功能障碍 并出现相应临床症状 4 一 自身免疫病与风湿性疾病 风湿性疾病 rheumaticdiseases 泛指影响骨 关节及周围软组织等一组疾病 简称风湿病 5 结缔组织病 connectivetissuedisease CTD 是指病变主要发生于结缔组织 有组织黏液样水肿 纤维蛋白样变性及坏死性血管炎等基本病理变化的一组疾病 以往所指的结缔组织病或胶原病是风湿性疾病的一部分 它们和风湿性疾病不可完全等同 6 1 发生与感染 遗传 性激素等因素有关 属AID 2 结缔组织及血管的慢性炎症为其基本病理变化 3 病变可累及多系统 多器官 发病情况差异大 为异质性疾病 5 以关节 肌肉 软组织等疼痛为主要症状 6 血清中可查出多种自身抗体 7 对糖皮质激素及免疫抑制剂药物治疗有疗效 8 病程慢性 反复 进行性 最终可导致残疾或死亡 风湿病的临床特点 7 二 自身免疫病的共同特征 8 三 自身免疫病的分类 按自身抗原分类 器官特异性自身免疫性疾病 器官非特异性自身免疫性疾病 患者的病变常局限于某一特定的器官 由对器官的特异性抗原的免疫应答引起 全身性或系统性自身免疫性疾病 患者的病变可见于多种器官及结缔组织 结缔组织病或胶原病 9 10 11 12 按发病部位的解剖系统分类 13 14 一 自身抗原形成 分子模拟 四 自身免疫病的发病机制 隐蔽抗原的释放 自身抗原改变 15 多克隆激活 二 免疫系统发育和免疫调节异常 胸腺骨髓功能异常 Th1和Th2细胞功能失衡 16 三 遗传因素 17 1 自身抗体的作用 四 AID的病理损伤机制 抗血细胞表面抗原的抗体 18 1 自身抗体的作用 抗细胞表面受体抗体 重症肌无力 19 抗细胞表面受体抗体 毒性弥漫性甲状腺肿 Graves病 发病机制示意图 20 自身抗体 抗核抗体 肾小球 关节 皮肤和其它多种器官的毛细血管壁 结合 循环中的核抗原 多部位脉管炎系统性红斑狼疮 形成 可溶性抗原 抗体IC 反复沉积 1 自身抗体的作用 自身抗体与相应抗原形成的免疫复合物 21 2 自身应答性T淋巴细胞作用针对自身抗原发生免疫应答的T细胞可引起组织损伤 这类疾病属于 型超敏反应引起的疾病 3 巨嗜细胞和NK细胞的作用巨噬细胞在AID的组织损伤中也起重要作用 巨噬细胞被细胞因子激活后 就具有细胞毒作用 四 AID的病理损伤机制 返回章目录 22 抗核抗体 antinuclearantibody ANA 是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称 在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质 激发机体产生许多抗不同核成分的抗体 第二节自身免疫性疾病的免疫学检查 一 抗核抗体测定 23 ANA主要是IgG 也有IgM IgA IgD和IgE ANA无器官特异性和种属特异性 ANA主要存在于血清中 将检出ANA作为AID存在的依据 24 抗DNA抗体 抗dsDNA 抗nDNA 抗ssDNA 抗dDNA等抗组蛋白抗体 AHA 抗H1 抗H2A 抗H2B 抗H3 抗H4抗体等抗非组蛋白抗体 抗nRNP 抗U1RNP 抗Scl 70 抗SSA 抗Sm 抗SSB 抗Jo 1 抗Rib抗体 AnuA 抗DNP 抗D E多肽抗体 抗DM53抗体抗RANA抗体 抗着丝点 抗Ku抗体等抗核仁抗体 抗PM Scl抗体 抗Th To抗体 抗U3 RNP 抗4 6 S RNA抗体等 一 ANA的类型和临床意义 ANA谱 25 抗天然DNA nativeDNA nDNA 抗体 又称抗双链DNA doublestrandedDNA dsDNA 抗体 抗变性DNA denaturedDNA dDNA 抗体 又称抗单链DNA singlestrandedDNA ssDNA 抗体 对SLE有高特异性 SLE诊断标准之一 缓解期降低 70 90 SLE活动期增高 药物疗效 抗dsDNA抗体 抗DNA抗体 26 抗组蛋白抗体 anti histonicantibody AHA 由H1 H2A H2B H3和H4五个亚单位 各自都有特异性抗体 AHA 检出百分率 抗dsDNA 50 70 90 100 药物诱导性狼疮只能检出此 SLE AHA AHA 抗组蛋白抗体 27 可提取性核抗原 extractablenuclearantigen ENA 是盐水可提取性核抗原的总称 是非组蛋白的核蛋白 属酸性核蛋白抗原 由许多小分子量的RNA和多肽组成 抗ENA抗体 28 对风湿病有特异诊断价值的有以下七种 抗nRNP nuclearRNP nRNP 抗体 抗Sm抗体 抗SSA抗体 抗SSB抗体 抗Scl 70抗体 抗Jo 1抗体 抗核糖体抗体 29 抗DNP抗体 抗核蛋白抗体 核蛋白 DNP 抗原由DNA和蛋白质组成 DNP抗原有不溶性和可溶性两种 可分别产生相应的抗体 检出百分率 抗DNP 20 40 60 80 SLE非活动期 SLE活动期 抗不溶性DNP抗体 抗DNP 抗DNP 100 RA滑膜液中 抗DNP 抗可溶性DNP抗体 抗DNP抗体 30 抗核小体抗体 anti nucleosomeantibody AnuA 是细胞核染色质的基本单位 细胞凋亡而致核小体大量蓄积 诱导B细胞产生的AnuA是SLE特异性的标志抗体 抗dsDNA抗体 抗核小体抗体 抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性率为60 80 特异性 97 抗核小体抗体 31 32 二 ANA的检测方法 将患者血清先进行稀释 可以做定量试验 在1 80稀释仍呈阳性时 对SLE的诊断有较大的参考价值 形成胞核基质 ANA 抗人Ig FITC 1 荧光免疫法 33 34 均质型 抗核抗体核型 着丝点型 核仁型 斑点型 35 例 间接免疫荧光法 IIF法 测定抗dsDNA抗体 短膜虫的动基体内含有大量纯的dsDNA 无其他抗原干扰 可用作基质来测定抗dsDNA抗体 短膜虫替换小鼠肝切片或肝印片或Hep2 制成抗原基质 抗dsDNA 抗人IgG FITC 阳性结果可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光 测定抗dsDNA抗体具有特异性强 敏感性高的优点 36 用ELISA间接法检测抗dsDNA抗体 抗组蛋白抗体和抗核小体抗体 2 ELISA法 37 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 待检血清 按分子大小分开不同区带 分离 转印 NC膜上 抗ENA与膜上相应抗原带结合 抗人IgG HRP NC ENA 抗ENA 抗人IgG HRP 显色 3 IBT法 38 类风湿因子 rheumatoidfactor RF 是抗变性IgG的自身抗体 为19S的IgM 也可见7S的IgG和IgA 与人变性IgG结合 不与正常IgG发生凝集反应 RF出现在类风湿性关节炎 RA 患者中 约70 90 的血清中和约60 的滑膜液中可检出IgG类RF 二 类风湿因子测定 39 IgG类抗体与相应抗原结合后 即发生变性 在炎症过程中也可发生IgG变性 构成自身抗原 刺激免疫系统产生各种抗IgG抗体 滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合形成中等大小的IC 比血清中IgM类RF更易致病 40 一 RF检测方法 RF检测最常采用的试验方法 将IgG吸附在聚苯乙烯胶乳颗粒上作为诊断试剂 与待检血清中的RF结合 出现胶乳凝集颗粒 但此法的灵敏度和特异性均不高 而且只能检出血清中的IgM类RF 间接胶乳凝集试验 41 将待检血清稀释成一定浓度 再加入定量变性IgG诊断试剂 立即用透射比浊或速率散射比浊仪测定血清中的RF 此法具有速度快 敏感性高 达ng L水平 精密度高 CV 5 稳定性好 能定量分析的优点 但仍局限在IgM类RF的检测 免疫比浊法 42 IgM IgG和IgA类RF需要用RIA法或ELISA法等方法检测 但前者有放射性污染 故临床上多采用ELISA间接法或双抗原夹心法进行测定 ELISA法 43 二 临床应用 RF在诊断RA患者时并非特异的 也非唯一标准 慢性活动性肝炎及老年人均可有不同程度的阳性率 44 三 其他自身抗体测定 返回章目录 45 1 筛选试验与确诊性试验的合理组合 2 结合临床症状选择性检测相关的自身抗体 3 切忌盲目的全面检测自身抗体 4 通常以抗核抗体作为筛选试验 ANA在许多AID中可呈阳性 5 ANA阳性时 再进行针对特异性靶抗原成分的自身抗体的检测 达到明确诊断的目的 第三节自身抗体的检测实验选择的原则 一 自身抗体检测的一般原则 46 二 实验室方法的选择及结果的确认 IIF法 筛选试验 ANA 抗dsDNA IB法ELISA法IFA法 特异性实验 抗原基质片 Hep 2细胞 小鼠肝印片 切片 加入自身抗体后与抗原成分相结合 再与荧光标记的抗抗体结合 根据荧光在细胞上的着色部位进行定位分析 特异性纯化抗原包被载体 检测特异性自身抗体 特异性抗原不易纯化或不明确 用ELISA法和IBT法等检测自身抗体会有一定误差 返回章目录 47 小结 自身免疫病是由于某种原因使自身免疫应答过强或持续时间过久 表现为质和量的异常 所产生的自身抗体和 或 自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细胞